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FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO DE QUMICA

Prcticas de Laboratorio de Bioqumica
Reconocimiento de carbohidratos, lpidos y
protenas
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INTRODUCCIN

Los glcidos carbohidratos constituyen la mayor parte de la materia orgnica
de la Tierra a causa de sus variadas funciones en todos los seres vivos. En
primer lugar, los carbohidratos sirven como almacn o transferencia de
energa, son combustibles e intermediarios metablicos, en general, son
sustancias de reserva y estructurales. El almidn en las plantas y el glucgeno
en los animales son dos polisacridos que rpidamente pueden movilizarse
para liberar glucosa, el combustible primordial para generar energa. En
segundo lugar, los azcares ribosa y desoxirribosa forman parte de la
estructura del ARN y del ADN. En tercer lugar, los polisacridos son los
elementos estructurales de las paredes celulares de bacterias y plantas, y del
exoesqueleto de los artrpodos y de crustceos. De hecho, la celulosa, el
principal componente de las paredes celulares de las plantas, es el compuesto
orgnico ms abundante de la biosfera. En cuarto lugar, los carbohidratos
estn unidos a muchas protenas, lpidos y metabolitos secundarios. Unidades
de azcar se encuentran unidas a las anticianidinas para poder translocarse a
travs del floema de los vegetales y proporcionar la coloracin a flores y
algunos frutos.


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OBJETIVOS

Identificar cualitativamente los carbohidratos de acuerdo con su
reactividad en presencia de reactivos especficos.
Diferenciar aldosas de cetosas y pentosas de hexosas.
Diferenciar e identificar azcares reductores de azcares no reductores
Diferenciar monosacridos, disacridos y polisacridos

Fundamentacin Terica

Los carbohidratos son polihidroxialdehidos o polihidroxicetonas o compuestos
polimricos que por hidrlisis producen polihidroxialdehidos y
polihidroxicetonas. Segn el nmero de unidades de azcares sencillos que
posean se clasifican en:

Monosacridos o azcares sencillos, que a su vez pueden se aldosas cuando
contienen el grupo aldehdo o cetosas cuando contienen el grupo cetona. Los
monosacridos naturales pertenecen a la serie D de los azcares y pueden
tener entre tres y hasta siete tomos de carbono.

Disacridos que estn formados por dos monosacridos unidos entre si por
enlaces glucosdicos.

Oligosacridos que tienen entre tres y diez monosacridos unidos tambin por
enlaces glucosdicos

Polisacridos que son polmeros naturales con varios miles de unidades de
azcar sencillo ligadas entre s. De acuerdo con lo anterior, adems de
reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los carbohidratos, es
necesario diferenciar si se trata de un monosacrido tipo aldosa o cetosa, si es
fcilmente oxidable o no, es decir si es un azcar reductor o no lo es, si es de
cinco tomos de carbono (pentosa) o de seis tomos de carbono (hexosa), si
es disacrido o polisacrido.

Pruebas qumicas para la caracterizacin de carbohidratos

Ensayo de Molisch: Es un ensayo de reconocimiento general de
carbohidratos en el que los polisacridos y disacridos son hidrolizadas con
cido sulfrico concentrado hasta monosacridos y se convierten en derivados
del furfural o 5-hidrximetil furfural los cuales reaccionan con -naftol formando
un color prpura violeta.

Ensayo de Benedict: Es una prueba para reconocimiento de carbohidratos
reductores. Al igual que el reactivo de Felhing, el reactivo de Benedict contiene

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ion cprico en medio alcalino que se reduce a xido cuproso en presencia de
azcares con el hidroxilo hemiacetlico libre.

Ensayo de Barfoed: Este ensayo permite diferenciar entre monosacridos y
disacridos reductores. Tambin contiene ion cprico que se reduce a xido
cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los disacridos.

Ensayo con lugol: El reactivo de lugol que contiene una mezcla de yodo y
yoduro, permite reconocer polisacridos, particularmente almidn, por la
formacin de una coloraciin Azul-violeta intensa y el glicgeno y las dextrinas
por formacin de coloracin roja.

Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo es especfico para las cetosas y se basa
en la conversin de la cetosa en 5-hidrometil furfural y su posterior
condensacin con resorcinol formando complejos coloreados.

Ensayo de Bial: El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el cual
forma complejos de coloracin slo con las pentosas.

MATERIALES Y REACTIVOS

Tubos de ensayo Reactivo de Fehling
Pinzas para tubo de ensayo Reactivo de Tollens
Gradillas Reactivo de Benedict
Vasos de precipitados Solucin de glucosa 0,1 M
Mechero, trpode y malla Solucin de fructosa 0,1 M
Pipetas graduadas Solucin de sacarosa 0,1 M
Lugol Solucin de almidn 0,1 M


PROCEDIMIENTO

Realice los ensayos que se describen a continuacin en tubos de ensayo
limpios y secos, con las soluciones patrn de las carbohidratos que se indican
en cada caso y la muestra problema.


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Prueba de Molisch
Adicione en los tubos de ensayo 1 ml de solucin del carbohidrato
correspondiente y 2 gotas del reactivo de Molish, mezcle lentamente y por las
paredes del tubo adicione 0.5 ml de cido sulfrico concentrado, NO AGITE.
Observe el color del anillo formado.

Ensayo de Lugol
Soluciones patrn de carbohidratos: Amildn. Coloque en un tubo de ensayo
2.0 mL de la solucin del carbohidrato y agregue 0.2 mL de Lugol, mezcle y
observe la formacin de los colores rojo para glicgeno, azul-violeta para
almidn como pruebas positivas.

Ensayo de Benedict
Soluciones patrn de carbohidratos: Glucosa, maltosa y sacarosa. Coloque
en un tubo de ensayo 2.0 mL de solucin de carbohidrato y agruegue 0.1 mL
del reactivo de Benedict y caliente al bao mara. La formacin de un
precipitado amarillo o rojizo es indicativo de carbohidratos reductores.

Ensayo de Barfoed
Soluciones patrn de carbohidratos: Glucosa, maltosa y sacarosa. Coloque
en un tubo de ensayo 2.0 mL de la solucin de carbohidrato y agregue 2 mL
del reactivo de Barfoed, caliente al bao mara a ebullicin. La formacin de un
precipitado rojo entre 5 y 7 minutos, es prueba positiva para monosacridos
reductores. Si el precipitado se forma entre 10 y 12 minutos, la prueba es
positiva para disacridos reductores.

RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS
Fundamentacin terica
Los lpidos son un grupo grande y heterogneo de biomolculas orgnicas y,
por tanto, presentan estructuras diversas, pero en general son solubles en
solventes no polares o poco polares. Las distintas clases de lpidos reaccionan
entre s por esta propiedad fsica, pero sus relaciones qumicas y estructurales,
as como sus funciones biolgicas, son diferentes.
Los lpidos tienen muchas funciones importantes, tanto en el hombre como en
los animales y los vegetales: Son componentes estructurales de la membrana
celular, son reservas que las clulas metabolizan para producir energa, sirven
como cubiertas protectoras de los rganos y algunas veces aparecen como
hormonas y vitaminas. El tejido adiposo contiene alrededor de un 90% de
lpidos y el cerebro un 15% de ellos, especialmente fosfolpidos glucolpidos y
colesterol.
Debido a su alta diversidad estructural, los lpidos pueden clasificarse como
saponificables y no saponificables, segn que, por hidrlisis alcalina, generen o

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no sales de cidos grasos (jabones). Cada uno de ellos presenta subdivisiones
tal como se muestra en la siguiente figura:

