El Urocultivo

EL urocultivo es utilizado para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye

un mtodoexcelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que
infectan el aparato urinario. La combinacin de piuria con bacteriuria
considerable sugiere la presencia de una infeccinurinaria.

UTILIDAD CLINICA:
Cuando los sntomas indican una posible infeccin urinaria como: dolor y
sensacin decalor al orinar, as como urgencia frecuente de orinar.
Cuando un paciente es canalizado por largo tiempo, aunque no muestre
sntomas de infeccin. Y en mujeres embarazadas para monitorear
cualquier bacteria en la orina que pueda causar algn problema al beb.

RECOLECCION DE LA MUESTRA PARA CULTIVO: PRINCIPIO GENERALES:
La muestra ideal es la primera de la maana debido a que la cuenta
bacteriana es mayor. Se requiere de 3 a 5 ml de orina reciente en un
recipiente estril, tambin se puede obtener mediante una sonda uretral,
suprapubica o permanencia.Las muestras para urocultivos no se toman
de bolsas recolectoras de orina que forman partedel sistema de drenaje a
travs de una sonda. Se lleva la orina al laboratorio y se examina lo mas
pronto posible, de no ser as, la orinase puede refrigerar hasta 2hrs antes
de someterla a cultivo. En caso que el diagnostico sea de
citomeglavirus, debern mantenerse a temperaturaambiental, ya que la
refrigeracin destruye a los virus. Para establecer bacteriuriua, se toman
2 muestras sucesivas del chorro medio. Las muestras se deben de
obtener antes de un tratamiento con antibiticos. El personal de salud
instruye al paciente respecto de la tcnica adecuada para recolectar
lamuestra. La muestra de orina se cubre y el recipiente se rotula y se
incluye lo siguienteinformacin: Ficha de identificacin, Nombre del
medico, Diagnostico probable, Mtodo derecoleccin, Hora en que se
obtuvo la muestra, Administracin de lquidos forzados ointravenosos,
Administracin de sustancias quimioterapeuticas especificas.

TECNICAS PARA OBTENER UNA MUESTRA LIMPIA DE ORINA O
DELCHORRO MEDIOToma de Muestras en Mujeres:
La muestra debe ser tomada preferentemente en el Laboratorio. Si ello
no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa.Debe hacerse
una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la
mano lo siguiente:
a) jabn desinfectante
b) agua hervida o agua estril
c) gasa estril o un pao acabado de lavar
d) el recipiente para tomar la muestra.
Proceda primero a lavarse las manos y luego sintese en el inodoro, lo
ms hacia atrs que pueda. Separe los labios genitales con una mano y
mantenga los pliegues separados y proceda a asearse toda la zona
genital con el jabn desinfectante.
Enjuague con abundanteagua estril y luego seque bien congasa estril
o con un pao limpio.Proceda a recoger la orina, destapando
previamente el frasco SLO EN ELMOMENTO DE LA MICCIN y sin
tocar con los dedos su interior, coloque la tapa con ellado plano hacia
abajo. No toque el interior del recipiente o de la tapa. Empiece a orinar
la poceta y recoja en el frasco, slo la muestra del chorro del medio es
decir, no debe recoger ni la primera, ni la ltima parte del chorro de
orina. Tape muy bien el frasco y rotlelo consunombre.Trigalo al
Laboratorio lo ms pronto posible, en un recipiente con hielo, cuidando
de queno se bote el contenido.

TOMA DE MUESTRAS EN HOMBRES:
La muestra debe ser tomada preferentemente en el Laboratorio. Si ello
no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa.Debe hacerse
una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la
mano losiguiente:a) jabn desinfectante b) agua hervida o agua estril a
temperatura ambientec) gasa estril o un pao acabado de lavar d) el
recipiente para tomar la muestra.Lavarse con jabn desinfectante
primero las manos y luego la cabeza del pene empezando por la abertura
uretral y contine en direccin a usted, como muestra la ilustracin,
previaretraccin del prepucio, si no est circuncidado.Luego enjuagar
bien con agua estril o previamente hervida (a temperatura ambiente)
ysecar con gasa estril.Destape el frasco recolector slo en el momento
de la miccin y sin tocar con los dedos su parte interna, coloque la tapa
con el lado plano hacia abajo. Comience a orinar en la pocetay recoja en
el frasco slo la muestra del chorro del medio, es decir, no debe recoger
ni la primera ni la ltima parte del chorro de orina. Tapar bien el frasco,
rotularlo con su nombrey traerlo al laboratorio lo ms pronto posible, en
un recipiente con hielo y cuidando de queno se bote. El examen
microbiolgico de una muestra de orina se denomina Urocultivo.ste se
ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.

