Ao de la Inversin para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE QUMICA
FOTOSNTESIS ALUMNA: TOMAS ALVAREZ, INGRIT FIORELA PROFESORA: CAROLINA MARCELO CURSO: LABORATORIO DE BIOLOGA
II. INTRODUCCIN
La fotosntesis es un proceso por el cual las plantas, algas y algunas bacterias atraen y utilizan la energa de la luz para transformar la materia inorgnica del medio ambiente en materia orgnica la cual utilizan para su crecimiento y desarrollo. Por lo tanto se puede decir que la fotosntesis es el proceso que mantiene la vida en nuestro planeta ya que los organismos hetertrofos, incluyendo al hombre dependemos de estas conversiones energticas y de materia para la subsistencia. Al realizar la fotosntesis, las plantas poseen varios nutrientes y nos ofrecen una variedad de alimentos por lo que son la base de la cadena alimenticia en los ecosistemas, adems de ello contribuyen a la limpieza del medio ambiente pues utilizan el CO 2 y liberan O 2. , ayudando as a la regeneracin de la capa de ozono. Por estas mltiples razones es importante conocer este gran proceso, es por ello que en esta prctica aprenderemos ms sobre las etapas de la fotosntesis, as como sus componentes que son los pigmentos y una forma de identificarlos mediante la cromatografa en papel.
II. MARCO TERICO 2.1 FOTOSNTESIS Las plantas son capaces de producir su propio alimento a travs de un proceso qumico llamado fotosntesis. Para realizar la fotosntesis las plantas disponen de un pigmento llamado clorofila. Los organismos que lo pueden llevar acabo son: Plantas, algas y cianobacterias. La fotosntesis es un proceso anablico porque sintetizan molculas orgnicas, adems es endergnico porque consume energa (luz), es discontinuo porque se divide en fases (fase luminosa, fase oscura) y reductor porque al final los electrones van a permitir formar molculas, cuyo producto final ser la sntesis de molculas orgnicas destacando en ella la glucosa. Dentro de la importancia de la fotosntesis tenemos la oxigenacin del planeta por el oxgeno que elimina al ambiente, favorece la regeneracin de la capa de ozono y es la base de la cadena alimenticia ya que las plantas al realizar esta forma de nutricin (auttrofa) alimentan al hombre y la mayor de los seres vivos sobre la Tierra. FRMULA: 12 H 2 O + 6CO 2 + LUZ ----------> C 6 H 12 O 6 + 6 O 2 + 6 H 2 O
FASES DE LA FOTOSNTESIS 2.1.1 FASE LUMINOSA O REACCIN DE HILL Se usa H 2 O y energa solar. Se forma ATP, NADPH 2 y
O 2. Ocurre en el tilacoide. Consta de las siguientes etapas: A. FOTOEXITACIN DE LA CLOROFILA: La luz es absorbida por los pigmentos, desencadena la excitacin electrnica molecular y la prdida de electrones por la clorofilas. B. FOTLISIS DEL AGUA: La energa absorbida provoca la ruptura de las molculas de agua como consecuencia se libera oxigeno molecular O 2 electrones (2e) y protones (2H) hacia el interior del tilacoide. En este proceso participa la protena Z. C. FOTOREDUCCIN DEL ADP: Los electrones liberados del agua son transferidos a partir de la cadena transportadora de electrones hacia el NADP+ que como consecuencia se reduce( el NADP+ gana electrones) en NADP-, luego acepta protones originando NADPH 2 . D. FOTOFOSFORILACIN DE ADP: La acumulacin de protones en el espacio intratilacoidal y el transporte de electrones genera una gradiente de concentracin y carga entre el tilacoide y el estroma. Como consecuencia se sintetiza ATP por parte de la ATP sintasa.
Figura 2.1.1 Se presenta las etapas de la fase luminosa de la fotosntesis en el tilacoide.
