Microbiologia e Imunologia Ksia Thas Barros dos Santos Mariana Masello Maia Nathalia Silveira da Fonseca Ribeiro Rafael Melo Yasmin da Silva Fontes PROTOCOO de Treinamento Cientfico ! Professora Bernadete Tei"eira# Tema$ Biodiversidade Bacteriana no Cor%o &'mano Introduo O cor%o h'mano %oss'i 'm microbiota diversificada# (ntre os micror)anismo %resente nesta* %odemos destacar a flora bacteriana a +'al vamos est'dar mais %rof'ndamente# , flora bacteriana normal %ode ser observada atravs de diferentes mtodos como a Colora-.o de /ram# Neste mtodo a bactria classificada como /ram 0 e /ram 1 * de acordo com a estr't'ra de s'a membrana cel'lar# 2tili3aremos em nosso %rocedimento a colora-.o de /ram %ara tornar %ossvel o est'do das bactrias encontradas na re)i.o do 'mbi)o# Se)'ndo 4iri &'lcr 5lder do Pro6eto da Biodiversidade do 2mbi)o5 7O 'mbi)o %rote)ido* tornando5se 'm ref8)io %ara as bactrias da %ele normal9 * as es%cies mais detectadas s.o o Staphylococcus epidermidis,e o Micrococcus luteus# Obetivo Reali3ar 'm est'do sobre a diversidade bacteriana do 'mbi)o* 'tili3ando a Colora-.o de /ram# M!todos ,T(N:;O$ Reali3ar todos os %assos descrito abai"o na 3ona de se)'ran-a do bico de b'nsen# 5Pre%arar o <)ar san)'e* <)ar chocolate* <)ar sim%les* <)ar manitol e caldo sim%les= e des%e6ar e des%e6ar em 'm > %lacas de %etri?@ %lacas de <)ar san)'e e 'ma %laca de cada 'm dos o'tros <)arAe %i%etar o caldo sim%les em 'm t'bo de ensaioB 5es%erar os meios de c'lt'ra end'recerem e formar o meio sClidoB 5com 'm sDab fa3er* fa3er 'm esfre)a-o no 'mbi)oB 52tili3ar o sDab %ara fa3er semead'ra %or es)otamentoE na s'%erfcie das cinco %lacas de %etri com <)arB 5Fechar e identificar as %lacasB 5Colocar na est'fa d'rante @Fh a GHICB 5 ,%Cs observado o crescimento nas %lacas* isolar as colJnias em 'm t'bo de ensaio contendo o caldo sim%les ?com o ob6etivo de obter 'ma c'lt'ra %'raA d'rante @Fh a GHICB 5,%Cs o crescimento das c'lt'ras %'rasB 52tili3ando 'ma al-a de %latina ?flambada ao r'broA* retirar 'ma al+'ota da c'lt'ra 6K isolada no caldo sim%lesB 5Passar a al-a em 'ma lLmina reali3ando movimentos es%iraisB 5Reali3ar a colora-.o de /ramM nas lLminas com a c'lt'ra %'raB 5(s%era as lLminas secaremB 5Com as lLminas secas* %in)ar 'ma )ota de Cleo de seda e observar no microscC%io ? em lente de imers.oA# " Pre#arao de $gar %angue FCrm'laNProd'tos Meio comercial$ Blood <)ar Base* Col'mbia <)ar Base* B&! <)ar* M'eller &inton <)arB San)'e desfibrinado de carneiro o' coelho$ > ml %ara cada OPP ml de meio base# %&$ Q*R 0N5 P*@ Procedimentos Pesar e hidratar o meio conforme instr'-Ses do fabricanteB (sterili3ar em a'toclaveB (sfriar a base T 0N5 >PUCB ,dicionar > ml de san)'e desfibrinado de carneiro %ara cada OPP ml de baseB &omo)enei3ar delicadamente %ara n.o formar bolhas Pre#arao do $gar c&ocolate Form'laNProd'tos Meios comerciais$ B&! <)ar V* Col'mbia <)ar