Universidad Andrs Bello

Facultad de Ciencias Biolgicas

Laboratorio de Biologa Molecular y Gentica
Profesores: Valentina Muos
Vernica Noches





TRABAJO PRCTICO N3:

MICROSCOPIA II
BIO-131-8










AUTORES:
Sebastin Cerda
Carolina Donoso
Darlyng Herras
Alexandra Neumann



Introduccin

Las aplicaciones actuales del microscopio de fondo oscuro en el campo de la biologa son
muy restringidas. En la prctica de laboratorio se le utiliza a veces para la identificacin de
fresco de algunos microrganismo de forma caractersticas .El microscopio de fondo oscuro
o ultramicroscopio, est basado en el hecho de que la luz se dispersa en los lmites entre
los diversos materiales que poseen diferentes ndices de refraccin. El instrumento
consiste en un microscopio comn en el cual el condensador se remplaza por otro con el
cual se ilumina oblicuamente el objeto. Con el condensador de campo oscuro no entra la
luz directa en el objetivo y por lo tanto el objeto aparece brillante a causa de la dispersin
de la luz sobre un fondo oscuro. Por medio de este instrumento pueden descubrirse pero
no resolverse estructuras menores que la que se visualizan con el microscopio comn de
campo claro. (1)
El recuento celular es imprescindible para conocer el nmero de clulas en cada recipiente
de cultivo. Esto se consigue de modo eficaz mediante un contador electrnico o el uso de
hemocitrometro como el Buker o Neubauer (2) La cmara Neubauer esta adatada al
microscopio claro, oscuro o al contraste de fases. Es un instrumento utilizado para
realizar recuento de clulas tales como sangre orina liquido cefalorraqudeo o sinovial,
etc. Conociendo el volumen de lquido que admite el campo del retculo, se calcula la
concentracin por unidad de volumen de la muestra liquida inicial. Podemos as comparar
la concentracin normal y en casos de enfermedad
El campo oscuro resaltara las caractersticas las estructuras de la clula que vamos a
observar? La medicin del tamao y la cantidad se acercara a los parmetros normales?
Con una correcta utilizacin de los materiales de laboratorio se cumplirn nuestras
expectativas.
Objetivos:
Generar un campo oscuro para la observacin de muestras de pelo humano y comparar su
visualizacin con la de un campo claro, utilizar la cmara Neubauer para un recuento de
clulas de una muestra fresca de sangre de cordero y determinar el tamao celular de
diferentes clulas como frotis de sangre y espermatozoides





Mtodos y materiales



En nuestra primera actividad, si bien en el microscopio de campo oscuro se utiliza un
condensador especial de campo oscuro nosotros generamos uno con un cartulina negra
recortada de forma circular la colocamos en el condensador para bloquear la luz del
condensar y que solo pase los haz de luz por los costados. Despus de generar el campo
oscuro procedemos a comparar un pelo humano en un campo claro y uno oscuro en un
aumento de 4x.
Luego procedimos a calibrar la reglilla puesta anteriormente en el ocular de un
microscopio. Esta reglilla tiene 100 rayas sin unidades pero al comprarla con un
portaobjeto especial con la medicin de 1mm y as crear una relacin entre las lneas sin
unidades de la reglilla con 1mm con un aumento de 4x, 10x y 40x. Esta calibracin se
realiz para medir el tamao aproximado de los componentes de un frotis de sangre
permanente siendo estos los glbulos rojos y blancos (neutrfilos). Adems mediremos el
tamao de espermatozoides de toro diferenciando cabeza y cola. Construiremos una tabla
con 3 mediciones de cada uno sacando as un promedio.
Por ultimo en la actividad N 4 realizaremos un recuento o conteo de clulas de sangre
diluida al 1/100 fresca de cordero. Este recuento lo realizaremos gracias a la cmara de
Neubauer utilizando para su medicin ciertas restricciones como validar solo las clulas
que se encuentren al lado superior derecho para as establecer un parmetro de medicin. Y
solo midiendo 5 cuadrillas centrales y superiores derecha e izquierda.











Resultados
Actividad N 1
A. Observacin de cabello humano en un campo claro

Nombre de la muestra: Cabello
humano
Tipo de muestra: temporal
Microscopio de campo claro
Aumento: 4x
Observaciones: La observacin del pelo
con objetivo de 4x en campo claro se
puede ver una franja marrn, plana sin
ningn detalle a distinguir.




