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Trabajo Prctico 2

ENZIMAS
Una caracterstica especial de las clulas es su capacidad para realizar
reacciones u!icas rpidas a te!peratura a!biente" #uera de las clulas$
esas reacciones solo se pueden realizar !u% lenta!ente" &a co!pleja acti'idad
!etab(lica de la clula no podra realizarse a te!peraturas tan bajas" &os
a)entes bsicos de las trans*or!aciones celulares son un )rupo de sustancias
proteicas deno!inadas enzi!as"
Enzi!a es una protena sintetizada en la clula$ ue cataliza una
reacci(n$ de tal *or!a ue la 'elocidad de esa reacci(n sea co!patible con los
procesos biou!icos esenciales para la 'ida celular" +oncentraciones
su!a!ente bajas son su*icientes para actuar" Su naturaleza proteica les
con*iere especi*icidad$ esto si)ni*ica ue son necesarias !iles de enzi!as
di*erentes para acelerar las di*erentes reacciones ue se producen en la clula"
Por su naturaleza proteica$ una enzi!a perder sus propiedades catalticas por
acci(n de la te!peratura$ cidos o bases$ sol'entes or)nicos u otros a)entes
capaces de desnaturalizar protenas"
&as enzi!as inter'ienen en las reacciones u!icas au!entando su
'elocidad porue dis!inu%en la ener)a de acti'aci(n % por lo tanto per!iten
ue estas ocurran a bajas te!peraturas, pero no alteran el euilibrio de las
reacciones$ lo ue i!plica ue la cantidad total de reaccionantes trans*or!ados
al *inal de la reacci(n ser i)ual con o sin enzi!a"
Para ejercer su acti'idad !uc-as enzi!as necesitan ue est presente
una !olcula or)nica de carcter no proteico deno!inada coenzi!a$ ade!s
al)unas enzi!as reuieren de al)unos iones tales co!o. !a)nesio$
!an)aneso$ calcio$ etc /co*actores0 ue *a'orecen su acti'idad /acti'adores0"
&a acti'idad de las enzi!as depende de una serie de *actores tales
co!o. te!peratura$ p1$ concentraci(n de sustrato$ concentraci(n de enzi!a$
in-ibidores$ acti'adores % otros" &as condiciones (pti!as de trabajo 'aran de
acuerdo a la enzi!a considerada" En la prctica es i!portante !antener en
*or!a adecuada el p1 % la te!peratura"
Para !edir la acti'idad de una enzi!a se !ide la cantidad de sustrato
consu!ido o la cantidad de producto *or!ado por un tie!po deter!inado
!ediante !todos u!icos$ tales co!o las reacciones de coloraci(n o bien
por !todos *sicos co!o la especto*oto!etra"
2aloraci(n de la acti'idad a!ilasa
En el trabajo prctico se utilizar la enzi!a a!ilasa sali'al$ la cual
-idroliza el al!id(n trans*or!ndolo en de3trinas % !altosa$ %a ue cataliza la
ruptura de los enlaces al*a )licosdicos situados en el centro de la !olcula"
Se caracteriza por presentar acti'idad en el ran)o de p1 de 4$5 a 6$7 % su p1
(pti!o es 8$6" Es acti'ada principal!ente por cloruros % en !enor )rado por
bro!uro$ nitritos$ ioduro$ etc" Su punto isoelctrico es cercano a 9$4"
El reacti'o de %odo da un color azul con el al!id(n$ pero no con los productos
de de)radaci(n" &a intensidad del color es directa!ente proporcional a la
concentraci(n de al!id(n" &a acti'idad enzi!tica se deter!ina !idiendo la
dis!inuci(n en color$ durante la incubaci(n de la enzi!a con el al!id(n en un
cierto periodo de tie!po"
Proceso de de)radaci(n del al!id(n.
Al!id(n
Amilasa
A!ilode3trina : !altosa
Amilasa
Eritrode3trina : !altosa
Amilasa
Acrode3trina : !altosa
Amilasa
Maltosa
PA;TE E<PE;IMENTA&.
=" +IN>TI+A ?E &A ;EA++I@N AMI&ASI+A.
?ispon)a de 8 tubos de ensa%o con = !l de 1
2
SB
7
=n cada uno" En BT;B
tubo de ensa%o coloue lo si)uiente.
Al!id(n C$= N C$6 !l
Ta!p(n p1 8$6 C$= !l
D+l C$= N C$6 !l
A)ua destilada 9$8 !l
Enzi!a diluida =E=C en suero
*isiol()ico
C$9 !l
El F&TIMB co!ponente ue debe a)re)ar es la diluci(n de sali'a
&UEGB AGITE H SAIUE ;API?AMENTE UNA A&J+UBTA ?E = M&" 2IE;TA
EN UNB ?E &BS TUKBS IUE +BNTIENEN 1
2
SB
7
" Este corresponde al
tie!po cero"
Incube los L !l restantes a 4LM+ % saue alcuotas de = !l a los si)uientes
tie!pos.
NM Alcuota Tie!po en !inutos
= =
2 2
4 7
7 5
9 =8
2ierta las alcuotas en cada uno de los tubos con 12SB7 =N /el cido
desnaturaliza la protena % por lo tanto detiene la reacci(n enzi!tica0
A cada uno de los tubos a)re)ue = )ota de reacti'o de %odo" Bbser'e % anote
lo ocurrido"
2" E#E+TB ?E& p1 SBK;E &A A+TI2I?A? AMI&ASA

?ispon)a de 8 tubos de ensa%o % adicione los si)uientes reacti'os se)Nn el
esue!a.
;eacti'os
NM Tubos
= 2 4 7 9 8
Ta!p(n p1 7$6 /!l0 = = O O O O
Ta!p(n p1 8$6 /!l0 O O = = O O
Ta!p(n p1 6$8 /!l0 O O O O = =
Al!id(n /!l0 = = = = = =
D+l C$= M /!l0 = = = = = =
Acido sul*Nrico =N /!l0 O C$9 O C$9 O C$9
Enzi!a diluida =E=C /!l0 C$9 C$9 C$9 C$9 C$9 C$9
Incube a 4LM+ por =9 !ins" &os tubos =$ 4 % 9
?eten)a la reacci(n con 1
2
SB
7
=N
/!l0
C$9 O C$9 O C$9 O
;eacti'o de %odo /)otas = = = = = =
&os tubos 2$ 7 % 8 corresponden a lo ue se conoce co!o tie!po cero de la
reacci(n$ es decir$ tiene por objeto conocer al co!posici(n del !edio antes ue
se inicie la reacci(n"
+uestionario.
=O PIu di*erencia e3iste entre un catalizador inor)nico % una enzi!aQ
2O PIu es lo e3plica la reacci(n de Mic-aelis % MentenQ
4O PIu si)ni*ica al D! % en ue unidades se e3presaQ
7O PPor u es necesario !antener el p1 estable con un a!orti)uador durante
una reacci(n enzi!ticaQ
9O PIu e*ecto tiene el au!ento de la concentraci(n de sustrato sobre la
in-ibici(n co!petiti'a de una enzi!aQ
8O PEn ue *or!as puede encontrar una enzi!a si la concentraci(n de sustrato
no es saturanteQ