Biorreactores

Un examen superficial de la literatura de la ingeniera bioqumica puede dar la

impresin de que hay un nmero ilimitado de diseos de biorreactores.
Sin embargo, una inspeccin ms cercana revela que casi todos estos diseos
se dividen en tres clases fundamentales:
Reactores de tanque agitado (STR), que cuentan con agitacin mecnica
interna (fig. 17.9A)
Columnas de burbujas, que se basan en la introduccin de aire u otro gas
(burbujeo) de agitacin (fig. 17.9B)
reactores de puente areo, que tienen ya sea una un bucle externo (fig.
17.9D) interna (fig. 17.9C); o la mezcla y la circulacin del fluido de cultivo en
estos reactores son los resultados del movimiento de un gas introducido (por lo
general aire ), lo que hace que las diferencias de densidad dentro de las
diferentes partes del biorreactor.
El tradicional, y con mucho, el ms utilizado, es el bioreactor STR. Este tipo de
biorreactor tiene varias ventajas sobre otras configuraciones de biorreactores.
Cuenta con las condiciones de operacin altamente flexible.
Es fcilmente disponible comercialmente.
Se proporciona una transferencia eficiente del gas a las clulas microbianas
que crecen, o, en palabras de los ingenieros de fermentacin, el coeficiente
volumtrico de transferencia de masa, ELK de ROS es elevado.
Se ha utilizado ampliamente por los ingenieros de fermentacin y
microbilogos para el cultivo de una variedad de microorganismos.
En un ROS, de gas, normalmente aire, se aade al medio de cultivo bajo
presin a travs de un dispositivo llamado un rociador, el cual puede ser un
anillo con muchos agujeros pequeos o un tubo con un nico orificio.Aunque
los anillos de borboteo generan burbujas ms pequeas y por lo tanto crean
una mejor distribucin inicial de gas, tubos de burbujeo se prefieren a menudo
en muchas aplicaciones a pequea escala (<20 litros), ya que son menos
propensos a obstruirse. Una dispersin a fondo del gas dentro del biorreactor
requiere uno o ms impulsores (agitadores) adems de la burbujeador. La
agitacin mecnica del medio de cultivo por los rodetes rompe burbujas ms
grandes en otros ms pequeos, las burbujas se dispersa por todo el medio, y
aumenta el tiempo de residencia de las burbujas en el biorreactor. A altos
niveles de agitacin, el tamao medio de las burbujas en grandes biorreactores
es esencialmente independiente del tamao de los agujeros en el tubo
rociador. El tipo de impulsor, su velocidad de rotacin, y las propiedades fsico-
qumicas de la fase lquida son factores importantes que dan lugar a la
dispersin de gas eficiente. En grandes biorreactores, sin embargo, si la
distribucin inicial de gas desde el rociador no es uniforme en todo el tanque,
incluso agitacin vigorosa puede no crea un ambiente de gas homognea.
Debido a la naturaleza corrosiva o abrasiva de muchos medios de cultivo y los
procedimientos de esterilizacin, los RTS se construyen normalmente a partir
de acero inoxidable o vidrio. Las unidades de vidrio se limitan generalmente a
biorreactores a escala de laboratorio que tienen una capacidad <50 litros.
Una limitacin en el tamao de un biorreactor es la capacidad del sistema para
eliminar eficientemente el calor que se genera como consecuencia de
cualquiera de los dos el metabolismo de las clulas en crecimiento o la entrada
de energa por agitacin. El exceso de calor eleva la temperatura y altera el
estado fisiolgico de las clulas, y disminuye el rendimiento del producto. El
calor puede ser eliminado mediante el uso de una camisa de refrigeracin
alrededor del recipiente de reaccin o por serpentines internos. Aunque
serpentines de refrigeracin internos son ms eficaces que las chaquetas en
mantener la reaccin de fermentacin cerca de la temperatura deseada, que
pueden se ensucian (recubierto) con microorganismos, lo que impide
enfriamiento, y que a veces interfieren con la agitacin adecuada del caldo de
fermentacin.
La contaminacin de una fermentacin con hongos o bacterias suele ser
desastroso. Por lo tanto, biorreactores estn diseados para que puedan ser
esterilizados, por lo general con vapor a presin. No debe haber espacios
muertos internos o superficies que escapan contacto con el vapor de agua
durante la esterilizacin.
Todos los sellos, sondas, vlvulas y tambin deben ser fcilmente esterilizable
de vapor. Cuando un bioreactor est diseado, un trade-off se hace a menudo
entre un conjunto completo de puertos para las sondas, lo que permite el
seguimiento de los parmetros de la fermentacin, y menos puertos, lo que
hace el mantenimiento de la esterilidad ms fcil.
El alto nivel de agitacin del medio de cultivo durante una reaccin de
fermentacin a menudo causa una considerable formacin de
espuma. Excesiva de espuma puede mojar el filtro en el puerto a travs del
cual sale el aire introducido el biorreactor, con lo que tanto la disminucin de la
corriente de aire y proporcionar una va potencial para la entrada de clulas
contaminantes. Cualquiera de los agentes qumicos o interruptores mecnicos
de espuma antiespumante se puede utilizar para controlar la formacin de
espuma. Sin embargo, los agentes qumicos pueden disminuir el grado de
crecimiento microbiano mediante la prevencin de la transferencia de oxgeno
o, en algunos casos, por la inhibicin de las enzimas celulares.