Base* Blood <)ar Base* M'eller &inton <)ar# San)'e de cavalo* carneiro o' coelho desfibrinado# Recomenda5se o 'so da base de B&! <)ar* %or a%resentar melhor crescimento das ce%as e"i)entes* %rinci%almente ce%as de &aemo%hil's s%%# Procedimentos Pesar e hidratar o meio conforme instr'-Ses do fabricanteB (sterili3ar em a'toclaveB (sfriar a base T tem%erat'ra de a%ro"imadamente RPUCB ,dicionar > ml de san)'e desfibrinado de cavalo %ara cada OPP ml de baseB &omo)enei3ar bem at lisar totalmente as hemKcias e o meio a%resentar 'ma cor castanho esc'ro ?chocolateAB Wistrib'ir em %lacas de Petri de XP mm de diLmetro# Pre#arao do $gar nutriente 'caldo sim#les( Form'laNProd'tos$ Prod'to$ N'triente <)ar FCrm'la$ Y ("trato de carne G ) Y Pe%tona > ) Y <)ar K)ar O> ) Y <)'a destilada OPPP ml Y %&$ Q*R 0N5 P*@ Mod !Z 5 > Procedimentos$ Pesar e hidratar os com%onentesB F'ndirB Wistrib'ir G ml %or t'boB (sterili3ar em a'toclaveB ,%Cs retirar da a'toclave* inclinar os t'bos ainda +'entes %ara +'e solidifi+'em com a s'%erfcie em forma de [bico de fla'ta[ ?Ln)'lo de F>UA# Pre#arao do $gar Manitol FCrm'laNProd'tos$ )om#osio em g*+, 5Pe%tona Proteose$ OP#PB("trato de Bife$ O#PBCloreto de SCdio$ H>#PBW5Manitol$ OP#PBZermelho Fenol$ P#P@>B,)ar$ O>#P 5%& Final ?a @>UCA$ H#F \ P#@
Procedimentos$ Wissolva OOO )ramas em OPPPml de K)'a destilada# ,+'e-a %ara dissolver o meio com%letamente# (sterili3ar a'toclavando a O>lbs de %ress.o a O@OUC %or O> min'tos# Mist'rar bem e %or em %lacas de Petri# Pre#arao do $gar sim#les Form'lasNProd'tos$ Completar!! Procedimentos$ )om#letar-- ./!cnica de semeadura #or esgotamento Materiais 5,l-a de %latina 5Bico de b'nsen 5(st'fa 5ColJnia de Bactria Procedimentos 5 Pe)'e a al-a do mesmo modo +'e se %e)a 'ma canetaB 5Flambe a al-a bacteriolC)ica* levando5a ao fo)o at +'e o metal se trone r'broB 5Na 3ona de se)'ran-a ?cerca de @Pcm em torno da chamaA* es%ere +'e a al-a esfrieB 5to+'e o material +'e contm micrCbiosB 5Passe a al-a s'avemente sobre o meio de c'lt'ra* fa3endo 'm 3i)53a)* em 'm 8nico sentido da %laca# Mantendo o mesmo sentido* )ire a %laca e contin'e o 3i)53a)# 5Flambe novamente a al-a* antes de )'ardK5laB 5, %laca de meio de c'lt'ra* assim %rocessada* deve ser )'ardada em tem%erat'ra ade+'ada* com o f'ndo %ara cima* e dei"ada o tem%o s'ficiente %ara +'e os bactrias se m'lti%li+'em* formando colJnias# 0)olorao de Gram Prod'tosNMateriais 5Cristal Zioleta 5Safranina 5<lcool X>] ? o s'ficiente %ara remover o coranteA 5')ol 5^leo de seda 5MicroscC%io 5@ lLminas 5,l-a de %latina 5<)'a Procedimentos 5Core o esfre)a-o com cristal violeta %or O min# 5Remova o corante com K)'a destilada 5Colo+'e o sol'-.o de l')ol sobre o esfre)a-o d'rante O min# 5Remova a sol'-.o de l')ol com K)'a destilada 5ave o esfre)a-o com Klcool X>] at +'e o Klcool +'e escorre da lLmina fi+'e trans%arente 5Remova o Klcool X>] com K)'a destiladaB 5,dicione