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BIOMETRIA HEMATICA PRACTICAS DE LABORATORIO

Preparacin del equipo


Tubos de coleccin: Los tubos estn predeterminados para llenarse con un determinado
volumen de sangre por vaco. El tapn de caucho est codificado por color, de acuerdo a su uso o
sus aditivos.

TUBO CON TAPON ROJO


USO: Qumica, Inmunologa, Banco de sangre
ADITIVO: Ninguno

TUBO CON TAPON ROJO


USO: Qumica
ADITIVO: Gel - Separador

TUBO CON TAPON MORADO


USO: Hematologa
ADITIVO: Anticoagulante EDTA

TUBO CON TAPON CELESTE


USO: Pruebas de Coagulacin
ADITIVO: Anticoagulante Citrato de sodio

hemogramas, se recomienda una aguja de un dimetro de 0.8 mm (21G) para evitar dao a las
clulas. Las agujas de 0.9 mm a 1.1 mm de dimetro (20G 19G) se utilizan normalmente para
puncin venosa en adultos.

.

-Vacutainer: Se utilizan para tubos al vaco.

planos.








El procedimiento de la flebotoma
La muestra debe tomarse correctamente y bajo las condiciones ms favorables para evitar errores.
Esto incluye la absoluta identificacin del paciente, el sitio a puncionar y el volumen a colectar. El
paciente debe estar en posicin cmoda, de preferencia en una silla especial para venopuncin
con descanso para los brazos y si est en cama, preferiblemente acostado.

Seleccin del sitio a puncionar:
Al proceder a seleccionar el sitio a puncionar, evite reas con hematoma, fstulas, quemaduras,
escoriaciones de la piel o cicatrices. Si se trata de un paciente hospitalizado evite tomar muestra
de un brazo que se est utilizando con venoclisis o del costado en que se ha realizado una
mastectoma reciente.

La palpacin:
Antes de proceder a puncionar, se debe escoger la vena. La mejor manera es realizando una
palpacin de las mismas para esa decisin. Para ello coloque el torniquete 3 a 4 pulgadas por
arriba del sitio seleccionado, para visualizarlas mejor. Debe tener presente en no mantener el
torniquete por ms de 3 minutos, para evitar la hemoconcentracin.
Las venas ms utilizadas para la venipuncin, estn localizadas en el rea antecubital. Entre stas
tenemos:

a) Vena Cubital: Es la ms larga y gruesa de todas y es la preferida por bordear la musculatura
del brazo.

b) Vena Ceflica: Tiene iguales caractersticas de la anterior, pero es un poco menos gruesa.


c) Vena Baslica: Es ms pequea que las anteriores. Esta vena est cerca de la arteria braquial,
por lo que su puncin es riesgosa y su rea es ms sensible y dolorosa para el paciente.












Al palpar hgalo con la punta de sus dedos, tratando de seguir el rastro de las venas. Aqu tambin
son tiles sus conocimientos en la anatoma de las venas de las extremidades superiores. En
ocasiones si no visualiza la vena, puede forzar la sangre dentro de la vena a travs de un suave
masaje de abajo hacia arriba.

PALPACIN DE LAS VENAS


La Descontaminacin:
Una vez que se ha decidido por la vena a puncionar, debe proceder a descontaminar el rea con
alcohol etlico o isoproplico al 70% utilizando algodn y con movimientos circulares del interior al
exterior. Debe tener presente que una vez realizada la descontaminacin, no debe volver a tocar el
rea venosa.




DESCONTAMINACION DEL AREA
La puncin venosa:

Ahora est preparado para realizar la extraccin sangunea.
El brazo debe estar preferiblemente en posicin cmoda horizontalmente. Con el torniquete en
posicin, haga que el paciente cierre y abra el puo de 3 a 5 veces para bombear mejor la sangre,
y luego que mantenga el puo cerrado.
Si se trata de un nio, es recomendable colocar 2 dedos de la mano, debajo del codo del paciente,
para evitar que doble el brazo durante la extraccin.

