nes hmatopo-

tiques impliques
dans le dveloppe-
ment lymphode, la
dcouverte des gnes impliqus dans certaines
formes de dficits immunitaires hrditaires chez
lhomme et les connaissances obtenues quant
aux rles physiologique et pathologique de cer-
tains facteurs tels que les rcepteurs Notch ont
amlior notre vision de cette voie de diffren-
ciation. Cet article fait le point sur ces donnes
et souligne les questions encore non rsolues.
La description dtaille de la lymphopose T est
dune importance capitale, qui pourrait faciliter
la mise au point de nouveaux protocoles thra-
peutiques capables dacclrer la reconstitution
immunologique aprs une greffe allognique de
CSH partiellement compatible pour les groupes
HLA, ou encore de participer au traitement de
la lymphopnie T dont souffrent les patients
atteints de sida. <
MEDECINE/SCIENCES 2006 ; 22 : 151-9
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M/S n 2, vol. 23, fvrier 2007
Hmatopose
humaine :
des cellules CD34
aux lymphocytes T
Marina Cavazzana-Calvo, Emmanuelle Six,
Isabelle Andr-Schmutz, Laure Coulombel
> Les cellules souches hmatopotiques (CSH)
reprsentent cette petite population cellulaire
responsable de la production de toutes les lignes
sanguines et du maintien de leur homostasie au
cours de la vie dun individu, grce deux pro-
prits cls : lautorenouvellement et la multipo-
tence. Parmi les cellules sanguines, les lympho-
cytes T occupent une place particulire. La diff-
renciation vers les lignes T ou T intervient
en effet dans un organe (le thymus) diffrent
de celui qui produit et amplifie les progniteurs
immatures (le foie ftal ou la moelle osseuse),
ce qui implique la migration dun progniteur
hmatopotique immature du foie ftal et,
plus tard, de la moelle osseuse au thymus. La
diffrenciation lymphode T se caractrise par la
slection thymique et la production de lympho-
cytes T prsentant un rpertoire diversifi, capa-
ble de rpondre tous les antignes trangers
quun individu peut rencontrer. Ces mcanismes
complexes de diffrenciation, extrmement dif-
frents de ceux qui caractrisent la production
des compartiments mylodes (rythrode ou
granulomacrophagique), composs de cellules
matures identiques entre elles phnotypique-
ment et fonctionnellement, et qui compltent
leur maturation dans la moelle osseuse, rendent
compte, au moins en partie, de nos connaissan-
ces limites de ce processus de diffrenciation
lymphode. Enfin, la troisime particularit de
la diffrenciation des lymphocytes T est lie aux
changements ontogniques caractriss par plu-
sieurs vagues discontinues de colonisation thy-
mique, ainsi que par une production massive de
progniteurs lymphodes pendant la vie ftale et
les premires annes de vie postnatale, qui dimi-
nue progressivement au cours du vieillissement.
Rcemment, le clonage des nouvelles cytoki-
M. Cavazzana-Calvo, E. Six,
I. Andr-Schmutz : Dpartement
de Biothrapie, Hpital
Necker-Enfants-Malades,
Inserm U768,
149, rue de Svres, 75015 Paris,
France. L. Coulombel :
Inserm U602, Hpital
Paul-Brousse, 12, avenue
Paul Vaillant Couturier,
94800 Villejuif, France.
m.cavazzana@nck.aphp.fr
151
Article reu le 19 juin 2006, accept le 21 aot 2006.
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a identifi dans la moelle osseuse de souris adulte, et
isol sur des critres phnotypiques, un progniteur
mylode commun appel CMP
1
[1]

et un progniteur
lymphode commun nomm CLP [2]. Le potentiel du
premier est restreint aux lignes mylodes, tandis que
le second se diffrencie uniquement en lymphocytes T, B
et NK (Figure 1).
Une telle analyse chez lhomme se heurte de nombreux
obstacles : nombre restreint de marqueurs de membrane,
et donc danticorps monoclonaux reconnaissant les prog-
niteurs lymphodes, faible spcificit de lantigne CD34,
effectivement exprim par tous les progniteurs hmato-
potiques et, enfin, absence dun test exprimental fiable
capable dvaluer la diffrenciation T lchelon clonal.
Le groupe de Weissman a nanmoins caractris chez
lhomme un progniteur mylode commun (CD34
+
IL-3R

CD45RA
-
) capable de donner naissance dune part aux
progniteurs bipotents granulocytaires/monocytaires et,
dautre part, aux progniteurs bipotents mgacaryocytai-
res/rythrocytaires. Ce progniteur est dpourvu de tous
les marqueurs prcoces de la ligne T et incapable (ou seu-
lement trs faiblement) de
donner naissance in vitro
des cellules B ou NK, le
potentiel T nayant pas t
tudi [3].
De nombreuses quipes
ont tent de caractriser le
compartiment des prog-
niteurs T humains et, outre
lantigne CD34, trois anti-
gnes se sont rvls parti-
culirement utiles : CD45RA,
CD7 et CD10 (ou CALLA,
endopeptidase neutre).