Las estructuras de algunos de ellos se presentan a continuacin:
1. Ceras o cridos: Son steres de cidos grasos superiores con
monoalcoholes de alto peso molecular o con esteroles. Las ceras forman
pelculas protectoras en el pelo, la piel, las plumas, las hojas y los
exoesqueletos de los insectos.
2. Grasas: Comprenden los steres de cidos grasos, en mayor porcentaje,
lineales saturados con el glicerol. Son, con los aceites, los lpidos ms
abundantes como reserva de los seres vivos.
3. Aceites: Comprenden los steres de cidos grasos, en mayor porcentaje,
lineales insaturados (cis) con el glicerol.
4. Fosfoglicridos: son componentes esenciales de las membranas biolgicas.
Estos compuestos contienen grupos fosfatos (steres del cido fosfrico)
5. Terpenos: son compuestos lineales o cclicos constituidos por dos o ms
unidades de isopreno (2-metil-1,3-butadieno). Los monoterpenos tienen dos
unidades de isopreno, los sesquiterpenos tres unidades y los diterpenos cuatro
unidades. Cuando tienen otros tomos, y diferentes de C y H, se denominan
terpenoides. Se encuentran en las plantas como aceites esenciales, resinas,

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pigmentos, entre otros. Algunos ejemplos son:
6. Esteroides: Son un grupo de lpidos que poseen una estructura tetracclica;
los esteroides derivan del ciclopentano perhidrofenantreno. Los esterodides
son alcoholes esteroidales cuyo miembro representativo es el colesterol. Este
se encuentra en casi todos los tejidos animales. Los clculos biliares humanos
y las yemas de huevo son especialmente fuentes ricas en este compuesto.
Altos niveles de colesterol en la sangre estn asociados con arterioesclerosis
(endurecimiento de las arterias).
El grupo hidroxilo en la posicin 3 de los esteroles se encuentra normalmente
esterificado con los cidos grasos. Los esteroles dan positivo a la prueba de
Liebermann-Burchard cuando se disuelven en cloroformo:
Cierto nmero de hormonas y cidos biliares poseen ncleos de esteroide,
algunos de ellos se muestran a continuacin:
Cortisona (Hormona suprarrenal)

Testosterona (Hormona masculina)

cido clico (cido biliar)







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7. Prostaglandinas: Se descubrieron en el semen y se reconoci que se
sintetizaban en la prstata (de aqu su nombre); pero ahora se conoce que se
encuentran en todo el organismo y se sintetizan en el tero, en el hgado, en
los pulmones y en otros rganos; estos compuestos cumplen diferentes
funciones en el organismo como son: intervenir en la funcin reproductiva; en
la inflamacin, fiebre y dolor asociados a lesiones o enfermedades; en la
formacin de cogulos de sangre y en la regulacin de la presin sangunea;
en la secrecin gstrica cida y en diversos procesos importantes en la salud
humana. Las prostaglandinas son cidos carboxlicos de 20 tomos de
carbono, que contienen anillos de ciclopentano. Se biosintetizan a partir de
cidos insaturados de 20 tomos de carbono.

PGE1
La propiedad ms empleada para la separacin de los componentes de los
acilgliceroles (grasas y aceites), para una posterior identificacin de estos, es la
hidrlisis qumica en presencia de cidos, enzimas o lcalis, lo que los
convierte en cidos grasos o en sus sales (jabones) y el glicerol.
Como los cidos grasos difieren en pero molecular y pueden estar mezclados
con sustancias que no reaccionan con los lcalis, tal como lo hacen los
alcoholes e hidrocarburos, se deduce que cada grasa o aceite requiere
cantidades distintas de lcalis para su saponificacin; en consecuencia, la
cantidad empleada de lcali se utiliza como una medida para un acilglicrido
particular. En esta forma, la unidad conocida como ndice de acidez se define
como el nmero de miligramos de KOH requeridos para neutralizar cidos
grasos libres presentes en un gramo de grasa o aceite, mientras que el ndice
de saponificain se define el nmero de miligramos de KOH necesarios para
saponificar (convertir en jabn) un gramo de grasa o aceite. Existe tambin el
ndice de yodo, que sirve para determinar el nmero de dobles enlaces
presentes en la cadena hidrocarbonada de los cidos grasos insaturados y que
se define como los gramos de yodo adicionados por cada 100 gramos de grasa
o aceite. Algunos ejemplos se presentan a continuacin:


