Quim. Nova, Vol. 36, No.

6, 848-858, 2013
R
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v
i
s

o
*e-mail: araujolv@me.com
BIOSSURFACTANTES: PROPRIEDADES ANTICORROSIVAS, ANTIBIOFILMES E ANTIMICROBIANAS
Lvia Vieira de Araujo* e Denise Maria Guimares Freire
Departamento de Bioqumica, Instituto de Qumica, Universidade Federal do Rio de Janeiro, 21941-909 Rio de Janeiro RJ, Brasil
Mrcia Nitschke
Departamento de Fsico-Qumica, Instituto de Qumica de So Carlos, Universidade de So Paulo, CP 780, 13560-970 So Carlos
SP, Brasil
Recebido em 13/11/12; aceito em 15/2/13; publicado na web em 15/4/13
BIOSURFACTANTS: ANTICORROSIVE, ANTIBIOFILM AND ANTIMICROBIAL PROPERTIES. Due to the importance
of biolms in the food industry, new products are being developed to enhance the efciency of cleaning food-contact surfaces.
Biosurfactants could be an alternative to synthetic products. The major advantages of biosurfactants over synthetic detergents are
their low toxicity and highly biodegradable nature. Biosurfactants may also exhibit antimicrobial, anti-adhesive and anticorrosive
activity concomitantly. In this review, we emphasize the potential application of biosurfactants as surface coating agents to prevent
corrosion and decrease planktonic and sessile microbial growth.
Keywords: biosurfactant; antibiolm; anticorrosive.
INTRODUO
Qualquer processo industrial que utilize matria prima de origem
biolgica pode fornecer os ingredientes e as condies para o cresci-
mento de micro-organismos, tanto sob a forma planctnica na gua
circulante quanto como biolmes sobre superfcies.
1
Geralmente, a
sanitizao de superfcies o mtodo utilizado para prevenir conta-
minao, no entanto, existem algumas evidncias de que as prticas
de sanitizao atualmente aplicadas so menos efetivas sobre micro-
-organismos aderidos do que sobre clulas planctnicas.
2
Devido
importncia dos biolmes em indstrias alimentcias, novos produtos
so constantemente desenvolvidos para melhorar a ecincia de lim-
peza das superfcies que entram em contato com o alimento durante o
processamento. Os biossurfactantes so compostos com propriedades
tensoativas, produzidos por micro-organismos. Seu uso foi sugerido
como uma alternativa produtos de origem sinttica. As principais
vantagens em relao aos detergentes sintticos residem em sua baixa
toxicidade e natureza altamente biodegradvel. Desta forma, so
menos poluentes que os sintticos. Estes mesmos produtos tambm
podem apresentar atividade antimicrobiana e antiadesiva simulta-
neamente.
3
Nesta reviso enfatizamos a importncia do controle de
biolmes, o potencial de uso de biossurfactantes e a aplicao dos
mesmos como agentes antimicrobianos, antibiolmes e anticorrosivos
em indstrias alimentcias.
Biolmes
Inicialmente, imaginava-se que os micro-organismos viviam de
maneira planctnica, ou seja, livres, em suspenso.
4
Mas atualmente
sabe-se que, em sua grande maioria, as bactrias so encontradas
em comunidades de diferentes graus de complexidade e a existncia
do tipo de vida planctnica independente parece ser eventual.
4,5
As
comunidades bacterianas que se desenvolvem entre fases, como in-
terfaces slido-lquido ou ar-lquido, so chamadas de biolmes.
6
Em
indstrias de alimentos, a ocorrncia de falhas nos procedimentos de
higienizao faz com que resduos de alimentos quem aderidos aos
equipamentos e superfcies.
2,7
Ento, sob determinadas condies, os
micro-organismos aderem, interagem com as superfcies e iniciam a
multiplicao celular at formar uma massa celular que capaz de
agregar nutrientes, resduos e outros micro-organismos.
2,8
O termo
biolme no inclui somente os micro-organismos, mas tambm
engloba o material extracelular produzido na superfcie e qualquer
material que esteja dentro da matriz resultante.
9-11
O termo biolme
se refere interao dinmica entre as populaes bacterianas com-
postas por uma ou mais espcies, caracterizadas por heterogeneida-
des temporais (desenvolvimento), espaciais (organizao espacial),
funcionais (variao na atividade metablica), estrutura hierrquica e
estgios evolucionrios bem denidos. Em geral, a diferena entre a
simples adeso do micro-organismo s superfcies e o biolme pode
ser denida atravs dos seguintes critrios: o papel da superfcie no
crescimento da populao bacteriana e a existncia de comunicao
clula-a-clula (quorum sensing) dentro da populao.
12
Enquanto
o termo biolme se refere a um microambiente complexo em uma
superfcie, existem vrios outros termos que se referem adeso das
bactrias s superfcies. Quando clulas planctnicas se associam a
uma superfcie, o termo usual aderncia. O termo adsoro tambm
usado para descrever o evento inicial da clula bacteriana associar-se
a uma superfcie. A aderncia baseada em foras fsico-qumicas
atrativas entre o micro-organismo e a superfcie. Quando o micro-
-organismo se torna rmemente aderido, geralmente com a ajuda de
material extracelular, o termo xao pode ser aplicado.
10
Adeso e formao do biolme
Quando um udo contendo micro-organismos e/ou outras subs-
tncias entra em contato com uma superfcie, o primeiro evento que
ocorre a adsoro que geralmente chamado de condicionamento.
O pr-tratamento ou condicionamento de superfcies, frequentemente
relacionado composio do uido, pode ter efeito inibitrio ou es-
timulante da adeso microbiana.
10
Os biolmes podem ser formados
por populaes desenvolvidas a partir de uma nica, ou de mltiplas
espcies, podendo ser encontrados em uma variedade de superfcies
biticas e/ou abiticas.
13
A adeso bacteriana pode gerar o processo
de multiplicao microbiana e formao de biolme
12-14
e pode ser
afetado por uma srie de fatores como a espcie do micro-organismo,
as condies de crescimento e a produo de substncias extracelula-
res polimricas (EPS).
4,13
Os micro-organismos que so responsveis
Biossurfactantes: propriedades anticorrosivas, antibiolmes e antimicrobianas 849 Vol. 36, No. 6
pelo incio da adeso na superfcie so denominados colonizadores
primrios. A presena desses colonizadores primrios pode permitir
que outros tambm participem do processo de aderncia.
10
A adeso
da clula bacteriana a uma superfcie condicionada considerada
um evento aleatrio. As clulas aderem, multiplicam e acumulam
produzindo uma pelcula de juno, na qual pode ocorrer o acmulo
das clulas. A pelcula de juno tambm providencia um meio de
estabilizar comunidades que esto continuamente sujeitas s foras
de cisalhamento.
6
As espcies que possuem apndices celulares como
fmbrias, clios e agelos, podem fazer a aproximao das clulas
ao substrato mais rapidamente e facilitar a aderncia da bactria.
13,15

Alm disso, a hidrofobicidade e a carga da superfcie dos micro-
-organismos podem afetar suas capacidades de aderir s superfcies.
13

Vrios estudos sugerem que a carga e a hidrofobicidade da superfcie
celular microbiana possuem um papel importante nos estgios iniciais
da adeso, por isso foram desenvolvidos mtodos que objetivam a
determinao das propriedades fsico-qumicas das superfcies das
clulas microbianas e das superfcies s quais as clulas aderem. Estes
mtodos incluem motilidade eletrofortica (ME),
15
aderncia bacteriana
ao hidrocarboneto (BATH), aderncia microbiana a solventes (MATS)
16

e aderncia ao poliestireno.
15
A hidrofobicidade e a carga supercial
das bactrias podem diferir entre espcies, sorotipos ou linhagens, e
podem sofrer alteraes de acordo com variaes nas condies de
desenvolvimento, estado siolgico das clulas, e composio do
meio de suspenso.
15
A classicao da hidrofobicidade das clulas
pode ser dividida em: clulas fortemente hidrofbicas, quando mais de
55% das clulas passam para a fase do hexadecano; moderadamente
hidrofbicas, quando 30-40% das clulas passam para a fase do hexa-
decano; moderadamente hidroflicas, quando 10-29% passam para a
fase do hexadecano ou fortemente hidroflicas, quando menos de 10%
das clulas passam para a fase do hexadecano.
15
A metodologia do
MATS foi desenvolvida para facilitar a caracterizao das superfcies
das clulas microbianas. uma anlise simples, rpida e quantitativa
que foi inspirada no mtodo BATH.
16
Existem vrias teorias sobre a
formao dos biolmes, o processo mais estudado observado em
termos de distncia da bactria em relao superfcie. Em distncias
maiores que 50 nm, somente foras de longo alcance atuam e a ligao
reversvel. Conforme a distncia de separao se aproxima de 20 nm,
tanto foras de longo alcance (fora de van der Waals e eletrosttica)
quanto interaes de curto alcance (ligao qumica e interaes hi-
drofbicas) esto operando. Esta fase pode ser reversvel, mas com o
tempo se torna irreversvel. Em distncias menores que 15 nm foras
adicionais entram em ao como a produo de polmeros adesivos
que levam xao irreversvel. A fase nal depende da habilidade do
micro-organismo metabolizar e produzir exopolissacardeos (EPS).
7,10

