Gentica bacteriana.

OBJETIVOS: El alumno ser capaz de definir la recombinacin gentica en bacterias. De utilizar adecuadamente
los conceptos relacionados: plsmidos, replicacin. De distinguir con precisin los tres mecanismos diferentes
de recombinacin gentica bacteriana: Conjugacin, Transformacin, Transduccin.

El "ncleo" bacteriano: NUCLEOIDE
Las clulas procariotas y eucariotas se distinguieron desde el principio sobre la siguiente base estructural: la
estructura equivalente al ncleo eucariota (esa compleja estructura rodeada por membranas) no se observaba
en procariotas.
El tamao de las bacterias dificult los estudios acerca del "ncleo" bacteriano, sin embargo en el curso de las
investigaciones destinadas a su esclarecimiento la utilizacin de los mtodos citoqumicos y la microscopa
electrnica demostraron su existencia.
El gran poder de resolucin del microscopio electrnico no solo amplia la tpica forma bacteriana, sino que
revela claramente la organizacin procariota.

Regin nuclear o nucleoide (n) donde se localiza el ADN y las reas oscuras del citoplasma de Neisseria
gonorrhoeae.
Hoy se conoce que al igual que del resto de seres vivos (celulares) poseen ADN, y que el mismo no se haya
distribuido al azar en el citoplasma, sino en una zona particular denominada regin nuclear o nucleoide sin
estar separado por una unidad de membrana.
Cromosoma bacteriano
Por microscopa ptica puede constatarse la presencia de ADN por la tincin de Feulgen.
Sin embargo, fueron los mtodos autorradiogrficos los que demostraron en forma indubitable que el ADN es
el material "nuclear" de las bacterias, gracias a una de las caractersticas que posee esta molcula: es la nica
sustancia celular que posee timina.
De los mtodos autorradiogrficos (usando timina tritiada) y bioqumicos tambin surgi el conocimiento que
el ADN se presenta como una doble cadena (de cerca de 1 mm de longitud), circular y cerrada de manera
covalente, que toma el nombre de cromosoma bacteriano. Esta "gigantesca" molcula circular tiene un peso
de 3 X 10
9
d (daltons).
Sobre estas bases por lo tanto, el nucleoide es una estructura que contiene un solo cromosoma.
No posee las histonas del cromosoma eucariota, pero se ha comprobado la existencia de protenas y
poliaminas de bajo peso molecular y de iones magnesio que cumpliran su funcin.
Desde ya, la sola mencin de la longitud del cromosoma bacteriano del orden del milmetro hace necesaria
una explicacin que concilie con el tamao de la bacteria que est en el orden de micrones (1 m = 0,001
mm), la microscopa electrnica muestra un cromosoma bacteriano altamente condensado y ordenado
("supercoiled" o superenrrollado), y que se encuentra anclado parcialmente a la membrana bacteriana. Este
ADN superenrrollado adopta una forma mucho ms compacta que el circular. En la clula eucariota el
enrollamiento se hace sobre las histonas en los nucleosomas, pero en las procariotas, existe una enzima:
la ADN girasa que provoca enrollamientos negativos (la torsin se hace de manera contraria a la direccin de
la doble hlice, o sea hacia la izquierda).
De la misma forma que la ADN girasa superenrrolla el cromosoma para confinarlo dentro de la clula, otra
enzima, la Topoisomerasa I es capaz de desenrollar y relajarlo para permitir la replicacin.

Esquematiza el cromosoma bacteriano y representa los plsmidos.
Plsmidos
Son elementos genticos accesorios extracromosmicos, pequeos fragmentos circulares de ADN, que estn
presentes prcticamente en todas las clulas bacterianas. Contienen de 2 a 30 genes. Algunos tienen la
capacidad para incorporarse o salir del cromosoma bacteriano. Se denomina episoma a un plsmido
incorporado al cromosoma bacteriano. Los plsmidos se replican en manera similar al cromosoma bacteriano.
En Escherichia coli se han reconocido muchos plsmidos, entre ellos el F ("factor sexual") y el R (resistencia a
los antibitico). El plsmido F contiene 25 genes, algunos de los cuales controlan la produccin de los pilis ,
"tubos" que se extienden desde la superficie de las clulas bacterianas "machos"( F
+
), a la de las clulas
bacterianas hembras ( F
-
).