a safranina d'rante F> se)'ndos 5Remova a safranina com K)'a destilada 5(s%ere a lLmina secar# Materiais 5<)'a destiladaB 5,l-a de %latina 5Bico de b'nsen 5> sDabs 5 > %lacas de %etri 5G t'bos de ensaio 5 (rlenme_er >PP m 5(st'fa 5Bec`er >PP m 5Pissete 5Sol'-.o salinaB 5Balan-aB 5San)'e de carneiro > mB 5(s%Kt'laB 5<)ar baseB 5<)'a destiladaB Resultados$ ,%Cs o es)otamento das bactrias tiradas do 'mbi)o* foi %ossvel observar o crescimento de tras ti%os diferentes de colJnias# (ssa diversidade de colJnias sC %Jde ser observada no <)ar san)'e# No <)ar chocolate* ho've crescimento* mas n.o m'ito* en+'anto +'e no <)ar sim%les ho've %o'co crescimento# , %artir da coleta de colJnias isoladas da Placa de %etri com <)ar san)'e* foram feitas colora-.o )ram nessas tras es%cies de bactrias* observando +'e se tratavam de coccus (bbbbbbbbA# We%ois de isoladas em caldo n'triente* foram novamente s'bimetidas a colora-.o )ram e observadas em microscC%io #Podemos %erceber a %resen-a de coccus ?bbbbA /rams 0# ')om#letar111(............... )oncluso, Referncias Bibliogrfica cM!MS* Cedric et al# Microbiologia M!dica# S.o Pa'lo$ (ditora Manole TW,* OXXX c KON(M,N* (lmer d# (t al# 2iagnstico Microbiolgico, /e3to e 4tlas colorido# Rio de 4aneiro$ /'anabara Koo)an* @PPR# cSC&,(C&T(R* Moselio et al# Microbiologia, Mecanismo das doenas infecciosas#GU edi-.o# Rio de 4aneiro$ /'anabara Koo)an* @PP@# c !M,* ,# Oliveira et al# M!todos de +aboratrio a#licados a clinica, t!cnica e inter#retao# QU edi-.o#Rio de 4aneiro# /'anabara*OXR>#
c MicrCbios ami)os# /!cnica de esgotamento * Set# We @PPH# Wis%onvel em$ e htt%$NNmicrobiosami)os#blo)s%ot#com#brN@PPHNPXNtcnica5de5es)otamento#html f ,cessado em$ OR de ,br# de @PO@# c Cal3avara* Br'no# )ientistas estudam bact!rias 5ue crescem no umbigo. 2is#on6vel em, 7 htt%$NNh_%escience#comNcientistas5est'dam5bacterias5+'e5crescem5no5'mbi)oN f ,cessado em$ OR de ,br# de @PO@# c &'lcr* 4iri et al# 8ell9 8utton 8iodiversit9. the ScienceOnline @POO convention # Wis%onvel em$ e htt%$NNDDD#Dildlifeof_o'rbod_#or)N f ,cessado em $OR de ,br# de @PO@# cUmbigo abriga cerca de cem es#!cies diferentes de bact!rias: mostra #es5uisa# O /lobo#com# Rio de 4aneiro* ,)o# de @POO# Se-.o mais em ciancias# Wis%onvel em$ ehtt%$NNo)lobo#)lobo#comNcienciaN'mbi)o5abri)a5cerca5de5cem5es%ecies5diferentes5de5 bacterias5mostra5%es+'isa5@HPROORf ,cessado em$ ,cessado em$ OR de ,br# We @PO@# c Biomedicina e Microbiolo)ia# Meio de cultura, $gar sangue# S.o Pa'lo# Wis%onvel em$ e htt%$NNbiomedicinaemicro#blo)s%ot#com#brN%Nmeios5de5c'lt'ra#html f ,cessado em$ OR de ,br# We @PO@# cZ(RM(&O* ,lane Beatri3 et al# Pr;ticas de Microbiologia# Rio de 4aneiro$ (ditora /'anabara Koo)an* @PPQ#
Um Estudo Controlado Randomizado de 12 Semanas Do Programa de Terapia Psicológica Integrada Cognitivo-Comportamental Efeito Positivo No Funcionamento Social de Pacientes Esquizofrênicos