Por otra parte, si un compuesto antiespumante no se quita antes del
procesamiento aguas abajo, que puede contaminar el producto final. Formacin
de espuma tambin se puede controlar proporcionando suficiente "espacio de
cabeza" en el biorreactor, es decir, el espacio por encima del lquido en el que
las burbujas pueden disipar. En la prctica, a continuacin, el "volumen de
trabajo," o el volumen real de la cultura, en un ROS es tpicamente slo
aproximadamente el 75% del volumen total del biorreactor.
Muchas de las consideraciones que se aplican a los ROS tambin se aplican a
los reactores de neumticos, tales como columnas de burbujas y biorreactores
de transporte areo. As, por ejemplo, la esterilidad, pH constante, y la
temperatura constante son componentes clave de cualquier fermentacin,
independientemente de la configuracin precisa del biorreactor.
Las configuraciones de columnas de burbujas y biorreactores de transporte
areo darles algunas ventajas sobre los ROS. Estos reactores neumticos son
ms eficientes que los RTS energa porque la agitacin es proporcionada por la
inyeccin de una corriente de --- aire u otro gas si los microorganismos
anaerobios estn siendo cultivadas --- en lugar de por un agitador
mecnico. Adems, con la eliminacin del eje del mezclador en estas unidades,
hay un sitio de menor potencial de entrada de microorganismos contaminantes.
Reactores neumticos generan un entorno de menor cizalladura que hacen los
ROS. Adems, en los reactores de puente areo, el esfuerzo cortante se
distribuye de manera ms uniforme a travs del recipiente que en los RTS. La
reduccin de las fuerzas de cizallamiento es importante por las siguientes
razones.
microorganismos genticamente modificados son a menudo ms susceptibles
a la lisis cuando se exponen a tensin de cizallamiento que son organismos no
modificados, debido a la carga metablica adicional de la sntesis de una
protena extraa a menudo hace que los microorganismos genticamente
modificados para formar paredes celulares debilitadas.
Una respuesta celular frecuente a las fuerzas de cizallamiento se disminuye la
sntesis de todas las protenas celulares, incluyendo la protena recombinante.
El esfuerzo cortante puede alterar las propiedades fsicas y qumicas de las
clulas de modo que las etapas de procesamiento aguas abajo se vuelven ms
difciles de realizar. Por ejemplo, las condiciones de fermentacin
inadvertidamente pueden aumentar la cantidad de polisacridos de la superficie
de un microorganismo que produce y, como consecuencia, pueden cambiar las
condiciones para la cosecha y la lisis eficaz de estas clulas, lo que hace ms
difciles de purificar la protena diana.
En las columnas de burbujas, el aire se introduce a alta presin cerca de la
parte inferior, pero las burbujas ms pequeas se unen en los ms grandes a
medida que suben a travs de la columna, lo que lleva a la distribucin desigual
de gas. Adems, el uso de aire a alta presin tiende a causar excesiva
formacin de espuma en el medio.
Estos inconvenientes limitan la flexibilidad o eficaz gama de condiciones de
funcionamiento, as como el tamao potencial de columnas de burbujas.
Biorreactores puente areo, sin embargo, pueden adaptarse fcilmente para
cualquier planta piloto o de los procesos de fermentacin a gran escala. En un
reactor de transporte areo, el gas se introduce en la parte inferior de un canal
vertical (elevador). Tanto el gas y el flujo de lquido hasta el tubo de subida
hasta que llegan a un espacio abierto en la parte superior (gas - separador de
lquido), en donde el gas es al menos parcialmente desacoplado del lquido. La
Produccin a gran escala de protenas a partir de microorganismos
recombinantes 705 lquido desgasificado, que es ms denso que el lquido
gasificado, desciende en un canal vertical separada (tubo vertical de bajada) y
se mueve a lo largo de la base del reactor hasta que llega a la parte inferior de
la tubera vertical. De esta manera, se continuamente se distribuye el fluido de
cultivo y las clulas alrededor del biorreactor.
Hay dos tipos principales de biorreactores de transporte areo: los que tienen
un solo contenedor, con refuerzos internos que crean canales de circulacin de
lquido del interior (reactores de bucle interno) (fig. 17.9C) y los que tienen un
bucle externo para que el lquido circula a travs de la cultura canales
independientes, separados (reactores de bucle externo) (fig. 17.9D). Reactores
de transporte areo interno de circuito son de diseo sencillo, pero una vez que
se construyen, el volumen y la velocidad de circulacin son fijos para todos los
procesos de fermentacin. Por el contrario, el bucle externo de los reactores
airlift externa de bucle puede ser cambiado o modificado, por ejemplo,
mediante la alteracin de su volumen, para adaptarse a los requisitos de
diferentes fermentaciones fcilmente.
Biorreactores puente areo son generalmente ms eficiente que columnas de
burbujas, especialmente para los ms densos o ms suspensiones viscosas de
microorganismos. En los reactores de transporte areo, la mezcla es
generalmente mejor, y coalescencia de burbujas no es un problema tan grande
como lo es en columnas de burbujas. En extremadamente grandes
fermentadores de transporte areo, tales como el fermentador 1.500.000 litros
construido por Imperial Chemical Industries, Ltd, en Inglaterra para la
produccin de protena de una sola clula, se necesita una cantidad
considerable de tiempo para una celular para completar un ciclo completo a
travs del reactor. Para evitar que las clulas se conviertan en sustrato agotado
mientras estn atravesando el biorreactor, hay mltiples puntos de inyeccin
para la introduccin de sustrato a lo largo de la longitud de la unidad.