Poderamos subdividir a formao de biolme em 5 etapas:
1 - Fase de Aproximao: Aproximao do micro-organismo
superfcie e ligao reversvel (Lifshitz-van der Waals e eletros-
ttica), micro-organismos a 50 nm de distncia da superfcie,
neste ponto a aproximao tambm mediada por propriedades
no especcas da superfcie da clula.
2 - Fase de adeso: Transio da ligao reversvel para irreversvel,
de forma que, devido a repulso eletrosttica (20nm da super-
fcie), comeam a ocorrer interaes secundrias e o rearranjo
das bactrias sobre a superfcie remove a gua, auxiliando na
ocorrncia de interaes especcas de curta distncia.
3 - Fase aderida: Ligao irreversvel. Micro-organismos a distncias
menores que 15 nm da superfcie (ligao qumica e interaes
hidrofbicas);
4 - Fase de Maturao do biolme: Produo de polmeros adesivos
e multiplicao celular;
5 - Fase de Biolme maduro: Incio da disperso de clulas do bio-
lme para colonizao de outros nichos;
Existem outros princpios gerais que foram referidos como apli-
cveis adeso bacteriana como o da energia livre.
10
A adeso ocorre
se resultar em um decrscimo da energia livre do sistema. Com base
no balano da energia livre interfacial possvel calcular se ocorre
esse decrscimo de energia livre no sistema e predizer (negligencian-
do interaes de cargas eltricas, uma vez que sistemas biolgicos
geralmente tem grande fora inica e essas interaes geralmente
so negligenciveis) se a adeso ser mais favorvel ou menos favo-
rvel de acordo com cada superfcie e micro-organismo.
17,18
Porm,
alguns estudos observaram que nem sempre esse critrio vlido.
19

Interaes hidrofbicas foram sugeridas como responsveis por uma
ampla gama de fenmenos de aderncia. Existem evidncias para
sugerir que a hidrofobicidade pode estar relacionada a estruturas pro-
teicas na superfcie da clula. Entretanto, no est claro na literatura
que a hidrofobicidade uma forte precursora da aderncia a vrias
superfcies slidas. Por outro lado, pode ser um dos fatores envol-
vidos na aderncia inicial dos micro-organismos s superfcies.
10,20

Quanto maior a hidrofobicidade das superfcies envolvidas na for-
mao do biolme, maior ser a formao deste.
21
A hidrofobicidade
bacteriana pode variar muito entre diferentes linhagens de mesmos
micro-organismos.
22
A hidrofobicidade da parede celular pode estar
relacionada adeso, tanto em superfcies hidrofbicas quanto em
superfcies hidroflicas.
23
Em superfcies hidrofbicas, as interaes
hidrofbicas so consideradas as principais foras e, em superfcies
hidroflicas, as interaes eletrostticas so as principais. Repulses
hidroflicas e atraes hidrofbicas so devidas principalmente s
interaes acidobsicas de Lewis e s interaes de Lifshitz-van der
Waals geralmente interferem menos.
16
Bactrias com altos valores
de DG
iWi


(mais hidrofbicas) so fortemente doadoras de eltrons e
bactrias que possuem baixos valores de DG
iWi
(menos hidrofbicas/
hidroflicas) so fracamente doadoras de eltrons.
24
Geralmente,
superfcies hidrofbicas apresentam baixos valores de ambos compo-
nentes aceptores de eltrons e doadores de eltrons.
25
Portanto, estes
parmetros tambm poderiam ser utilizados na avaliao da adeso
microbiana s superfcies. A temperatura e a fase de crescimento
podem inuenciar sobre a composio da parede celular, tornando-a
menos ou mais hidrofbica, doadora ou aceptora de eltrons.
9
Todas
as caractersticas fsico-qumicas so estritamente relacionadas com
a adeso microbiana e a formao de biolmes, e a alterao de cada
parmetro pode inuenciar positiva ou negativamente sobre a adeso
microbiana.
26
O desenvolvimento microbiano na superfcie est asso-
ciado com agitaes massivas, reguladas pela cintica de crescimento
celular e a quantidade de nutrientes disponveis. As clulas bacterianas
enviam sinais para outras. necessrio que se estabelea um com-
portamento multicelular, que reetido por atividades coordenadas
de interao e comunicao dos vrios micro-organismos. Dentre os
mecanismos de comunicao inter-bacteriana, importantes na forma-
o, organizao da arquitetura e desenvolvimento dos biolmes, se
destaca o quorum sensing.
4,6,12
As bases do quorum sensing
O quorum sensing um termo usado para descrever o processo
de comunicao intra e interespcies microbianas, que permite que
estas tenham a capacidade de se comportar como organismos com-
plexos, que se comunicam e agem coordenadamente, respondendo a
diferentes estmulos de modo unicado, sendo tal processo mediado
pela densidade populacional. Este mecanismo realizado por meio
de molculas denominadas auto-indutores (AI). Os dois mecanismos
mais bem descritos so os sistemas da Acil-homoserina lactona
(HSL) de muitos micro-organismos Gram-negativos; e os sistemas
sinalizadores baseados em peptdeos de muitos micro-organismos
Gram-positivos. Ainda existe um amplo sistema chamado de AI-2 que
encontrado em vrias espcies Gram-positivas e Gram-negativas,
Araujo et al. 850 Quim. Nova
sendo descrito como responsvel pela comunicao inter-espcies.
4,27

Existe grande evidncia de que as bactrias possuem sistemas que
monitoram e respondem aos sinais de quorum sensing de outras
espcies. Em alguns casos, estes sistemas podem ser muito espec-
cos, e em outros pode haver mtodos para a percepo dos sinais ou
roteiros produzidos por praticamente qualquer membro da microbiota
local.
27,28
Durante o crescimento microbiano, todas as clulas pro-
duzem e liberam uma certa quantidade de AI. Quando a populao
atinge a fase exponencial (alta densidade populacional) e o incio da
fase estacionria de crescimento, a quantidade de AI chega a uma
concentrao limite, suciente para disparar o processo de alterao
da expresso gnica.
4
Em uma cultura planctnica, presumvel que
todas as bactrias estejam siologicamente semelhantes, produzindo
molculas sinalizadoras na mesma proporo. No contexto de um
biolme, heterogeneidades na populao que acontecem por mutao
podem dar espao a nichos de seus clones dentro do biolme.
27
As
clulas planctnicas usam os sinais qumicos para regular uma va-
riedade de processos dependentes da densidade populacional.
28
Mas
em vrias espcies bacterianas como a Pseudomonas aeruginosa,
Burkholderia cepacia, Streptococcus mutans e outras, os mesmos
sinais so conhecidos como roteiros para o desenvolvimento dos
biolmes.
29
Isto foi primeiramente demonstrado com a bactria P.
aeruginosa, na qual os sinais de quorum sensing controlam a ex-
presso de centenas de genes. Logo, a formao do biolme uma
atividade social controlada tanto por fatores genticos, quanto por
fatores ambientais.
28
Existem evidncias que suportam a ideia de
que, para algumas espcies bacterianas, o quorum sensing controla
a disperso do biolme.
27
Estrutura do biolme
Os biolmes contm partculas de protenas, lipdeos, fosfolip-
dios, carboidratos, sais minerais, vitaminas, entre outros, formando
camadas onde os micro-organismos de uma ou mais espcies se
desenvolvem.
7
Eles so representados pela interao e organizao
de estruturas tridimensionais de organismos envolvidos por EPS, com
redes de canais de gua, e mltiplas camadas de clulas.
4,6
Logo, as
estruturas fsicas e biolgicas dos biolmes esto sujeitas s mltiplas
inuncias intrnsecas (composio qumica, microbiota natural) e
extrnsecas (ambientais) que vo afetar o crescimento microbiano e
consequentemente a composio da comunidade microbiana.
1
Vrias
propriedades fsicas dos biolmes podem ser atribudas matriz de
EPS.
6
A matriz EPS pode ser de natureza polissacardica ou proteica
e ca exposta nas clulas Gram-negativas exteriormente membrana
externa das clulas, e nas clulas Gram-positivas exteriormente ao
peptdeoglicano.
7
A matriz EPS possibilita as ligaes clula-a-clula,
assim como faz as ligaes de clulas individuais s superfcies,
5

