GENETICA DE LOS VIRUS DE LA INFLUENZA

Reordenamiento
El reordenamiento es una forma de recombinacin en donde dos o ms virus de la influ
enza del mismo o diferente subtipo, co-infectan una clula e intercambian segmento
s de ARN para formar as un nuevo virus. El reordenamiento de los segmentos del ge
noma contribuye al aumento de la diversidad de los virus de la influenza y est as
ociado con epidemias severas y pandemias. Los virus de la influenza A causaron l
as ltimas 4 pandemias ms relevantes: 1918, 1957, 1968 y 2009, todas ellas a causa
de eventos de reordenamiento inter-subtipo(Garten y cols, 2009).
Eventos de reordenamiento pueden ser detectados cuando secuencias de diferentes
segmentos de un mismo virus ocupan posiciones incongruentes en los rboles filogent
icos. Hasta hace poco, eran solamente frecuentes reordenamientos que involucraba
n la HA y NA, quizs porque la gran mayora de las secuencias del virus disponibles
en el banco de datos eran para HA y NA. Sin embargo las secuencias de otros gene
s del virus mostraron que puede haber reordenamiento en segmentos internos y ent
re cepas humanas del mismo subtipo (Holmes, 2005).
La tasa de reordenamiento en los virus de la influenza A tambin brinda conocimien
tos en cuanto a la proteccin cruzada inmunolgica, la cual es relevante en el diseo
de las vacunas. El reordenamiento entre cepas que pertenecen a diferentes tipos
antignicos necesariamente significara que ambas co-infectan una nica clula, implican
do as que la proteccin no es del todo completa en este nivel de diferencia antignic
a. Finalmente el estudio de los modelos de reordenamiento podra brindar important
es claves a la unin de segmentos genmicos, ya que se espera que segmentos estrecha
mente ligados estn sujetos a menor frecuencia dereordenamiento (Nelson y col, 200
7).
El reordenamiento da como resultado diferencias sustanciales en la historia evol
utiva de cada gen individual. Sin embargo, similitudes en la historia de algunos
genes indicaran que adems de las caractersticas antignicas de la HA, el contexto ge
nmico y la compatibilidad de ciertas combinaciones gnicas contribuyen a una mejor
capacidad replicativa del virus (Rambaut y cols, 2008).
Recombinacin del ARN viral
Slo se ha descripto una sola vez la recombinacin clsica en dnde un segmento de ARN d
el virus de la influenza contiene material gentico de dos virus parentales distin
tos y se presume sea una forma extremadamente rara de intercambio de informacin g
entica entre virus de lainfluenza.
La recombinacin de ARN es la unin de dos cadenas separadas de ARN que ocurre por m
ecanismos de cruzamiento o por eleccin de copia. Histricamente para virus de la in
fluenza, la recombinacin de ARN ha sido usada para nombrar al reordenamiento del
ARN. A diferencia de virus de ARN de cadena positiva (Picornaviridae y Coronavir
idae), donde la recombinacin ocurre a alta frecuencia, hasta ahora no se ha podid
o comparar para los virus de la Influenza. Sin embargo se han encontrado ejemplo
s naturales de recombinacin de ARN cuando en el sitio de clivacin HA1/HA2 de la he
maglutinina se encontr una insercin de nucletidos derivada del ARN ribosomal 28S de
l husped (Orlich M. y cols., 1990) o nucletidos derivados del gen NP (Orlich M. y
cols., 1994). Presumiblemente, ste es uno de los pocos sitios en el genoma del vi
rus de la influenza donde puede ser tolerada una insercin sin ninguna consecuenci
a adversa para la viabilidad del virus. Ms que una recombinacin lo que pudo ocurri
r en el ARN es un salto de la polimerasa desde un segmento a otro (Fields S.y co
l., 1982).
Mutantes termosensibles
Mediante mutagnesis qumica, se han aislado muchos mutantes termosensibles (ts) par
a comprender las funciones de las protenas codificadas por cada segmento de ARN.