Aucun nest, lui seul, sp-
cifique de progniteurs T,
mais leur combinaison
peut identifier une fraction
significativement enrichie.
Ainsi, Galy a dmontr que
lexpression du CD45RA
sur des cellules CD34
+
de
moelle osseuse adulte ou
ftale (20-23 semaines)
tait associe la perte
du potentiel de reconsti-
tution hmatopotique
long terme et du potentiel
rythrode [4, 5], et que
lacquisition du CD10 dfi-
nissait une fraction ayant
M/S n 2, vol. 23, fvrier 2007 152
De la moelle osseuse au thymus : caractristiques
phnotypiques des prcurseurs lymphodes humains
Il est aujourdhui tabli que les CSH donnent naissance toutes les
lignes sanguines au cours dun processus de diffrenciation qui
saccompagne dune perte graduelle de leur multipotentialit et de
leur capacit dautorenouvellement. Appliquer ce schma la dif-
frenciation lymphocytaire T revient poser un certain nombre de
questions portant sur la sgrgation prcoce entre lignes mylodes
(rythrode, mgacaryocytaire et granulomacrophagique) et lympho-
des, sur la nature du (des) progniteur(s) issu(s) du foie ftal ou de
la moelle osseuse qui colonise(nt) le thymus et devrai(en)t donc tre
retrouv(s) dans la circulation et, enfin, sur les variations possibles
de ces processus au cours de lontogense, ainsi que sur les modifica-
tions de lengagement des CSH dans la voie T avec le veillissement de
lindividu.
Chez la souris, les travaux publis par le groupe de Weissman lont
conduit proposer un modle de sgrgation prcoce entre spcifica-
tion mylode et lymphode qui, si elle fait autorit, ne fait pas luna-
nimit, des donnes rcentes suggrant que dautres voies de diff-
renciation dune CSH vers les lignes lymphodes existent. Ce groupe
1
Le droul des abrviations utilises fait lobjet dun encadr en fin darticle.

(autorenouvellement)
ETP
NK
Thymus
NK
Cellule
dendritique
Moelle osseuse
(Lin
-
CD25
-
Sca
hi
ckit
hi
)
DN1-2
(CD25
+
c
-
kit
+
)
HSC
(Lin
-
Sca
hi
ckit
hi
Flt3
-
)
Progniteur
mylode commun
CMP
(Lin
-
Sca
-
ckit
hi
FcRII/ItI

HSC (MPP)
(Lin
-
Sca
hi
ckit
hi
Flt3
+
)
(pas d'autorenouvellement)
MEP
(Lin
-
Sca
-
ckit
hi
FcRII/III
lo
CD34
-
)
GMP
(Lin
-
Sca
-
ckit
hi
FcRII/III
++
CD34
+
)
CLP1
(Lin Sca
lo
ckit
lo-
IL7Ra
hi
AA4
+
FIt3
+
)
CLP2
(B220
+
pT
+
)
Pro-B
(B220
+
CD43
+
IgM
-
)
Figure 1. Diffrenciation hmatopotique chez la souris. Chez la souris, lanalyse de lexpression de diffrents
antignes a permis disoler des populations distinctes de progniteurs partir de la moelle osseuse adulte.
Lvaluation de leur fonction par des tests robustes raliss aussi bien in vitro quin vivo a permis de proposer la
hirarchie schmatise ici. Dans le compartiment des cellules souches (rouge), on distingue 3 types de cellules
selon quelles sautorenouvellent ou pas et reconstituent ou non, long ou court terme, lhmatopose. On
distingue 2 populations de CLP (vert), CLP1 et CLP2, CLP2 tant isol partir des souris knock-in pour le gne
pr-T. In vivo, ces populations nont pratiquement pas de potentiel T, alors que lon peut le dmontrer in vitro.
Une controverse persiste sur la nature des cellules qui migrent dans le thymus (voir Figure 2). Les CMP (marron)
donnent naissance aux progniteurs granulomacrophagiques (GMP, orange) et mgacaryocytaires-rythrodes
(MEP, rose).
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un potentiel strictement lymphode, capable de produire
in vitro, lchelon unicellulaire, des cellules B, NK et den-
dritiques et, in vivo, chez la souris immunodficiente NOD/
SCID greffe avec du tissu thymique humain, des lympho-
cytes T. Cette population (CD34
+
CD45RA
+
CD10
+
) prsente
des similitudes fonctionnelles avec celle dcrite par Ryan
et ses collaborateurs, qui exprime en plus la chane du
rcepteur de lIL-7 (IL-7R) [6], et avec celle identifie
dans le sang de cordon par Hao et ses collaborateurs, qui
prsente le phnotype CD34
+
CD38
-
CD45RA
+
HLADR
+
CD7
+
,
mais nexprime pas lIL-7R. Si ce phnotype associ la
dtection de transcrits codant pour des facteurs de trans-
cription propres la ligne lymphode suggre que lon est
bien en prsence de progniteurs lymphodes, le potentiel T
na que rarement t dtect de faon convaincante [7].