Extraccin con jeringuilla:

Cuando vaya a proceder a realizar la extraccin con jeringuilla, usted debe tener presente el
calibre a utilizar y el tamao de la jeringuilla segn el volumen a extraer.
a) Coloque la punta de la aguja en un ngulo de 15 a 30 grados sobre la superficie de la vena
escogida y atraviese la piel con un movimiento firme y seguro, hasta el lumen de la vena.

b) Apretando firmemente la jeringuilla, debe jalar el mbolo con movimiento continuo para extraer
la sangre hasta el volumen requerido. Evite presionar fuertemente la aguja durante la
extraccin.


c) Afloje el torniquete para que la sangre fluya mejor y remueva la aguja del brazo con
movimiento suave al terminar de colectar, sin apretar el rea de la puncin con el algodn.

d) Presione el algodn sobre el sitio de la puncin aplicando una presin adecuada y no excesiva
para evitar la formacin de hematoma.


e) Llenar los tubos en su orden.


f) Descarte la jeringuilla y aguja en un contenedor apropiado.

g) Colocar un curita o venda en el sitio de la puncin



RECUENTO ERITROCITARIO Y DETERMINACION DE HEMATOCRITO

INTRODUCCION:
EL RECUENTO DE ERITROCITOS es un examen de sangre que determina el nmero de glbulos
rojos (GR) que tiene una persona. La cantidad de oxgeno recibida por los tejidos corporales
depende de cuntos glbulos rojos tenga la persona y de qu tan bien stos estn funcionando. El
recuento de eritrocitos, leucocitos y plaquetas son expresados en concentracin (clulas por
unidad de volumen de sangre); en este caso que es el mtodo manual es de mm.

FUNDAMENTO DEL METODO MANUAL:
Para EL RECUENTO DE ERITROCITOS, la sangre se diluye con una solucin isotnica,
conservando ntegros a los eritrocitos, impidiendo a su vez, que se hinchen o se contraigan, pero
tambin esta solucin destruye a los leucocitos. Luego, esta dilucin se coloca en una cmara de
Neubauer con la ayuda de una pipeta automtica, Pasteur o de Thoma y se cuentan cada uno de
los eritrocitos al microscopio con el objetivo de 40X, para calcular el nmero de eritrocitos por mm.
Es preciso que cuando se interprete los resultados del conteo eritrocitario, se complemente con
otras medidas de la biometra hemtica, es decir, con la hemoglobina, el hematocrito, la VCM, la
HCM y la VMHC.
No obstante, los valores disminuidos pueden deberse a:


nemias ocasionadas por causas varias






Los valores aumentados a:






El hematocrito
Con el valor hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologas, como
es el caso de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la cantidad de eritrocitos de la
sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el porcentaje de clulas que transportan
oxgeno frente al volumen total de sangre, determinado por proceso de centrifugacin. En este
proceso, se pueden apreciar dos niveles, los elementos formes que se sedimentan, y el plasma
total que flota. En definitiva es la relacin porcentual entre ambos lo que representa el valor
hematocrito.
La finalidad que se persigue con esta prueba es la de confirmar el diagnstico de varias patologa o
afecciones.
Los valores altos de hematocrito puede deberse a afecciones tales como:






Enfermedades pulmonares crnicas


Sin embargo, los valores disminuidos nos pueden indicar:












MATERIAL BIOLOGICO:


REACTIVOS:



MATERIAL NECESARIO:









PROCEDIMIENTO:
Para recuento de eritrocitos:
1. Obtener sangre total siguiendo el protocolo ya conocido
2. Con la boquilla y la pipeta de Thoma aspirar sangre hasta la marca 0.5 (SIN BURBUJAS)
3. Aspirar diluyente (Hayem o Dacie) hasta la marca 101 de la pipeta
4. Agitar la pipeta por 3 min.
5. Desechar las 5 o 6 primeras gotas de la pipeta de Thoma
6. Colocar el cubreobjetos sobre la cmara de Neubauer y llenarla, tratando que fluya libremente
por difusin el lquido evitando llenar en exceso o formacin de burbujas
7. Dejar en reposo 2 o 3 minutos el Hemacitmetro con el fin de que los eritrocitos sedimenten
8. Localizar la cuadricula de la cmara de Neubauer con el objetivo seco dbil (10X); enseguida
enfocar con seco fuerte (40X)
9. El recuento se realizara en los cuadros ms pequeos de la cmara, contando los hemates
localizados en los 4 cuadros de los extremos y en el del centro, haciendo un total de 5 cuadros.
(VER FIGURAS MAS ABAJO)
10. Realizar los clculos para determinar la cantidad de eritrocitos resultantes

