Del ADN a la biotecnologa moderna El conocimiento del ADN (cido desoxirribonucleico), su estructura y funcin, fue determinante para el desarrollo de la biotecnologa moderna! "a estructura de doble #$lice del ADN, %ue los in&estigadores 'ames (atson y )rancis *ric+ propusieran en ,-./ proporcion respuestas a muc#as preguntas %ue se tenan sobre la #erencia! 0redi1o la autorreplicacin del material gen$tico y la idea de %ue la informacin gen$tica estaba contenida en la secuencia de las bases %ue conforman el ADN! 2s a3n, con el correr de los a4os y de las in&estigaciones, se pudo determinar %ue todos los seres &i&os contienen un ADN similar, formado a partir de las mismas unidades5 los nucletidos! Este cdigo gen$tico mediante el cual se 6escriben7 las instrucciones celulares es com3n a todos los organismos! Es decir %ue el ADN de un ser #umano puede ser 6ledo7 dentro de una bacteria, y una planta puede interpretar la informacin gen$tica de otra planta diferente! A esta propiedad de la informacin gen$tica se la conoce como 6uni&ersalidad del cdigo gen$tico7! El cdigo gen$tico uni&ersal es uno de los conceptos bsicos para comprender los procesos de la biotecnologa moderna! 0or e1emplo, la posibilidad de generar organismos transg$nicos, y %ue las instrucciones del ADN de un organismo puedan determinar nue&as caractersticas en organismos totalmente diferentes! La funcin del ADN El ADN tiene la funcin de 6guardar informacin7! Es decir, contiene las instrucciones %ue determinan la forma y caractersticas de un organismo y sus funciones! Adems, a tra&$s del ADN se transmiten esas caractersticas a los descendientes durante la reproduccin, tanto sexual como asexual! 8odas las c$lulas, procariotas y eucariotas, contienen ADN en sus c$lulas! En las c$lulas eucariotas el ADN est contenido dentro del n3cleo celular, mientras %ue en las c$lulas procariotas, %ue no tienen un n3cleo definido, el material gen$tico est disperso en el citoplasma celular! La estructura del ADN El ADN est organi9ado en cromosomas! En las c$lulas eucariotas los cromosomas son lineales, mientras %ue los organismos procariotas, como las bacterias, presentan cromosomas circulares! 0ara cada especie, el n3mero de cromosomas es fi1o! 0or e1emplo, los seres #umanos tienen :; cromosomas en cada c$lula somtica (no sexual), agrupados en </ pares, de los cuales << son autosomas y un par es sexual! =na mu1er tendr un par de cromosomas sexuales >> y un &arn tendr un par >?! *ada cromosoma tiene dos bra9os, ubicados por arriba y por deba1o del centrmero! *uando los cromosomas se duplican, pre&io a la di&isin celular, cada cromosoma est formado por dos mol$culas de ADN unidas por el centrmero, conocidas como cromtidas hermanas! El ADN se compone de dos cadenas, cada una formada por nucletidos! *ada nucletido, a su &e9, est compuesto por un a93car (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada! "as bases nitrogenadas son cuatro5 adenina (A), timina (8), citosina (*), y guanina (@), y siempre una A se enfrenta a una 8 y una * se enfrenta a una @ en la doble cadena! "as bases enfrentadas se dice %ue son complementarias! El ADN adopta una forma de doble #$lice, como una escalera caracol donde los lados son cadenas de a93cares y fosfatos conectadas por 6escalones7, %ue son las bases nitrogenadas! "a mol$cula de ADN se asocia a protenas, llamadas histonas, y se encuentra muy enrollada y compactada para formar el cromosoma! Esta asociacin de ADN y protenas se conoce como cromatina! "a cromatina puede estar enrollada en mayor o menor grado, dependiendo de la etapa en %ue se encuentra la c$lulaA por e1emplo, cuando el ADN se #a duplicado antes de %ue la c$lula se di&ida, la cromatina se compacta en su mayor grado, y como resultado se pueden &isuali9ar los cromosomas duplicados al microscopio como corp3sculos con forma de >! "a doble #$lice de ADN con las bases nitrogenadas complementarias %ue se ubican #acia dentro y establecen uniones no co&alentes (o fuer9as de atraccin) entre s %ue mantienen la estructura de la mol$cula! "as desoxirribosas (a93cares) y los grupos fosfato constituyen las columnas de la mol$cula! *uando la c$lula se di&ide, cada nue&a c$lula %ue se forma debe portar toda la informacin gen$tica, %ue determine sus caractersticas y funciones! 