La GS es una enzima presente en todas las especies y en casi todos los tejidos y cataliza la

conversin de glutamato en glutamina en presencia de ATP, puesto que el amoniaco libre es

toxico es necesario que sea transportado en grupos amina o amida.
Las clulas vegetales evitan la toxicidad del amonio incorporndolo rpidamente en los esqueletos
carbonados para formar aminocidos. El paso primero de esta reaccion involucra la accion de la
glutamina sintetasa (GS) la cual combina hidroxilamina con glutamato para formar la glutamina:

El glutamato y el amoniaco son el sustrato de la glutamina sintetesa la cual requiere de ATP para
que pueda realizar su actividad cataltica
El nitrgeno del grupo amida de la glutamina es una fuente de grupos amino para una amplia
gama de procesos biosinteticos.
Las rutas biosinteticas que conducen a glutamato y glutamina son sencillas y todos o algunos de
sus pasos se encuentran en la mayora de los organismos. La ruta mas importante para la
incoporacion de NH4+ al glutamato requieren dos reacciones. Primero, la glutamina sintetasa
cataliza la reaccin del glutamato y el NH4+ para dar glutamina. Esta reaccin tiene lugar en dos
pasos, con el gama glutamil fosfato unido a la enzima como intermediario:



El grupo amida de la glutamina es importante como dador de nitrgeno para varias clases de
molculas entre las que se encuentran las bases purnicas y el grupo amino de la citosina. El
glutamato y el amonaco son el sustrato de la glutamina sintetasa, la cual requiere ATP para la
catlisis.
Asimilacin del amonio
Las clulas vegetales evitan la toxicidad del amonio incorporndolo rpidamente en los
esqueletos carbonados para formar aminocidos (Figura 7 y 8). El paso primario de esta
incorporacin involucra las acciones secuenciales de la glutamina sintetasa y la glutamato
sintetasa. La glutamina sintetasa (GS) combina el amonio con glutamato para formar glutamina:
Glutamato + NH4+ + ATP glutamina + ADP + Pi
Esta reaccin requiere la hidrlisis de un ATP e involucra cationes divalentes como el Mg2+, Mn2+
o Co2+ como cofactores. L La GS tiene una alta afinidad por el NH4+ siendo la Km de 3-5 M. Las
plantas contienen dos clases de GS, una en el citoplasma y otra en los plstidos de las races o en
los cloroplastos de tallos y hojas. Las formas citoslicas son expresadas durante la germinacin de
las semillas o en las clulas vasculares de races y tallos y producen glutamina para el transporte
intracelular de nitrgeno. La GS en los plstidos de races genera nitrgeno amdico para su
consumo; mientras que la GS de los cloroplastos de los tallos reasimila el NH4+ producido por
fotorespiracin. Al aumentar el nivel de glutamina aumenta la actividad de la glutamato sintasa
(tambin conocida como glutamina 2 oxoglutarato aminotransferasa, o GOGAT). Esta enzima
transfiere el grupo amida de la glutamina al - ceto glutarato, dando 2 molculas de glutamato.
Las plantas contienen dos tipos de GOGAT, una que acepta los electrones del NADH, la otra acepta
electrones de la ferredoxina:
El primer paso a realizar sera preparar el extracto enzimtico a
partir del tejido, que en nuestro caso son hojas de girasol. Es
necesario conseguir un extracto porque las enzimas se encuentran en
los compartimentos celulares y para liberarlos hay que romper las
clulas. Pero cuando los tenemos aislados es necesario estabilizarlos
pues de lo contrario perderan su integridad. Con este fin preparamos
un tampn de extraccin, que entre otras cosas lleva una sustancia:

As pues, preparamos cuatro tubos, dos para cada ensayo. Uno servir
como control (y tendr ms cantidad de agua destilada) y el otro ser
el ensayo propiamente dicho. Nada ms iniciar la reaccin en las dos
muestras se incuba durante 5 minutos a 35 C. Pasado este tiempo
aadimos Mezcla Reveladora y dejamos durante otros 5 minutos, pero
ahora a temperatura ambiente. La finalidad de la Mezcla Reveladora
es que sus iones Fe3+ reaccionen con el ?-Glutamilhidroxamato en
medio cido formando un complejo coloreado cuya concentracin
podr ser cuantificada mediante absorbancia a 500 nm.