Universidad de Oriente

Ncleo Bolvar
Escuela de Ciencias de la Salud
Departamento de Microbiologa y Parasitologa
MicrobiologaEn!ermera "#$%&%%
Coordinador' (cdo) *os+ Nastasi
Tema prctico
Tinciones ms usadas en microbiologa.
Tincin de Gram.
Se le denomina as por ser descubierta por el Bacteri,logo dan+s C-ristian
.ram/ 0uien la desarroll, en "122)
Es uno de los m+todos de tinci,n m3s importantes en el laboratorio
bacteriol,gico) Su utilidad pr3ctica es indiscutible y en el traba4o microsc,pico de rutina
del (aboratorio de Microbiologa las re!erencias a la mor!ologa celular bacteriana/ se
basan 4ustamente en la tinci,n de .ram)
(as bacterias pueden dividirse en dos grupos/ grampositivas y gramnegativas 5en
este caso/ los t+rminos positivo y negativo no tiene nada 0ue ver con carga el+ctrico/
sino simplemente designan dos grupos mor!ol,gicos distintos de bacterias6)
Fundamento.
(as bacterias Gram positivas/ !i4an el colorante cristal violeta 5colorante primario6/ 0ue
al unirse al lugol/ !orman un comple4o insoluble en agua/ debido a 0ue estas bacterias/
poseen en su pared celular/ 7N8 en !orma de ribonucleato de magnesio) Este comple4o
imposibilita 0ue el colorante cristal sea barrido por el alco-ol 3cido/ 0uedando te9ida de
color morado)
(as bacterias Gram negativas/ no poseen este compuesto en su pared celular/
por lo tanto no !orman el comple4o insoluble/ se ti9en con el ltimo colorante 5!ucsina6
0ue es de color rosado)
Materiales usados para realizar la tincin de Gram.
(3mina con el !rotis
Cristal :ioleta
(ugol yodo
8lco-ol 3cido
Sa!ranina
8gua
Soporte para tinci,n
Microscopio
Tcnica para realizar la tincin de Gram.
7eali;ar !rotis
Colocar el !rotis sobre un soporte para tinci,n y cubrir la super!icie con soluci,n
de cristal violeta por el lapso de "min)
(avar con agua destilada
Cubrir el !rotis con soluci,n de yodo/ durante " min)
(avar nuevamente con agua)
Cubrir la placa con decolorante de alco-ol 3cido -asta 0ue no desprenda mas el
color violeta/ 5"& seg)6)
(avar con agua corriente)
Cubrir la placa con sa!ranina durante " min)
(avar con agua corriente y colocar la placa en una posici,n 0ue drene el e<ceso
de agua y el !rotis se0ue)
Observar el !rotis con " gota de aceite de inmersi,n con ob4etivo < "&&)
Ejemplos vistos bajo el microscopio:
Gram egativas
Pseudomona aeruginosa
Neisseria gonorrhoae
Gram positivas
Staphylococcus aureus
Bacillus anthracis
!oloracin de "ie#l eelsen $cido resistente%
Usadas !undamentalmente en las micobacterias)
=stas est3n recubiertas por un grueso material c+reo 5consistencia de cera6 0ue
resiste la tinci,n/ sin embargo una ve; te9idas las c+lulas bacterianas resisten la
decoloraci,n con solventes org3nicos !uertes como alco-ol 3cido)
Por ese motivo/ estas bacterias se conocen como acidorresistentes/ !en,meno
descubierto por >ie-l y Neelsen en "11%)
Fundamento.
(as paredes celulares de ciertas bacterias contienen 3cidos grasos de cadena
larga 0ue les con!ieren la propiedad de resistir la decoloraci,n con alco-ol3cido/
despu+s de la tinci,n con colorantes b3sicos) Por esto se denominan 3cidoalco-ol
resistente) (as micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y M. marinum se
caracteri;an por sus propiedades de 3cidoalco-ol resistencia) (a coloraci,n cl3sica de
>ie-lNeelsen re0uiere calentamiento para 0ue el colorante atraviese la pared bacteriana
0ue contiene ceras) 8l suspender el calentamiento y en!riar con agua/ provoca una
nueva solidi!icaci,n de lo 3cidos grasos de modo 0ue el colorante ya no puede salir de
las bacterias) Por otro lado/ el calentamiento aumenta la energa cin+tica de las
mol+culas del colorante lo cual tambi+n !acilita su entrada a las bacterias) (as bacterias
0ue resisten la decoloraci,n son de color ro4o y las 0ue no/ se ven de color a;ul ya 0ue
se utili;a a;ul de metileno como tinci,n de contraste)
Materiales para la tincin de "ie#l& eelsen
(amina con el !rotis
Sopote para tinci,n
8lco-ol 3cido
?uscina !enicada
8;ul de metileno
Mec-ero
8gua
Microscopio
Tcnica de tincin de "ie#l& eelsen
Colocar el !rotis sobre un soporte para tinci,n y cubrir la super!icie con soluci,n
!ucsina !enicada por @ min) Mientras se calienta la placa de la siguiente manera'
Pasar la llama por deba4o de la placa/ -asta la emisi,n de vapores/ de4ar en!riar)
7epetir esta operaci,n tres veces)
(avar la placa con abundante agua corriente para eliminar el e<ceso de
colorante)
Decolorar con la soluci,n de alco-ol 3cido -asta 0ue el e<tendido no elimine
mas colorante/ @& seg)
(avar la placa con agua)
Cubrir la placa con a;ul de metileno por el lapso de " min)
(avar con agua el e<ceso de colorante)
De4ar secar la preparaci,n y e<aminar al microscopio aplicando una gota de
aceite de inmersi,n A"&&)
Mycobacterium tuberculosis
887B 58cido 8lco-ol 7esistente6