2.1.2 FASE NO LUMINOSA Llamada tambin ciclo de Calvin, fase no fotodependiente, utiliza los productos de la fase luminosa: ATP, NADPH 2 .Ocurre en el estroma o matriz acuosa del cloroplasto. ETAPAS: A. ACTIVACIN DE LA RIBULOSA FOSFATO: El ATP impacta con la ribulosa monofosfato y el ATP es el que pierde un fsforo, entonces la RM gana un fsforo. Era monofosfato pero como gan un fsforo ser difosfato, la cantidad de carbonos se mantiene. B. FIJACIN DE LA RIBULOSA BIFOSFATO: La ribulosa bifosfato es importante porque se va unir al CO 2 . El CO 2 se acopla a la ribulosa y al unirse se formar una molcula de 6c, pero para que el CO 2 se acople ms rpido participa la enzima rubisco (ribulosa bifosfato carboxilada oxigenasa ) cuando una molcula se le incorpora el CO 2 , se incorpora carbono se llama carboxilacin. Esto sucede cuando en el estroma hay una mayor concentracin de CO 2 y poco de O 2 . C. REDUCCIN DEL FOSFOGLICERATO: La molcula de 6C formada es inestable, por ello se parte en 2 molculas de 3C 3C el cual se llama Fosfoglicerato, es aqu donde se usa los otros productos de la fase luminosa, se gasta 2 ADP, los NADPH 2 + los cuales son cedidos a los 3C. Por lo tanto el Fosfoglicerato gana electrones y se reduce. Ahora como solo se gana fsforos e hidrgenos la cantidad de carbonos se mantiene constante, se forma el Fosfogliceraldehdo, el cual tiene 6C y se parte en dos molculas de 3C. D. SNTESIS DE LA GLUCOSA Y REGENERACIN DE LA RIBULOSA: De los 6C de lFosfogliceraldehdo se gasta 5C para regenerar a la ribulosa monofosfato, de esta forma el ciclo contina, luego por esta va solo nos queda 1C , del Fosfogliceraldehdo se forma la fructuosa y por un proceso de isomerizacin se transforma a glucosa. Figura 2.1.2 La fase oscura y sus etapas para producir glucosa. 1 CICLO DE CALVIN -------> 1 C 6 VUELTAS DE CALVIN ------------> 1 GLUCOSA 1 GLUCOSA -----------> NECESITA 18 ATP
2.2 LA CROMATOGRAFA En 1906, el botnico Ruso M. Tswett realiz un experimento que condujo al descubrimiento de lo que hoy conocemos como cromatografa. Coloc un extracto de pigmentos vegetales en la parte superior de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio (CaCO3). Al agregar ter, observ que la mezcla original se separaba en diversas bandas coloridas que descendan a travs de la columna a diferentes velocidades. Un rasgo caracterstico de la cromatografa es la presencia de dos fases; dispuestas de tal manera que mientras una permanece estacionaria dentro del sistema (fase estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de l (fase mvil). La clave de la separacin en cromatografa es que la velocidad con la que se mueve cada sustancia depende de su afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de distribucin). En el experimento de Tswett, la separacin de los pigmentos vegetales se logr gracias a que cada uno de ellos tena una afinidad diferente por las fases. En general, los componentes ms afines a la fase estacionaria avanzan lentamente (ms retenidos) mientras que los ms afines a la fase mvil (menos retenidos) se mueven con mayor rapidez. Por consecuencia, el medio cromatogrfico (columna, placa o papel) funciona como un controlador de la velocidad de cada sustancia que constituye la mezcla, logrando as su separacin y mediante el uso de un detector, su caracterizacin qumica. 2.2.1 CROMATOGRAFA EN PAPEL
La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la disolucin y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se hace ascender por capilaridad. La separacin se realiza en funcin de la afinidad de los solutos con las dos fases, las ms solubles en agua se quedarn cerca del punto donde se aplic la muestra, y las menos solubles en agua y ms solubles en el disolvente llegarn ms lejos. Las sustancias separadas se identifican mediante diversos procedimientos fsicos o qumicos La cromatografa en papel es una tcnica utilizada para anlisis inorgnico cualitativo, permite llevar a cabo la separacin e identificacin de iones, trabajando con cantidades mnimas de sustancia. Pertenece al tipo de Cromatografa de particin se fundamenta en que las sustancias problema, pueden tener diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo en la superficie del papel fase estacionaria generalmente en agua, la fase mvil constituida generalmente por una mezcla de disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay varios tipos de cromatografa, la ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel invertido), radial y de separacin de zonas y sectores. Al entrar en contacto con los disolventes empieza su fase de movilidad lo que produce unas manchas caractersticas sobre el papel, generalmente, estas no son coloreadas y se revelan con una lmpara fluorescente, los contornos se marcan con lpiz. Como medida en cromatografa sobre papel se emplea el Rf (Retention factor), el cual se define como el cociente de dividir el recorrido de la sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media desde el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la distancia que media desde el origen hasta el frente del disolvente (S). En la cromatografa en papel se utiliza como fase estacionaria una hoja de papel de celulosa de elevada pureza recubierta de una capa de agua asociada a las fibras de celulosa. La fase mvil, en la que ir disuelta la muestra, se forma por disolventes cuya naturaleza se elige en funcin de los componentes que se pretenden separar.