Nota: Se puede realizar con la pipeta automtica, se toma 20 L (0,02mL) de sangre total con
anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que contenga 4 mL de
solucin de Hayem (aqu se tiene una dilucin de 1:200). Se deja reposar aproximadamente 5
minutos y se procede a cargar la cmara con la misma pipeta usando un nuevo tip.
PARTES DE LA PIPETA DE THOMA:












ILUSTRACION PARA EL LLENADO DE LA CAMARA DE NEUBAUER


CONTEO DE GLOBULOS ROJOS
Cuadrantes dentro de la cmara de Neubauer donde se realizara el conteo celular, contaremos
cada uno de los glbulos rojos que encontremos en los cuadrantes que estn marcados con la
letra R y en el orden como se indica en las flechas.





De los 25 cuadrados en que se encuentra subdividido, se cuentan los cuatro angulares y el central,
con un recuento total representativo de 1/5 de milmetro cuadrado. Sobre la base de una dilucin
de 200, de un recuento de 1/5 mm2 y una profundidad de 0.1 mm, el clculo se efecta como
sigue:

Eritrocitos contabilizados X 5 X 200 X 10 = NUMERO DE ERITROCITOS POR mm3, o bien

Eritrocitos contabilizados X 10,000 = NUMERO DE ERITROCITOS/ mm3


Para determinacin de hematocrito:
Con el valor del hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologas,
como es el caso de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la cantidad de eritrocitos
de la sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el porcentaje de clulas que transportan
oxgeno frente al volumen total de sangre, determinado por proceso de centrifugacin. En este
proceso, se pueden apreciar dos niveles, los elementos formes que se sedimentan, y el plasma
total que flota. En definitiva es la relacin porcentual entre ambos lo que representa el valor
hematocrito.
PROCEDIMIENTO:
1. Utilice tubos capilares de 7 cm de largo por 1 mm de grosor, llenar las partes del capilar, con
sangre venosa bien homogeneizada.
2. Cerrar la punta del tubo capilar sellando a la llama del mechero (evite quemar el paquete
globular) o con plastilina.
3. Centrifugar por 5 min. A 10,000 rpm
4. Leer el resultado en escalas comerciales, de la siguiente manera:
a. Extremo inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel de la lnea horizontal
correspondiente al cero.
b. Desplace el tubo a travs de la escala hasta que la lnea marcada con el nmero 100 quede al
nivel del tope de la columna de plasma. Vigile que el fondo de la columna de eritrocitos contine
sobre la lnea cero. El tubo debe encontrarse completamente en posicin vertical.
c. La lnea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicar la fraccin de volumen
de stos.

TUBO DE MICROHEMATOCRITO Y METODOS DE LECTURA DEL VOLUMEN DE CELULAS
EMPACADAS.

CAUSAS DE ERROR EN RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS:
o Agitado imperfecto.
o Suciedad del material.
o Error en la aspiracin de sangre y dilucin hasta las marcas correctas.
o Desecamiento del lquido en la cmara de recuento.
o Errores en el recuento y en el clculo.
o Olvido de descartar el lquido de dilucin de la pipeta antes de cargar la cmara
o Carga excesiva de la cmara

CAUSAS DE ERROR EN DETERMINACION DE HEMATOCRITO:
o Velocidad inadecuada al centrifugar.
o Actividad muscular del paciente antes de la toma de muestra.
o Exceso de anticoagulantes.
o Prolongado uso del torniquete.
o Quemar el paquete globular al cerrar el capilar.
o Utilizar sangre hemolisada.

VALORES
NORMALES:
HOMBRES
MUJERES UNIDADES
Eritrocitos (RBC) 5.4 (4.6 6.0) 4.8 (3.9 5.0) 106 L
Hematocrito
(HTO)
45 (42 52) 42 (36 48) %


FORMULA ROJ A Y CLASIFICACION DE ANEMIAS
OBJETIVO:
Realizar una formula roja mediante la medicin de cada uno de los parmetros que la integran:
recuento de eritrocitos, medicin de la hemoglobina, Hematcrito y clculo de los valores absolutos
de la concentracin de hemoglobina; para poder diagnosticar y clasificar una anemia.
INSTRUCCIONES:
Tomar una muestra de sangre y realizar CADA UNO DE LOS RECUENTOS que ya hemos
realizado (eritrocitos, Hematcrito y dosificacin de hemoglobina) con el material requerido para
cada prueba. Anotar y hacer clculos correspondientes para determinar y clasificar anemias. Y
finalmente realizar el reporte correspondiente a cada paciente.

