TINCIONES DE GRAM

Esta tcnica diferencial es una de las de uso

mas comn en microbiologia. En este
procedimiento, el frote bacteriano teido se
somete a las soluciones siguientes en el orden
que se indica: cristal violeta, solucin de yodo,
alcohol (decolorante) y safranina o alguna otra
solucin colorante de contraste conveniente.


Las bacterias sometidas al mtodo de Gram
pertenecen a dos grupos: bacterias Gram
positivas, que retienen el cristal violeta y aparecen
color violeta profundo; las bacterias Gram
negativas que pierden el cristal violeta y por el
contraste de la safranina aparecen rojas.
METODO DE GRAM

El metodo de Gram entra en la clasificacin
de las tinciones de coloracin diferencial, y se
procede como sigue.
Sobre la extencin seca y fijada, se hace
actuar sucesiva y alternadamante dos o tres
veces cada una de las siguientes soluciones:

Violeta de genciana fenicado. 1 minuto aprox,
lugol, 2 min aprox. El tiempo de actuacin de
estas dos soluciones no puede
determinarsepor todos los frotis, pues esta en
funcin del espesor de los mismos.
sobre un portaobjetos bien escurrido
verter alcohol de 95 o una mezcla de alcohol
(5 partes) y acetona (1 parte), hasta que ya
no se disuelvael violeta de genciana fenicado.


Lavar; colorear el fondo con fucsina diluida
durante 30 seg; lavar y secar. Para poder
identificar bacterias gramnegativas se agrega
una gota de safrnina y se deja actuar durante
un min. Posteriormente se lava con agua.

Las bacterias se pueden dividir en dos
grandes grupos, grampositivas y gramnegativas-
con base a la tecnica de tincin diferencial, ya
mencionada llamada tincin de gram.
Estos dos grupos difieren sobre todo en su
pared celular y, debido a sus diferencias se
mencionan:

Grampositivas
Gramnegativas
Bacterias Gramnegativas

La pared celular de las bacterias
gramnegativas es ms compleja, desde el punto
de vista quimico. Su pered celular contiene
menos pptidoglucano, pero por fuera de esta
capa poseen una segunda estructura
membranosa, compuesta de proteinas,
fosfolipidos y lipopolisacaridos (acidos grasos
unidos a polisacaridos).
Las bacterias gramnegativas contiene un
porcentaje mas altos de lipidos que las bacterias
grampositivas.
Las paredes celulares de las bacterias
gramnegativas son tambin ms delgadas que
las de las grampositivas.
Hay pruebas experimentales en el sentido de
que el tratamiento con alcohol extrae lpidos con
la cual se aumenta la porosidad permeabilidad
de la pared celular gramnegativa.

As el complejo cristal violeta-yodo (CV-I) puede
extraerse en los organismos gramnegativos y de
esta manera se destien.
Las paredes celulares de las bacterias
grampositivas, por su composicin diferente
(bajo contenido de lipido) se deshidratan durante
el tratamiento con alcohol, los poros disminuyen,
la permeabilidad se reduce y no se logra extraer
el complejo (CV-I).
Bacterias Grampositivas

Las paredes de las celulas de los organismos
Grampositivos son completamente gruesas (20 a
80nanmetros) y consisten de 60 a 80 % de
pptidoglucano,el cual es excesivamente
entrecruzado en tres dimenciones para formar
una red polimrica gruesa.
Todas las clulas Grampositivas poseen un
polmero lineal de cido N-acetilmermico y N-
acetilglucosamina.
Otra explicacin se basa en diferencias de
prmeabilidad entre los dos grupos de
bacterias.
En las bacterias grampositivas, el complejo
(CV-I) queda retenido en la pared despus del
tratamiento con etanol, la cual segn se
supone causa una disminucun en el diametro
de los poros del glucopptido o peptido-
glucano de la pared celular.

Las paredes de las bacterias gramnegativas
tienen una cantidad mucho menor de peptido-
glucano con ligaduras cruzadas menos
extensas que en las paredes de las bacterias
grampositivas.