EXAMEN MICROBIOLOGICO DE LAS PLANTAS INDUSTRIALES

I. INTRODUCCION
Los microorganismos estn por doquier: suelo, agua, alimentos, efluentes y en las
superficies corporales. El microbilogo separa estas poblaciones mixtas en especies
individuales para su estudio.
El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas,
qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada.
En general, podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin de las
caractersticas del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin de la
disponibilidad de nutrientes en el medio.
Un cultivo conteniendo una sola especie de clulas, no adulteradas, se llama cultivo
puro. Para aislar y estudiar microorganismos en cultivos puros, se requieren una
serie de instrumentos bsicos de laboratorio y la aplicacin de tcnicas especficas.

II. OBJETIVO
Conocer el proceso de evaluacin microbiolgica de las plantas industriales.
Conocer las operaciones a seguir en la ejecucin de las pruebas microbiolgicas
utilizados en el anlisis microbiolgico de las plantas industriales.
Realizar el recuento de colonias presentes en los diferentes anlisis.

III. FUNDAMENTO TEORICO
3.1. MICROBIOLOGIA AGROINDUSTRIAL
La microbiologa industrial es la microbiologa que estudia la aplicacin de la
biotecnologa de los microorganismos en la industria. Esto implica la utilizacin de
sistemas biolgicos en diferentes procesos industriales. En general puede abarcar
diferentes mbitos:
Fabricacin de diferentes compuestos orgnicos.
Transformacin de productos, hecho que cada da tiene ms importancia,
puesto que las reacciones mediadas por los seres vivos ocurren en
condiciones de presin, temperatura,... normales. Por lo tanto puede ser ms
barato el uso de seres vivos, ya que no se requieren condiciones especiales.
Adems, en muchos casos sern reacciones ms eficaces que las qumicas. Se
ha de tener en cuenta siempre que la industria buscar la mayor eficiencia
posible y la reduccin de costes, ya que lo que interesa es tener beneficios.
Reacciones con compuestos inorgnicos, como puede ser el caso de la
lixiviacin de metales.
Produccin de biomasa, con diferentes finalidades. A menudo el producto
final de las reacciones son los propios microorganismos, por su valor en
alimentacin humana, como Saccharomyces,... o animal, como las SCP.
Degradacin de sustancias, como puede ser la depuracin de aguas, el
tratamiento de residuos,...
Biosensores, determinacin de la presencia de sustancias, mediante sistemas
biolgicos. Tambin puede servir en los controles de calidad. Est
adquiriendo una gran importancia en los ltimos aos, ya que es una muy
importante herramienta de anlisis.


3.2. MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo usados para hacer crecer los microorganismos han de tener
todos los elementos necesarios en la forma y las proporciones adecuadas para la
sntesis de material celular y la produccin de metabolitos. En un laboratorio se
pueden usar productos qumicos, de composicin conocida, para la obtencin de
medios de cultivo, que son medios sintticos, pero en las fermentaciones industriales
los medios han de ser lo ms baratos posibles. En microbiologa industrial raramente
se usan medios ptimos, equilibrados o definidos, sino que en muchos casos los
medios usados estn formados a partir de subproductos de otras industrias. Sern
medios muy variados en su composicin, nunca ptimos ni equilibrados, ni mucho
menos definidos. Esto presenta una serie de consecuencias sobre el desarrollo de los
organismos y sobre el control de la fermentacin.
I. Un medio de cultivo ptimo y ms o menos equilibrado es obligatorio para
conseguir la mxima produccin. Es necesario por lo tanto optimizar los medios
industriales, lo que no es tarea fcil, teniendo en cuenta los ingredientes de los que
se parte, muy complejos y variables. Los medios de cultivo industriales pueden
optimizarse usando mtodos estadsticos, mediante programas diseados con
ordenador. En caso de ser necesario pueden aadirse suplementos de elementos
crticos ausentes o insuficientes en el medio.
II. Control de calidad. Los medios se disean para conseguir la mxima produccin.
En todos los casos, los nuevos sustratos han de ser evaluados precisamente antes de
iniciar la produccin industrial, mediante fermentaciones prueba.
Represin por el catabolito. Consiste en la represin de la sntesis de determinadas
protenas como consecuencia de la presencia de una determinada fuente de carbono y
energa, como puede ser la glucosa. La existencia de una fuente de carbono y energa
ptima en el medio puede provocar que algunas protenas no se expresen, lo que puede
reducir la eficacia de ciertas reacciones de inters industrial, o incluso impedirlas. La
represin por el catabolito o por el producto puede eliminarse optimizando los
nutrientes en el medio, de manera que no haya glucosa, por ejemplo, o por gestin
adecuada del fermentador, de manera que se aada la glucosa poco a poco al medio. Si
no funcionase esta aproximacin, deberan usarse cepas mutantes desreguladas para la
produccin.