0ara eso, antes de di&idirse, el ADN debe replicarse, es decir generar una copia de s mismo! Durante la replicacin, la mol$cula de ADN se desenrolla, separando sus cadenas! *ada una de $stas ser&ir como molde para la sntesis de nue&as #ebras de ADN! 0ara eso, la en9ima ADNB polimerasa coloca nucletidos siguiendo la regla de apareamiento AB8 y *B@! El proceso de replicacin del ADN es semiconser&ati&o, ya %ue al finali9ar la duplicacin, cada nue&a mol$cula de ADN estar conformada por una #ebra 6&ie1a7 (original) y una nue&a! Cmo se interpretan las instrucciones escritas en el ADN? "a informacin est guardada en el ADN en el cdigo de secuencia de bases A, 8, * y @ %ue se combinan para originar 6palabras7 denominadas genes! "os genes son fragmentos de ADN cuya secuencia nucleotdica codifica para una protena! Es decir %ue a partir de la informacin 6escrita7 en ese fragmento de ADN se fabrica (sinteti9a) un tipo particular de protena! Aun%ue, en realidad, los genes tambi$n lle&an la informacin necesaria para fabricar mol$culas de ACN (ribosomal y de transferencia) %ue inter&ienen en el proceso de sntesis de protenas! El ACN (cido ribonucleico) es una mol$cula con una estructura similar al ADN! =n gen no es una estructura %ue se &ea sino %ue se define a ni&el funcional! Es una secuencia %ue &a a empe9ar en alg3n lugar del ADN y &a a terminar en otro! 0ara conocer un gen se secuencia, se determina la cantidad de los nucletidos %ue lo forman y el orden en %ue se ubican! 8odas las c$lulas de un organismo tienen el mismo genoma, o con1unto de genes! 0ero, en cada c$lula se expresan los genes %ue se usan! 0or e1emplo, aun%ue una c$lula de la piel tiene toda la informacin gen$tica al igual %ue la c$lula del #gado, en la piel solo se expresarn a%uellos genes %ue den caractersticas de piel, mientras %ue los genes %ue dan caractersticas de #gado, estarn all 6apagados7! 0or el contrario, los genes %ue dan rasgos de 6#gado7 estarn acti&os en el #gado e inacti&os en la piel! "o %ue no se usa se encuentra mayormente compactado! Este empa%uetamiento puede ser temporal o definiti&o! La sntesis de protenas "as protenas son macromol$culas %ue cumplen funciones &ariadas! Day protenas estructurales, otras son en9imas, otras transportan oxgeno como la #emoglobina, #ay protenas in&olucradas en la defensa inmunitaria, como los anticuerpos, otras cumplen funciones de #ormonas como la insulina, etc! As como el ADN est compuesto a partir de nucletidos, las protenas estn compuestas a partir de aminocidos! Day <E aminocidos diferentes, y cada protena tiene una secuencia de aminocidos particular! El proceso de sntesis de protenas consta bsicamente de dos etapas5 la transcripcin y la traduccin! En la primera etapa, las 6palabras7 (genes) escritas en el ADN en el lengua1e de los nucletidos se copian o transcriben a otra mol$cula, el ACN mensa1ero (ACNm)! "uego, en la etapa siguiente, el ACNm se traduce al idioma de las [Escribir texto] protenas, el de los aminocidos! Este flu1o de informacin se conoce como el 6dogma central de la biologa7! "a transcripcin Durante la transcripcin la en9ima ARN polimerasa, copia la secuencia de una #ebra del ADN y fabrica una mol$cula de ACN complementaria al fragmento de ADN transcripto! El proceso es similar a la replicacin del ADN, pero la mol$cula nue&a %ue se forma es de cadena simple y se denomina ACN! Fe denomina ACN mensa1ero por%ue &a a lle&ar la informacin del ADN #acia los ribosomas, las organelas encargadas de fabricar las protenas! El ACN, o cido ribonucleico, es similar al ADN aun%ue no igual! "a traduccin y el cdigo gen$tico "a mol$cula del ACN mensa1ero se traslada a los ribosomas donde ocurre la etapa de traduccin! Durante esta etapa el ribosoma lee la secuencia de nucletidos del ACN mensa1ero por tripletes o tros de nucletidos, denominados codones! A medida %ue el ribosoma lee la secuencia de codones &a formando una protena, a partir de la unin de aminocidos! Feg3n cul es el codn %ue el ribosoma 6lee7 &a colocando el aminocido %ue corresponde! Fi se considera la combinacin de cuatro bases tomadas de a tres, existe un total de ;: codones posibles! *ada codn determina %u$ aminocido se colocar en la protena %ue se est fabricando! De los ;: codones, ;, corresponden a aminocidos y / son codones de terminacin (stop), responsables de la finali9acin de la sntesis proteica! "a siguiente tabla es el cdigo gen$tico o 6diccionario7 %ue permite traducir la informacin escrita en el lengua1e de los cidos nucleicos (nucletidos) al lengua1e de las protenas (aminocidos), y es uni&ersal, o sea, es &lido para todos los seres &i&os! http!!images"clinicaltools"com!images!gene!codontable"#pg "a tabla del cdigo gen$tico es uni&ersal y permite conocer a partir de la secuencia del ACN mensa1ero cmo ser la secuencia de la protena para la cual el gen correspondiente codifica! As, la secuencia A8@ (A=@ en el ACNm) codifica para el aminocido metionina, y el codn 888 (=== en el ACNm) codifica para el aminocido fenilalanina en todos los organismos &i&os! *omo slo existen <E aminocidos en la naturale9a, &arios codones pueden codificar para el mismo aminocido (por e1emplo, al aminocido glicina le corresponden los codones @@=, @@*, @@A y @@@)! *ada codn del ACNm es ledo por otro ACN, llamado ARN de transferencia (ACNt), %ue act3a como un 6adaptador7 entre la informacin %ue lle&a el ACNm y los aminocidos %ue deben ir colocndose para formar la protena correspondiente! El ACNt es muy pe%ue4o comparado con los ACNm y tiene una secuencia, denominada anticodn %ue aparea (es decir, es complementaria) con el codn! *ada ACN de transferencia tiene un anticodn y 6carga7 un aminocido en particular! 