CLASIFICACION DE ANEMIAS POR MEDIO DE LA DETERMINACIONES DE LOS
INDICES ABSOLUTOS.

La anemia es una deficiencia en la cantidad o calidad de los glbulos rojos y frecuentemente es
secundaria a alguna enfermedad subyacente.
Para diagnosticar a un paciente con anemia debemos clasificar que tipo de anemia est cursando,
es necesario realizar algunos clculos para la determinacin del tamao, contenido y
concentracin de hemoglobina en los glbulos rojos. Estos ndices han resultado tiles para la
caracterizacin morfolgica de las anemias y pueden calcularse a partir del recuento de glbulos
rojos, de la concentracin de hemoglobina y del hematocrito.

El Volumen Corpuscular Medio (VCM o VGM) da idea DEL TAMAO promedio DE CADA
ERITROCITO, se calcula con la siguiente frmula:

VGM= Hto X 10 /Eritroc.

HCM: Hemoglobina Corpuscular Media es la CANTIDAD HEMOGLOBINA PRESENTE en los
eritrocitos, se calcula:
HCM= Hb (g /dL) x 10 /Eritroc.

CMHC: Concentracin Corpuscular Media de Hemoglobina, es la
CONCENTRACIN media de Hb en un volumen determinado de eritrocitos, y se calcula:
CMHC= Hb * 100 / Hto.

ERITROSEDIMENTACION GLOBULAR Y RECUENTO DE RETICULOCITOS

La eritrosedimentacin globular es una prueba que se usa ampliamente para estudiar la actividad
de diversas enfermedades. La velocidad de sedimentacin de los glbulos rojos se refiere al
tiempo que tardan en separarse del plasma. Se le mide en MILIMETROS POR HORA.
La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido en el desarrollo
de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su gran sensibilidad, pues
resulta anormal en las enfermedades funcionales, as como en los procesos inactivos o
estrictamente locales.

FUNDAMENTO:
La eritrosedimentacin depende de la formacin de ROULEAUX, de la concentracin de
fibringeno y de la concentracin de globulinas alfa y beta en el plasma. La concentracin de las
diversas protenas plasmticas afecta la eritrosedimentacin y en muchas enfermedades se altera
la relacin entre las protenas, con la consiguiente aceleracin de la eritrosedimentacin. Una
disminucin en el nmero de glbulos rojos tambin la acelera y en algunos laboratorios se corrige
su resultado en los casos de anemia. Adems de las elevaciones producidas en procesos
infecciosos e inflamatorios, se producen elevaciones fisiolgicas en el embarazo y durante la
menstruacin. La VSG disminuye en la anemia falciforme y en las 39fibringeno39 severas.
FENOMENO DE ROULEAUX:
El ROULEAUX o formacin de pilas de monedas, es un fenmeno que consiste en que los
glbulos se aglomeran en masas. Las causas de este fenmeno radican en el plasma o en el suero
y no estn influidas por la temperatura. La administracin de algunos medicamentos puede
producir este fenmeno. Otras veces se trata de una causa intrnseca al paciente, que tiene un
desequilibrio de sus protenas (aumento del 39fibringeno o aparicin de protenas anormales).
Observado en el microscopio, el fenmeno de Rouleaux es caracterstico: se ven los glbulos
reunidos en filas, apilados por sus caras planas, varias filas se entrecruzan en diversos planos,
produciendo un grumo el cual puede ser visto de forma macroscpica (a simple vista)
INTERPRETACION CLINICA:

La VSG es un buen ndice de la presencia de procesos infecciosos activos como la tuberculosis o
la endocarditis bacteriana subaguda, el lupus eritematoso diseminado, las carditis reumticas,
ciertas neoplasias, embarazo ectpico, etc. Sirve igualmente para controlar la actividad evolutiva
de las infecciones mencionadas.