B. Observacin de cabellos humano en campo oscuro.


Nombre de la muestra: Cabello
humano
Tipo de muestra: temporal
Microscopio de campo oscuro
Aumento: 4x
Observaciones: La observacin del pelo
con objetivo de 4x en campo oscuro se
puede ver una franja marrn
tridimensional destacando los bordes se
nota la forma cilndrica del pelo.

Cul es la diferencia entre el campo claro
y el campo escuro?
La diferencia entre ambos campos es que
en el campo claro se pueden observar el cabello humano conformado por queratina con
una gran cantidad de luz haciendo poco distinguible la muestra por su brillo en cambio el
de campo oscuro podemos distinguir mayormente sus estructuras color y hasta su forma
tridimensional esto se debe a que la poca luz que llega por los costados hace que la luz
reflejada por el espcimen sea ms notoria y resalte estas caractersticas
Actividad N 2
Reglilla
2.1 Tabla con la calibracin en los distintos Objetivos

Objetivos Distancia Ocular Distancia en Patrn
conocido
Distancia entre dos
rayas
4x 0 a 40 rayas 1mm 0.025mm
10x 0 a 100 rayas 1mm 0,01mm
40x 0 a 100 rayas 0,25mm 0,0025mm


2.2 Determinar la media de 3 glbulos blancos y rojos y 3 espermatozoides diferenciando
cabeza y cola. En

Frotis de sangre:

Glbulos rojos Glbulos blancos
7.5 micrmetros 15 micrmetros
10 micrmetros 12,5 micrmetros
7,5 micrmetros 17.5 micrmetros
Medio o promedio 8,33 micrmetros 15 micrmetros

Espermatozoides de toro:

Cola Cabeza Completo
17,5 micrmetros 7,5 micrmetro 25 micrmetro
20 micrmetros 7,5 micrmetro 27.5 micrmetros
25 micrmetros 5 micrmetros 30 micrmetro
Promedio 20,8 micrmetro 6,66 micrmetros 27.5 micrmetros


Actividad N 3
Recuento de clulas de una muestra de
sangre fresca de sangre de cordero diluida












((35+45+38+39+36/ 5) X 250) X 100 = 965 000

Este valor representa nuestra estimacin para el total de glbulos rojos por milmetro
cbicos de sangre de cordero diluida, pudimos realizar el conteo gracias a la cmara de
Neubauer



35 36

38

45 39





Discusin


En la primera Actividad realizamos la comparacin de una muestra de cabello humano en
un microscopio de campo claro y uno de campo oscuro generado por nosotros. La
observacin por un campo oscuro hace que la muestra se vuelva tridimensional generando
en ella un leve relieve apreciando mejor su forma cilndrica en comparacin al de campo
claro que se observa la figura plana. Este fenmeno se debe a la cualidad del campo oscuro
para dispersar la luz a nivel de interface para que as el cabello humano aparezca como un
objeto brillante en un fondo oscuro.

Luego en nuestro 2 actividad determinamos mediante una calibracin el tamao celular de
los componentes de una muestra de frotis de sangre permanente ( eritrocitos y neutrfilos)
Los neutrfilos son glbulos blancos de tipo granulocito miden de 9 a 12 micrmetros y
es el tipo de leucocito ms abundante del ser humano (3) Nuestra medicin arrojo un
promedio de 15 micrmetros que, aunque sobrepaso a la media no se alej tan
considerablemente y esto pudo ser por una inexactitud de visualizacin al medirlos. Los
eritrocitos son los elementos ms nmeros en la sangre, son anucleados compuesto por
hemoglobina que su objetivo es transportar oxgeno, ella tambin le da la cualidad del color
rojo y de ah su nombre glbulos rojos, mide entre 5 y 7,5 micrmetros de dimetro (4)
Nuestra tabla nos arroj una media de 8.33 micrmetros que al igual que los neutrfilos o
glbulos blancos se debi a una mala visualizacin de medicin.
A












Bibliografa

1. De Robertis (h) HIB-PONZIO Biologa celular y molecular -15ed... 8 reimp.
Buenos Aires: El ateneo, 2011, pg. 50
2. Elservier Espaa, SL MASSON Travessea de Gracia 17-21 Barcelo Espaa ed
2009, pg. 308
3. es.wikipedia.org/wiki/neutrfilo.
4. es.wikipedia.org/wiki/eritrocito
5.
























Conclusin
La microscopia de fondo oscuro se basa en la dispersin de la luz a nivel de
interfaces.