Conjugacin en una cepa de Escherichia coli



La resistencia a los antibiticos ha sido encontrada en grmenes patgenos causantes de enfermedades
tales como: tifoidea, meningitis, gonorrea y otras. Actan proporcionando la informacin necesaria para
destruir el antibitico o para circunvalar el bloqueo que produce el antibitico en la va metablica
bacteriana.
El plsmido R confiere, a las clulas que lo poseen, resistencia a los antibiticos o drogas. Un plsmido R
puede llegar a tener hasta 10 genes que confieren resistencia.
Tamao genmico
El tamao genmico de las bacterias se diferencia de una especie a otra, en un rango que va de 0,6 hasta
13.10
6
pares de bases (pb). La mayora de los genomas bacterianos tienen el mismo orden de tamao que el
de Escherichia coli (esto es 4,6.10
6
kb).
El nmero de genomas por clula difiere igualmente de una especie a otra y depende de las condiciones de
cultivo.
A efectos comparativos la tabla siguiente muestra el tamao genmico de Escherichia coli y de una serie de
eucariotas.
Organismo Tamao genmico
Escherichia coli 4,6.10
6
pb
Neurospora crassa 19.10
6
pb
Aspergillus niger 40.10
6
pb
Homo sapiens 2,9.10
9
pb
Zea maiz 7.10
9
pb
Reproduccin Bacteriana
Los datos obtenidos a partir de las autorradiografas del cromosoma de Escherichia coli(imgenes theta por
su similitud al aspecto de dicha letra griega) ya indican la manera en que se replicara el ADN bacteriano, el
esquema y la animacin representan unareplicacin unidireccional, si bien en realidad se ha establecido que
la misma es bidireccional y existen dos horquillas de replicacin que acontecen por la desespiralizacin de la
doble cadena.
La duplicacin de la clula va precedida por la duplicacin o replicacin del cromosoma bacteriano. Primero
se replica y luego pega cada copia a una parte diferente de la membrana celular. Cuando las clulas que se
originan comienzan a separarse, tambin se separa el cromosoma original del replicado.
El nmero de copias por clula del cromosoma depende del estadio del ciclo celular (replicacin del
cromosoma, crecimiento de la clula, separacin de los cromosomas, etc.). Si bien el mecanismo de
separacin de los cromosomas "hermanos" no se ha dilucidado en su totalidad, todo los modelos coinciden
que una de las condiciones es que el cromosoma permanezca "pegado" a la membrana celular a travs de
varios estadios del ciclo de divisin bacteriano.


El tiempo necesario para la replicacin del cromosoma de Escherichia coli es de aproximadamente 40
minutos, sin embargo la duplicacin de la bacteria acontece (en condiciones ptimas) en cerca de 20
minutos, este hecho paradojal se explica por el descubrimiento que en los cromosomas bacterianos "hijos"
se inicia un nuevo ciclo de divisin antes de que se termine el primero.
Ciertos tipos de bacterias pueden "donar " un pedazo de ADN a una clula receptora. Esta recombinacin es
el equivalente bacteriano de la reproduccin sexual en eucariotas. Debe notarse que usualmente no se
transfiere la totalidad de la molcula de ADN, solo una pequea parte

Nmero de copias cromosmicas
Las clulas procariotas en crecimiento rpido (fase logartmica o exponencial) tienen la posibilidad de
dividirse ms rpido que lo que permite la maquinaria de replicacin del ADN. Por ello pueden tener de 2 a 4
copias del cromosoma bacteriano o copias incompletas del mismo. Para asegurar que exista una copia
completa para cada una de las clulas hijas en la fisin binaria, se inician nuevos ciclos de replicacin del
ADN antes que el ltimo haya terminado.nicamente en fase estacionaria, cuando las bacterias cesan de
dividirse, existe un cromosoma por clula. Por ello este tipo de organismos son haploides, es decir el genoma
mnimo por clula es una sola copia del cromosoma bacteriano, lo que implica que existe una sola copia de
cada gen.