Plus rcemment, lanalyse a t affine par lquipe
de Canque, qui montre que lexpression du CD7
+
sur
les progniteurs CD34
+
du sang de cordon reflte un
engagement vers la diffrenciation T/NK, contraire-
ment au phnotype CD34
+
CD10
+
indicateur, lui, dun
potentiel majoritairement lymphocytaire B [8].
Aujourdhui, il est donc acquis que les progniteurs
lymphodes de la moelle osseuse adulte
et du sang de cordon sgrgent dans
une fraction CD34
+
CD45RA
+
, et que lex-
pression de combinaisons diffrentes des
antignes CD10, CD7 et IL-7R augmente
lenrichissement en progniteurs B ou T.
Toutefois, seule la population CD7
+
a t
retrouve dans le thymus ftal. On ne
sait rien pour linstant du potentiel de
circulation et de colonisation thymique
de ce progniteur lymphode aprs la
naissance.
Il reste dfinir plus prcisment les
diffrentes tapes de la lymphopose
humaine ftale et adulte, la filiation
entre les diffrents progniteurs CD10
+
et
CD7
+
, prouver lchelon unicellulaire
la capacit de ces progniteurs donner
naissance simultanment des lympho-
cytes T, B et NK et, ventuellement, des
cellules dendritiques, au moins de type
plasmacytode.
Deux observations rendent optimistes quant
la progression rapide de nos connaissan-
ces. La premire, dordre technique, consiste
en la mise au point dune mthode trs
reproductive dobtention de lymphocytes T
humain in vitro. En effet, grce lutilisation
dune ligne stromale OP9 surexprimant le
ligand de Notch, Delta 1, il est maintenant
possible dobtenir une diffrenciation lymphode T humaine in vitro partir
de cellules souches CD34
+
du sang de cordon ou de la moelle osseuse [9, 10].
Ce systme de coculture constitue une avance majeure, qui permet le suivi
des tapes de la diffrenciation T et la production, au bout de 5 semaines, de
lymphocytes T matures et fonctionnels. La seconde avance est reprsente
par la dcouverte de nouvelles cytokines hmatopotiques telles que lIL -7,
la TSLP et les interleukines 15 et 21, qui permettent de cloner certaines sous-
populations lymphodes.
Dveloppement des lymphocytes T humains :
des progniteurs mdullaires colonisant
le thymus aux cellules double-positives
Colonisation thymique
Nos connaissances des mcanismes contrlant la migration des pro-
gniteurs hmatopotiques du foie foetal ou de la moelle osseuse
au thymus et de la nature de ces progniteurs sont encore trs frag-
mentaires. On ignore en particulier si cette colonisation se fait au
hasard ou spcifiquement en rponse des signaux de guidage, et si
elle concerne des progniteurs encore multipotents ou dj engags
dans la voie lymphode avant de pntrer dans le thymus. Dans le cas
o ces cellules ne seraient plus multipotentes, ce qui suggrerait que
Figure 2. Colonisation et tapes trs prcoces du dveloppement thymocytaire. Les rsultats
rcents publis dans la littrature nont pas dtermin de faon consensuelle la nature des cel-
lules issues de la moelle osseuse qui colonisent le thymus : il pourrait sagir de cellules souches
vritables, de progniteurs ETP, dj engags dans la voie T, ou de cellules dune autre nature,
dites TSP. lentre dans le thymus, le potentiel B (et mylode rsiduel) est rapidement perdu,
consquence de linteraction des progniteurs, exprimant Notch1, avec les ligands de Notch ; le
potentiel NK persiste un peu plus longtemps. Seuls les vnements initiaux du dveloppement T,
concernant des progniteurs double ngatifs DN1 (ckit
++
, CD25
+
, Lin
-
), sont indiqus. Des anti-
gnes tels que CCR9 (rcepteur de chimiokine) et Flt3 peuvent peut-tre permettre de distinguer
ces populations DN1 (daprs [36]).

Nombre de cellules
? 2000 20 000 30 000 ? 2000 20 000 30 000
CSH
?
TSP ETP ETP DN2

Flt3
+
CCR9
Signaux Notch
Potentiel B
Potentiel NK
Potentiel mylode
Stade DN1
Progniteurs
T-spcifiques
CCR9
++
FIt3
+
Lin
-
Sca1
+
ckit
++
CSH/Progniteurs
multipotents circulants
CCR9
++

FIt3
+
CCR9
++

FIt3
+
CCR9
FIt3
CCR9
FIt3
-
Lin

ckit
++
CD25
+
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M/S n 2, vol. 23, fvrier 2007 154
lengagement lymphode T interviendrait dans la moelle osseuse ou
trs prcocement dans le thymus, la question de sa reconnaissance
reste ouverte (Figure 2).