alm de serem hidratados e servirem como reserva de nutrientes.
4,5

Sob fluxo turbulento, os biofilmes formados por comunidades
complexas espalham-se pelas superfcies, o que compatvel com o
comportamento do EPS como um udo viscoelstico. Essas carac-
tersticas fazem com que o biolme seja considerado uma entidade
dinmica.
6
O carter hidroflico predominantemente correlacionado
s altas concentraes de polissacardeos e s baixas concentraes
de compostos hidrocarbonados na superfcie celular.
30
Como di-
versos fatores podem interferir no processo de adeso microbiana
superfcie, como apndices celulares,
13,15
hidrofobicidade e carga
da superfcie dos micro-organismos
13
em relao hidrofobicidade
e carga da superfcie qual vo aderir
31
e a capacidade ou no de
produzir exopolissacardeos,
13
as linhagens com maior capacidade
de produzir exopolissacardeos (EPS), provavelmente so as menos
hidrofbicas e possuem maior capacidade de formar biolmes. Foi
vericado que quanto maiores os nveis de carboidratos extracelulares
produzidos por diferentes linhagens de L. monocytogenes, maior a
capacidade delas de formar biolmes, destacando a importncia desta
caracterstica para a habilidade de uma dada linhagem em formar
biolmes.
15
Outro trabalho tambm correlacionou a maior produo
de exopolissacardeos com as linhagens de L. monocytogenes capazes
de ter maior adeso a superfcies.
32
Disperso do biolme
Vrios fatores afetam a disperso das clulas dos biolmes
como temperatura, tempo, foras mecnicas e foras qumicas.
1
Em
determinados momentos, os biolmes liberam micro-organismos que
podem colonizar outros ambientes. Existem diferentes processos de
disperso, como a disperso expansiva, na qual conforme as clulas
de uma micro-colnia se multiplicam, usam o carbono proveniente
da pelcula de EPS como fonte de nutriente. Assim, o material polis-
sacardico se desintegra, facilitando a sada de clulas que precisam
de nutrientes da superfcie. Ou quando as clulas morrem e perdem
massa, assim a cpsula de EPS se fragiliza e se fragmenta liberando
clulas da estrutura para o ambiente. Outro processo o de disper-
so por fragmentao do biolme, em que pores da matriz EPS
junto com micro-organismos so liberadas, sendo um dos principais
motivos a ao estressante das foras de cisalhamento. E ainda existe
a disperso supercial, que ocorre devido ao crescimento do prprio
biolme como um todo.
4,12
Principais micro-organismos encontrados em biolmes na
indstria de alimentos
Nas indstrias de processamento de alimentos, alguns micro-
-organismos causam danos aos produtos, interferindo na qualidade
de estocagem e provocando a deteriorao do alimento, o que coloca
em risco a segurana alimentar devido transmisso de doenas a
partir deste alimento, principalmente se essa contaminao ocorrer
aps uma etapa de pasteurizao/esterilizao do produto.
10
So vrios
os micro-organismos encontrados nos processos de adeso na rea de
alimentos, dentre eles os principais so: P. aeruginosa, Pseudomonas
fragi, Pseudomonas uorescens, Micrococcus sp, Enterococcus fa-
ecium, Listeria monocytogenes, Yersinia enterocolitica, Salmonella
thyphimurium, Escherichia coli O157:H7, Staphylococcus aureus
e Bacillus cereus.
1,4,7,10
A L. monocytogenes uma bactria muito
comum em indstrias de alimentos, devido sua facilidade de formar
biolmes sobre diversas superfcies como, por exemplo: ao inox,
PET, PTFE, PVC, PE, vidro; e devido tambm sua capacidade de
se desenvolver sob diversas condies como em baixas temperaturas,
em pH cido e em meio extremamente salino.
11,33,34
Alm disto, produz
EPS e com isso se desenvolve nas superfcies onde o alimento entra
em contato, neutralizando agentes antimicrobianos e aumentando a
resistncia desinfeco.
35
Sua importncia se deve principalmente ao
seu potencial patognico. Dentre os alimentos envolvidos na ocorrn-
cia de listeriose destacam-se os produtos lcteos como o leite cru ou
pasteurizado, os sorvetes e queijos; os produtos crneos crus ou termo-
processados de diversas origens como: bovina, ovina, caprina, suna
e de aves; os peixes crus ou defumados; e os embutidos preparados a
partir de carne crua fermentada, alm dos produtos de origem vegetal,
marinha e as refeies pr-preparadas.
36-38
A P. uorescens tambm
possui uma grande capacidade de formao de biolme. Alm disto,
pertence a um dos gneros mais frequentemente encontrados em
circuitos de gua de sistemas industriais.
19
Os sistemas de tratamento
de gua e de ltrao de sucos que utilizam membranas geralmente
encontram problemas como a bioincrustao (biofouling), levando
a perdas na performance geral destes processos. A bioincrustao
caracterizada pela adsoro de partculas e micro-organismos super-
fcie, iniciando o desenvolvimento de biolmes. Neste caso, mesmo
micro-organismos no-patognicos como a P. uorescens trazem
grandes prejuzos, pois vo sobrecarregar o sistema, aumentando
Biossurfactantes: propriedades anticorrosivas, antibiolmes e antimicrobianas 851 Vol. 36, No. 6
a presso de trabalho, podendo levar a entupimento, rompimento
das membranas e gastos desnecessrios com energia e paralizao
dos trabalhos.
39
A P. uorescens capaz de formar biolmes com
facilidade sobre uma ampla gama de superfcies, incluindo o polies-
tireno, a poliamida e o ao inox.
19,40
Resistncia dos biolmes
Nos biolmes, os micro-organismos so mais resistentes do que
as clulas de vida livre ao de agentes qumicos e fsicos, como os
que so usados nos procedimentos de higienizao.
20
Esta resistncia
das clulas do biolme s inuncias externas como antibiticos,
defesas do hospedeiro, antisspticos e foras de cisalhamento, uma
preocupao constante nas indstrias e na medicina.
6
Existem trs
mecanismos usualmente aceitos que justicam a resistncia maior dos
micro-organismos presentes nos biolmes, so eles: a capacidade do
EPS impedir o contato do agente com os micro-organismos, funcio-
nando como um ltro; os micro-organismos apresentarem um estado
metablico diferenciado (metabolismo mais lento) e a capacidade de
modicar e/ou neutralizar o agente (principalmente em biolmes com
mais de uma espcie). Logo, o EPS no providencia necessariamente
uma barreira de difuso contra compostos inibitrios (antimicrobia-
nos), mas as bactrias do biolme podem ser inerentemente mais
resistentes. Em biolmes com vrias espcies, as espcies podem se
beneciar entre si por meio da troca de substrato e/ou remoo mtua
de metablitos. Este nvel de estrutura organizacional e especializao
metablica justica a marcante ecincia metablica dos biolmes e
sua resistncia inerente a agentes antimicrobianos. A matriz tambm
pode proteger os micro-organismos dos efeitos do vapor.
1,6
Mtodos de avaliao e quanticao da adeso a superfcies
Os mtodos de avaliao de biolmes podem ser visuais ou di-
retos, como a remoo das clulas (raspagem, ultrassom, vortex ou
agitao com prolas de vidro) seguida de contagem por mtodos
tradicionais (contagem padro em placa); a microscopia de contraste
de fase, que usada para acompanhar em tempo real o desenvolvi-
mento do biolme em uma superfcie transparente; a microscopia
de epiuorescncia, que excelente para a quanticao das clulas
aderidas s superfcies; a microscopia eletrnica de varredura (MEV)
e a de transmisso (MET) que so as mais indicadas para a avaliao
da interao microbiana na matriz do biolme.
1,5,7,10,13
Os mtodos de
remoo das clulas das superfcies, seguidos por contagem de clulas
viveis, podem ser inconsistentes devido diculdade da completa
remoo das clulas xadas. Em pesquisas nas quais biolmes esto
sendo estudados, pode ser fcil remover uma alta porcentagem das
clulas aderidas da superfcie pela raspagem ou agitao forte com
prolas de vidro.
5,10,20
Muitos estudos vm realizando com sucesso a
quanticao indireta de biolmes corando-os com cristal violeta e
lendo a absorbncia aps ressolubilizao do corante,
41-45
esta mesma
metodologia utilizada para classicar os micro-organismos em:
no aderentes; fracamente aderentes; moderadamente aderentes; e
fortemente aderentes.
41
Apesar da morfologia dos biolmes sofrer
algumas alteraes durante processos de desidratao, possvel
conseguir boa informao pela utilizao da MEV para comparar e
demonstrar claramente diferenas na estrutura de biolmes submeti-
dos a diferentes condies.
46
O microscpio eletrnico de varredura
ambiental (MEVA) uma excelente opo pois permite o trabalho
sem a necessidade de um preparo prvio visualizao. Uma varie-
dade de provas uorescentes pode ser utilizada na anlise in situ da
arquitetura populacional de biolmes.
Biolmes no processamento de alimentos
O principal objetivo do processamento de alimentos conseguir
meios de fornecer alimentos seguros, com qualidade nutricional
e sensorial aos consumidores. O controle dos micro-organismos
essencial para se alcanar essa meta.
2,10
A regulamentao das
indstrias alimentcias exige nvel de tolerncia zero para patgenos
como Salmonella spp. e L. monocytogenes, pois uma nica clula
pode ser to importante como um biolme j desenvolvido,
10
devido
a seus potenciais patognicos. As bactrias podem aderir a uma va-
riedade de superfcies encontradas nos ambientes de processamento
de alimentos. Para reduzir ou eliminar os micro-organismos das su-
perfcies em que o alimento vai entrar em contato, os processadores
de alimentos utilizam tcnicas que incluem mtodos fsicos, como
a lavagem manual e sprays de alta presso, assim como mtodos
qumicos como o uso de hipocloritos, iodforos e compostos de
amnia quaternria. Ambas as tcnicas removem e inativam os micro-
-organismos que podem estar presentes na superfcie do equipamento
e que poderiam eventualmente entrar em contato com alimentos crus
ou processados.
10
A xao bacteriana e a subsequente formao de
biolme em uma ampla gama de superfcies comumente utilizadas
no processamento de alimentos pode ocorrer em tempos de contato
to curtos como 20 minutos, dependendo do micro-organismo e das
condies ambientais.
5
Processos industriais que lidam com qualquer
material biolgico fornecem ingredientes e condies de crescimento
para micro-organismos.
1
Clulas viveis de um biolme so perigos
em potencial, pois se forem transferidas para o alimento, podem gerar
um grande impacto negativo.
10
A sanitizao das superfcies com as
quais alimentos vo entrar em contato uma forma de prevenir a
contaminao. Infelizmente existem evidncias de que as prticas de
sanitizao atuais so menos efetivas em micro-organismos aderidos
do que em micro-organismos de vida livre.
2,5
Na maioria das plantas
processadoras de alimentos, a sanitizao precedida pela limpeza
com detergentes, pois se sabe que a eccia do agente sanicante
reduzida pela presena de matria orgnica. As recomendaes de
limpeza e sanitizao ainda so as melhores maneiras de combater a
contaminao. Alm disso, os detergentes podem ser considerados
como o componente de maior importncia no controle do nmero
bacteriano, devido sua capacidade de remover a matria orgnica da
superfcie que serviria como substrato para a adeso microbiana.
10,47

