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Chapitre 2 : TRANSMISSION DES CARACTRES DE LHRDIT

I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE



II-STRUCTURE ET RPLICATION DES CHROMOSOMES
Chapitre 2 : TRANSMISSION DES CARACTRES DE LHRDIT
I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE
A-Introduction
-Cette rplication de lADN implique des vitesses de polymrisation denviron

-500 nuclotides/seconde chez les bactries
-50 nuclotides/seconde chez les mammifres

-Ncessit -dune machine de rplication prcise et rapide
-dun systme de correction des erreurs de rplication

qui contribuent la fidlit de la transmission de linformation gnique.

-Dans tous les organismes vivants lADN doit tre rpliqu avec prcision
avant chaque division de la cellule.
RPLICATION ET RPARATION DE L'ADN
TRANSMISSION DES CARACTRES DE LHRDIT
I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE
A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
Rplication : processus de duplication l'identique d'une molcule d'ADN en
deux molcules filles.
TRANSMISSION DES CARACTRES DE LHRDIT
I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE
A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
1-Appariement des bases : support de la rplication
! Il na pas chapp notre attention que lappariement spcifique que
nous avons postul suggre immdiatement un mcanisme de copiage
possible du matriel gntique!
Watson, et Crick. (1953)
Base + sucre = nucloside
Base + sucre + un ou plusieurs phosphates = nuclotide
BASE NUCLOSIDE ABRVIATION
adnine adnosine A
guanine guanosine G
cytosine cytidine C
uracile uridine U
thymine thymidine T
Composition des nuclotides entrant dans les acides nucliques
Base
Structure gnrale dun 2-dsoxyribonucloside 5-triphosphate (dNTP)
Les quatre bases qui entrent dans la composition de lADN
Adnine (A) Guanine (G) Cytosine (C) Thymine (T)
Structure du 2-dsoxyadnosine 5-triphosphate (dATP)
Structure du 2-dsoxythymidine 5-triphosphate (dTTP)
Structure du 2-dsoxyguanosine 5-triphosphate (dGTP)
Structure du 2-dsoxycytidine 5-triphosphate (dCTP)
une attraction lectrostatique entre un atome lectrongatif et
un atome d'hydrogne li de faon covalente
un second atome lectrongatif
Liaison hydrogne
Liaison hydrogne
3
3
5
5
Cytosine
Squelette de
2-dsoxyribose-phosphate
Guanine
Adnine Thymine
Complmentarit des paires de bases dans la double hlice de lADN
Petit sillon
Grand sillon
3

3
5

5

Structure de lADN et appariement des bases dans lADN
TRANSMISSION DES CARACTRES DE LHRDIT
I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE
A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
1-Appariement des bases : support de la rplication
2-Rplication semi-conservatoire
Figure 2-1 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Une mole correspond a X grammes dune substance dont la masse molculaire est X

Une mole contient 6.10
23
molcules de cette substance




Une mole de Carbone: 12g

Une mole dAzote: 14g
+ +
Prvisions
Modle conservatoire Modle semi-conservatoire
Rsultats
attendus
Rsultats
attendus
Une bande
H-H
Une bande
H-H
Une bande
H-L (hybride)
Deux bandes
H-L et L-L
Deux bandes
H-H et L- L
Deux bandes
H-H et L-L
Brins de dpart
synthtiss
dans
15
N
Premire
rplication
dans
14
N
Seconde
rplication
dans
14
N
H H
H H
H H
H H
H H H H
L
L
L L
L
L
L L L L L L L L L L
Rplication Rplication
Mlange 1+3 1 2 3
Centrifugation Centrifugation Centrifugation Centrifugation
15
N
15
N
15
N
15
N
15
N
15
N
15
N
15
N 15
N
15
N
15
N
14
N
14
N
14
N
14
N
14
N
14
N
14
N
14
N
14
N
14
N
14
N
14
N
Exprience de Meselson et Stahl (1958)
Brin B matrice
Brin B matrice
Nouveau brin B
Nouveau brin B
5
5
3
3
3
3
5
5
Double hlice dADN servant de matrice sa propre rplication
Double hlice dADN
initiale
Brin B
Brin B
5
5 3
3
TRANSMISSION DES CARACTRES DE LHRDIT
I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE
A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
1-Appariement des bases : support de la rplication
2-Rplication semi-conservatoire
3-Existence d'une fourche de rplication asymtrique
Fourches de
rplication
2-dsoxyribose
OH 3
Base
5 triphosphate
?
Hypothtique fourche de rplication symtrique
2-dsoxyribose
OH 3
Base
5 triphosphate
Fourche de rplication asymtrique
Extrmit 5
Extrmit 3
Extrmit 3
Extrmit 5
Dsoxyribonuclotide
entrant
Pyrophosphate
Raction chimique de synthse de lADN
Synthse de lADN catalyse par lADN polymrase
(dcouverte en 1956 par Arthur Kornberg)
Brin amorce
Brin matrice
Dsoxyribonucloside
triphosphate entrant
3 5
5 3
HO
5 triphosphate
HO
3 HO
3
5
5
Pyrophosphate
Sens de
polymrisation
de 5 en 3
Amorce : courte squence d'ADN ou d'ARN, complmentaire du
dbut d'une matrice, servant de point de dpart la synthse du brin
complmentaire de cette dernire par une polymrase.
Dsoxyribonucloside
triphosphate entrant
Pouce
Brin matrice
Brin amorce
Paume
Doigts
Brche
dans lhlice
ADN polymrase de Escherichia coli
5
5
3
Sens de
dplacement
de lADN
Figure 8-45a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Raction de polymrisation en chaine (PCR)
Figure 8-45b Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
1 molcule de dpart n cycles 2
n
molcules
1 20 10
6
1 30 10
9


