Discusin

Respecto a la seccin inicial del prctico, donde se proceda a la centrifugacin del

homogenizado de hgado de rata, se obtuvieron resultados bastante positivos debido a que
se logr separar de buena manera un pellet de ncleos, mitocondrial y microsomal, adems
de los sobrenadantes correspondientes a cada uno de ellos. A partir de esto, la actividad
dictaba que se deban observar los ncleos obtenidos del primer sobrenadante por medio de
tincin con azul de tripan en el telescopio (objetivo 40X), lo cual resulto en nuestro caso,
un poco dificultoso, pero exitoso, ya que haba muy poca poblacin de ncleos en la
muestra extrada y tom un tiempo hallar uno, mostrndose como pequeos crculos
celestes con un circulo azul oscuro en su interior (ncleo). Posteriormente, en el
experimento N2 no fue posible observar las mitocondrias por medio de la tincin con azul
de tripan, a pesar de que este organelo tambin contiene el objetivo de marcaje (ADN), esto
debido quizs a la mala separacin del pellet y el sobrenadante.
En el experimento nmero tres se separaron 4 tubos de ensayo con diferentes soluciones
(1 Blanco = 1 mL Succinato 0,1M + 1 mL Azul de metileno + 1 mL agua destilada/ 2
Fraccin nuclear = 1 mL Succinato 0,1 M + 1 mL azul de metileno + 1 mL fraccin
nuclear/ 3 Fraccin mitocondrial = 1 mL Succinato 0,1 M + 1 mL azul de metileno + 1 mL
fraccin mitocondrial/ 4 Sobrenadante 2 = 1 mL Succinato 0,1M + 1 mL azul de metileno
+ 1 mL sobrenadante N2), luego de la preparacin se le aplic una capa de vaselina que
tena como objetivo separar el medio de la solucin con el del ambiente para evitar la
oxidacin, a partir de esto, generamos una comparacin con lo que deba pasar (segn lo
explicado por el profesor), y lo que pas realmente, debido a que como ya se mencion
anteriormente, no hubo ningn cambio o fue casi nulo. Llegamos a la conclusin como
grupo de que el extenso tiempo de centrifugacin haya reducido demasiado la cantidad de
organelos que estuviramos identificando, la alta concentracin de azul de metileno, la
denaturacin de enzimas por efecto de los termorreguladores o que el hgado haya tenido
una mala congelacin provocando que los organelos perdieran sus funciones.


Lo que realmente debi ocurrir es una variacin de color en algunos de los tubos de ensayo,
un ejemplo claro de esto es el cambio de color rojo a verde en el tubo de ensayo que
contena la fraccin mitocondrial al aplicarle azul de metileno, donde posteriormente al
agregarle la vaselina y someterlo al bao termorregulado se observara que la solucin se
tornara nuevamente roja, esto debido a que la temperatura ptima para que el succinato
catalice la deshidrogenacin para transformarlo en fumarato es de 37 C, liberando
electrones que reducen a la solucin.