0or e1emplo, el ACNt %ue tiene el anticodn =*A, se aparea al codn A@=, y carga el aminocido serina (Fer)! De la misma manera, el ACNt %ue carga tirosina (8yr) se aparea, a tra&$s de su anticodn, con el codn =A*! As se &a formando una cadena polipeptdica (protena) a medida %ue los anticodones de los ACNt reconocen sus respecti&os codones en el ACNm! Este proceso de sntesis proteica ocurre en los ribosomas! $u son las mutaciones? A &eces, y este es un fenmeno relati&amente frecuente, la en9ima %ue se encarga de la replicacin del ADN (ADN polimerasa) se e%ui&oca, es decir, coloca un nucletido en lugar de otro! Fi, por e1emplo, la en9ima ADN polimerasa coloca una 8 en lugar de una A podra ocurrir %ue al traducirse, se colo%ue en la protena un aminocido diferente del %ue correspondera! 0or lo tanto, la protena generada sera diferente en un aminocido a la original! Este cambio en el ADN, llamado mutacin, podra alterar o anular la funcin de la protena! Este e1emplo ilustra el efecto de los cambios o mutaciones puntuales (debidos a un 3nico cambio en la secuencia) en la protena final! En algunos casos las mutaciones pasan inad&ertidas, pero tambi$n pueden pro&ocar la falta de acti&idad de una protena esencial y causar una enfermedad! De todas formas, la mayora de las mutaciones no se manifiestan, o por%ue estn en regiones del ADN donde no #ay genes, o por%ue no cambian el aminocido, o por%ue ese cambio no altera la funcin de la protena! G bien podra alterarse la funcin y esto no resultar per1udicial! 8al es el caso del carcter color de o1os, donde el color claro se produce por falta de ciertas en9imas %ue fabrican los pigmentos del iris! En realidad, las mutaciones son la base de la biodi&ersidad! Es decir %ue las pe%ue4as diferencias en el ADN es lo %ue determina %ue los seres &i&os sean diferentes entre s! Esta di&ersidad en las caractersticas sumada a la existencia de un cdigo gen$tico com3n entre los seres &i&os, son dos #ec#os determinantes en el desarrollo de la biotecnologa moderna! %l ADN y la biotecnologa moderna *uando los cientficos comprendieron la estructura de los genes y cmo la informacin %ue portaban se traduca en funciones o caractersticas, comen9aron a buscar la forma de aislarlos, anali9arlos, modificarlos y #asta de transferirlos de un organismo a otro para conferirle una nue&a caracterstica! 'ustamente, de eso se trata la ingeniera gentica, a la %ue podramos definir como un con1unto de metodologas %ue nos permite transferir genes de un organismo a otro, y %ue dio impulso a la biotecnologa moderna! "a ingeniera gen$tica permite clonar (multiplicar) fragmentos de ADN y expresar genes (producir las protenas para las cuales estos genes codifican) en organismos diferentes al de origen! As, es posible obtener protenas de inter$s en organismos diferentes del original del cual se extra1o el gen, me1orar culti&os y animales, producir frmacos, y obtener protenas %ue utili9an diferentes industrias en sus procesos de elaboracin! &rincipios de la fermentacin anaerbica "a generacin de biogs, me9cla constituida fundamentalmente por metano (*D:) dixido de carbono (*G<) , y pe%ue4as cantidades de #idrgeno (D), sulfuro de #idrgeno (FD<) y nitrgeno (N) constituye un proceso &ital dentro del ciclo de la materia orgnica en la naturale9a! "as bacterias metanog$nicas en efecto constituyen el 3ltimo eslabn de la cadena [Escribir texto] de microorganismos encargados de digerir la materia orgnica y de&ol&er al medio los elementos bsicos para reiniciar el ciclo! Fe estima %ue anualmente la acti&idad microbiolgica libera a la atmsfera entre .-E y HHE millones de toneladas de metano! 'etanognesis =na idea general sobre el proceso microbiolgico in&olucrado en la formacin de metano es necesaria para poder comprender me1or el dise4o y funcionamiento de los denominados reactores o digestores productores de biogs! &rerre(uisitos necesarios para iniciar el proceso "a fermentacin anaerbica in&olucra a un comple1o n3mero de microorganismos de distinto tipo los cuales pueden ser di&ididos en tres grandes grupos principales! "a real produccin de metano es la 3ltima parte del proceso y no ocurre si no #an actuado los primeros dos grupos de microorganismos! "as bacterias productoras del biogas son estrictamente anaerbicas y por lo tanto slo podrn sobre&i&ir en ausencia total de oxgeno atmosf$rico! Gtra caracterstica %ue las identifica es la sensibilidad a los cambios ambientales debido a lo cual ser necesario un mantenimiento casi constante de los parmetros bsicos como la temperatura! "as dificultades en el mane1o de estas delicadas bacterias explican %ue la in&estigacin sistemtica tanto de su morfologa como de la bio%umica fisiolgica slo se #alla iniciado #ace cincuenta a4os! Doy en da gracias a estudios muy recientes podemos conocer me1or el mecanismo y funcionamiento de este comple1o sistema microbiolgico in&olucrado en la descomposicin de la materia orgnica %ue la reduce a sus componentes bsicos *D: y *G<! %tapas inter)inientes Ieamos a#ora las diferentes etapas inter&inientes y sus