A. Examen cuantitativo
Mtodo de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por
Kaasparaevitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar
bacteriuria verdadera decontaminacin, se realiza de la siguiente
manera: Se homogeneiza la muestra mediante agitacin.
Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de
caldo de tripticasao de suero fisiolgico, estriles. Se preparan
diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilucin al 1:100. Se
deposita 1 ml. de cada dilucin en placas de Petri esterilizadas, sobre las
cuales sevaca un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y
enfriados a 45. Medianterotacin suave, se favorece la distribucin
homognea de la siembra.
Mtodo de Kass
Se incuban todas las siembras a 37 durante 24 a 48 horas.Para
calcular el nmero de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y
300 colonias.Contadas stas, basta multiplicar su nmero por la dilucin
respectiva para obtener lacuenta total.
Mtodo del asa calibrada.
Esta estimacin cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de
agar-sangre o agar con CLED en una muestra de orina, sin centrifugar,
empleando asa de platino calibrada (4mm. de dimetro). Despus de
incubar las siembras a 37 durante 24 a 48 horas, se cuentael nmero de
colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que la
asada de platino contiene 0.01 ml. de orina.Los resultados del estudio
cuantitativo se informan de la siguiente manera: No hubo desarrollo
microbiano. Menos de 10 000 colonias por ml. Entre 10 000 y 100 000
colonias por ml. Ms de 100 000 colonias por ml.Cuando se obtienen
dos recuentos sucesivos con ms de 100 000 colonias por ml.,
la probabilidad de infeccin es de 80%, cifra que se eleva a 95% si el
mismo resultado selogra en tres recuentos sucesivos.Por lo general, las
muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10
000colonias/ml. Cuando el recuento revela valores intermedios, entre 10
0000 y 100 000colonias /ml, el examen debe repetirse. Conviene advertir
que pueden pasar inadvertidasinfecciones urinarias verdaderas, si no se
toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000colonias por ml, ya que
existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en
infecciones urinarias verdaderas, diuresis acentuada, obstruccin uretral,
infeccionescrnicas e infecciones por cocos gram positivos.
b. Examen cualitativo
El estudio cualitativo, que conduce a la identificacin del agente, se
realiza mediante lasiembra de la muestra homogeneizada, en placas con
agar-sangre, agar-CLED, agar deLevine o MacConkey.Es recomendable
el medio CLED, porque favorece el desarrollo de bacterias
patgenasurinarias y permite la identificacin de los microorganismos
contaminados. Su contenido encistena y lactosa y su deficiencia en
electrolitos facilitan, por una parte, el reconocimientode colonias de
bacterias y, por otra, inhiben el carcter invasor de las colonias de
Proteus.As se facilita la identificacin de estafilococos, bacilos
difteromorfos, lactobacilos y otrosagentes que pueden contaminar la
orina.La identificacin final de los agentes se hace mediante el estudio de
sus propiedades bioqumicas y caractersticas serolgicas. Esto permite
establecer relaciones de identidadentre microorganismos aislados en
cultivos sucesivos o de control, y definir el estado derevivida o de
reinfeccin. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo,
delserotipo (particularmente en E. coli), del piocinotipo (en especial
cuando es de Ps.aeruginosa) y del antibitico. ste ltimo se obtiene al
comparar el antibiograma de cepasaisladas de muestras obtenidas de
diferentes oportunidades en un mismo paciente Si
existecorrespondencia, se concluye que se trata de una misma cepa.
* Mtodos rpidos de diagnstico.
Existen varios procedimientos prcticos y econmicos para el
diagnstico rpido deinfecciones urinarias o de bacteriurias significativas.
Son tiles para investigar grandesgrupos de personas.Estos mtodos
pueden ser microscpicos, qumicos o de microcultivo. La coloracin de
un frotis de orina no centrifugada mediante el mtodo de Gramconstituye
un ndice prctico para diferenciar entre infeccin y contaminacin
urinarias.En efecto, la observacin de un bacilo gram negativo por campo
microscpico puederealizarse cuando la muestra contiene ms de 100
000 bacterias por ml. Sin embargo, ladificultad de encontrar bacterias en
frotis de orina por este mtodo, provoca resultadosfalsos negativos.
Menos confiable aun es el hallazgo de 20 o ms bacterias
gramnegativas por campo microscpico desedimento urinario, aunque
dicho nmero permita sospechar recuentos superiores a 100
000microorganismos por ml. Los procedimientos qumicos estn
basados en propiedades enzimticas de las bacterias,que se pueden
poner de manifiesto en la orina. Entre las pruebas se pueden
mencionar:catalasa, reduccin de nitratos, reduccin de trifeniltetrazolio e
hipoglucosuria. Estosmtodos, aunque rpidos y econmicos, tienen el
inconveniente de ser indirectos, basarseenpropiedadesmetablicas de
las bacterias y no en su desarrollo y observacin, y producir muchos
falsosnegativos.