Replicacin del ADN
Una vez que se comprob que el ADN era el material hereditario y se descifr su estructura, lo que quedaba
era determinar como el ADN copiaba su informacin y como la misma se expresaba en el fenotipo. Matthew
Meselson y Franklin W. Stahl disearon el experimento para determinar el mtodo de la replicacin del ADN.
Tres modelos de replicacin eran plausibles.

1. Replicacin conservativa durante la cual se producira un ADN completamente nuevo durante la replicacin.

2. En la replicacin semiconservativa se originan dos molculas de ADN, cada una de ellas compuesta de una
hebra de el ADN original y de una hebra complementaria nueva. En otras palabras el ADN se forma de una
hebra vieja y otra nueva. Es decir que las hebras existentes sirven de molde complementario a las nuevas.


3. La replicacin dispersiva implicara la ruptura de las hebras de origen durante la replicacin que, de alguna
manera se reordenaran en una molcula con una mezcla de fragmentos nuevos y viejos en cada hebra de
ADN.

El experimento de Meselson-Stahl consiste en cultivar la bacteria Escherichia coli en un medio que contenga
nitrgeno pesado (
15
Nitrgeno que es mas pesado que el istopo mas comn: el
14
Nitrgeno ). La primera
generacin de bacterias se hizo crecer en un medio que nicamente contena
15
Nitrgeno como fuente de N.
La bacteria se transfiri luego a un medio con
14
N. Watson y Crick haban pronosticado que la replicacin del
ADN era semiconservativa, de ser as el ADN extrado de las bacterias luego de cultivarlas por una generacin
en
14
N tendra un peso intermedio entre el ADN extrado del medio con
15
N y el del extrado de medio con
14
N
y as fue.
La iniciacin de la replicacin siempre acontece en un cierto grupo de nucletidos, el origen de la replicacin,
requiere entre otras de las enzimas helicasas para romper los puentes hidrgeno y las topoisomerasas para
aliviar la tensin y de las protenas de unin a cadena simple para mantener separadas las cadenas abiertas.

Una vez que se abre la molcula, se forma una rea conocida como "burbuja de replicacin" en ella se
encuentran las "horquillas de replicacin" . Por accin de la la ADN polimerasa los nuevos nucletidos entran
en la horquilla y se enlazan con el nucletido correspondiente de la cadena de origen (A con T, C con G). Los
procariotas abren una sola burbuja de replicacin, mientras que los eucariotas mltiples. El ADN se replica en
toda su longitud por confluencia de las "burbujas".
Para que trabaje la ADN polimerasa es necesario la presencia, en el inicio de cada nuevo fragmento, de
pequeas unidades de ARN conocidas como cebadores, a posteriori, cuando la polimerasa toca el extremo 5'
de un cebador, se activan otras enzimas, que remueven los fragmentos de ARN, colocan nucletidos de ADN
en su lugar y, una ADN ligasa los une a la cadena en crecimiento.


Traduccin, redaccin y diagramacin a cargo

CONCLUSION:
Conclusiones Se emplea la recombinacin del DNA para dirigir o planear la evolucin de nuevos
microorganismos. La tecnologa del DNA recombinante es un instrumento poderoso para comprender los
procesos genticos bsicos y tiene aplicaciones industriales potencialmente enormes.
La ingeniera gentica utiliza plsmidos como portadores del DNA no relacionado y las enzimas que
intervienen en la recombinacin normal y en la replicacin del DNA para introducir el DNA ajeno dentro
de los plsmidos portadores.

BIBLIOGRAFIA:
http://www.biologia.edu.ar/bacterias/micro2.htm
http://www.slideshare.net/breid/recombinacin-gentica-bacteriana
http://www.biologia.edu.ar/adn/adntema1.htm