Ltude du dveloppement lymphode au cours de lembryogense nous
a appris plusieurs faits importants. Le principal est que la colonisation
du thymus nest pas un vnement continu , mais se droule par
vagues successives : une premire vague survient avant ltablisse-
ment de la vascularisation thymique (avant J14 de la vie embryon-
naire chez la souris et la 8
e
semaine de gestation chez lhomme), et
une deuxime vague une fois la vascularisation thymique tablie. La
premire phase de migration est assure, chez la souris, par divers
couples de rcepteurs des chimiokines et leurs ligands : CCR9/CCL25
et CCL21/CCR7 [11, 12], qui ont un rle de premier plan, et CXCL11 et
C3CL1, un degr moindre ; en revanche, le rle de CXCL12/CXCR4 dans
ce processus ne serait que marginal.
Une fois la vascularisation du thymus mise en place, diffrentes int-
grines et molcules dadhrence interviennent : le couple de molcules
P-slectine/PSGL-1, la premire exprime sur lendothlium thymique
et la seconde sur les progniteurs circulants, semble indispensable
lentre des progniteurs murins dans le thymus [13]. Nanmoins,
linhibition seulement partielle de la colonisation thymique par un
anticorps anti-P-slectine suggre que dautres couples intgri-
nes/ligands participent ce processus : parmi eux, L2/ICAM1 et
41/VCAM semblent participer la colonisation thymique chez la
souris [14]. Moins nombreuses et souvent contradictoires sont les
informations concernant les molcules impliques dans ce processus
chez lhomme. Chez ce dernier, les thymocytes ftaux immatures
semblent exprimer prfrentiellement les rcepteurs CXCR4 et, plus
faiblement, CCR9 [15], et il semble que lacquisition du rcepteur
CXCR4 sur les cellules CD34
+
de la moelle osseuse saccompagne de
la perte du potentiel mylode et dune restriction du dveloppement
aux lymphocytes T et B [16]. Ces donnes, concordantes avec celles
obtenues par Haddad et ses collaborateurs sur les thymocytes ftaux,
sont en contradiction avec celles publies par Hernandez-Lopez et
ses collaborateurs [17], qui montrent que les progniteurs thymiques
CD1a ngatifs nexpriment pas ce rcepteur. Il est intressant de noter
que les patients atteints de mutations du gne CXCR4 (syndrome
WHIM) prsentent une lymphopnie T, avec un nombre rduit de cellu-
les T naves, vraisemblablement due une altration de la sortie des
lymphocytes T matures du thymus. Cette voie ne semble pas modifier
la migration du CLP dans le thymus [17-19]. La connaissance dtaille
de ce processus nous permettrait denvisager lutilisation in vivo de
certaines de ces chimiokines pour amliorer la colonisation du thymus
au dcours, par exemple, dune greffe allognique.
Le niveau de diffrenciation des progniteurs qui colonisent le thymus
reste controvers, et il semble que plusieurs populations puissent
coloniser le thymus. Chez la souris, il sagirait de CSH vraies, cest--
dire capables de reconstitution hmatopotique long terme in vivo,
mais galement de progniteurs lymphodes prcoces [12, 20-22]. En
revanche, un certain consensus existe sur le fait que, in vivo, le CLP ne
colonise pas de faon majeure le thymus, son potentiel T sexprimant
surtout in vitro. Chez lhomme, le thymus pourrait galement tre
colonis par des progniteurs multipotents [18] ou par
un progniteur lymphode commun capable de donner
naissance exclusivement des cellules B, NK et den-
dritiques, comme cela a t montr pendant la priode
ftale [15] et, dune faon moins complte, dans le
sang de cordon [7, 8] (Figure 2). Il nexiste cependant
aucune information sur lidentit et la caractrisation
des progniteurs qui colonisent le thymus aprs la nais-
sance et pendant la vie adulte, et leur prsence simul-
tane dans la circulation et dans le thymus na jamais
t dmontre. La description dun tel progniteur cir-
culant nous permettrait de lisoler et de lamplifier dans
un but thrapeutique, par analogie avec lamplification
des progniteurs mylodes mobiliss aprs administra-
tion de G-CSF [19].