Placas de agar McConkey y de agar CLED, donde ha crecido un
EscherichiaColiencultivo puro, con un recuento superior a 100.000
UFC/ml. (cultivo sembrado con asacalibrada de 1/1000).
SIGNIFICADO CLINICO:
Los siguientes microorganismos en titulacin suficiente se consideran
patgenos:Escherichiacoli, Enterococcos, Neisseriagonorrhoeae,
Klebsiella, Enterobacter, algunasespecie de Serratia, Mycobacterium
tuberculosis, Especies de Proteus, Pseudomonaaeruginosa,
Estreptococcohemoliticogenralmente del gurpo B, Candidaalbicans y
otraslevaduras.
INTERFERENCIAS:
Pacientes que estn recibiendo lquidos forzados, la orina esta tan
diluida que la cuenta delos colonias disminuye por debajo de los
105/mililitro. La contaminacin bacteriana puede provenir de: vello peri
anal, bacterias localizadas debajo del prepucio, bacterias de las
secrecionesvaginales, de la vulva o de la porcion distal de la uretra,
bacterias provenbientyes de lasmanos, pies o ropa.
1- Siembra
La siembra debe realizarse de la orina sin centrifugar con un ansa
calibrada, lo que permitir obtener una estimacin semicuantitativa del
desarrollo microbiano. Existennumerosos medios de cultivo para sembrar
una muestra de orina. La eleccin del medio decultivo debe contemplar la
relacin costo-beneficio, de modo de elegir la opcin que permita la
recuperacin de la mayora de los patgenos con el menor costo
posible.Para tal fin, el microbilogo debe tener en cuenta cierta
informacin bsica. El 70-80% de los urocultivos enviados al laboratorio
resultan "negativos".ii. El 85-90% de las IU son producidas por
enterobacterias.iii. De los grmenes gram-positivos, los que se aislan con
mayor frecuencia sonenterococos y estafilococos.iv. El medio CLDE
permite el desarrollo de bacilos gram-negativos, estafilococos
yenterococos. Los medios de Levine, EMB o MacConkey permiten
nicamente larecuperacin de bacilos gram-negativos. La mayora de los
grmenes (incluyendoestreptococos y corinebacterias) desarrollan en
agar sangre, pero este medio no permite larecuperacin de
Haemophilusspp., ni neisserias patgenas (gonococos y muchas cepas
demeningococos).El agar chocolate posibilita la recuperacin de todos
los microorganismos mencionadosanteriormente.Teniendo en cuenta
estos conceptos, el microbilogo tiene varias opciones para la
siembraracional de la orina.Siembra de acuerdo a la observacin previa
del sedimento. Este procedimiento ofrece laventaja de cultivar el
microorganismo en el medio ms apropiado, tanto para su
desarrollo,comoparasu caracterizacin macroscpica (aspecto de la
colonia, fermentacin de lactosa, tipo dehemlisis, etc), por lo que
posibilita orientar con mayor certeza el esquema inicial de identificacin.
La desventaja es que demanda ms tiempo que la siembra "a ciegas".

penicilina; AMP, ampicilina; AMS, aminopenicilina-sulbactama; OXA,
oxacilina;CTN, cefalotina; TMS, cotrimoxazol; NIT nitrofurantona; NOR,
norfloxacina; CIP,ciprofloxacina; CTX, cefotaxima o ceftriaxona; CAZ,
ceftacidima; IMI, imipenem; GEN,gentamicina; AMK, amicacina; PIP,
piperacilina; VAN, vancomicina. A, ambulatorio; I,internado, BNNF,
principalmente Pseudomonasaeruginosa y Acinetobacterbaumannii
Probar PEN para informar AMP y OXA para informar OXA y CTN, @
slo en A. baumannii, & con disco de alta carga, slo en internados.^
Informar AMP, CTN, y CIP de acuerdo a los resultados de PEN, OXA y
NOR,respectivamente.La tabla 7 muestra una lista de antibiticos
sugeridos para ensayar slo con finesteraputicos. Por lo tanto, la tabla
no incluye ciertas drogas tiles para la vigilancia dealgunos mecanismos
de resistencia de importancia clnica, ni para la bsqueda deresistencia
asociada, ni para la sospecha de determinadas especies por el
antibiotipo. Elmicrobilogo debe recordar que lo importante es ensayar e
informar los antibiticos deeleccin para el tratamiento de la IU y los que
sean apropiados para las distintas especies (no informar un antibitico
frente a una especie que es naturalmente resistente al
mismo).Finalmente, se debe considerar el precio y la toxicidad de la
droga. Es decir, tratar deinformar la droga ms barata y menos txica,
cuando esto sea posible. En base a estasconsideraciones se