MATERIAL:







PROCEDIMIENTO (METODO DE WINTROBE):
1. Mezclar la muestra de sangre
2. Llenar de sangre una pipeta Pasteur

3. Introducir la punta de la pipeta Pasteur hasta el fondo del tubo de Wintrobe
4. Lentamente vaciar la sangre e ir retirando la pipeta arrastrndola por la pared interna del tubo
EVITANDO la formacin de burbujas de aire.
5. El tubo se llena hasta la marca cero y se coloca en una gradilla en posicin vertical.
6. INMEDIATAMENTE activar el cronometro que indique 1 hora, durante la cual ocurrir el
fenmeno de Rouleaux
7. Transcurrida la hora se leern los milmetros que haya sedimentado la muestra de sangre
8. La escala se lee hacia abajo, representando cada nmero 10 mm o 1 cm.
VALORES DE REFERENCIA:
Hombres: 0 9 mm/hr
Mujeres y nios: 0 15 mm/hr
CAUSAS DE ERROR:
1. Uso de anticoagulante incorrecto (heparina aumenta el resultado).
2. Exceso de anticoagulante (aumenta)
3. Posicin inadecuada del tubo (que este ladeado el tubo)
4. Aglomeracin anormal de los glbulos rojos en pilas de monedas.

CUENTA DE RETICULOCITOS
FUNDAMENTO:
La investigacin de reticulocitos es una de las pruebas ms tiles en la investigacin de la
causa de la anemia, pues nos d idea del estado de la produccin de glbulos rojos por la
mdula sea.
Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teir con el
azul de cresil brillante. Este colorante en combinacin con una misma cantidad de sangre
anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura (bao mara) se produce la
coloracin de estos eritrocitos jvenes visualizndose en los frotices sanguneos por
microscopa
REACTIVOS:
Azul brillante de cresil
MATERIAL:









PROCEDIMIENTO:
1. En un tubo de ensaye chico se depositan tres gotas de sangre con EDTA
2. Se agregan 3 gotas de reactivo
3. Mezclar el tubo y tapar con parafilm
4. Incubar a 37oC por 10 minutos.
5. Hacer frotis en un portaobjetos
6. Leer en el microscopio con el objetivo de inmersin (100X)
7. Se leern varios campos, contando 300 eritrocitos en total, incluyendo a los
reticulocitos
8. Se har un clculo de regla de tres simple para obtener el valor porcentual de los
reticulocitos encontrados.

VALORES DE REFERENCIA:
Recin nacidos: 3 6 %
Adultos: 0.5 1.5 %
INTERPRETACION CLINICA:

Causas de aumento
El nmero de reticulocitos aumenta en todas las circunstancias en las que existe un
incremento de la eritropoyesis, tales como en la hemlisis, como respuesta a
sangrados o tras el inicio de un tratamiento antianmico que ha resultado eficaz.

Causas de disminucin
Como la produccin de reticulocitos es necesaria para compensar las prdidas fisiolgicas de
glbulos rojos maduros, una disminucin de su nmero es la expresin de un estado
arregenerativo o hiporegenerativo de la serie roja. Esta circunstancia es tpica de anemias
aplsicas, anemias carenciales y enfermedades inflamatorias y neoplsicas.

RECUENTO DE LEUCOCITOS TOTALES
INTRODUCCION: Efectuaremos un recuento de leucocitos totales de un paciente.
Esto nos servir de referencia para determinar si hay algn proceso infeccioso activo. Al efectuar el
recuento total no encontraremos diferenciacin entre los 5 tipos de leucocitos normales
(neutrfilos, monocitos, linfocitos, basfilos y eosinfilos). En esta prctica nos limitaremos a contar
manualmente los leucocitos totales dados en mm3 o litros.
FUNDAMENTO: En el mtodo de Turk se utiliza una solucin de cido actico al 2% que tiene
como funcin lisar los eritrocitos para evitar interferencias en el recuento.