Mesmo com a utilizao de sistemas reconhecidos de limpeza, as
bactrias podem permanecer nas superfcies dos equipamentos e
sobreviver por perodos prolongados, dependendo da quantidade e
natureza do substrato residual, da temperatura e da umidade relativa.
1

Existe uma grande variedade de superfcies que entra em contato com
os alimentos e que pode promover o processo de aderncia microbiana
como o ao inox, vidro, ferro fundido, borracha, polipropileno, polies-
tireno, polietileno de baixa-densidade e policarbonato. Por isso a esco-
lha dos materiais das superfcies importante no combate formao
de biolmes. Deve-se escolher o material que seja mais resistente
limpeza mecnica e a agentes qumicos. As reas mais propcias ao de-
senvolvimento de biolmes na linha de processamento so os espaos
mortos, juntas, vlvulas, vedaes e superfcies corrodas pelo tempo
de uso.
1,13,48
O poliestireno (PE) um material extensamente utilizado
para diversas aplicaes. As principais so: embalagens e descartveis
(38%), refrigerao (16%), eletrodomsticos (5%) e outros (42%).
49

No setor alimentcio, geralmente aplicado em potes (embalagens)
para iogurte, cremes, sobremesas, leite e bebidas lcteas, cream
cheese, queijo cottage, entre outros; podem estar presentes em pratos
descartveis contendo frutas, refeies prontas, carne fresca, entre
outros; tambm esto presentes em bandejas utilizadas para produtos
agrcolas como exemplo para ovos e para coletar e separar as vsceras
na hora do abate, tambm em bandejas de redes de fast-food, em
produtos de confeitaria e padaria, em tampas de bebidas em frascos
de ervas e especiarias, sopas instantneas etc.
50
Ademais, os biol-
mes tambm podem causar perdas de energia e bloqueios em tubos
condensadores, materiais resfriadores, circuitos de gua e de esgoto,
Araujo et al. 852 Quim. Nova
e em trocadores trmicos.
1
Novas formas de controle de formao
de biolmes so constantemente pesquisadas, dentre elas, o controle
atravs de fatores ambientais na linha de processamento e o uso de
agentes tensoativos, dispersantes, biodispersantes, enzimas, e novos
compostos qumicos biocidas, em adio a compostos qumicos no
txicos ou minimamente txicos. Assim como a limpeza das super-
fcies, o treinamento dos funcionrios, boas prticas de fabricao e
boa estrutura de processamento so fatores importantes no combate
aos problemas higinicos da indstria alimentcia.
1
Biossurfactantes
Os surfactantes constituem uma classe importante de compostos
qumicos amplamente utilizados em diversos setores industriais,
principalmente como matria-prima na fabricao de detergentes
de uso domstico.
51
A maioria dos surfactantes disponvel comer-
cialmente sintetizada a partir de derivados do petrleo
51,52
e foi
somente nas ltimas dcadas que as molculas de origem biolgica
com propriedades tensoativas foram descritas.
53
Vrios compostos
com propriedades tensoativas so sintetizados por organismos vivos,
desde plantas (saponinas) at micro-organismos (glicolipdios) e
tambm no organismo humano (sais biliares), sendo considera-
dos surfactantes naturais.
54
Os compostos de origem microbiana
que exibem propriedades surfactantes, isto , diminuem a tenso
supercial e possuem alta capacidade emulsicante, so denomi-
nados biossurfactantes e consistem em subprodutos metablicos de
bactrias, fungos lamentosos e leveduras.
55
Os micro-organismos
produtores distribuem-se em diversos gneros, sendo a maioria
deles bactrias.
51
Os surfactantes convencionais so usados para
uma ampla gama de propsitos em uma grande variedade de apli-
caes. A maioria dos requisitos para um surfactante convencional
poderia ser preenchida pelo biossurfactante. Para justicar a troca
de um surfactante sinttico por um composto biolgico necessrio
encontrar um agente mais efetivo para uma dada aplicao e/ou um
que possa ser produzido com custos mais baixos.
56-58
Os surfactantes
so molculas anpticas que tem tanto pores hidroflicas quanto
pores hidrofbicas. A poro apolar frequentemente uma cadeia
de hidrocarbonetos,
56
enquanto que a poro polar pode ser inica
(aninica ou catinica), no-inica ou anfotrica.
54
O equilbrio
entre a parte hidroflica e hidrofbica na mesma molcula propor-
ciona propriedades no usuais, incluindo a habilidade de diminuir
a tenso supercial da gua.
52,56
Estas propriedades nicas fazem os
surfactantes serem adequados para uma ampla gama de aplicaes
industriais que envolvem detergncia, emulsicao, lubricao,
capacidade de formar espuma, capacidade molhante, solubilizao
e disperso de fases.
52,54,59