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I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE
A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
1-Appariement des bases : support de la rplication
2-Rplication semi-conservatoire
3-Existence d'une fourche de rplication asymtrique
4-Fidlit de la rplication par l'ADN polymrase
Quantit derreurs dincorporation de nuclotides
au cours de la polymrisation de 5 en 3
chez les eucaryotes suprieurs

1 tous les10
9
nuclotides incorpors

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I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE
A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
1-Appariement des bases: support de la rplication
2-Rplication semi-conservatoire
3-Existence d'une fourche de rplication asymtrique
4-Fidlit de la rplication par l'ADN polymrase
-Existence d'un mcanisme de correction des erreurs

Figure 5-4 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
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A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
1-Appariement des bases: support de la rplication
2-Rplication semi-conservatoire
3-Existence d'une fourche de rplication asymtrique
4-Fidlit de la rplication par l'ADN polymrase
-Existence d'un mcanisme de correction des erreurs
-Extrmit 3'-OH apparie d'un brin amorce ncessaire la polymrisation
Exonuclases : classe d'enzymes qui dgradent les acides nucliques de
proche en proche partir d'une ou des deux extrmits.
OH
OH
Lactivit de lexonuclase 3-5 de
lADN polymrase retire le C non appari
Lextrmit 3-OH non apparie de lamorce
bloque la progression de la polymrase
Mcanisme de correction des erreurs
5
5 3
Mcanisme de correction des erreurs
LADN polymrase continue ajouter
des nuclotides partir de lextrmit 3-OH
de lamorce apparie
5
5
3
OH
O
H