3.3. Esterilizacin
Es el proceso de eliminar todas las formas de vida de un medio o material. Esto puede
lograrse por calor, filtracin, agentes qumicos y radiacin.

3.4. Tubos de cultivo y Placas de Petri
Tubos de cultivo de vidrio y placas de Petri, de vidrio o plstico, son utilizados para el
cultivo de microorganismos. Los tubos de cultivo deben estar provistos de un cierre
adecuado, como los tapones modernos de metal o plstico que son de uso comn. Las
placas de Petri proveen mayor rea de cultivo y crecimiento. Normalmente contienen de
15 a 20 mL de medio, el cual se aade derretido y se deja solidificar antes de su uso. La
placa consiste en dos partes, la inferior que contiene el medio, y la parte superior que
sirve de tapa. Luego de ser inoculadas
(sembradas con microorganismos), las placas de Petri se incuban en posicin invertida,
para evitar que la condensacin que se forma en la tapa gotee en la superficie del agar
solidificado.

3.5. Instrumentos de Transferencia
Los microorganismos deben ser transferidos de un recipiente a otro, o de un cultivo stock
a diversos medios para mantenimiento y estudio. Una transferencia de dicho tipo se
llama subcultivo, y debe llevarse a cabo en condiciones estriles para evitar
contaminacin.
Para realizar las transferencias se utilizan agujas o asas bacteriolgicas, hechas de metal
inerte como platino, e insertadas en un manubrio de metal. Son muy duraderas y
esterilizables incinerndolas en la porcin azul (la ms caliente) de la llama de un
mechero.
Para la transferencia de medios lquidos, debe utilizarse una pipeta esterilizada.



IV. MATERIALES Y SUSTANCIAS
4.1. Materiales
Mechero busen
Asa de siembra
Microscopio
Pinzas
Estufa
Autoclave
Matraz Erlenmeyer
Placas Petri
Pipetas de 5ml
Tubos de ensayo 5ml
Algodn
Papel craft
Papel aluminio
4.2. Sustancias
Agar
Agua destilada
Muestra tomada de las manos

V. METODOLOGIA
5.1. Bacterias del piso, maquinarias o equipos:
Preparacin del medio de cultivo
Esterilizar el medio de cultivo y los materiales a utilizar y Pasar un hisopo
embebido en buffer por un rea determinada del equipo, maquinaria o piso y
posteriormente descargar el hisopo en un volumen medido de diluyente.
Transferir con la pipeta 1.0 ml de la dilucin a la placa Petri
El proceso de aadir a la placa petri realizar en presencia de calor, para evitar el
ingreso de microorganismos no deseables.
A continuacin se vierten de 15 a 20 mL de medio de cultivo estril, atemperado
a 45 - 47 C.
Mezclar cuidadosamente el contenido de cada placa con movimientos
circulares a derecha y a izquierda, solidificar en superficie plana; a fin de obtener
colonias regularmente dispersas despus de la incubacin.
Incubar en forma invertida la placa con agar nutritivo a 37C por 24 a 48 horas
Realizar el recuento de nmero de colonias en el contador de colonias.
Realizar la coloracin Gram de las diferentes clases de colonias identificando la
morfologa.
5.2. Bacterias del aire en la planta piloto
Preparar el medio de cultivo (agar nutritivo) y solidificar en Placas Petri.
Exponer las Placas Petri al or durante un periodo de 15 minutos a ms.
Tapar las placas e incubar la placa con agar nutritivo durante 24 horas a 30C
Realizar el recuento de nmero de colonias en el contador de colonias.
Realizar la coloracin Gram de las diferentes clases de colonias identificando la
morfologa.