Figura 2.2 Cromatografa en papel.
2.3 PIGMENTOS FOTOSINTTICOS 2.3.1 XANTFILA La clorofila ms abundante en las hojas enmascara los colores de los carotenoides. Al caer las hojas, la clorofila ms inestable ante la oxidacin se descompone ms rpidamente y las hojas muestran los colores amarillentos de las xantfilas. Se conoce como xantfilas a los compuestos qumicos pertenecientes al grupo de los carotenoides que poseen uno o ms tomos de oxgeno en su estructura. Las xantfilas se encuentran tambin de forma natural en muchas plantas, son compuestos pigmentados y presentan tambin accin fotosinttica. Estos pigmentos, ms resistentes a la oxidacin que las clorofilas, proporcionan sus tonos amarillentos y parduzcos a las hojas secas. PROPIEDADES: Las xantfilas son derivados oxigenados de los carotenoides, usualmente sin ninguna actividad como vitamina A. La criptoxantina es una excepcin, ya que tiene una actividad como vitamina A algo superior a la mitad de la del beta-caroteno. Abundan en los vegetales, siendo responsables de sus coloraciones amarillas y anaranjadas, aunque muchas veces stan enmascaradas por el color verde de la clorofila. Tambin se encuentran las xantfilas en el reino animal, como pigmentos de la yema del huevo (lutena) o de la carne de salmn y en el exoesqueleto de crustceos (cantaxantina). Esta ltima, cuando se encuentra en los crustceos, tiene a veces colores azulados o verdes, al estar unida a una protena. El calentamiento rompe la unin, lo que explica el cambio de color que experimentan algunos crustrceos al cocerlos. La cantaxantina utilizada como aditivo alimentario se obtiene usualmente por sntesis qumica.
2.3.2 LOS CAROTENOIDES Son pigmentos orgnicos del grupo de los isoprenoides que se encuentran de forma natural en plantas y otros organismos fotosintticos como algas, algunas clases de hongos y bacterias. Se conoce la existencia de ms de 700 compuestos pertenecientes a este grupo. Los carotenoides son el grupo ms representativo de los tetraterpenos, compuestos que se caracterizan por una estructura con 40 tomos de carbono, aunque no todos los carotenoides se ajustan estrictamente a esta regla. Estos tomos de carbono se encuentran ordenados formando cadenas polinicas conjugadas en ocasiones terminadas en anillos de carbono. A los carotenoides que contienen tomos de oxgeno se les conoce ms especficamente como xantofilas. Los restantes constituyen el grupo de los llamados carotenos. Su color, que vara desde amarillo plido, pasando por anaranjado, hasta rojo oscuro, se encuentra directamente relacionado con su estructura: los enlaces dobles carbono-carbono interactan entre s en un proceso llamado conjugacin. Mientras el nmero de enlaces dobles conjugados aumenta, la longitud de onda de la luz absorbida tambin lo hace, dando al compuesto una apariencia ms rojiza. Por ejemplo, el fitoeno que posee nicamente tres enlaces dobles conjugados absorbe luz en el rango ultravioleta y apareciendo por tanto incoloro a la vista, el licopeno, compuesto que confiere su color rojo al tomate contiene 11 enlaces dobles conjugados. Existen tambin carotenoides de color verde (Caroteno), amarillo (caroteno), y anaranjado (neurosporaxantina). En organismos fotosintticos los carotenoides desempean un papel vital en los centros de reaccin, ya sea participando en el proceso de transferencia de energa, o protegiendo el centro de reaccin contra la autooxidacin. En los organismos no fotosintticos, los carotenoides han sido vinculados a los mecanismos de prevencin de la oxidacin. Como ejemplo de estos compuestos en la naturaleza, podemos citar al carotenoide mejor conocido, el que da al grupo su nombre, el caroteno, encontrado en zanahorias y responsable de su color anaranjado brillante. El color rosado del flamenco y el del salmn, y la coloracin roja de las langostas, tambin son producidos por carotenoides. Entre las aplicaciones ms importantes de los carotenoides podemos mencionar su uso como pigmentos naturales, as como su papel como complemento alimenticio.