PAS DAMORCE PAS DE CORRECTION POSSIBLE

Reprsentation schmatique du mcanisme de correction des erreurs
par lADN polymrase
Paume
Paume
Pouce Pouce
Doigts
Doigts
Brin matrice
Brin en cours
de synthse
Pourquoi lADN polymerase fonctionne forcment de 5 vers 3?
STOP !
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A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
1-Appariement des bases: support de la rplication
2-Rplication semi-conservatoire
3-Existence d'une fourche de rplication asymtrique
4-Fidlit de la rplication par l'ADN polymrase
-Existence d'un mcanisme de correction des erreurs
-Extrmit 3'-OH d'un brin amorce appari ncessaire la polymrisation
-Correction possible des erreurs seulement si croissance de 5' en 3
5-Amorce initiale ncessaire l'ADN polymrase
2-dsoxyribose
OH 3
Base
5 triphosphate
Fourche de rplication asymtrique
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I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE
A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
1-Appariement des bases: support de la rplication
2-Rplication semi-conservatoire
3-Existence d'une fourche de rplication asymtrique
4-Fidlit de la rplication par l'ADN polymrase
-Existence d'un mcanisme de correction des erreurs
-Extrmit 3'-OH d'un brin amorce appari ncessaire la polymrisation
-Correction possible des erreurs seulement si croissance de 5' en 3
5-Amorce initiale ncessaire l'ADN polymrase
-une seule fois pour le brin synthtis en continu
TRANSMISSION DES CARACTRES DE LHRDIT
I-MCANISMES DU MAINTIEN DE LINFORMATION GNTIQUE
A-Introduction
B-Mcanismes de rplication de l'ADN
1-Appariement des bases: support de la rplication
2-Rplication semi-conservatoire
3-Existence d'une fourche de rplication asymtrique
4-Fidlit de la rplication par l'ADN polymrase
-Existence d'un mcanisme de correction des erreurs
-Extrmit 3'-OH d'un brin amorce appari ncessaire la polymrisation
-Correction possible des erreurs seulement si croissance de 5' en 3
5-Amorce initiale ncessaire l'ADN polymrase
-une seule fois pour le brin synthtis en continu
-tous les 200 nuclotides pour le brin synthtis de faon discontinue
5
5
3
3
5
Brin synthtis
en continu
Brin synthtis de
faon discontinue
3
Brins
pr-existants
Sens du dplacement de
la fourche de rplication
Dplacement de la fourche de rplication
Amorces
Amorce
6-Ncessit -d'une ARN polymrase primase pour la synthse de l'amorce
ARN polymrase primase
Amorce dARN
Synthse de lamorce dARN par lARN polymrase primase
(synthse dune amorce dARN par polymrisation dune dizaine de nuclotides)
ARN polymrase primase
6-Ncessit -d'une ARN polymrase primase pour la synthse de l'amorce
-d'une ADN ligase pour ligaturer l'ADN


Ligature : union par une liaison 3'-5' phosphodiester de deux nuclotides
adjacents dj incorpors dans une chane polynuclotidique.

ARNase H ou RNase H : ribonuclase dtruisant les squences d'ARN dans
les hybrides ARN/ADN.
Synthse du second brin de faon discontinue
Amorces dARN synthtises
par une ARN polymrase primase partir de lADN
Amorce dARN
Brin pr-existant
5
3
longation de lamorce dARN par lADN polymrase
5
3
ADN
nouvellement
synthtis
5
3
Ligature des fragments par lADN ligase
Ligature
X
5
3
limination en 5 de lamorce dARN par lARNase H
et synthse de lADN par lADN polymrase
5
3
Synthse du second brin de faon discontinue
ADN
nouvellement
synthtis
5
3
Fragments dOkasaki de -1.000 2.000 nuclotides chez les bactries
-100 200 nuclotides chez les eucaryotes
(Reiji Okasaki 1968)
Okazaki (fragments d') : fragments de 1.000 2.000 nuclotides rsultant de
la synthse discontinue du second brin lors de la rplication de l'ADN.
6-Ncessit -d'une ARN polymrase primase pour la synthse de l'amorce
-d'une ADN ligase pour ligaturer l'ADN
7-Protines ncessaires pour ouvrir la double hlice
6-Ncessit -d'une ARN polymrase primase pour la synthse de l'amorce
-d'une ADN ligase pour ligaturer l'ADN
7-Protines ncessaires pour ouvrir la double hlice
-ADN hlicase