Tincin de Gram
Esta tincin se denominada as por el bacterilogo dans Christian
Gram,quien la desarroll en1844.La tincin de Gram es uno de los
mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio bacteriolgico y con
el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su
utilidad prctica es indiscutible y en el trabajo microscpico de rutina del
Laboratorio de Microbiologa las referencias a la morfologa celular
bacteriana (cocos, bacilos, positivos,negativos, etc.) se basan justamente
en la tincin de GRAM.Descripta en forma breve, la secuencia de la
tincin es la siguiente: el Frotis fijado concalor se tie 1 min. con Violeta
Cristal, se lava con agua, se cubre con solucin Yodadadurante 1 min. y
se lava de nuevo con agua, decolorar con mezcla alcohol
etlico/acetona.Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste)
durante 20 seg. Lavar y secar.Sobre la base de su reaccin a la tincin
de Gram, las bacterias pueden dividirse en dosgrupos, gram positivas y
gram negativas (en este caso, los trminos positivo y negativo notiene
nada que ver con carga elctrico, sino simplemente designan dos grupos
morfolgicosdistintos de bacterias).Las bacterias gram-positivas y gram-
negativas tien de forma distinta debido a lasdiferencias constitutivas en
la estructura de su pared. La pared de la clula bacteriana sirve para dar
su tamao y forma al organismo as como para prevenir la lisis osmtica.
Elmaterial de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el
peptidoglicano. La paredde la clula gram-positiva es gruesa y consiste
en varias capas interconectadas de peptidoglicano as como algo de
cido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de laclula gram-
positiva es peptidoglicano. La pared de la clula gram-negativa, por otro
lado,contiene una capa mucho ms delgada, nicamente de
peptidoglicano y est rodeada por una membrana exterior compuesta de
fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo10% - 20% de la
pared de la clula gram-negativa es peptidoglicano.Debido a su
importancia en taxonoma bacteriana y a que indica diferencias
fundamentalesde la pared celular de las distintas bacterias,
describiremos aqu con algn detalle la tincinde Gram y las
interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porqu de
sufuncionamiento.Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se
tien, primero con una solucin decristal violeta (otros colorantes bsicos
no son tan efectivos) y son lavadas despus paraquitar el exceso de
colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las grampositivascomo
las gram negativas, estn teidas de azul.El portaobjetos se cubre
entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico. El ingredienteactivo
es aqu el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en
las clulasy forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De
nuevo tanto las clulasgrampositivas como las gramnegativas se
encuentran en la misma situacin.

Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcohol-
acetona, sustanciasen las que es soluble el complejo I2-cristal violeta.
Algunos organismos (grampositivos) nose decoloran, mientras que otros
(gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esosdos tipos de
clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta resistencia
sedebe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-
negativas, la mezcla dealcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve
la membrana exterior de la pared de laclula (y tambin puede daar la
membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano).La delgada capa
de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-
yodoy la clula se decolora. Las clulas grampositivas, a causa de sus
paredes celulares msespesas (tienen ms peptidoglicano y menos
lpido), no son permeables al disolvente ya queste deshidrata la pared
celular y cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre lasmolculas
y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado
dentro dela pared celular. Despus de la decoloracin las clulas
grampositivas son todava azules, pero las gramnegativas son
incoloras.Para poner de manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza
una coloracin de contraste.Habitualmente es un colorante de color rojo,
como la safranina o la fucsina bsica. Despusde la coloracin de
contraste las clulas gramnegativas son rojas, mientras que
lasgrampositivas permanecen azules.Deben destacarse algunos
aspectos cruciales de la tincin de Gram:1) El tratamiento con cristal
violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por ssolo tiene
poca afinidad con las clulas.2) La decoloracin debe realizarse con
poca agua para evitar que pierdan la tincin lasclulasgrampositivas. EI
proceso de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo preciso
del tiempo para obtener resultados satisfactorios.3) Cultivos ms viejo de
24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristalvioleta
- yodo.El carcter de grampositivo no es siempre un fenmeno del todo o
nada. Algunosorganismos son ms grampositivos que otros y algunos
son gram-variables, es decir, unasvecesgrampositivos y otras
gramnegativos