Diffrenciation intrathymique
La dissection des sous-populations de progniteurs thy-
miques immatures est galement beaucoup plus prcise
chez la souris que chez lhomme : par exemple, on dis-
tingue 4 fractions de prcurseurs thymiques immatures
(doubles ngatifs, DN) DN1-4 selon lexpression des
antignes CD25 et CD44, distinction qui nexiste pas
chez lhomme, o ces antignes ne sont pas exprims
selon cette hirarchie. La population DN1 conserve un
potentiel lymphode multiple et un potentiel mylode
rsiduel, tous deux steignant aux stades DN2. Chez
lhomme, cest lantigne CD1a qui distingue le passage
dun progniteur thymique trs immature (CD34
+
CD38
-
)
un progniteur clairement engag dans la voie T. Selon
le schma propos par le groupe de Canque, la popula-
tion thymique ftale plus immature (CD34
+
CD38
+/faible
,
CD1a
-
) est encore capable de se diffrencier en lym-
phocytes B, NK et en cellules dendritiques avec une trs
faible capacit mylode [15]. Cette population, dont
le gne codant le rcepteur T de lantigne (TCR) nest
pas rarrang, pourrait co-exprimer les antignes CD10
et CD7 [7]. Lacquisition du CD1a est contemporaine de
la perte de potentiels autres que lymphocytaire T. Le
stade suivant correspond lexpression de lantigne
CD4, stade immature simple positif (ISP-CD4), et peut
tre ultrieurement divis en deux sous-populations
selon lintensit dexpression du CD1a ; elle donne nais-
sance des cellules doubles positives (DP, coexprimant
CD4 et CD8) [25-27]. Chez lhomme, deux stades de
dveloppement DP sont reconnaissables (CD4
+
CD8
+

-

CD3
-
CD4
+
CD8
+

+
CD3
-
), qui prcdent lexpression
membranaire du CD3 [20].
Pendant les tapes prcoces du dveloppement T,
les locus du TCR rarrangent dune manire squen-
tielle TCR >>>, sans que lon puisse dfinir avec
prcision dans quels prcurseurs ces vnements ont
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lieu, plusieurs donnes suggrant que la slection des
rarrangements productifs du TCR et la -slection
pourraient dj commencer au stade ISP-CD4 et ne
seraient pas troitement associes lexpression mem-
branaire du CD4 ou CD8 [21]. Si lexpression du CD1a est
corrle chez lhomme avec lengagement T exclusif, la
dcision de devenir un lymphocyte ou ne se fait
pas, comme chez la souris, au moment de la co-expres-
sion des antignes CD4 et CD8. En effet, le potentiel
de donner naissance des lymphocytes persiste au
moins jusquau stade DP prcoce (CD4
+
CD8
+

-
CD3
-
).
Le dveloppement en lymphocytes T chez lhomme se
prsente comme une voie de diffrenciation par dfaut
[22], et le dveloppement versus est principa-
lement influenc par la succession des rarrangements
des gnes du TCR et par lexpression dun TCR fonction-
nel [22].
Les facteurs et les voies de signalisation impliqus dans
laccessibilit de ces diffrents locus du TCR sont, en
revanche, encore dfinir.
Contrle molculaire
du dveloppement lymphocytaire T humain
La spcification des CSH en progniteurs lympho-
des est finement rgule par lexpression coordonne
dans le temps des facteurs de transcription, dont la
fonction nest pas seulement lie la formation de
complexes protiques multimriques, mais galement
aux variations de dose de chaque facteur isolment.
Certains, comme Ikaros, E2A ou PU.1, sont ncessaires
lexpression dune potentialit lymphode sans que
leur expression ne soit restreinte lune ou lautre de
ces lignes. Dautres, plus spcifiques, agissent en
aval, restreignant la diffrenciation dans la ligne B
(EBF et Pax5), ou T (GATA-3, TCF1, ROR) (pour ne citer
que les principaux). Ainsi, un schma assez consensuel
aujourdhui distingue une premire phase de per-
missivit lymphode , rversible, et une seconde, au
cours de laquelle le progniteur sengage dans une voie
prcise, restreignant ainsi son potentiel, et complte
toutes les tapes jusquau lymphocyte fonctionnel.
Ces facteurs de transcription sont eux-mmes induits
par des signaux de lenvironnement, parmi lesquels les
ligands de Notch occupent une place essentielle. En
effet, ils ont un rle dterminant dans lorientation T
versus B dun progniteur lymphode commun, et peut-
tre mme dune cellule souche. Quatre rcepteurs
Notch, cods par quatre gnes diffrents (Notch 1-4),
et cinq ligands de Notch ont t caractriss (Jagged
1, 2, Delta like 1, 3, 4). Linteraction entre Notch et son
ligand induit deux coupures protolytiques successi-
ves dans le rcepteur Notch, la seconde (via un complexe ayant une
activit -scrtase) librant un fragment intracytoplasmique qui
migre dans le noyau, dplace les corpresseurs associs CSL/RBP-
Jk et recrute un troisime partenaire Mastermind. Ce complexe est
un activateur transcriptionnel (Figure 3) dont les cibles principales
sont les gnes Hes-1 (bHLH) et Deltex-1, chacun contrlant en aval
ses propres cibles. La nature du ligand et sa concentration sont deux
paramtres importants de cette voie transcriptionelle. Jagged 1 et
2, par exemple, sont exprims sur les cellules stromales de la moelle
osseuse et du foie ftal, ainsi que dans lpithlium thymique et
certaines sous-populations cellulaires du sytme lymphohmato-
potique. En revanche, les ligands Delta-1 et Delta-4 sont fortement
et exclusivement exprims dans le thymus. Cette distribution explique
probablement en partie labsence de diffrenciation T dans la moelle
osseuse, car la signalisation Notch ny est pas active un niveau
suffisant pour engager ce processus ; en revanche, le dveloppement
B, qui est inhib par un signal Notch fort, y est efficace.
