UNIVERSIDAD SALVADOREA ALBERTO MASFERRER

FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA-BIOLOGA

Catedrtico: Dr. Jorge Collazo Asignatura: Anlisis Instrumental 1
Carrera: Licenciatura en Qumica y Farmacia Ciclo: V - 2013

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Prctica de laboratorio No. 6: Determinacin de acetato de prednisolona (HPLC demostrativa)

Introducin:
La cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC, en ingls) es el mtodo de anlisis instru-
mental ms utilizado actualmente en el anlisis de medicamentos como puede concluirse si se
revisan las monografas oficiales de la USP, por ejemplo. Antes de comenzar a inyectar solucio-
nes de muestras en el cromatgrafo lquido es necesario preparar las muestras y el equipo. En
esta prctica demostrativa se presentar la etapa preparativa que requiere la determinacin del
contenido de acetato de prednisolona en una suspensin oftlmica y se analizar una muestra de
este medicamento.


Objetivos:
-conocer cmo se prepara correctamente la fase mvil (composicin, calidad de los solventes a
mezclar, filtrado y desgasificacin)
-conocer cmo se prepara la solucin patrn y la solucin de la muestra (diluyente, rango de con-
centracin, filtrado)
-conocer cmo se establecen parmetros importantes del equipo (deteccin de los compuestos
que eluyen, velocidad de flujo de la fase mvil)
-poder clasificar el mecanismo de separacin (forma de retencin) de acuerdo con la fase estacio-
naria indicada en la monografa USP
-saber cmo se procesan los datos que acumula el equipo, con el objetivo de poder calcular el
contenido de acetato de prednisolona en la muestra
-elaboracin de un informe de laboratorio, que ser entregado en el plazo acordado



Equipos, reactivos y materiales:
-cromatgrafo lquido con detector UV y columna L1 (USP)
-solventes de calidad HPLC (agua y acetonitrilo)
-patrn de acetato de prednisolona, de pureza conocida
-muestra de suspensin oftlmica
-balanza analtica, bao de ultrasonido, cmara extractora de gases
-cristalera comn del laboratorio analtico (balones volumtricos, pipetas, probetas)

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Catedrtico: Dr. Jorge Collazo Asignatura: Anlisis Instrumental 1
Carrera: Licenciatura en Qumica y Farmacia Ciclo: V - 2013

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Procedimiento:
-observar atentamente cmo el instructor prepara la fase mvil, la solucin patrn y la solucin
de la muestra de suspensin oftlmica

-observar cmo se manipula el cromatgrafo para lograr lo siguiente: hacer circular la fase mvil
a travs de la columna, inyectar las soluciones del patrn y de la muestra, detectar adecuadamente
los compuestos que eluyen de la columna, obtener el cromatograma



Trabajo con los resultados y clculos:

-identificar el acetato de prednisolona a partir del tiempo de retencin del patrn y del pico prin-
cipal del cromatograma de la muestra

-calcular el contenido de acetato de prednisolona en la muestra

-verificar si se cumplen los parmetros de adecuacin del sistema cromatogrfico



Contenido del informe de laboratorio:

-breve introduccin sobre el tema de la prctica de laboratorio (mximo una cuartilla)
-descripcin de la forma en que se preparan las soluciones que se inyectan en el equipo
-descripcin del sistema cromatogrfico empleado (marca y modelo del cromatgrafo, columna
utilizada, flujo de la fase mvil, longitud de onda del detector
-datos primarios, cromatogramas y clculo del contenido de acetato de prednisolona en la
muestra
-conclusiones y bibliografa utilizada







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Autopreparacin (trabajo antes de realizar la prctica)

-es necesario haber estudiado la teora correspondiente a los mtodos cromatogrficos, revisando
los captulos 26 y 28 del libro de texto de Anlisis Instrumental (5. edicin)

-revisar la monografa USP correspondiente al producto analizado


Bibliografa:

-libro de texto de la asignatura: Skoog Holler Nieman. Principios de Anlisis Instrumental,
5. edicin, McGraw-Hill, 2001

-edicin reciente de la USP, comparar con la monografa de otras farmacopeas (BP, etc)