Figura 2.3 Alimentos con pigmentos carotenoides. III. MATERIALES Y METODOLOGA 3.1 MATERIALES QUE SE REQUIEREN: *TUBOS DE ENSAYO *LAPIZ *MOTERO *REGLA *GRADILLA *HOJAS DE ESPINACA *PAPEL DE FILTRO *HOJAS DE COLORES *BENCINA *FLORES DE COLORES * ALCOHOL
3.2 METODOLOGA
PROCEDIMIENTO:
A. EXTRACCIN DE PIGMENTOS VEGETALES 1.- Rompemos y Triturar las hojas verdes en un mortero, en este caso la espinaca. Repetir con las hojas de otro color y los ptalos de las flores, en este caso las rosas.
Figura 3.2.1 A la izquierda: Hojas de espinacas. A la derecha: Las hojas de espinaca trituradas en el mortero. Figura 3.2.2 A la izquierda: Las hojas de colores. A la derecha: El filtrado de las hojas trituradas. Figura 3.2.3 A la izquierda: Los ptalos de la rosa. A la derecha: Ptalos triturados de la rosa. Figura 3.2.4 A la izquierda: Lquido obtenido de la espinaca. A la derecha: Lquido obtenido de las hojas de colores.
2.- Filtrar el lquido obtenido a travs de un papel de filtro y depositarlo en tubos de ensayo.
Figura 3.2.5 Lquido obtenido de los ptalos de la rosa.
Figura 3.2.6 A la Izquierda: Filtrado de las rosas en tubo de ensayo. A la derecha: El filtrado de la espinaca. Figura 3.2.7 Los pigmentos de la hoja de rosas y espinacas listas para ser utilizadas en cromatografa de papel.
El lquido obtenido es filtrado a travs de papel de filtro y depositado en tubos de ensayo.
B. CROMATOGRAFA EN PAPEL DE LOS PIGMENTOS VEGETALES 1.- Cortar una tira de papel de filtro de acuerdo al tamao del tubo y trazar una lnea horizontal, aproximadamente a 3cm del extremo del papel y otra aproximadamente a 1 cm del otro extremo del papel. 2.- Sobre la lnea trazada a 3 cm del extremo del papel, se coloca, pequeas gotas del filtrado obtenido (repetir varias veces, hasta obtener una mancha de color intenso). 3.- En el fondo de un tubo colocar el disolvente de bencina y para otro tubo colocar alcohol, ambos casos para cada muestra. 4.- La tira de papel de filtro preparada se coloca dentro de los tubos de ensayo, no debe tocar las paredes del tubo y cerramos la boquilla de tubo con Papel parafilm. Observar el ascenso de los pigmentos.
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES: Para escoger las plantas a utilizar verificamos que sean las que tienen las hojas suaves, en el caso de las flores de colores buscamos las que tengan color intenso. Mientras vamos triturando las hojas agregamos alcohol para facilitar el contacto de los pigmentos con el solvente. Otro de los motivos por los que utilizamos el alcohol y no el agua se debe a que Como los pigmentos son unas sustancias orgnicas son insolubles al agua, por ello necesitamos utilizar un disolvente orgnico que sera el alcohol o acetona, ya que los pigmentos s son solubles en solventes orgnicos.
El alcohol es aquel compuesto qumico orgnicos que contiene un grupo hidroxilo (-OH) en sustitucin de un tomo de hidrgeno enlazado de forma covalente a un tomo de carbono. Los alcoholes pueden ser primarios, secundarios o terciarios, en funcin del nmero de tomos de hidrgeno sustituidos en el tomo de carbono al que se encuentran enlazado el grupo hidroxilo. Con frmula qumica CH 3 CH 2 OH. Los alcoholes tienen una gran gama de usos en la industria y en la ciencia como disolventes y combustibles. Figura 3.2.8 Las tiras de papel de filtro listas para usar y puestas dentro de cada tubo de ensayo. Por su baja toxicidad y disponibilidad para disolver sustancias no polares, el etanol es utilizado frecuentemente como disolvente en frmacos, perfumes y en esencias vitales como la vainilla. Los alcoholes sirven frecuentemente como verstiles intermediarios en la sntesis orgnica.