Structure de lADN hlicase
(bactriophage T7)
6-Ncessit -d'une ARN polymrase primase pour la synthse de l'amorce
-d'une ADN ligase pour ligaturer l'ADN
7-Protines ncessaires pour ouvrir la double hlice
-ADN hlicase
-Protines SSB Single-Strand DNA binding proteins
ADN polymrase
Segment dADN simple brin
avec de courtes rgions
apparies entre elles
5
5
Effet des protines SSB sur la structure de lADN simple brin
5
Protines SSB
monomres
5
LIAISON COOPRATIVE DES PROTINES SSB
6-Ncessit -d'une ARN primase pour la synthse de l'amorce
-d'une ADN ligase pour ligaturer l'ADN
7-Protines ncessaires pour ouvrir la double hlice
-ADN hlicase
-Protines SSB Single-Strand DNA binding proteins
8-Machine de rplication constitue de protines associes
Matrice du brin
synthtis
en continu
Nouveau brin
synthtis en continu
3
5
ARN polymrase primase
Protine SSB
ADN hlicase
5
ADN polymrase
qui synthtise le premier brin
en continu
ADN polymrase
qui termine la synthse
dun fragment dOkazaki
3
Matrice du brin synthtis
de faon discontinue
Fragment dOkazaki
Amorce dARN
Brin nouvellement
synthtis
Synthse des deux brins dADN la fourche de rplication
Nouveau brin synthtis en continu
Hlice dADN
parental
Nouveau brin
synthtis de
faon discontinue
Machine de rplication vue au ME (bactriophage T4)
6-Ncessit -d'une ARN primase pour la synthse de l'amorce
-d'une ADN ligase pour ligaturer l'ADN
7-Protines ncessaires pour ouvrir la double hlice
-ADN hlicase
-Protines SSB Single-Strand DNA binding proteins
8-Machine de rplication constitue de protines associes
9-Mcanisme similaire pour les eucaryotes et les procaryotes
-deux ADN polymrases diffrentes, ! et ",
sont utilises pour le brin synthtis de faon discontinue ;
-lARN polymrase primase est lune des sous-units de lADN polymrase
(!) et nest pas associe lADN hlicase comme pour les procaryotes.
La machine de rplication de lADN des eucaryotes fonctionne selon les
mmes principes gnraux que celle des procaryotes. La machine de
rplication des mammifres prsente principalement deux diffrences :
ADN polymrase "
ADN hlicase
ADN polymrase !
ARN polymrase primase
Protines SSB
Amorce dARN
Nouveau fragment
dOkazaki
Pince coulissante
Bride
ADN polymrase "
5
5
3
3
Brin synthtis en continu
Matrice du brin synthtis en continu
Matrice du brin synthtis
de faon discontinue
C-Mcanismes de rparation de l'ADN
1-Introduction
Rparation : processus de restauration de l'intgrit d'un brin d'ADN ls qui,
en rgle gnrale, met en jeu lutilisation du brin intact comme modle.
-une grande fidlit de la rplication de lADN ;
-des mcanismes destins rparer les trs nombreuses lsions
accidentelles de lADN qui affectent lADN en permanence.

Sur les milliers de changement de squence qui surviennent au hasard dans
lADN dune cellule humaine, crs par :

-la chaleur,
-les accidents du mtabolisme,
-les radiations de toute sorte,
-lexposition aux substances toxiques de lenvironnement, ! !

Pour maintenir la stabilit gntique, il faut :
C-Mcanismes de rparation de l'ADN
1-Introduction
2-Conservation et mutations des squences d'ADN



Frquence derreurs : changement dune paire de bases sur 10
9
pb
pour chaque gnration de cellules.



Par consquent, un gne qui contient 10
3
pb subirait une modification toutes
les 10
6
gnrations de cellules.
C-Mcanismes de rparation de l'ADN
1-Introduction
2-Conservation et mutations des squences d'ADN
3-Consquences diffrentes des mutations de l'ADN :
C-Mcanismes de rparation de l'ADN
1-Introduction
2-Conservation et mutations des squences d'ADN
3-Consquences diffrentes des mutations de l'ADN :
-dans les cellules germinales

C-Mcanismes de rparation de l'ADN
1-Introduction
2-Conservation et mutations des squences d'ADN
3-Consquences diffrentes des mutations de l'ADN :
-dans les cellules germinales
-dans les cellules somatiques
La stabilit du matriel gntique des cellules germinales est ncessaire la
perptuation de l'espce.

La stabilit du matriel gntique des cellules somatiques est indispensable
la prvention du cancer.
Aucune espce ne peut se permettre de laisser accumuler un taux lev de
mutations dans ses cellules germinales.

Les cellules somatiques d'un organisme pluricellulaire doivent tre protges
contre les variations gntiques pour prserver l'individu des prolifrations
cellulaires non contrles qui entranent les cancers.
Presque toutes les mutations qui surviennent dans les gnes des protines
sont nuisibles.
Quelques syndromes hrditaires avec dfauts de rparation de lADN

NOM DU PHNOTYPE ENZYME OU PROCESSUS
SYNDROME EN CAUSE
MSH2, 3, 6,
MLH1, PMS2 Cancer du colon Rparation des msappariements

Xeroderma Cancer de la peau, Rparation par excision
pigmentosum sensibilit aux UV, de nuclotides
anomalies neurologiques

BRCA-2 Cancers du sein et Rparation par recombinaison
des ovaires homologue

Anmie de Fanconi Anomalies congnitales, Rparation des pontages entre
(groupes A-G) instabilit du gnome, brins de lADN
leucmie
etc! etc! !

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