MATERIAL UTILIZADO:
1. Pipeta de Thoma para LEUCOCITOS
2. Cmara de Neubauer
3. Microscopio
4. Contador celular
5. Boquilla

REACTIVO UTILIZADO:
Reactivo de Turk
PROCEDIMIENTO: Se requiere de sangre total con EDTA
1. Pipetear sangre con la pipeta de Thoma y la boquilla, hasta la marca de 0.5 evitando la
formacin de burbujas.
2. Limpiar la pipeta para ELIMINAR el exceso de sangre
3. Aspirar reactivo de Turk hasta la marca 11, EVITANDO las BURBUJAS.
4. Se retira la boquilla de la pipeta y esta se agita vigorosamente por 3 min.
5. Preparar la cmara de Neubauer.
6. Se eliminan las 3 primeras gotas de la dilucin.
7. Colocar una gota en la cmara de Neubauer y dejar reposar por 3 min. Para que se asienten los
leucocitos.
8. Leer al microscopio con objetivo de 10X y el contador celular, SOLO EN LOS 4 CUADROS
GRANDES de la cmara de Neubauer, como se indica en la figura.
9. Realizar clculos correspondientes.

CALCULOS: El total de clulas en estos 4 mm3 se multiplica por 50 (factor obtenido entre la
dilucin de la sangre y la profundidad de la cmara).




El recuento de glbulos blancos se realizara en las 4 CUADRICULAS GRANDES que estn en las
orillas, en este dibujo estn MARCADAS con la letra W (White). Y con el OBJETIVO DE 10X
LEUCOCITOS TOTALES/ mm3 = clulas contadas X 50

VALORES DE REFERENCIA:
5,000 10,000/mm3
5.00 10.00 X109 /L

SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES:
Un bajo nmero de glbulos blancos se denomina leucopenia y puede deberse a:


ad del hgado o el bazo


Un alto nmero de glbulos blancos se denomina leucocitosis y puede deberse a:


reumatoide o alergia)




RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

INTRODUCCION: El recuento diferencial de leucocitos es una parte rutinaria de la biomtrica
hemtica que puede ser til en la valoracin de una infeccin o inflamacin, en la determinacin de
los defectos de intoxicacin posible por sustancias qumicas o drogas, en el monitoreo de
trastornos sanguneos como la leucemia, y en los efectos secundarios de tratamientos como la
quimioterapia. El procedimiento consta de una toma de sangre, la misma se disemina en un
portaobjetos de vidrio y luego se tie. A continuacin se determina el porcentaje de cada tipo de
leucocitos.
FUNDAMENTO: Los leucocitos son parte fundamental del tejido hemtico y presentan las
siguientes caractersticas: son clulas que tienen un mayor dimetro que los eritrocitos, presentan
un ncleo de forma irregular, su citoplasma presenta algunas granulaciones las cuales son teidos
con diferentes colorantes, y la cromatina del ncleo puede ser de diferentes densidades.
Pueden distinguirse 5 tipos de leucocitos maduros (neutrfilos, eosinfilos, basfilos, monocitos y
linfocitos) basndose en general en las siguientes caractersticas:






El 65% de leucocitos corresponde a los GRANULOCITOS: Eosinfilos, Basfilos y Neutrfilos.
El 35% corresponde a los AGRANULOCITOS: Monocitos y Linfocitos.
Los leucocitos se desplazan por medio de movimientos amiboideos saliendo de los vasos
sanguneos y llegando a los tejidos, por medio de la DIAPEDESIS. Estas clulas vagabundas son
importantes en las reacciones de defensa contra enfermedades y en general en infecciones,
puesto que pueden fagocitar cuerpos extraos y bacterias.
Tienen una importante funcin en las reacciones inmunolgicas de nuestro organismo
favoreciendo la produccin de anticuerpos.
MATERIAL:











PROCEDIMIENTO:
1. Homogenizar la muestra sangunea y ANTES de 3 hrs. realizar un frotis
2. Empleando un aplicador de madera, depositar una pequea gota de sangre en el extremo de un
portaobjetos totalmente limpio.
3. Con el borde de otro portaobjetos a 20 o 30 grados, tocar la gota, esperar a que la sangre se
distribuya por capilaridad en el extremo del portaobjetos extensor y deslizarlo suavemente sobre el
otro portaobjetos, en sentido longitudinal hasta que la gota quede bien extendida sobre la
superficie del primer portaobjetos (NOTA: revisar clase de leucopoyesis para recordar la forma de
hacer el frotis)
4. Dejar secar el frotis.
5. Teir el frotis con la tincin correspondiente de la siguiente manera:
a. fijar la extensin en metanol absoluto aproximadamente 30 segundos.
b. teir con la solucin de Eosina bufferizada por 20 segundos.
c. enjuagar con agua de la llave.
d. introducir la extensin en solucin de azul de policromo durante 30 segundos.
e. enjuagar con agua de la llave, dejar escurrir el agua y dejar secar al aire libre.
6. colocar una gota de aceite de inmersin y leer al microscopio con el objetivo de 100x.
7. se har un recuento de 100 clulas blancas en total, DIFERENCIANDO cada una de ellas segn
sus caractersticas antes citadas. (VER CLASE LEUCOPOYESIS)
8. evaluar la morfologa de eritrocitos, leucocitos y plaquetas y reportar anormalidades.



