Tpicos em

Biotecnologia III
Alunos:
1
Ana Carolina Dantas
Dayara Oliveira
Emerson de Souza
Floriano Ornai
Guilherme Rben
Ingrid Queiroz




Joo Pedro Viana
Larissa Chicas
Matheus Giro
Paulo Rafael

2
Biotecnologia
aplicada a sade
3
4
Anticorpos
5
Tambm chamados de imunoglobulinas;

So glicoprotenas secretadas pelos linfcitos-B
com funo de defesa do organismo; e

Dividem-se em cinco classes principais (IgA,
IgG, IgM, IgD, e IgE).

Anticorpos
6
No soro humano, IgM:

- Aproximadamente 950 KDa pentmeros(10 pesados,
10 leves e uma cadeia de ligao)

- 1.150 kDa hexmeros (12 pesados e 12 cadeias
leves).

Procedimento experimental
7
Nicotiana benthamiana

Anticorpo: IgM PAT-SM6

Vetores de clonagem: pICH31160 , pICH26033 e
pPT2

Gel de Poliacrilamida(3 - 12%): 150V/2h

IgM precipitado com acetona(20 C/1 h), e
ressuspendido no tampo( 1X): NP LDS
Procedimento Experimental
8
Purificao e Quantificao:
Folhas
maceradas
45 mM Tris, 1.5 M NaCl, 1 mM EDTA,
40 mM cido ascrbico, pH 7.4
Centrifugao
30 min, 4
C, 30,000
g
Sobrenadante
DEAE-
Sepharose
Quantificao
Procedimento Experimental
Anlise de Glicanos

Ligao do Antgeno

Cromatografia de Excluso
9
Resultados
10
SM6 foi expressado eficientemente em N. Benthamiana

Glicosilao de glicostios especficos de IgM em
clulas humano-derivadas
11

Resultados
Resultados
12




Resultados
13




*SM6 foi expressado eficientemente em N.
Benthamiana

*Glicosilao de glicostios especficos de IgM
em clulas humano-derivadas

*Modelo de glicosilao de plantas
produtoras de SM6 assemelha-se humana

Resultados
14




* Clulas vegetais expressam SM6
devidamente montado

Resultados
15




Resultados
16




* Clulas vegetais expressam SM6
devidamente montado
* Derivadas vegetais de glicoformas SM6
mostram integridade funcional
* Modelo de SM6 sugere glicosilaes
especficas do local devido acessibilidade
diferencial

Resultados
17




Resultados
18




* A montagem adequada de IgM para formas
heteromultimericas indica a presena de
chaperonas vegetais com funes
semelhantes a clulas de mamferos.
* Pequenas diferenas na conformao
secundria e na ligao de antgenos entre
derivados de plantas SM6 e SM6
PER
, que
foram encontrados por espectroscopia de
ECD e de citometria de fluxo , pode ser
atribuda a os diferentes procedimentos de
purificao.

Resultados
19




Em geral , a produo de IgMs multimricos
funcionalmente ativos em plantas abre novos
caminhos para a expresso de complexos
proteicos humanos para aplicaes teraputicas .
Alm disso , a possibilidade de produzir de forma
eficiente diferentes glicoformas de IgM bem
caracterizados oferece ferramentas prticas para
elucidar o impacto da glicosilao sobre as
propriedades biolgicas de IgM e , portanto, pode
acelerar o gerao de protenas teraputicas com
funes otimizadas .

Resultados
20


Resultados
21




22
23
A Sndrome da imunidade adquirida um distrbio
(AIDS) imunolgico causado pelo vrus da
imunodeficincia humana (HIV)

36 milhes de pessoas esto infectadas.

Tratamento atravs da Terapia Anti-retroviral.

Existe 5 classes principais de medicamentos: Inibidor
da transcpitase reversa de nuclesideos, inibidor da
transcriptase reversa de nucleotdeos, inibidores de
transcriptase reversa de non-nicletideos, inibidores
de protease, inibidores de fuso e inibidores de
integrasses.
Objetivo
24
Terapia com Saquinavir convencional no muito
eficaz devido a sua baixa biodisponibilidade
.
As Isoenzimas do citocromo P450, especialmente a
CYP3A4, esto envolvidos na biotransformao do
frmaco.

Causa vrios efeitos colaterais.

O uso da nanotecnologia pode aumentar o poder
teraputico e diminuir os efeitos adversos.

Objetivo
25
Preparao da partcula de quitosana.

Morfologia da quitosana.

Eficincia de encapsulamento.

Cintica de liberao.

Capacitao celular do saquinavir simples e
carregado com quitosana.

Eficcia antiviral in vitro.
Metodologia
Resultados
26
Resultados
27
Resultados
28
Resultados
29
Resultados
30
Resultados
31
Resultados
32
Resultados
33
Concluso
34
O encapsulamento do inibidor de proteases saqnavir
foi alcanado com 72% de xito;

A dilatao mxima da estrutura de quitosana foi
observada em pH cido, onde a liberao da droga
tambm foi mxima

O saqnavir em estruturas de quitosana obteve um
potancial superior que a droga livre, mesmo na
ordem de nanogramas