Estruturas
Os biossurfactantes constituem uma das principais classes de
surfactantes naturais, sendo classicados de acordo com a sua com-
posio qumica e sua origem microbiana, diferentemente dos sur-
factantes sintetizados quimicamente que so classicados de acordo
com seus grupos polares. As principais classes incluem glicolipdios,
lipopeptdeos e lipoprotenas, fosfolipdios e cidos graxos, surfac-
tantes polimricos e surfactantes particulados.
52
A poro lipoflica
quase sempre composta por cadeia hidrocarbnica de um ou mais
cidos graxos, que podem ser saturados, insaturados, hidroxilados ou
ramicados. A parte solvel em gua (polar) de um biossurfactante
pode ser to simples como um carboxilato, um grupo hidrxi ou uma
mistura complexa como fosfato, carboidrato, aminocidos, etc.
52
A
maioria dos biossurfactantes neutra ou carregada negativamente
variando de pequenos cidos graxos at grandes polmeros. Nos
biossurfactantes aninicos, a carga devido a um carboxilato e/ou
fosfato ou, ocasionalmente, a um grupo sulfato. Um pequeno grupo
de biossurfactantes catinicos contm grupamentos amino.
54
Funo siolgica dos biossurfactantes
Os biossurfactantes so produzidos por uma variedade de
micro-organismos, predominantemente durante o crescimento em
substratos insolveis em gua, sendo secretados extracelularmente ou
ligados a partes de clulas. Do ponto de vista siolgico, a produo
desta quantidade abundante de molculas tensoativas representaria
um alto custo metablico caso no houvesse uma funo especca,
e provavelmente os genes responsveis pela produo no seriam
conservados nos genomas destes micro-organismos.
52
Embora a exata
funo siolgica dos biossurfactantes ainda no tenha sido comple-
tamente elucidada, algumas funes tm sido atribudas a eles, como
a emulsicao e a solubilizao de hidrocarbonetos ou compostos
insolveis em gua, facilitando o crescimento de micro-organismos
nestes substratos; transporte de hidrocarbonetos; regulao da
aderncia-liberao da clula a superfcies; atividade antibitica que
demonstrada por vrios biossurfactantes, principalmente da classe dos
lipopeptdeos e glicolipdios, como os ramnolipdios de P. aeruginosa
e a surfactina de B. subtilis que solubilizam os principais componentes
das membranas celulares microbianas, adquirindo maior chance de
sobrevivncia e maior competitividade na busca por nutrientes.
52-54
Aplicaes industriais
Existem muitas reas de aplicao onde os surfactantes qumicos
poderiam ser substitudos pelos biossurfactantes, dentre as quais
campos to diversos como a agricultura, construo, indstrias
de bebidas e alimentcias, limpeza industrial, biorremediao de
poluentes insolveis em gua, lubricantes, tratamento do couro,
indstrias de papel e metal, indstrias txteis, cosmticos, indstria
farmacutica, e indstrias de petroqumicos e petrleo.
52,53,55,56
Na
indstria de alimentos, os biossurfactantes apresentam propriedades
teis como emulsicantes,
55
agentes antiadesivos e antimicrobia-
nos.
60
Devido s suas propriedades funcionais, os emulsicantes
so parte indispensvel de produtos alimentcios que exigem su-
perioridade sensorial, estabilidade e maior vida de prateleira.
61
A
emulsicao tem papel importante na formao da consistncia e
textura, bem como na disperso de fase e na solubilizao de aromas.
Os biossurfactantes podem ser utilizados como emulsionantes no
processamento de matrias-primas alimentcias. Os agentes tenso-
ativos encontram aplicao em panicao, produtos derivados da
carne
54
e do leite (queijos cremosos e sorvetes), dos quais a adio
de emulsicantes melhora a textura e a cremosidade,
61
inuenciando
as caractersticas reolgicas da farinha e a emulsicao de gordu-
ras. Estas qualidades so de grande valia para produtos contendo
baixo teor de gordura.
62
Um exemplo o uso do bioemulsicante
produzido por Candida utilis em molhos prontos para saladas.
52,53

O liposan foi utilizado com sucesso para emulsicar leos comes-
tveis.
61
A atividade antimicrobiana tambm pode ser explorada
por meio do uso de biossurfactantes. A combinao de nisina com
ramnolipdios foi capaz de aumentar a vida de prateleira e inibir
esporos termoflicos em leite de soja UHT. O uso de natamicina
associada a ramnolipdios em molhos para saladas foi capaz de
aumentar a vida de prateleira e inibir crescimento de leveduras. A
associao de natamicina, nisina e ramnolipdios tambm prolongou
a vida de prateleira e inibiu crescimento de bactrias e leveduras
em queijo cottage.
61
A atividade antiadesiva desejvel para evitar
a formao de biolmes em superfcies s quais os alimentos vo
entrar em contato. possvel reduzir a adeso de patgenos em
superfcies comumente utilizadas em indstrias alimentcias a partir
do condicionamento das mesmas com biossurfactantes.
63-65
Um
biossurfactante produzido por uma linhagem termoflica lctea de
Biossurfactantes: propriedades anticorrosivas, antibiolmes e antimicrobianas 853 Vol. 36, No. 6
Streptococcus sp. pode ser usado para o controle de contaminao
nas placas de troca de calor dos pasteurizadores, j que ele retarda
a colonizao do S. termophilus responsvel pela contaminao.
55

Os biossurfactantes podem ser candidatos em potencial na busca
de produtos com diferentes funcionalidades, desde que eles atinjam
os requerimentos de aditivos alimentcios funcionais.
54
Logo, com
todas estas propriedades, estes compostos de origem microbiana
poderiam ser utilizados para melhorar a aparncia/estabilidade de
determinados alimentos; evitar contaminao do alimento direta-
mente, como um aditivo alimentar (atravs do uso de formulaes
adequadas), ou indiretamente, como formulaes detergentes para
limpeza das superfcies que entram em contato com o alimento.
61
Vantagens e desvantagens do uso dos biossurfactantes em relao
aos surfactantes convencionais
A demanda industrial por surfactantes alta, com o aumento
da preocupao ambiental entre os consumidores, juntamente com
as legislaes de controle do meio ambiente, os biossurfactantes
vm surgindo como uma alternativa aos produtos sintticos existen-
tes.
51,54
Alm disso, existe uma tendncia movida pela necessidade
de substituio de compostos no biodegradveis ou pouco biode-
gradveis e pelo aumento do requerimento de especicidade dos
produtos,
52
tanto para uma atuao mais seletiva quanto para uma
atuao mais efetiva. Por enquanto, os biossurfactantes ainda no
so competitivos do ponto de vista econmico, comparativamente
aos compostos sintetizados quimicamente que esto disponveis no
mercado. As principais razes para este fato esto relacionadas aos
altos custos de produo devido metodologia de bioprocessamento
ineciente, baixa produtividade das linhagens e necessidade de
uso de substratos caros.
53
Contudo, esta rea tem sido objeto de
intensa pesquisa, o que poder culminar em avanos signicativos,
tornando estes bioprodutos economicamente competitivos. Os
biossurfactantes podem ser sintetizados utilizando procedimentos e
substratos relativamente simples e com menor custo, como exemplo,
a partir de substratos renovveis.
55
Inevitavelmente, as fontes de
petrleo esto diminuindo e, em algum tempo no futuro, a nica
fonte de surfactantes ser de reservas renovveis. Ainda mais,
surfactantes sintticos usualmente requisitam produtos qumicos
puros, ou pelo menos classes de substncias qumicas para produzir
o produto desejvel. Este fato no crucial para um bioprocesso,
visto que possvel produzir biossurfactantes por meio de um
processo fermentativo utilizando como fonte de carbono resduos
contendo carboidratos, cidos graxos ou compostos similares.
3,52