VALORES DE
REFERENCIA:
Celular
Relativo (%)
Neutrfilos en
Banda
0 - 5
Neutrfilos
segmentados
45 - 65
Linfocitos 30 - 40
Monocitos 3 - 8
Eosinfilos 1 - 5
Basfilos 0 - 1



RECUENTO DE PLAQUETAS



OBJETIVO

Realizar el conteo de plaquetas existentes en un milmetro cbico de sangre total
Identificar morfolgicamente las plaquetas coloreadas con Wright en extendidos de sangre
perifrica y apreciar su nmero por campo.
Correlacionar la prctica con la teora expuesta en clase.

MARCO TEORICO

Las plaquetas o trombocitos constituyen el elemento forme ms pequeo de la sangre; su
evaluacin en el hemograma manual usualmente slo se realiza en los extendidos coloreados. En
el electrnico, su estudio aporta, adems del valor numrico, otros parmetros de importancia
diagnstica, tales como promedio del volumen plaquetario e histograma plaquetario. A esta
valoracin la llamamos plaquetograma.
Existen dos mtodos para el conteo de plaquetas: manual y electrnico.

PROCEDIMIENTO

El conteo de plaquetas se realiza en sangre anticoagulada con EDTA y diluida con oxalato de
amonio al 1% mediante el uso de la pipeta para dilucin de hemates y el hemocitmetro.

RECURSOS

Sangre anticoagulada con EDTA
Solucin de oxalato de amonio al 1% y/ o Rees Ecker
Pipeta para dilucin de hemates
Cmara de recuento de Neubauer
Laminilla de cuarzo
Caja de Petri con papel filtro humedecido
Agitador de pipetas
Microscopio
Material bibliogrfico
Presentacin en Power point


METODO

Mezcle cuidadosamente, por inversin por lo menos 10 veces, la sangre anticoagulada con el fin
de obtener una muestra homognea
Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0 exactamente
Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para no contaminar la solucin
diluente
Aspire el lquido diluente hasta la marca 101 exactamente
Sujeta la pipeta entre los dedos ndice y pulgar, desprenda la boquilla y deje en reposo durante 3
minutos
Agite durante 10 minutos
Descarte hasta la mitad del bulbo con el fin de eliminar el lquido del capilar e inmediatamente
llene la cmara
Llene la cmara de Neubauer en ambos lados y coloque en ambiente hmedo por 10 minutos. El
ambiente hmedo se logra cubriendo la cmara con una Caja de Petri que llevar adherido un
disco de papel de filtro humedecido
Coloque la cmara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y observe el llenado de la
cmara. No debe haber agregados plaquetarios. Cuidadosamente enfoque el cuadrado central
Disminuya la intensidad de la luz. As le ser ms fcil distinguir y contar las plaquetas
Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeas, opacas, redondas o alargadas,
medianamente refrctiles, y a veces con prolongaciones
El nmero est determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que se subdivide el cuadrado
central, descartando las plaquetas que tocan las lneas derecha e inferior.

Clculo

El nmero de plaquetas por mm se calcula de acuerdo con:
1. Volumen del rea contada: 0.1 mm (1x1x0.1)
2. Dilucin utilizada: 1:100
3. Nmeros de clulas contadas

Plaquetas /mm Nmero de clulas contadas X 1 X dilucin volumen de rea contada

Plaquetas/mm = B X 10 X 100

Plaquetas /mm = B X 1000

Valores de Referencia
El rango normal para el recuento de plaquetas es de 150.000 a 400.000xmm