principales caractersticas! *ase de hidrlisis "as bacterias de esta primera etapa toman la materia orgnica &irgen con sus largas cadenas de estructuras carbonadas y las &an rompiendo y transformando en cadenas ms cortas y simples (cidos orgnicos) liberando #idrgeno y dixido de carbono! Este traba1o es lle&ado a cabo por un comple1o de microorganismos de distinto tipo %ue son en su gran mayora anaerobios facultati&os! *ase de acidificacin Esta etapa la lle&an a cabo las bacterias acetog$nicas y reali9an la degradacin de los cidos orgnicos lle&ndolos al grupo ac$tico *D/B*GGD y liberando como productos Didrgeno y Dixido de carbono! Esta reaccin es endoexerg$tica pues demanda energa para ser reali9ada y es posible gracias a la estrec#a relacin simbitica con las bacterias metanog$nicas %ue substraen los productos finales del medio minimi9ando la concentracin de los mismos en la cercana de las bacterias acetog$nicas! Esta ba1a concentracin de productos finales es la %ue acti&a la reaccin y acti&idad de estas bacterias, #aciendo posible la degradacin manteniendo el e%uilibrio energ$tico! *ase metanognica "as bacterias inter&inientes en esta etapa pertenecen al grupo de las acibacterias y poseen caractersticas 3nicas %ue las diferencian de todo el resto de las bacterias por lo %ue las diferencian de todo el resto de las bacterias por lo cul, se cree %ue pertenecen a uno de los g$neros ms primiti&os de &ida coloni9adoras de la superficie terrestre! "a transformacin final cumplida en esta etapa tiene como principal substrato el ac$tico 1unto a otros cidos orgnicos de cadena corta y los productos finales liberados estn constituidos por el metano y el dixido de carbono!El siguiente grfico resume las distintas caractersticas de cada una de las etapas &istas %ue por simplificacin se #an agrupado en dos fases (cida %ue in&olucra la de #idrlisis y acidificacin y la metanog$nica), con los principales compuestos %umicos inter&inientes! "os microorganismos inter&inientes en cada fase tienen propiedades distintas %ue son muy importantes y se las debe conocer para lograr comprender el e%uilibrio y funcionamiento ptimo de un digestor! Estas caractersticas #an sido resumidas en el cuadr para su me1or comprensin! *ase acidogenica *ase metanognica Jacterias facultati&as (pueden &i&ir en presencia de ba1os contenidos de oxgeno)! Jacterias anaerbicas estrictas (No pueden &i&ir en presencia de oxgeno)! Ceproduccin muy rpida (alta tasa reproducti&a)! Ceproduccin lenta (ba1a tasa reproducti&a)! 0oco sensibles a los cambios de acide9 y temperatura! 2uy sensibles a los cambios de acide9 y temperatura! 0rincipales metabolitos, cidos orgnicos! 0rincipales productos finales, metano y dixido de carbono *omo &emos el proceso #a sido simplificado a3n ms reduciendo el mismo a dos fases principales la cida generadora de productos intermedios y la metanog$nica! Del cuadro anterior se desprende %ue una alteracin en los parmetros de funcionamiento incidir negati&amente sobre la fase metanog$nica preponderantemente, lo cual significar una merma importante en la produccin de gas y una acidificacin del contenido pudi$ndose llegar al blo%ueo total de la fermentacin! Debido a la lenta &elocidad de recuperacin de las bacterias metanog$nicas, la estabili9acin de un digestor 6agriado7 ser muy lenta, de all la importancia del cuidado de los parmetros %ue gobiernan el proceso y %ue &eremos a continuacin en detalle! "a fermentacin anaerbica es un proceso natural %ue ocurre en forma espontnea en la naturale9a y forma parte del ciclo biolgico! De esta forma podemos encontrar el denominado Kgas de loa pantanosK %ue brota en aguas estancadas, el gas natural metano) de los yacimientos petrolferos as como el gas producido en el tracto digesti&o de los rumiantes como los bo&inos! En todos estos procesos inter&ienen las denominadas bacterias metanog$nicas! Composicin y caractersticas Fe llama biogas a la me9cla constituida por metano *D: en una proporcin %ue oscila entre un .EL a un MEL y dixido de carbono conteniendo pe%ue4as proporciones de otros gases como #idrgeno, [Escribir texto] nitrgeno y sulfuro de #idrgeno! Fus caractersticas #an sido resumidas en el CA+AC,%+-.,-CA. C/0 C12 /23 /2. 1,+1. 4-15A. 67!07 &roporciones 8 9olumen ..BME <MB:: , / ,EE 9alor Calrico ':!m ; /.,H B ,E,H << <,,. 9alor Calrico <Cal!m ; H;EE B <.H, .<.H .,:E -gnicin 8 en aire .B,. B B B ;B,< ,emp" ignicin en =C ;.EB M.E B B B ;.EBM.E &resin crtica en 'pa :,M M,. ,,< H,- M,.BH,- g!l E,M ,,- E,EH B ,,< Densidad relati)a E,.. <,. E,EM ,,< E,H/ -nflamabilidad 9ol" en 8 aire .B,. B B B ;B,<