Portanto, este problema econmico pode ser signicativamente
reduzido utilizando-se fontes alternativas de nutrientes facilmente
disponveis e de baixo custo como os subprodutos agrcolas ou de
processamento industrial, contribuindo para a reduo da poluio
ambiental e permitindo a valorizao econmica dos resduos que
seriam simplesmente descartados.
51,54
A diculdade na seleo de um
resduo est em encontrar a composio adequada de nutrientes que
permita o crescimento celular e o acmulo do produto de interesse,
alm da padronizao do substrato devido s variaes naturais de
composio, bem como os custos de transporte, armazenagem e
tratamento prvio necessrios. O Brasil um pas essencialmente
agrcola, portanto, a quantidade e a facilidade de acesso aos subpro-
dutos agroindustriais so bastante signicativas.
51
Os biossurfactan-
tes so mais ecientes e efetivos com relao atividade supercial
e interfacial do que os surfactantes convencionais (detergentes
aninicos sulfatados), pois produzem menor tenso supercial
com menores concentraes de produto ativo.
51,54
Como exemplo
temos o dodecil-sulfato de sdio (SDS) que usualmente apresenta
CMC em torno de 2023-2890 mg/L e reduo da tenso supercial
de 72 mN/m para 37 mN/m,
66
enquanto alguns biossurfactantes
apresentam valores tenso supercial em torno de 26-29 mN/m e
de CMC 50-200 mg/L. Alguns biossurfactantes apresentam elevada
estabilidade trmica, de pH e fora inica, podendo ser utilizados
em ambientes com condies mais drsticas do que as suportadas
pelos surfactantes convencionais. Como exemplo, tem-se que a
maioria dos biossurfactantes suporta concentraes de 10 % de NaCl
enquanto que uma concentrao de 2-3 % suciente para inativar
os surfactantes convencionais.
51,52,54
Diferentemente dos surfactantes
qumicos, os biossurfactantes so prontamente biodegradveis na
gua e no solo, apresentando uma melhor compatibilidade ambien-
tal, o que os torna adequados para aplicaes como biorremediao
e tratamento de resduos.
51,52,54
Os biossurfactantes possuem baixa
toxicidade, por isso so atrativos, j que os produtos articiais tem
sido motivo de preocupao da populao devido aos seus efeitos
alrgicos. Alm disso, essa baixa toxicidade permite o uso em ali-
mentos, cosmticos e produtos farmacuticos.
3,52
Outras vantagens
so a possibilidade de serem sintetizados a partir de substratos
renovveis e possurem grande diversidade qumica, possibilitando
aplicaes especcas para cada caso particular,
51,52,54
se mostrando
ecientemente comparveis ou superiores aos surfactantes sintti-
cos;
54
no so derivados do petrleo, fator de importncia medida
que os preos do petrleo aumentam; alm da possibilidade de
modicao da estrutura qumica e das propriedades fsicas atravs
de manipulao gentica ou bioqumica para o desenvolvimento de
produtos para necessidades especicas.
51,54
Glicolipdicos
Os ramnolipdios so os glicolipdios mais bem estudados. A
maioria das espcies de ramnolipdios se apresenta aninica quando
em soluo,
67
possuem uma ou duas molculas de ramnose liga-
das a uma ou duas molculas de cido -hidroxidecanico (cido
caprlico). A primeira descrio da produo dos glicolipdios con-
tendo ramnose foi feita por Jarvis e Johnson (1949). Os principais
glicolipdios produzidos por P. aeruginosa so o L-ramnosil-L-
ramnosil--hidroxidecanoil--hidroxidecanoato e o L-ramnosil-
-hidroxidecanoil--hidroxidecanoato, mas tambm foram relata-
dos outros tipos de ramnolipdios, um cido--hidroxidecanico
com uma ou duas unidades de ramnose, metil ster derivados dos
L-ramnosil-L-ramnosil--hidroxidecanoil--hidroxidecanoato e
L-ramnosil--hidroxidecanoil--hidroxidecanoato e ramnolipdios
com cadeias de cidos graxos alternativos.
52,59
P. aeruginosa pode
produzir ramnolipdios a partir de vrios substratos, incluindo alca-
nos C11 e C12, succinato, piruvato, citrato, frutose, glicerol, leo de
oliva, glicose e manitol. A composio e o rendimento dependem
do tipo de biorreator, do modo de conduo do bioprocesso, do pH,
da composio nutricional, do substrato e da temperatura usada.
59

O Laboratrio de Biotecnologia Microbiana (LaBiM) da UFRJ em
convnio com o CENPES/Petrobrs vem desenvolvendo, desde 2000,
diversos trabalhos de produo de ramnolipdios utilizando uma
linhagem de P. aeruginosa PA1, oriunda da coleo de culturas do
CENPES/Petrobrs que foi isolada de poos de Petrleo (Sergipe/
BR). A otimizao do meio de cultivo, busca de fontes de carbono
de baixo custo e modicaes no modo de conduo do processo
fermentativo levaram minimizao (900%) da produo de fatores
de virulncia de natureza proteica, com concomitante aumento da
produo de ramnolipdio de 1,2 g/L para cerca de 13,0 g/L.
68-70
O mesmo grupo desenvolveu trabalhos de escalonamento da
produo deste biossurfactante, contornando o problema de formao
de espuma, em biorreatores acoplados a membranas oxigenados de
modo no dispersivo. O processo conduzido em batelada alimentada
de glicerol/nitrato em altas relaes C/N conduziu a um aumento
de produtividade volumtrica e da produo de ramnolipdio, e foi
escalonado para biorreatores piloto de 200 L.
71,72
Os ramnolipdios
Araujo et al. 854 Quim. Nova
produzidos por P. aeruginosa PA1 em meio contendo 3 % glicerol
e 1,45 g/L de nitrato de sdio, como fontes de carbono e nitrognio,
respectivamente, demonstraram serem capazes de diminuir a tenso
supercial para 26,9 mN/m
69
e o tipo de ramnolipdio predominante
no produto o Rha
2
C
10
C
10
, seguido pelo RhaC
10
C
10
.
73
Os ramnoli-
pdios tambm emulsicam alcanos, estimulam o crescimento de
P. aeruginosa em hexadecano
52
e apresentam excelentes resultados
na lavagem de solos impactados com petrleo.
74
Vrios micro-
-organismos podem ser produtores de biossurfactantes glicolipdicos.
Portanto, a procura de novas molculas e de micro-organismos que
sejam produtores e no patognicos, de forma a facilitar a aprovao
para aplicao em indstrias alimentcias, um desao a ser alcan-
ado. A espcie de Burkholderia kururiensis KP23 se enquadra no
quesito no-patogenicidade e foi identicada como produtora de
molculas glicolipdicas, que foram recentemente caracterizadas
pelo Laboratrio de Microbiologia Microbiana em conjunto com o
Laboratrio de Microbiologia Molecular e Protenas.
75
Esta cepa foi
inicialmente isolada em um lago contaminado com tricloroetileno
em Kururi na prefeitura de Chiba, no Japo.
76
Lipopeptdicos
O lipopeptdeo surfactante mais bem estudado o produzido
por Bacillus subtilis e recebeu o nome usual de surfactina, sendo
conhecido como um dos biossurfactantes mais potentes.
53
um
biossurfactante aninico,
55
possui a capacidade de reduzir a tenso
supercial de 72 para 27,9 mN/m em concentraes to baixas quanto
0,005%. Sete aminocidos (Glu Leu Leu Val Asp Leu Leu)
neste composto formam um anel e a poro lipdica composta por
um cido graxo beta-hidroxilado contendo de 13 a 15 carbonos. Outra
caracterstica deste composto a sua capacidade de lisar eritrcitos
de mamferos e formar esferoblastos; esta propriedade usada para
detectar a produo de surfactina por meio da hemlise no gar
sangue.
52,53,59,77
A estrutura primria da surfactina foi determinada
em 1969 por Kanikuma e colaboradores. Mais recentemente, em
1995, a estrutura tridimensional foi determinada por Bonmatin e
colaboradores a partir de tcnicas de ressonncia magntica nuclear.
59

A surfactina produzida a partir de um isolado de B. subtilis LB5a, uti-
lizando manipueira como substrato alternativo, foi capaz de apresentar
valores de tenso supercial de 26,9 mN/m, tenso interfacial contra
o hexadecano de 0,96 mN/m e concentrao micelar crtica (CMC)
de 33 mg/L. Este mesmo produto apresentou a isoforma de massa
molecular 1036 como predominante, o que representa o lipopeptdeo
com sete aminocidos e quinze carbonos na poro lipdica.
78
Alguns
estudos demonstraram que composio e tamanho das cadeias de
cidos graxos variam de acordo com o meio utilizado e pode resul-
tar em maiores atividades surfactantes especcas.
79,80
A surfactina
possui vrias aplicaes farmacuticas como a inibio da formao
de cogulos; formao de canais inicos em membranas; atividade
antibacteriana e antifngica; atividade antiviral e antitumoral.
51,54

Vrios micro-organismos podem ser produtores de biossurfactantes
lipopeptdicos. Da mesma forma, a procura de novas molculas e de
micro-organismos que sejam bons produtores e no patognicos um
desao a ser alcanado. A espcie de Bacillus sp. H
2
O-1, assim como o
B. subtilis, se enquadra nestes quesitos e foi identicada como produ-
tora de uma molcula lipopeptdica. Esta cepa foi inicialmente isolada
a partir de um reservatrio de petrleo brasileiro, localizado em guas
profundas em uma plataforma do Rio de Janeiro
81
e, recentemente, a
molcula produzida por este micro-organismo foi caracterizada pelo
Laboratrio de Gentica Microbiana da UFRJ como surfactina-like,
por produzir surfactinas com as pores lipdicas C
13
, C
14
e C
15
e uma
poro lipdica adicional de C
16
. Foi estudada pelas suas propriedades
antimicrobianas
82,83
e agora produzida e utilizada em estudos em
andamento no Laboratrio de Biotecnologia Microbiana da UFRJ.
84
Propriedades antimicrobianas dos biossurfactantes
Uma ampla gama de biossurfactantes demonstrou atividade an-
timicrobiana contra bactrias, fungos lamentosos, leveduras, algas
e vrus.
3
Dentre eles, o ramnolipdio e surfactina j foram relatados
possuindo esta atividade.
85
Dentre os biossurfactantes, a classe dos
lipopeptdeos a mais relatada em termos de ao antimicrobiana.
O gnero Bacillus responsvel pela produo dos lipopeptdeos
surfactantes mais bem conhecidos.
85,86
Alm da surfactina, este gnero
tambm produz outros lipopeptdeos com as mesmas propriedades:
fengicina, iturina, bacillomicinas e micosubtilinas. Outras espcies do
gnero Bacillus, alm do B. subtilis, so conhecidas como produtoras
de biossurfactantes lipopeptdicos com ao antimicrobiana, como o
B. licheniformis, produtor da lichenisina e o B. pumilus, produtor da
pumilacidina.
85
Recentemente, foi conrmada a atividade antimicro-
biana sobre 29 bactrias pelo uso de dois lipopeptdeos de B. subtilis.
86