5.3. Bacterias del personal de planta.
Tome como muestra a un personal de trabajo, y hacer que se lave las manos en
un volumen medido de diluyente.
Transferir 1.0 mL a la Placa Petri estril
A continuacin se vierten de 15 a 20 ml de agar nutritivo, atemperado a 45 - 47 C
Mezclar cuidadosamente el contenido de cada placa con movimientos circulares
a derecha y a izquierda, solidificar en superficie plana; a fin de obtener colonias
regularmente dispersas despus de la incubacin.
Incubar en forma invertida lo placa con agar nutritivo a 37C por 24 a 48 horas
Realizar el recuento de nmero de colonias en el contador de colonias.
Realizar la coloracin Gram de las diferentes clases de colonias identificando la
morfologa. Siga el mismo procedimiento aire para diagnosticar las bacterias de la
respiracin del personal con la diferencia de realizar un sople sobre la placa con agar.

VI. RESULTADOS
N TOTAL DE COLONIAS = N DE COLONIAS X FACTOR DE DILUCION







A) 200 X 10 = 2000
B) 50 X 100 = 5000

N TOTAL DE COLONIAS = N DE COLONIAS X FACTOR DE DILUCION
5000/2000= 2.5
(5000 + 2000)/2= 3500 ufc/ml

VII. CUESTIONARIO
7.1. Indicar las microorganismos que pertenecen a los grupos de:

Microorganismos indicadores de higiene inadecuada
Estafilococos. La presencia de Staphylococcus aureus en un alimento se
interpreta, por lo genera, como indicativo de contaminacin a partir de la
piel, la boca y las fosas nasales de los manipuladores de alimentos, si bien el
material y equipo sucios y las materias primas de origen animal pueden ser
asimismo la fuente de la contaminacin. Cuando se encuentra un gran
nmero de estafilococos en un alimento, ello significa, por lo general, que las
prcticas de limpieza y desinfeccin y el control de la temperatura no han
sido, en algn lugar, adecuados. Ingran (1960) conceda significado a la
presencia de gran nmero de Staphylcoccus, por ejemplo en carnes curadas,
debido a que, cuando los recuentos de este grupo de grmenes son altos, se
S. MADRE 10
-1
10
-2
10
-3
200
50 12
3.5x10
3
ufc/ml
han dado circunstancias determinantes de que las cepas de S. aureus
enterotoxignicas pudieran encontrarse en nmero peligroso.

Microorganismos indicadores de la contaminacin fedecal.
Escherichia coli es un germen cuyo hbitat natural es el tracto entrico del
hombre y de los animales. Por ello, la presencia de este microorganismo en
un alimento indica generalmente una contaminacin directa o indirecta de
origen fecal. E. coli es el indicador clsico de la posible presencia de
patgenos entricos en el agua, en los moluscos, en los productos lcteos y
en otros alimentos. La enumeracin de E. coli en el agua constituye una
medida de la cuanta de la polucin, mientras que los niveles detectados en
los alimentos pueden estar influenciados por otros factores, tales como la
multiplicacin del microorganismo, su muerte o inactivacin o su adherencia
a las partculas del alimento. Con todo, cifras sustanciales de E. coli en un
alimento sugieren una falta general de limpieza en el manejo del mismo y un
almacenamiento inadecuado.
La presencia de E. coli en un alimento no constituye una connotacin directa
de la presencia de un patgeno, sino que implica nicamente un cierto riesgo
de que pudiera estar presente. En otras palabras, la presencia de E. coli en
los alimentos no guarda siempre una estrecha correlacin con la presencia
de salmonelas o de otros microorganismos patgenos.
Existe abundante bibliografa sobre los valores de E. coli de los coliformes y
de la familia completa de las Enterobacteriaceae como indicadores de
contaminacin de origen fecal. Una prctica comn es utilizar las pruebas
para coliformes, que incluyen E.coli, en los ensayos de screening o
preliminares. Si de estas pruebas iniciales se deduce la posibilidad de
contaminacin fecal, los coliformes u otras Enterobacteriaceae se someten a
posteriores estudios para determinar si entre ellos est presente E. coli.