"as primeras menciones sobre biogs se remontan al ,!;EE identificados por &arios cientficos como un gas pro&eniente de la descomposicin de la materia orgnica! En el a4o ,H-E se construye el primer biodigestor a escala real en la Nndia y ya en ,H-; en Exeter, Nnglaterra, las lmparas de alumbrado p3blico eran alimentadas por el gas recolectado de los digestores %ue fermentaban los lodos cloacales de la ciudad! 8ras las guerras mundiales comien9a a difundirse en Europa las llamadas fbricas productoras de biogs cuyo producto se empleaba en tractores y autom&iles de la $poca! En todo el mundo se difunden los denominados tan%ues Nm#off para el tratamiento de aguas cloacales colecti&as! El gas producido se lo utili9 para el funcionamiento de las propias plantas, en &e#culos municipales y en algunas ciudades se lo lleg a inyectar en la red de gas comunal! Durante los a4os de la segunda guerra mundial comien9a la difusin de los biodigestores a ni&el rural tanto en Europa como en *#ina e Nndia %ue se transforman en lderes en la materia! Esta difusin se &e interrumpida por el fcil acceso a los combustibles fsiles y reci$n en la crisis energ$tica de la d$cada del ME se reinicia con gran mpetu la in&estigacin y extensin en todo el mundo incluyendo la mayora de los pases latinoamericanos! "os 3ltimos <E a4os #an sido fructferos en cuanto a descubrimientos sobre el funcionamiento del proceso microbiolgico y bio%umico gracias al nue&o material de laboratorio %ue permiti el estudio de los microorganismos inter&inientes en condiciones anaerbicas (ausencia de oxgeno)! Estos progresos en la comprensin del proceso microbiolgico #an estado acompa4ados por importantes logros de la in&estigacin aplicada obteni$ndose grandes a&ances en el campo tecnolgico! "os pases generadores de tecnologa ms importantes en la actualidad son5 *#ina, Nndia, Dolanda, )rancia, @ran Jreta4a, Fui9a, Ntalia, EE!==!, )ilipinas y Alemania! A lo largo de los a4os transcurridos, la tecnologa de la digestin anaerbica se fue especiali9ando abarcando actualmente muy diferentes campos de aplicacin con ob1eti&os muy diferentes! *omo puede apreciarse en el cuadro seg3n los campos de aplicacin de la tecnologa de la fermentacin anaerbica los ob1eti&os buscados son diferentes o tienen un distinto orden de prioridades! Anali9aremos bre&emente la e&olucin y estado actual de cada uno de los campos descriptos! "as plantas de tratamiento de desec#os industriales, #an tenido una importante e&olucin en los 3ltimos a4os y #abiendo superado una primera etapa a ni&el piloto, en Europa y *#ina se encuentran actualmente siendo difundidas para determinados fines en combinacin con tratamientos aerbicos con&encionales! Estos reactores anaerbicos son de enormes dimensiones (ms de ,!EEE m/ de capacidad), traba1an a temperaturas mesoflicas ( <EO* a :EO* ), o termoflicas (ms de :EO* ) poseen sofisticados sistemas de control y estn generalmente conectados a e%uipos de cogeneracin %ue brindan como productos finalesA calor, electricidad y un efluente slido de alto contenido proteico, para usarse como fertili9ante o alimento de animales! A ni&el latinoamericano, se #a desarrollado tecnologa propia en la Argentina para el tratamiento de &ina9as, residuo de la industriali9acin de la ca4a de a93car! En Jrasil y *olombia se encuentran utili9ando sistemas europeos ba1o licencia! El n3mero de reactores de este tipo a3n no es importante en el mundo (e1!5 ,/E en la *omunidad Econmica Europea) pero los continuos descubrimientos, reducciones de costos y me1oramiento de la confiabilidad #acen suponer un amplio campo de desarrollo en el futuro! "a aplicacin del biogs en el rea rural #a sido muy importante dentro de ella se pueden diferenciar dos campos claramente distintos! En el primero, el ob1eti&o buscado es dar energa, sanidad y fertili9antes orgnicos a los agricultores de 9onas marginales o al productor medio de los pases con sectores rurales de muy ba1os ingresos y difcil acceso a las fuentes con&encionales de energa! En este caso la tecnologa desarrollada #a buscado lograr digestores de mnimo costo y mantenimiento fciles de operar pero con eficiencias pobres y ba1os ni&eles de produccin de energa! El segundo tipo de tecnologa est dirigido al sector agrcola y agroindustrial de ingresos medios y altos! El ob1eti&o buscado en este caso es brindar energa y solucionar gra&es problemas de contaminacin! "os digestores de alta eficiencia desarrollados para esta aplicacin tienen un mayor costo inicial y poseen sistemas %ue #acen ms comple1o su mane1o y mantenimiento! Ambos tipos de digestores se encuentran #oy da en continua difusin! "os reactores sencillos #an tenido una amplia aceptacin en *#ina, Nndia, )ilipinas y JrasilA debido a %ue en estos pases se e1ecutaron importantes planes gubernamentales %ue impulsaron y apoyaron con asistencia t$cnica y financiera su empleo! En el resto de los pases del mundo la difusin alcan9ada por este tipo de digestores no #a sido significati&a *on respecto a los digestores de alta eficiencia la mayora se encuentran instalados en Europa (se estima un total de .EE digestores en los pases de la *EE!)A en el resto del mundo no se #a superado a3n la etapa de unidades demostrati&as o emprendimientos particulares aislados! El tratamiento de l%uidos cloacales mediante sistemas anaerbicos solos o combinados con tratamientos aerbicos es una t$cnica muy difundida en todo el mundo desde #ace ms de :E a4os! 0ara tener una idea de su importancia el gas generado por esta t$cnica en Europa alcan9aba en el a4o ,-M. un total de casi <:E millones de m / anuales [Escribir texto] de biogs! Cecientes progresos en e%uipos de cogeneracin #an permitido una ms eficiente utili9acin del gas generado y los continuos a&ances en las t$cnicas de fermentacin aseguran un sostenido desarrollo en este campo! Debe tenerse en cuenta %ue la incorporacin de esta tecnologa obliga a una estricta regulacin en cuanto a tipo de productos %ue se &ierten en los sistemas cloacales urbanosA por este moti&o en algunos pases donde los desec#os industriales son &ertidos sin tratar en las cloacas los reactores anaerbicos #an tenido gra&es problemas de funcionamiento y en muc#os casos #an sido abandonados! El relleno sanitario, prctica muy difundida en el mundo para eliminar las enormes cantidades de desperdicios generados en las grandes ciudades #an e&olucionado incluyendo #oy en da modernas t$cnicas de extraccin y purificacin del gas metano generado el cual en d$cadas pasadas generaba gra&es problemas, entre los cuales figuraba el ambiental, por muerte de la &egetacin %ue se encontraba en las 9onas cercanas, malos olores %ue molestaban a los residentes y explosi&as me9clas de gases %ue se acumulaban en los stanos de la &ecindad! El a&ance de esta t$cnica #a permitido %ue importantes ciudades del mundo, como es el caso de Fantiago de *#ile en Am$rica "atina, incluya un importante porcenta1e de gas procedente de esta fuente en la red de distribucin urbana de gas natural! 8odos los campos de aplicacin anali9ados muestran %ue la tecnologa ba1o estudio se encuentra en una franca etapa de perfeccionamiento y difusin! "as causas %ue moti&arn y regularan su futura expansin se encuentran centradas en dos aspectos crticos del futuro como son la energa y la contaminacin! )actores %ue afectan la produccin de gas5 "a acti&idad metablica in&olucrada en el proceso metanog$nico se &e afectada por di&ersos factores! Debido a %ue cada grupo de bacterias inter&inientes en las distintas etapas del proceso responde en forma diferencial a esos cambios no es posible dar &alores cualitati&os sobre el grado %ue afecta cada uno de ellos a la produccin de gas en forma precisa! Entre los factores ms importantes a tenerse en cuenta se desarrollarn los siguientes5 tipo de sustrato (nutrientes disponibles) temperatura del sustratoA la carga &olum$trica tiempo de retencin #idrulico ni&el de acide9 (pD) relacin *arbonoPNitrgeno concentracin del sustratoA el agregado de inoculantes grado de me9clado presencia de compuestos in#ibidores del proceso! ,ipo de materia prima "as materias primas fermentables incluyen dentro de un amplio espectro a los excrementos animales y #umanos, aguas residuales orgnicas de las industrias (produccin de alco#ol, procesado de frutas, &erduras, lcteos, carnes, alimenticias en general), restos de cosec#as y basuras de diferentes tipos, como los efluentes de determinadas industrias %umicas! El proceso microbiolgico no solo re%uiere de fuentes de carbono y nitrgeno sino %ue tambi$n deben estar presentes en un cierto e%uilibrio sales minerales (a9ufre, fsforo, potasio, calcio, magnesio, #ierro, manganeso, molibdeno, 9inc, cobalto, selenio, tungsteno, n%uel y otros menores)! Normalmente las sustancias orgnicas como los esti$rcoles y lodos cloacales presentan estos elementos en proporciones adecuadas! Fin embargo en la digestin de ciertos desec#os industriales puede presentarse el caso de ser necesaria la adicin de los compuestos enumerados o bien un post tratamiento aerbico "as sustancias con alto contenido de lignina no son directamente apro&ec#ables y por lo tanto deben someterse a tratamientos pre&ios (cortado, macerado, compostado) a fin de liberar las sustancias factibles de ser transformadas de las incrustaciones de lignina! En lo atinente a esti$rcoles animales la degradacin de cada uno de ellos depender fundamentalmente del tipo de animal y la alimentacin %ue #ayan recibido los mismos! "os &alores tanto de produccin como de rendimiento en gas de los esti$rcoles presentan grandes diferencias! Esto es debido al sinn3mero de factores inter&inientes %ue #acen muy difcil la comparacin de resultados! *omo norma se deber tomar en cuenta %ue a ra9 de estar traba1ando en un medio biolgico slo los promedios estadsticos de una serie prolongada de mediciones sern confiables siempre y cuando figuren las condiciones en las cuales fueron reali9adas las pruebas! En cuanto al &olumen de esti$rcol producido por las distintas especies animales son &ariables de acuerdo fundamentalmente al peso y al tipo de alimentacin y mane1o de los mismos! *uando se encare un proyecto especfico se recomienda reali9ar una serie de mediciones en el lugar donde se empla9ar el digestor! A modo ilustrati&o se expone a continuacin un cuadro indicati&o sobre cantidades de esti$rcol producido por distintos tipos de animales y el rendimiento en gas de los mismos tomando como referencia el +ilogramo de slidos &oltiles! %.