Lipopeptdeos produzidos por B. subtilis e por B. licheniformis foram
testados contra dois micro-organismos patognicos, sendo o produto
de B. subtilis efetivo contra o micro-organismo Gram-positivo e no
efetivo contra o Gram-negativo e o inverso ocorreu para o produto
de B. licheniformis.
87
Este efeito antimicrobiano provavelmente foi
mais eciente no Gram-positivo do que no Gram-negativo devido s
diferenas nas estruturas das paredes celulares, causando uma maior
inibio do crescimento celular, pois em geral, os micro-organismos
Gram-positivos possuem alta sensibilidade a detergentes aninicos
enquanto os Gram-negativos no.
88
A surfactina interfere mais inten-
samente em membranas contendo fosfolipdios que possuem cadeias
mais curtas e/ou esto em organizao uda, consequentemente
interferindo em suas funes biolgicas por meio da insero nas
bicamadas lipdicas, modicando a permeabilidade da membrana pela
formao de canais inicos ou por carrear ctions mono ou di-valentes
e solubilizando a membrana por seu mecanismo detergente.
89
Outras
classes de biossurfactantes que so relatadas com ao antimicro-
biana so os ramnolipdios de P. aeruginosa e os sophorolipdios
de Candida bombicola. Os lipdeos de mannosileritritol (MEL-A
e MEL-B) produzidos por uma linhagem de Candida antarctica
exibiram ao antimicrobiana contra bactrias Gram-positivas.
85
Em
um trabalho realizado recentemente pelo nosso grupo foi possvel
vericar que o ramnolipdio puricado apresenta propriedade an-
timicrobiana contra L. monocytogenes ATCC 19112 e ATCC 7644,
inibindo em 100% o crescimento de ambas. Tambm foi conrmada
a inibio do crescimento planctnico destas mesmas linhagens
utilizando surfactina de B. subtilis LB5a produzida em manipueira
como substrato.
90
A atividade antimicrobiana de uma mistura de
sete homlogos de ramnolipdios produzida por P. aeruginosa AT10
sobre ampla gama de bactrias Gram-positivas e Gram-negativas,
leveduras e fungos lamentosos foi avaliada e, devido s proprieda-
des fsico-qumicas e elevada atividade antimicrobiana, este produto
poderia ser visto como uma ferramenta til em processos de biorre-
mediao, cosmticos e aplicaes em indstrias de alimentos.
67
As
diferenas encontradas na literatura entre percentuais de inibio do
crescimento e tambm de formao de biolme entre o ramnolipdio
bruto e o ramnolipdio puricado de P. aeruginosa, contra mesmos
micro-organismos, provavelmente so devidas presena de outros
componentes (fatores de virulncia e sinais de quorum sensing) no
meio bruto que aps a puricao so total ou parcialmente elimi-
nados. Estes componentes podem ser alguns fatores de virulncia
de natureza proteica e ainda de quorum sensing: elastase, protease
LasA, protease alcalina, fosfolipase C, lipase, exotoxina A, cianeto,
piocianina, lectina e superxido dismutase; que tm produo coor-
denada por quorum sensing e a mesma ocorre concomitantemente
produo de ramnolipdios por P. aeruginosa.
91,92
As molculas que
possuem atividade quorum sensing produzidas por P. aeruginosa
Biossurfactantes: propriedades anticorrosivas, antibiolmes e antimicrobianas 855 Vol. 36, No. 6
tambm podem interferir sobre o comportamento de outros micro-
-organismos que no produzem os mesmos sinais, um exemplo o
3-oxo-C
12
-HSL (sistema LasI/R) e o PQS que apresentam excelentes
propriedades antibacterianas.
93
Propriedades antibiolmes dos biossurfactantes
Estudos recentes mostraram que o pr-condicionamento de su-
perfcies com biossurfactantes podem reduzir consideravelmente a
contaminao microbiana de materiais e inibir ou diminuir a formao
subsequente de biolmes
94
(Figura 1).
Quando um surfactante adsorvido a superfcies hidrofbicas,
normalmente orienta o grupo hidrofbico para a superfcie e expe
o grupo polar gua. A superfcie torna-se assim hidroflica e, como
resultado, a tenso interfacial entre a superfcie e a gua reduzida.
19

Os ramnolipdios atuam no mecanismo de dessoro das clulas
presentes em biolmes de P. aeruginosa.
95
O pr-condicionamento
de cateteres uretrais com surfactina inibiu totalmente a formao
de biolmes de S. enterica, E. coli e P. mirabilis.
96
Um biossurfac-
tante produzido por P. uorescens (no caracterizado) utilizado no
pr-condicionamento de superfcies de PTFE e ao inox 304 AISI
demonstrou uma reduo signicativa da adeso de L. monocytogenes
LO28 no ao inox em diferentes temperaturas (at 92 %); entretanto,
no foi evidenciada uma reduo na adeso em superfcie de PTFE
34
.
Superfcies de borracha de silicone condicionadas com ramnolipdios
de P. aeruginosa, obtiveram inibies na adeso de 60,9 %, 53,1 %,
58,2 % e 33,8 % contra as bactrias R. dentocariosa, S. epidermidis,
S. salivarius e S. aureus, respectivamente, com soluo de ramnoli-
pdio no diluda (4 g/L).
97
Os trabalhos realizados recentemente pelo
nosso grupo demonstraram que o pr-condicionamento do ao inox
304 com surfactina (0,1 %) foi capaz de reduzir signicativamente
a adeso de L. monocytogenes ATCC 19112 em aproximadamente
10
2
UFC/cm
2
e 10
1
UFC/cm
2
para E. sakazakii ATCC 29004. J em
polipropileno os resultados do condicionamento com surfactina 0,1
% demonstraram uma reduo signicativa no nmero de clulas
aderidas de L. monocytogenes, E. sakasakii e S. enteritidis em apro-
ximadamente 10
1
UFC/cm
2
.
98
O pr-condicionamento de superfcies
de poliestireno com ramnolipdio bruto, ramnolipdio puricado e
surfactina reduziram signicativamente a adeso das cepas ATCC
19112, 19117, 15313 e 7644 de L. monocytogenes e foram mais e-
cientes que o dodecil-sulfato de sdio.
90
Superfcies de poliestireno
condicionadas por surfactina e por ramnolipdios avaliadas em dife-
rentes temperaturas reduziram a adeso em todas as condies com a
surfactina (Staphylococcus aureus, L. monocytogenes e Micrococcus
luteus) e o ramnolipdio promoveu uma pequena reduo na adeso
de S. aureus.
99
Estes dados reforaram a ideia de que alguns bios-
surfactantes so efetivos na inibio da adeso de acordo com as
caractersticas das superfcies. Foi comprovado que a B. kururiensis
possui o sistema HSL de quorum sensing, chamado de BraI/R, que
produz e responde ao 3-oxo-C
12
-HSL e extremamente similar ao
LasI/R de P. aeruginosa (nesta interconectado com outros sistemas
regulatrios e o regulador global envolvido na regulao de muitos
genes que possuem importncia na virulncia e colonizao).
100