Microorganismos indicadores de procesamiento insuficiente
Bacterias mesfilas esporuladas. La presencia de bacilos mesfilos en
alimentos enlatados indica que o bien el envase no se cerr hermticamente
o que el tratamientos trmico fue insuficiente para destruir los esporos.
Existe la posibilidad de que en tales circunstancias pudiera estar presente
tambin Clostridium botulinum. Si fuera as, pudiera haber tenido lugar el
crecimientos del germen y la produccin de toxina en los alimentos
enlatados de acidez escasa (pH 4,6 o ms elevado), tales como sopa de pollo
y championes.
Cuando se encuentran bacterias esporuladas en los alimentos refrigerados y
en los deshidratados en nmero anormalmente elevado, o en proporcin
excesivamente grande de la poblacin total, existe el riesgo de que entre
ellas puedan encontrarse C. perfringens, C. botulinum o Bacillus cereus. Estos
microorganismos representan un peligro ya en el alimento tal como ha sido
fabricado o en sus usos futuros.

7.2. Qu son las bacterias aerobias mesfilas viables y donde se encuentran?

La clasificacin en cuanto a su requerimiento de oxigeno puede ser aerobia que
necesitan oxgeno para crecer, tambin hay microaerofilicos (pueden crecer con muy
bajas cantidades de oxigeno) y los anaerobio que no crecen si hay oxgeno. Lo de
mesofilicos es en la temperatura a la que pueden crecer, entre 20 y 45 grados aprox,
los termofilicos cercen por arriba de estas temperaturas y los psicrofilicos por debajo.
As que una bacteria mesofilica aerobia crece entre 20 y 45 C en presencia de
oxgeno.

Este grupo de bacterias es el ms amplio y se usa como indicador de contaminacin
en alimentos.

7.3. Defina lo que es un microorganismo indicador.
Indicadores Ponen de manifiesto deficiencias en la calidad microbiolgica de un
determinado alimento en trminos ms generales. Por ejemplo, presencia de
bacterias del grupo coliformes en la leche pasteurizada, en nmero que exceda a un
valor de referencia experimentalmente establecido, puede advertir diversas
deficiencias de este producto:
Un tratamiento trmico insuficiente,
Una contaminacin posterior al tratamiento,
Un almacenamiento del producto final a una temperatura demasiado elevada.


VIII. CONCLUSIONES
en la prctica de laboratorio hemos podido hacer el reconocimiento de microorganismos
en las manos, como la echericha coli, salmonella, etc.
los diferentes anlisis de los equipos agroindustriales se hicieron con cuidado ya que
podramos alterar el resultado con un mal manejo.
en el recuento de colonias hemos podido observar mayor formacin de colonias en la
muestra madre que en las diferentes diluciones y la coloracin rojiza dando por resultado
Gram negativa.

IX. RECOMENDACIONES
Cuando hagamos el manejo de algn equipo debemos de tener cuidado con el manejo y
hacer con la debida limpieza en manos, y el rostro cubierto asi no alteramos los diferentes
proceso en la Agroindustria con microorganismos no deseados que podran causar dao.

X. BIBLIOGRAFIA

MARTIALAY VALLE, F. (MINISTERIO DE DEFENSA)(1988). Prontuario de tcnicas en
microbiologa de alimentos. Pd de Defensa.
PASCUAL ANDERSON, M.R. (1992). Microbiologa Alimentaria. Metodologa Analtica
para alimentos y bebidas. Ed. Diaz de Santos. Madrid.
ICMSF (1991). Microorganismos de los alimentos. Tcnicas de analisis microbiolgico.
Ed. Acribia. Zaragoza.
HERNANDEZ JIMENEZ Y OTROS (1994) Anlisis microbiolgicos de alimentos y control
de los procesos de fabricacin. Instituto de Agroqumica y Tecnologa de los alimentos
de la UPV.
XI. ANEXOS






Fig 1. Medio de cultivo (agar) Fig 2. Llevado a la estufa








Fig 3. Esterilizacin Fig 4. Diluciones