&%C-% &%.1 9-91 <g %.,-%+C1L!da l!<g"."9" 8C/0 *erdos .E :,. B ; /:E B ..E ;. B ME Iacunos :EE <. B:E -E B /,E ;. E%uinos :.E ,< B ,; <EE B /EE ;. G&inos :. <,. -E B /,E ;/ A&es ,!. E,E; /,E B ;<E ;E *aprinos :E ,,. ,,E B <-E B ,emperatura del sustrato 0ara %ue se inicie el proceso se necesita una temperatura mnima de :O a .O * y no se debe sobrepasar una mxima de alrededor de MEO* ! Fe reali9a generalmente una diferenciacin en tres rangos de temperatura de acuerdo al tipo de bacterias %ue predominan en cada una de ellas 4AC,%+-A. +AN51 D% ,%'&%+A,>+A. .%N.-4-L-DAD 0siccroflicas menos de <EO* Q <O*P#ora 2esoflicas entre <EO* y :EO* Q ,O*P#ora 8ermoflicas ms de :EO* Q E,.O*P#ora "a acti&idad biolgica y por lo tanto la produccin de gas aumenta con la temperatura! Al mismo tiempo se deber tener en cuenta %ue al no generar calor el proceso la temperatura deber ser lograda y mantenida mediante energa exterior! El cuidado en el mantenimiento tambi$n debe extremarse a medida %ue aumentamos la temperatura, dada la mayor sensibilidad %ue presentan las bacterias termoflicas a las pe%ue4as &ariaciones t$rmicas! [Escribir texto] 8odas estas consideraciones deben ser e&aluadas antes de escoger un determinado rango de temperaturas para el funcionamiento de un digestor ya %ue a pesar de incrementarse la eficiencia y produccin de gas paralelamente aumentar los costos de instalacin y la comple1idad de la misma! "os digestores %ue traba1an a temperaturas meso y termoflicas poseen generalmente sistemas de calefaccin, aislamiento y control los cuales son ob&iados en digestores rurales econmicos %ue traba1an a ba1as temperaturas! "a temperatura est ntimamente relacionada con los tiempos %ue debe permanecer la biomasa dentro del digestor para completar su degradacin (8iempo de retencin Didrulica, 8CD)! A medida %ue se aumenta la temperatura disminuyen los tiempos de retencin y en consecuencia se necesitar un menor &olumen de reactor para digerir una misma cantidad de biomasa! 9elocidad de carga )olumtrica *on este t$rmino se designa al &olumen de sustrato orgnico cargado diariamente al digestor! Este &alor tiene una relacin de tipo in&ersa con el tiempo de retencin, dado %ue a medida %ue se incrementa la carga &olum$trica disminuye el tiempo de retencin! Existen diferentes formas de expresar este parmetro siendo los ms usuales los siguientes5 +g de materialPdaA +g de materia secaPdaA +g de slidos &oltilesPda todos expresados por metro c3bico de digestor! "as cantidades de slidos y slidos &oltiles se extraen afectando a las cantidades en Rg! de material cargado con los porcenta1es de slidos o slidos &oltiles %ue se obtiene por anlisis! (0orcenta1e de slidos sometiendo al sustrato a desecacin, ,E.O* #asta peso constante y extrayendo el siguiente coeficiente5 (peso #3medo B peso seco)Ppeso #3medo! El porcenta1e de slidos &oltiles se obtiene sometiendo la muestra seca a la mufla, .;EO* durante tres #oras y extrayendo el siguiente coeficiente5 =n factor importante a tener en cuenta en este parmetro es la dilucin utili9ada, debido a %ue una misma cantidad de material biodegradable podr ser cargado con diferentes &ol3menes de agua! ,iempos de retencin Este parmetro slo puede ser claramente definido en los 6sistemas discontinuos o batc#7 donde el 8!C! coincide con el tiempo de permanencia del sustrato dentro del digestor! En los digestores continuos y semicontinuos el tiempo de retencin se define como el &alor en das del cociente entre el &olumen del digestor y el &olumen de carga diaria! De acuerdo al dise4o del reactor, el me9clado y la forma de extraccin de los efluentes pueden existir &ariables diferencias entre los tiempos de retencin de l%uidos y slidos debido a lo cual suelen determinarse ambos &alores! El 8!C! est ntimamente ligado con dos factores5 el tipo de sustrato y la temperatura del mismo! "a seleccin de una mayor temperatura implicar una disminucin en los tiempos de retencin re%ueridos y consecuentemente sern menores los &ol3menes de reactor necesarios para digerir un determinado &olumen de material! "a relacin costo beneficio es el factor %ue finalmente determinar la optimi9acin entre la temperatura y el 8!C!, ya &aran los &ol3menes, los sistemas paralelos de control, la calefaccin y la eficiencia! *on relacin al tipo de sustrato, generalmente los materiales con mayor proporcin de carbono retenido en mol$culas resistentes como la celulosa demandar mayores tiempos de retencin para ser totalmente digeridos! En la )N@=CA : podemos obser&ar como se distribuye en funcin al tiempo de retencin la produccin diaria de gas para materiales con distintas proporciones de celulosa! A modo de e1emplo se dan &alores indicati&os de tiempos de retencin usualmente ms utili9ados en la digestin de esti$rcoles a temperatura mesoflica! El lmite mnimo de los 8!C! est dado por la tasa de reproduccin de las bacterias metanog$nicas debido a %ue la continua salida de efluente del digestor extrae una determinada cantidad de bacterias %ue se encuentran en el l%uido! Esta extraccin debe ser compensada por la multiplicacin de las bacterias %ue pertenecen dentro del reactor! 