La situation est inverse dans le thymus. Les donnes des modles de
surexpression des ligands ou de la forme active de Notch1 dans les
CSH, ainsi que celles provenant des modles o Notch est inactiv dans
le thymus, confirment le rle primordial de cette voie de signalisation
dans la dichotomie T/B. Dune faon gnrale, linteraction Notch1/
Delta-1/4 est essentielle aux stades initiaux de la thymopose (sta-
des DN), mais diminue ensuite partir du stade DP et reste mal connue
dans les tapes plus tardives (Figure 2). Curieusement, on sait trs peu
de choses des cibles directes de Notch activ, de CSL/RBPJ-k ou de leur
gne cible Hes-1 dans le systme lymphode.
La coopration complexe entre le facteur de transcription E2A et
Notch, dcrite chez la souris pendant le dveloppement ftal, doit
encore tre valide chez lhomme lge adulte [23]. Laction de
Notch dans le systme hmatopotique est ultrieurement compli-
que par le fait que ce facteur de transcription nagit pas seulement
comme activateur du programme de diffrenciation T spcifique, mais
galement comme rpresseur ou modulateur dautres facteurs de
transcription, induisant ainsi linhibition de la lymphopose B, ainsi
que celle de la mylopose [31-33].
Un autre facteur de transcription cl dans le dveloppement T est
GAT A-3, membre de la famille des facteurs de transcription se liant
au motif consensus GATA grce un domaine trs conserv doigt
de zinc [24]. Plusieurs travaux rapportent lexpression de GATA-3
exclusivement dans la ligne T. Chez lhomme, son expression laide
dun rtrovirus dans un systme de culture ex vivo a dmontr que
lhyperexpression non rgule de GATA-3 augmente la diffrenciation
prcoce des thymocytes vers le stade DP, et entrane une cellularit
thymique rduite des prcurseurs plus engags, par augmentation
de leur apoptose. Cette hypocellularit est mettre en relation avec
lincapacit de ces prcurseurs T exprimer une chane TCR fonc-
tionnelle leur surface, soulignant nouveau limportance de la
rgulation prcise de la dose de chaque facteur tout au long de la
diffrenciation T [25]. Il reste vrifier si ces rsultats sont pertinents
en physiologie humaine, car ils sont en contradiction avec les donnes
recueillies chez la souris, qui plaident en faveur dun rle majeur du
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Cellule stromale
CSL
HE S
n u c l e us
Progniteur lymphode
TACE
Delta
Jagged
NIC
CSL
HES
Noyau
NIC
MAML
g-scrtase
Notch
facteur de transcription GATA-3 dans lexpression du TCR et dans la
signalisation via le pr-TCR.
Dautres facteurs de transcription de la famille HOX semblent interve-
nir dans le dveloppement T chez lhomme, comme cela a t indirec-
tement prouv par ltude des translocations dcrites dans certaines
leucmies aigus chez lhomme ; leur rle physiologique reste cepen-
dant mal connu.
Dveloppement lymphocytaire T et pathologie humaine
Dficits immunitaires primitifs
Les dficits immunitaires combins svres (DICS) reprsentent
un groupe htrogne de pathologies caractrises par un blo-
cage prcoce et profond du dveloppement lymphocytaire T. Bien
que labsence des lymphocytes T matures saccompagne inva-
riablement dun dficit de limmunit humorale,
seules 5 des 10 formes gntiquement caractrises
se traduisent par une absence ou une diminution
importante, et exclusive, des lymphocytes T. Il
sagit des mutations de la chane du rcepteur
de lIL-7 (IL-7R), de mutations du gne CD45 et,
enfin, des mutations des sous-units de signalisa-
tion du complexe CD3 pr-TCR et CD3/TCR : CD3 et
. Les consquences biologiques de ces mutations,
aujourdhui bien connues chez lhomme, dfinissent
le rle diffrent de ces molcules dans le dvelop-
pement T.
Ainsi, les patients porteurs de dfauts de lIL-7R ont
une absence complte de lymphocytes T, mais un nom-
bre normal de lymphocytes B et NK. Ce constat plaide
contre un effet majeur de lIL-7 sur la survie et la pro-
lifration du prcurseur lymphode commun humain et
sur la survie et la diffrenciation des cellules B imma-
tures. Nanmoins, il ne permet pas dexclure la prsence
de dfauts quantitatifs du compartiment pro-B, que
masque la prolifration des lymphocytes B matures.
Ltude de la lymphopose B humaine chez ces malades
pourrait claircir ce point. LIL-7, outre son action sur
la survie et la prolifration des thymocytes DN, exerce
un rle direct dans linduction des rarrangements de
la chane du TCR : elle augmente lactylation des
histones et laccessibilit du locus [26], et contribue
galement au rarrangement du locus [27].