Luego de triturar las hojas, al lquido obtenido lo filtramos para retener algunos pedazos de las hojas y obtener solo el pigmento. El resultado es colocado en tubos de ensayo junto con la bencina, la cual ayudar a la solubilidad de los pigmentos y podr arrastrarlos de modo que asciendan por el papel de filtro.
La bencina tambin conocido como ter de petrleo, es una mezcla lquida de diversos compuestos voltiles, muy inflamables, de la serie homloga de los hidrocarburos saturados o alcanos. Se emplea principalmente como disolvente no polar.
El ter de petrleo se obtiene en las refineras de petrleo como una parte del destilado, intermedia entre la nafta ligera y la ms pesada del queroseno.
Tiene una densidad relativa comprendida entre 0,6 y 0,8, en funcin de su composicin El ter de petrleo es utilizado principalmente por las compaas farmacuticas en el proceso de fabricacin de frmacos
La bencina no debe confundirse con el benceno. La bencina es una mezcla de alcanos, como pentano, hexano y heptano, mientras que el benceno es una hidrocarburo aromtico cclico, de frmula C 6 H 6 . As mismo, el ter de petrleo no debe confundirse con la clase de compuestos orgnicos llamados teres, que contienen el grupo funcional R-O-R'.
Una vez puesto las tiras de papel con la bencina en el tubo de ensayo, sellamos la boquilla del tubo con papel parafilm esto para evitar que la bencina se evapore ya que es un compuesto voltil. La sustancia voltil es aquella se evapora a temperatura ambiente sin necesidad de aplicarle alguna fuente de energa (calor y/o electricidad). Ejemplo de sustancias voltiles: alcoholes, thiner, gasolina, petrleo, etc.
PAPEL PARAFILM. El papel Parafilm es aquella lmina de material semitransparente, flexible y resistente al agua que se utiliza como barrera contra la humedad de los instrumentos o equipos para el cuidado de la salud. USOS Y APLICACIONES: El papel Parafilm es utilizado en diversas industrias como la mdica, farmacutica, hospitalaria y en laboratorios para ciertas aplicaciones como son:
- Envoltura para los vendajes hmedos - Lazos de drenaje - Recubrimientos de botellas - Recubrimientos recipientes - Recubrimientos Instrumentos - Sello hermtico para cualquier recipiente - Evita evaporacin de muestras - Evita contaminacin de muestras - Protege envases - Protege tubos de cultivo - Protege cajas petri - Protege objetos con superficie irregular
RESULTADOS OBTENIDOS DE LA CROMATOGRAFA EN PAPEL La cromatografa nos ayudar a la separacin de sustancias de una mezcla, en este caso la separacin e identificacin de los pigmentos fotosintticos de las hojas de un vegetal de modo que apreciemos cada color. A cada muestra se le calcular el avance o movimiento del soluto, respecto al frente del disolvente el cual se expresa con la letra Rf y se obtiene la siguiente operacin:
Rf = Distancia alcanzada por el soluto Distancia alcanzada por el solvente
A.- MUESTRAS PUESTAS CON SOLVENTE DE ALCOHOL: Aqu identificaremos y sealaremos la distancia que recorre las muestras de los pigmentos y la distancia que asciende el solvente alcohol.
B.- MUESTRAS PUESTAS CON SOLVENTE DE BENCINA Aqu identificaremos y sealaremos la distancia que recorre las muestras de los pigmentos y la distancia que asciende el solvente de bencina.
V. CONCLUSIONES: Con esta prctica aprendimos sobre las fases de la fotosntesis lo cual permite obtener la glucosa. Con la aplicacin de la cromatografa en papel aprendimos a identificar a los pigmentos de cada hoja como carotenoides y xantofilas.
Con la tcnica de separacin observamos la solubilidad de los pigmentos en el alcohol ya que arrastraba ms a estos y ascendan por el papel de filtro.