'A,%+-A &+-'A ,"+"/" Esti$rcol &acuno l%uido <E B /E das Esti$rcol porcino l%uido ,. B <. das Esti$rcol a&iar l%uido <E B :E das 0or esta ra9n en los 3ltimos a4os se #an buscado dise4os de cmaras de digestin %ue procuran lograr grandes superficies internas sobre las cuales se depositan como una pelcula las bacterias u otros sistemas %ue logran retener a las metanog$nicas pudi$ndose lograr de este modo 8!C! menores (&er <!:!, )iltro anaerbico y =!A!F!J!, respecti&amente)! 9alor de acide? @p/A =na &e9 estabili9ado el proceso fermentati&o el pD se mantiene en &alores %ue oscilan entre M y H,.! Debido a los efectos buffer %ue producen los compuestos bicarbonatoBdixido de carbono (*G < BD*G / ) y Amonio BAmonaco (ND : BND / ) el proceso en s mismo tiene capacidad de regular diferencias en el pD del material de entrada! "as des&iaciones de los &alores normales es indicati&o de un fuerte deterioro del e%uilibrio entre las bacterias de la fa9 cida y la metanog$nica pro&ocado por se&eras fluctuaciones en alguno de los parmetros %ue gobiernan el proceso! Contenido de slidos "a mo&ilidad de las bacterias metanog$nicas dentro del sustrato se &e crecientemente limitada a medida %ue se aumenta el contenido de slidos y por lo tanto puede &erse afectada la eficiencia y produccin de gas! 0or otro lado podemos encontrar en la literatura datos de producciones de gas importantes logradas en rellenos sanitarios con un alto contenido de slidos! En este punto tampoco existen reglas fi1asA mediciones reali9adas utili9ando me9clas de esti$rcoles animales en agua #an determinado %ue para digestores continuos el porcenta1e de slidos ptimo oscila entre el HL y el ,<L! -nclusin de inoculantes El crecimiento bacteriano dentro de los digestores sigue desde su arran%ue la cur&a tpica graficada en la siguiente figura! [Escribir texto] En la figura pueden distinguirse claramente tres etapas5 "a de arran%ue (N), la de estabili9acin (NN) y la de declinacin (NNN)! "a primera etapa puede ser acortada mediante la inclusin de un determinado porcenta1e de material de otro digestor rico en bacterias %ue se encuentran en plena acti&idad! Esto es particularmente importante en los digestores discontinuos %ue deben ser arrancados frecuentemente! Al llegarse en forma ms rpida a la estabili9acin puede incrementarse la produccin de gas por +g! de esti$rcol! "os dos factores a tener en cuenta en la inoculacin de un digestor es la proporcin en %ue se agrega y la edad del mismo! *uanto mayor sea la proporcin y menor la edad mayor ser la eficacia! Agitacin 3 me?clado "os ob1eti&os buscados con la agitacin son5 remocin de los metabolitos producidos por las bacterias metangenas, me9clado del sustrato fresco con la poblacin bacteriana, e&itar la formacin de costra %ue se forma dentro del digestor, uniformar la densidad bacteriana y e&itar la formacin de espacios 6muertos7 sin acti&idad biolgica! En la seleccin del sistema, frecuencia e intensidad de la agitacin se debern reali9ar las siguientes consideraciones5 El proceso fermentati&o in&olucra un e%uilibrio simbitico entre &arios tipos de bacterias! "a ruptura de ese e%uilibrio en el cul el metabolito de un grupo especfico ser&ir de alimento para el siguiente implicar una mema en la acti&idad biolgica y por ende una reduccin en la produccin de gas! *omo conclusin en la eleccin de un determinado sistema se tendr siempre presente tanto los ob1eti&os buscados como el pre1uicio %ue puede causar una agitacin excesi&a debi$ndose buscar un punto medio ptimo! Existen &arios mecanismos de agitacin utili9ados desde los ms simples %ue consisten en un batido manual o el pro&ocado por la entrada y salida de los l%uidos #asta sofisticados e%uipos %ue in&olucran agitadores a #$lice, recirculadores de sustrato e inyectores de gas! -nhibidores "a presencia de metales pesados, antibiticos y detergentes en determinadas concentraciones pueden in#ibir e incluso interrumpir el proceso fermentati&o! *uando es demasiado alta la concentracin de cidos &oltiles (ms de <!EEE ppm para la fermentacin mesoflica y de /!;EE ppm para la termoflica se in#ibir la digestin! 8ambi$n una ele&ada concentracin de Nitrgeno y Amonaco destruyen las bacterias metanog$nicas! -N/-4-D1+%. C1NC%N,+AC-1N -N/-4-D1+A FG: .!EEE ppm Na*l :E!EEE ppm Nitrato (seg3n contenido de Nitrgeno) E,E. mgPml *u ,EE mgPl *r <EE mgPl Ni <EEB.EE mgPl *N (Despu$s %ue se #an domesticado las bacterias metanog$nicas a <B,E mgPml)! <. mgPl AJF (Detergente sint$tico) <EB:E mgPl Na /!.EEB.!.EE mgPl R <!.EEB:!.EE mgPl *a <!.EEB:!.EE mgPl 2g ,!EEEB,!.EE mgPl En el cuadro se dan &alores de concentraciones de ciertos in#ibidores comunes! Ialores %ue se deben tomar como orientati&os, puesto %ue las bacterias inter&inientes pueden con el tiempo adaptarse a condiciones %ue en un principio las afectaba marcadamente! [Escribir texto]