Dune faon similaire, aucun rle de la chane com-
mune (c) du rcepteur des cytokines hmatopotiques
nest attendu dans la formation du CLP chez lhomme,
compte tenu de la prsence dans la moelle osseuse
des patients porteurs de mutations dun pourcentage
normal de prcurseurs lymphodes CD10
+
(Isabelle
Andr-Schmutz, donnes non publies). En revanche,
cette chane joue un rle majeur dans le dveloppement
lymphocytaire T et NK ; larrt de la maturation lympho-
cytaire T est en effet d labsence de signalisation via
le rcepteur spcifique de lIL-7, form des deux sous-
units et c [28].
Leucmies aigus lymphoblastiques
de la ligne T (LAL-T)
La leucmie lymphoblastique aigu de type T (LAL-T)
est une maladie hmatologique maligne agressive qui
affecte surtout les enfants, plus rarement les adultes,
avec une incidence globale de 4/100 000, et 450 nou-
veaux cas chaque anne en France.
La transformation leucmique des thymocytes est un
processus mutagnique multi-tapes, avec de nom-
breuses altrations gntiques conduisant, dans une
cellule normale, un vnement transformant qui
Figure 3. Cascade protolytique dclenche par linteraction du rcepteur Notch
activ par son ligand. Linteraction entre le rcepteur Notch et son ligand Delta
ou Jagged induit deux clivages protolytiques successifs : le premier ralis
par la mtalloprotase TACE, suivi par un deuxime clivage intramembranaire
par lactivit -scrtase. Ce dernier clivage libre la rgion intracellulaire du
rcepteur, NIC, transporte dans le noyau o elle forme un complexe activateur
de la transcription avec les protines CSL et MAML (Mastermind), activant la
transcription des gnes cibles de la famille HES.
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pratique mdicale, les progniteurs lymphodes ou les molcules sti-
mulant leur spcification/prolifration.
Bloquer une activation excessive de la voie Notch
La grande frquence des mutations de Notch 1 dans les LAL-T fait
de cette voie de signalisation une cible idale pour une intervention
pharmacologique. Thoriquement, cette voie de signalisation pour-
rait tre utilise diffrents niveaux : interaction avec le ligand,
endocytose, protolyse ou activit transcriptionnelle. En pratique,
des petites molcules inhibitrices du complexe -scrtase qui
inhibent la libration du fragment intracytoplasmique activ de
Notch reprsentent lapproche thrapeutique la plus raliste, tant
donn les modalits disponibles dadministration des mdicaments.
Nanmoins, un certain nombre de problmes lis la spcificit de
cette approche doivent encore tre rsolus, et ces molcules ne sont
utiles que si les mutations naboutissent pas un clivage spontan
du rcepteur [34, 35]. Une molcule inhibitrice de la -scrtase est
en cours de dveloppement clinique, et un essai de phase I a dbut
aux tats-Unis.
Stimuler la reconstitution immune
Un des moyens dacclrer la reconstitution immunitaire aprs greffe
de CSH allogniques partiellement compatible consisterait exposer
des progniteurs multipotents un ligand de Notch de type Delta-
1 ou Delta-4 pendant quelques jours, afin de forcer lengagement
lymphocytaire T de ces progniteurs, et de rinjecter ces cellules
par voie intraveineuse aux sujets greffs. Il est vrai quavant toute
application clinique, il convient de dmontrer que lengagement T
ne saccompagne pas dune perte de la capacit de migration de ces
cellules dans le thymus, et de choisir un temps dincubation suffi-
samment court pour viter la slection des cellules T porteuses de
TCR pathologiques.
Enfin, la connaissance dtaille de la niche lymphode pourrait per-
mettre la mise au point de nouveaux conditionnements cibls capa-
bles de la vider, ce qui permettrait dviter lusage de la chimioth-
rapie et de la radiothrapie dans les protocoles de conditionnement
prcdant une greffe de CSH, prvenant ainsi la toxicit qui lui est
associe.
Conclusions
La caractrisation de prcurseurs lymphodes humains et la dcouverte
de laction physiologique et pathologique de la voie Notch ouvrent la
voie des interventions thrapeutiques innovantes, qui devraient
amliorer le pronostic des LAL et les rsultats cliniques des greffes de
CSH. Les progrs biologiques sont en train de transformer notre prati-
que mdicale et de faire voluer notre approche thrapeutique.
SUMMARY
Human hematopoiesis: from CD34 cells to T lymphocytes
Hematopoietic stem cell (HSC) has two key-properties : the self-
renewal and the multipotentiality which guarantee the homeos-
induit une croissance cellulaire non contrle, et donc
une expansion clonale prdominante. Lvnement
leucmique pouvant survenir diffrents stades de
la diffrenciation thymique, le phnotype des LAL-T
correspond ces diffrents stades [29]. Lanalyse
cytogntique et le clonage molculaire des points de
cassure qui caractrisent les translocations chromo-
somiques propres aux LAL-T ont permis la dcouverte
des protines rgulatrices de la transcription exprimes
dune faon anormale dans les blastes leucmiques.
Parmi les altrations gntiques, une forte prvalence
des mutations activatrices du gne Notch a t mise en
vidence [30].