Aunque algunos de estos mutantes han sido tiles para entender el funcionamiento p
roteico (por ejemplo mutantes de las protenas NA y M1), no se han obtenido buenos
resultados en el uso de mutantes para NS1 y NS2.
Cuando una clula es infectada con dos virus que tienen funciones defectivas en lo
ci diferentes, puede ocurrir complementacin entre virus; la funcin defectiva en un
virus es provista por el virus co-infectante, y viceversa. As se replican los vi
rus infecciosos reordenados que recibieron el complemento total de ocho genes no
defectivos. El primer paso en la reactivacin de la multiplicidad y reactivacin cr
uzada es la complementacin, la cual va seguida por reordenamientos. La complement
acin entre virus de la influenza A ha sido evaluada entre mutantes termosensibles
bajo condiciones en donde mezclas de infecciones se llevan a cabo a temperatura
s restrictivas. Los mutantes ts se arreglan en grupos definidos por la habilidad
de dos virus ts de producir virus infeccioso durante la co-infeccin a la tempera
tura restrictiva (Lamb R. y col., 1996).
Gentica reversa
La gentica reversa parte de una protena que haya sido aislada de una clula y que pr
esente propiedades interesantes. Si el punto de partida es una protena, se clona
el gen que la codifica y se determina su secuencia de nucletidos. Posteriormente
se altera la secuencia bioqumicamente, creando un gen mutante que codifique una v
ersin alterada de la protena. El gen mutante se transfiere a una clula, en la que p
uede integrarse a un cromosoma mediante recombinacin gentica y pasar a formar part
e de la dotacin permanente del genoma celular. Si el gen se expresa, la clula y to
dos sus descendientes sintetizarn una protena alterada (Kaiser K., 1990).
En el comienzo de la era de la tecnologa del ADN recombinante, ha sido posible al
terar genticamente virus ADN para su estudio y para el uso de virus ADN como vect
ores para la expresin de genes forneos. Para muchos virus ARN con genoma infeccios
o y de hebra positiva, ha sido posible transcribir genomas ARN desde ADN clonado
y as obtener virus infeccioso. Los virus de hebra negativa (como el virus de la
influenza) requieren que el virin de ARN se ensamble con un complejo transcriptas
a activa para que se inicie la replicacin, y hasta hace poco para el virus de la
influenza la inhabilidad para solubilizar y reconstituir el complejo transcripta
sa en el ARN desnudo ha evitado la ingeniera gentica del genoma.
La gentica reversa ha tenido, hasta el momento, distintos usos:
caracterizacin de la replicacin del virus de la influenza
El hecho de que se hiciera posible aislar el complejo polimerasa activo para el
virus de la influenza mediante gradiente de centrifugacin, permiti realizar la tra
nscripcin in vitro de pequeas molculas de ARN conteniendo las secuencias terminales
5y 3del virus y analizar las seales promotoras.
desarrollo de vacunas atenuadas
La introduccin de cambios aminoacdicos en el sitio de clivacin de proteasas en el g
en HA del virus aviar tipo H5 altamente letal en Hong Kong en 1997, permiti el de
sarrollo de unavacuna recombinante.
uso del virus de la influenza como vector
Los genes de la HA y NA han sido manipulados para expresar genes forneos. Se inse
rtaron pequeos eptopes en el sitio antignico del tipo de influenza B de la HA del v
irus WSN. Los virus recombinantes son altamente antignicos y pueden ser tiles para
el desarrollo de la vacuna. Por otro lado, la expresin de genes forneos usando la
NA fue relativamente poca. Recientemente se han introducido genes forneos en el
gen de NS1 para poder as expresar la poliprotena usando la propia secuencia proteo
ltica 2 entre dos genes. El gen forneo fue altamente expresado, siendo adems sensibl
es a la temperatura y atenuados en roedores (Enami M., 2002).