Tambm foi relatada a existncia de uma outra molcula produzida
por P. aeruginosa que possui efeito antibiolmes, o cido graxo
insaturado cis-2-decenico, porm, seu mecanismo de ao ainda
no foi elucidado.
101
Desta forma a ao dos ramnolipdios pode
ser otimizada pela presena destes compostos, ajudando a inibir a
formao dos biolmes. Os lipopeptdeos so capazes de modicar a
hidrofobicidade da superfcie bacteriana e consequentemente alterar
a adeso destes micro-organismos a superfcies slidas e seus efeitos
dependem da hidrofobicidade bacteriana inicial, assim como do tipo
de lipopeptdeo e sua concentrao, podendo aumentar ou diminuir
a hidrofobicidade da superfcie bacteriana em funo desta ser mais
ou menos hidrofbica.
22
Do ponto de vista siolgico, possvel
que cada bactria possua determinada resposta gentica que permita
que elas sobrevivam e ainda sejam bem sucedidas em condies
de limitao de nutrientes e outros tipos de condies estressantes
como o estresse osmtico, anxia e mudanas de pH
102
. E por que
no incluir nesta lista o estresse por agentes antimicrobianos ou por
molculas reguladoras de quorum sensing produzidas por outros
micro-organismos? B. subtilis e outras espcies pertencentes ao
mesmo gnero produzem molculas sinalizadoras conhecidas como
peptdeos autoindutores (AIP), que so peptdeos contendo de 5 a
34 aminocidos com arquiteturas no usuais, os peptdeos triptofano
isoprenilados.
103
Estas molculas tambm podem ter efeito sobre a
formao de biolmes. Recentemente foi identicada uma mistura de
D-aminocidos produzidos por B. subtilis que fazem com que as bras
proteicas amilide-like presentes na matriz extracelular de biolmes
se separem das clulas, permitindo que estas escapem da matriz.
Estes compostos tambm podem atuar em outros micro-organismos,
prevenindo a formao de biolmes.
101
Outro fator que poderia inter-
ferir sobre a formao de biolmes seria a presena de lactonases.
Estas so produzidas pelo gnero Bacillus e so conhecidas como
enzimas AHL-hidrolases, as mesmas so quorum-quenchers, ou seja,
interferem na sinalizao do quorum-sensing impedindo eventos de
sinalizao dependentes de densidade celular tanto de espcies Gram-
positivas quanto de espcies Gram-negativas.
27,104
Um lipopeptdio
produzido por B. circulans foi utilizado no pr-condicionamento de
superfcies de poliestireno contra diversos micro-organismos pato-
gnicos e as porcentagens de inibio variaram de 15 a 89 %.
105
Um
extrato contendo surfactina, utilizado como agente condicionante de
superfcies de poliestireno, inibiu aproximadamente 42 % a formao
de biolmes de L. monocytogenes ATCC 19112.
106
Com todas essas
propriedades, estes compostos poderiam ser utilizados para evitar a
contaminao de alimentos diretamente, como aditivo (pelo uso de
formulaes adequadas), aumentando a vida de prateleira do produto
sem preocupao com a sade dos consumidores, deixando de lado
a necessidade de adicionar conservantes sintticos, que na maioria
dos casos, so perigosos para a sade; ou indiretamente, como for-
mulaes detergentes para limpar as superfcies s quais os alimentos
entram em contato.
61
O efeito antiadesivo ou inibitrio dos biossur-
factantes adsorvidos s superfcies pode estar ligado a alteraes
singulares nas propriedades fsico-qumicas, alterando as interaes
atrativas entre a superfcie e o micro-organismo, combinado ou no
com um efeito de dessoro deste biocomposto,
65,90,98
e/ou ainda que os
biossurfactantes ou outros compostos que tenham sido produzidos por
estes micro-organismos podem estar atuando como fatores quorum
Figura 1. Efeito inibitrio da formao de biolmes atravs do condiciona-
mento da superfcie por biossurfactante
Araujo et al. 856 Quim. Nova
sensing,
29
interferindo positivamente ou negativamente no processo
de adeso e formao de biolmes, o que justicaria as diferenas
encontradas nos resultados de diferentes linhagens/espcies em
diferentes superfcies. Alm disso, este efeito inibitrio poderia ser
potencializado por uma ao antimicrobiana dos biossurfactantes.
Diferenas que possam ser encontradas nos percentuais de formao
de biolmes de mesmas linhagens de micro-organismos quando as
mesmas superfcies forem tratadas com os ramnolipdios ou com
as surfactinas, por exemplo, podem ocorrer devido s diferenas
qumicas encontradas nas misturas dos homlogos produzidos nas
fermentaes. Esse fato pode dicultar a comparao de percentuais
encontrados na literatura e, portanto, essencial que os trabalhos
apresentem a composio da mistura de homlogos juntamente com
os ensaios de atividade antibiolme ou atividade antimicrobiana. O
condicionamento de superfcies de poliestireno com ramnolipdio e
com surfactina reduziu a adeso de L. monocytogenes ATCC 19112
em 17 e 60 %, respectivamente.
65
J em outro trabalho esta mesma
cepa teve sua adeso inibida em 53 % para ambos.
90
A diferena
observada no valor de inibio da adeso encontrados entre estes
dois trabalhos para o ramnolipdio provavelmente se deve a poss-
veis diferenas nos constituintes do meio de cultivo como fatores de
virulncia, pois foram obtidos em diferentes fermentaes, enquanto
a surfactina utilizada foi a mesma.
65,90
Atividade anticorrosiva
O ao inox um material frequentemente utilizado devido a
sua alta resistncia corroso. Em contato com o ar, a superfcie
rapidamente coberta por uma camada de xido de Cromo e xido
de Ferro, o que aumenta sua resistncia corroso, a qualidade deste
lme formado depende das condies ambientais e principalmente
do contedo de Cromo da liga metlica. Para aumentar a resistncia
a corroso, o condicionamento de superfcies pode ser aplicado,
reduzindo a formao de xido de Ferro e aumentando a formao
de xido e Hidrxido de Cromo, sugerindo a existncia de proprie-
dades protetoras dos biossurfactantes contra a corroso
107
(Figura 2).
Foi vericado um aumento na razo Cr / Fe saindo de 0,9 na su-
perfcie limpa (no condicionada) para 1,4 na superfcie condicionada,
sugerindo a existncia de propriedades anticorrosivas dos biossur-
factantes e os mesmos tornaram as superfcies mais hidroflicas.
31
O
ao inox AISI 304 possui contedo de Cromo equivalente a 18 % e
por isso, possui uma resistncia relativamente fraca corroso.
107
O
processo de corroso metlica resulta na formao de produtos de cor-
roso e na liberao de energia, ou seja, as superfcies mais protegidas
contra a corroso sero as que apresentam valores mais baixos de ener-
gia livre de superfcie total. Pela interao com ons H
+
, a superfcie
tende a car mais hidroflica, o que pode ser o indcio da ocorrncia
de um processo corrosivo, porm, no caso dos condicionamentos por
biossurfactantes a hidrolicidade pode estar associada a formao
de uma pelcula destas molculas sobre a superfcie orientando a
cabea hidroflica para o meio e a cauda hidrofbica para a superfcie
mantendo a mesma protegida da interao com ons H
+
e O
2
, evitando
a corroso. Existe um grande potencial de uso dos biossurfactantes
como agentes condicionantes de superfcies para reduzir a formao
de biolmes de micro-organismos comumente encontrados em am-
bientes industriais. Alguns estudos relativamente recentes mostraram
que superfcies pr-condicionadas com biossurfactantes so capazes
de reduzir signicativamente a contaminao microbiana e inibir ou
reduzir o desenvolvimento subsequente de biolmes.
31
Alm disso,
alguns destes produtos, como os ramnolipdios, podem ser utilizados
como agentes protetores de superfcies metlicas contra corroso, pois
foi conrmado que a presena de biossurfactante de P. uorescens
em ao inox 304 postergou a corroso desta superfcie.
107

CONCLUSES
Na indstria de alimentos, diversos estudos detalhados sobre a
utilidade dos biossurfactantes como agentes inibidores da adeso de
micro-organismos e, consequentemente, da inibio da formao
de biolmes, tm sido realizados, cujos resultados nos permitem
armar que futuramente eles podero ser utilizados e produzidos
em larga escala, suprindo a necessidade do uso de produtos sintti-
cos, ou diminuindo as concentraes de produtos sintticos que so
utilizadas atualmente. Os biossurfactantes podem tambm ser utili-
zados como agentes inibidores da corroso, um problema comum.
Assim seu campo de aplicao poderia ser ampliado, podendo atuar
simultaneamente como agente antimicrobiano, antibiolme e ainda
anticorrosivo. Desta forma pode-se direcionar os tipos de biossurfac-
tantes para cada determinada aplicao, assim como para aplicaes
com mltiplas nalidades. O grande potencial de aplicao destes
produtos diretamente nas indstrias alimentcias, como forma de
preveno da formao de biolmes por diferentes micro-organismos,
em superfcies com as quais os alimentos entram em contato durante
o processamento, pode beneciar diretamente o consumidor, que
ter a possibilidade de ter em suas mesas uma maior garantia de
qualidade microbiolgica de seus alimentos. Ainda como vantagem
em potencial destes produtos estaria a substituio ou reduo da
quantidade utilizada de produtos sintticos no biodegradveis ou
pouco biodegradveis por produtos de origem natural, obtidos por
meio do cultivo de micro-organismos em substratos renovveis. As
indstrias teriam uma potencial reduo de custos com o tratamento
de resduos, que seriam mais facilmente degradados devido a ausn-
cia/reduo de produtos pouco biodegradveis no euente nal, os
quais geralmente dicultam o tratamento. Outro fator responsvel
pela reduo de custos seria a necessidade de concentraes muito
inferiores de biossurfactante em relao ao surfactante convencional
para atingir os resultados esperados. Ademais, os prprios resduos da
indstria alimentcia possuem potencial para serem utilizados como
substrato para a produo dos biossurfactantes.
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