Historiquement, Notch a t caractris grce liden-
tification du point de cassure impliqu dans la trans-
location (7 ; 9) (p 34 ; p 34.3), qui juxtapose un gne
Notch 1 tronqu au locus TCRB et induit ainsi lexpres-
sion aberrante dune forme intracellulaire continuelle-
ment active de Notch 1 [31]. Ce nest que 15 ans plus
tard que lon a ralis que des mutations activatrices
du gne Notch taient prsentes chez plus de 50 % des
patients ayant une LAL-T ou un lymphome, faisant ainsi
de Notch loncogne la prvalence la plus leve dans
la pathogense de cette maladie maligne, et confirmant
les donnes exprimentales observes chez la souris lors
de la surexpression de Notch activ dans les CSH.
Plus gnralement, la grande majorit des transloca-
tions dcrites dans les LAL-T se caractrisent par la jux-
taposition des promoteurs et des enhancers des gnes
du TCR, avec un nombre relativement modeste de gnes
codant pour des facteurs de transcription importants
dans le dveloppement, dont MYC, le groupe des gnes
HOXA, HOX11, XO11L2, TAL1, TAL2, LYL1, LMO1 et LMO2.
Parmi ceux-ci, seuls les gnes HOXA10 et HOXA11 sont
exprims dans les thymocytes au cours du dveloppe-
ment, suggrant une fonction physiologique au cours du
dveloppement T. Les autres facteurs de transcription
exercent leur fonction oncognique en interfrant avec
lexpression des facteurs T spcifiques, une situation
qui a t relativement bien dcrite pour les transloca-
tions concernant TAL1 [32] et LMO2 [33]. La fonction
des gnes de la famille HOX au cours de ce processus
doit encore tre dcrite.
Applications thrapeutiques
La description dtaille des nouvelles formes de DICS,
la dcouverte du rle cl jou par le rcepteur Notch 1
dans lengagement T et dans la physiopathologie des
LAL de type T, ainsi que la description de la dynamique
de colonisation du thymus sont autant de dcouvertes
nous permettant desprer pouvoir utiliser, dans la
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tasis of the hematopoietic system all along the lifespan. Inside
this system, T lymphocytes are particular for several reasons.
First and foremost, their differentiation takes place in a different
organ from the one where the immature progenitors are generated
and expanded. This implies the migration of an immature proge-
nitor from the fetal liver and later on from the bone marrow to
the thymus. Secondly, T cell differentiation is characterized by
thymic selection and generation of T lymphocytes with a diverse
repertoire able to answer to all foreign antigens one can meet.
These complicated mechanisms underlying the T cell differentia-
tion, completely different from those characterizing the myeloid
system, at least partially explain our limited knowledge on human
T cell lymphopoiesis. Finally, T cell differentiation pathway shows
the particularity of profound ontogenic changes with the huge
production of lymphoid progenitors during the fetal and the first
years of life which declines during the ageing period. Recently, the
discovery of new hematopoietic cytokines, the discovery of genes
involved in primary immunodeficiencies and the detailed descrip-
tion of the role of Notch receptors have strongly developed our
knowledge on T cell lymphopoiesis. In this review, we will attempt
to describe where we stand in the description of this fundamental
process and to underline the unresolved questions. The knowledge
of this process is crucial, since it will lead us to set up new proto-
cols with the aim to speed up immunological reconstitution after
HLA partially compatible HSC and to treat the lymphocytopenia of
patients affected by HIV.
GLOSSAIRE
CALLA : common acute lymphoblastic leukemia antigen
CLP : common lymphoid progenitor
CMP : common myeloid progenitor
DICS : dficits immunitaires combins svres
ETP : early T cell progenitor
G-CSF : granulocyte-colony stimulating factor
GMP : granulocyte/monocyte progenitor
HES : hairy enhancer of split
ICAM1 : intercellular adhesion molecule
ISP : immature single-positive
LAL-T : leucmies aigus lymphoblastiques de la ligne T
MAML : mastermind-like
MEP : megakaryocyte/erythrocyte progenitor
NK : natural killer
PSGL-1 : P-selectin glycoprotein ligand 1
TACE : tumor necrosis factor-alpha-converting enzyme
TCR : T-cell receptor
TSLP : thymic stromal derived lymphopoietin
TSP : thymus seeding progenitor
TCRB (locus) : T cell receptor beta (locus)
VCAM : vascular cell adhesion molecule
WHIM (syndrome) : warts, hypogammaglobulinemia, infections
and myelokathexis
REMERCIEMENTS
Nos remerciements vont lAction concerte Biothrapie
de lInserm - U768 (AIP Cellules Souches - Appel projets
2003 Les progniteurs lymphodes : de lidentification des
mcanismes fondamentaux de leur gnration et amplifica-
tion aux applications thrapeutiques ), au dpartement de
Biothrapie, lAssistance publique-Hpitaux de Paris et
Benedita Rocha et Alain Fischer pour les discussions scien-
tifiques.
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