La biologa de la rizosfera a travs de La biologa de la rizosfera a travs de
un papel de cromatografa un papel de cromatografa
Cd. Guerrero, Chih., Febrero 2009 M.C. Armenia Velzquez Gurrola Gerente de Agrobiolgicos InnovakGlobal Ehrenfried Pfeiffer Ehrenfried Pfeiffer (1899 (1899- -1961) 1961) Desarroll los mtodos de formacin de imgenes: imgenes: Cristalizacin sensible: amplia investigacin, aplicacin en medicina y en sanidad vegetal Dinamlisis capilar: utilizada para distinguir entre productos orgnicos y convencionales Cromatografa en papel circular Cromatografa en papel circular (cromas): (cromas): Amplia aplicacin en agricultura, composteo y manejo de suelos Cromatografa La cromatografa en papel es un proceso utilizado en los laboratorios como anlisis cualitativo La fase estacionaria se constituye por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo y luego el solvente empleado se hace luego el solvente empleado se hace ascender por capilaridad. Se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene el solvente en el fondo. Despus de unos minutos cuando el solvente deja de ascender, se retira el papel y seca. Cromatografa en papel horizontal: Cromatografa en papel horizontal: CROMAS CROMAS La muestra sube por capilaridad por un pistilo, y se extiende horizontalmente a travs del papel PASO 1. Deshidratar la muestra a 70C por 24 h (Suelo o tejido vegetal) Moler en mortero con pistilo (suelo) Moler en licuadora hasta obtener un polvo fino y homogneo (tejido vegetal) PASO 2. Preparar una solucin de nitrato de plata al 0.5 % Preparar una solucin de Hidrxido de Sodio (sosa custica), al 0.1-0.5 % El nitrato de plata puede almacenarse e incluso reciclarse, pero la solucin alcalina deber prepararse al momento de utilizarse para que sea lo ms fresca posible PASO 3. Mezclar 5 g de la muestra seca y molida en 50 mL de la solucin alcalina al 0.1-0.5% PASO 4. Agitacin manual TIEMPOS DE AGITACIN MANUAL A tiempo 0 Reposo Reposo A los 15 minutos de iniciada la extraccin Reposo A los 60 minutos despus de la ltima agitacin Reposo de 4 horas PASO 5. Impregnar con nitrato de plata el papel filtro, hasta la primera marca, dos horas antes de que finalice el ltimo reposo Cmara hmeda Cmara hmeda Puede fabricarse de diferentes materiales, o formas para correr dos o ms cromas al mismo tiempo Humedad relativa constante entre 70 y 80 % 21-26C de temperatura Altura de 12-15 cm PASO 6. Colocar la muestra en la caja pequea Impregnar el pistilo con la muestra y dejar correr en cmara hmeda, hasta que toque la segunda marca del papel Aplicaciones Qu pasa en el suelo? Qu pasa en Qu pasa en el suelo? Qu pasa en la rizosfera? la rizosfera? Anlisis nutricionales (foliares y suelo) Anlisis microbiolgicos, microorganismos benficos y patgenos ? Qu pasa en el suelo? Qu pasa en Qu pasa en el suelo? Qu pasa en la rizosfera? la rizosfera? Manejo convencional 1 ao con t de composta + 4 aos con t de composta + Cromas del suelo rizosfrico de manzano. Muestran el mismo patrn de formacin de imagen. Los anlisis microbiolgicos tampoco mostraron diferencias significativas Qu pasa en el suelo? Qu pasa en Qu pasa en el suelo? Qu pasa en la rizosfera? la rizosfera? Manejo convencional 1 ao con t de composta + 4 aos con t de composta + Cromas de la rizosfera: raz + suelo rizosfrico Diferencias evidentes y congruentes con lo observado en campo Cambios en la rizosfera a travs de los aos.los microorganismos se mueren, pero dejan su obra. Lo que ocurre en la rizosfera, impacta el Lo que ocurre en la rizosfera, impacta el estado general de salud del cultivo estado general de salud del cultivo Cromas de peciolo de tomate: manejo convencional vs t de composta + ExuRoot Lo que ocurre en la rizosfera, impacta el Lo que ocurre en la rizosfera, impacta el estado general de salud del cultivo estado general de salud del cultivo Cromas de tallo de tomate: manejo convencional vs t de composta + ExuRoot Gua de interpretacin de cromas Gua de interpretacin de cromas 1. Zona central. Indicador del contenido de oxgeno en las sustancias. 2. Zona interna. Indicador de materia orgnica y formacin humus. 3. Zona media. Indicador de procesos de transformacin en las sustancias. 4. Zona externa o final. Indicador de nitrgeno enlazado y de formas estables de coloides del humus del suelo (humatos estables). 5. Formacin de picos. Indicador de rompimiento y procesos de formacin de molculas. 6. Hoyos en forma de cereza. Indicador de materia viva, no aparece en materiales sintticos. 7. Radiacin. Indicador de actividad enzimtica y/o actividad biolgica en una muestra 8. Manchas oscuras. Indicador de protenas y nitrgeno orgnico. Interpretacin de cromas Interpretacin de cromas Importante hacer cromas patrn o cromas de referencia -Suelo frtil -Suelo estril -Suelo compacto -Suelo enfermo, etc. -Suelo enfermo, etc. La gua de interpretacin anterior, No aplica para cromas de tejidos vegetales. Tambin es necesario hacer cromas patrn Plantas sanas, enfermas, productivas, etc. La rizosfera vista a travs de un papel de cromatografa.. Luis Medina Vega (QEPD) Gracias!