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El ndice de acidez vara mucho en un mismo aceite, dependiendo del tipo de
almacenamiento y de la rancidez. Uno de los controles para la venta de aceites
y grasas es precisamente el ndice de acidez. En el caso de los aceites,
aquellos que presentan un valor por encima de 3 en el ndice de acidez no son
admitidos para el consumo.
Procedimiento experimental
1. ndice de acidez: Pese 1.0g de aceite en un Erlenmeyer y disulvalo con 10
mL de etanol; adicione 2 gotas de fenolftalena y titule con una solucin de
KOH 0.01 N (el punto de equivalencia se observa cuando la solucin toma un
color rosado plido persistente)
Anote el volumen gastado en la titulacin y calcule el ndice de acidez
aplicando la frmula siguiente:
ndice de acidez = 0.56 VKOH
2. Adicin de yodo a cidos grasos: En cuatro tubos de ensayo agregue 20
gotas de cloroformo y adicione a cada uno de ellos Tubo 1: 0.1 gramos de
cido palmtico o esterico Tubo 2: 5 gotas de cido oleico linolico Tubo 3:
5 gotas de aceite Tubo 4: 0.1 gramos de manteca
Agite bien hasta disolucin completa y adiciones a cada tubo, 5 gotas de
I2/CHCl3; caliente los tubos al bao mara a 50
o
C.

Observe en cuales tubos
ocurre decoloracin de la solucin de yodo.




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RECONOCIMIENTO DE PROTENAS
Fundamentacin terica
Los prtidos o protenas son biopolmeros, estn formadas por gran nmero de
unidades estructurales simples repetitivas (monmeros). Debido a su gran
tamao, cuando estas molculas se dispersan en un disolvente adecuado,
forman siempre dispersiones coloidales, con caractersticas que las diferencian
de las disoluciones de molculas ms pequeas.
Por hidrlisis, las molculas de protena se dividen en numerosos compuestos
relativamente simples, de masa molecular pequea, que son las unidades
fundamentales constituyentes de la macromolcula. Estas unidades son los
aminocidos, de los cuales existen veinte especies diferentes y que se unen
entre s mediante enlaces peptdicos. Cientos y miles de estos aminocidos
pueden participar en la formacin de la gran molcula polimrica de una
protena.
Todas las protenas tienen carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno, y casi
todas poseen tambin azufre. Si bien hay ligeras variaciones en diferentes
protenas, el contenido de nitrgeno representa, por trmino medio, 16% de la
masa total de la molcula; es decir, cada 6,25 g de protena contienen 1 g de
N. El factor 6,25 se utiliza para estimar la cantidad de protena existente en una
muestra a partir de la medicin de N de la misma.
La sntesis proteica es un proceso complejo cumplido por las clulas segn las
directrices de la informacin suministrada por los genes.
Las protenas son largas cadenas de aminocidos unidas por enlaces
peptdicos entre el grupo carboxilo (-COOH) y el grupo amino (-NH2) de
residuos de aminocido adyacentes. La secuencia de aminocidos en una
protena est codificada en su gen (una porcin de ADN) mediante el cdigo
gentico. Aunque este cdigo gentico especifica los 20 aminocidos
"estndar" ms la selenocistena y en ciertos Archaea la pirrolisina, los
residuos en una protena sufren a veces modificaciones qumicas en la
modificacin postraduccional: antes de que la protena sea funcional en la
clula, o como parte de mecanismos de control. Las protenas tambin pueden
trabajar juntas para cumplir una funcin particular, a menudo asocindose para
formar complejos proteicos estables.
FUNCIONES
Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas
constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los
procesos biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de
molculas. Bastan algunos ejemplos para dar idea de la variedad y
trascendencia de las funciones que desempean. Son protenas:

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Casi todas las enzimas, catalizadores de reacciones qumicas en organismos
vivientes;
Muchas hormonas, reguladores de actividades celulares;
La hemoglobina y otras molculas con funciones de transporte en la sangre;
Los anticuerpos, encargados de acciones de defensa natural contra
infecciones o agentes patgenos;
Los receptores de las clulas, a los cuales se fijan molculas capaces de
desencadenar una respuesta determinada;
La actina y la miosina, responsables finales del acortamiento del msculo
durante la contraccin;
El colgeno, integrante de fibras altamente resistentes en tejidos de sostn.
Funciones de reserva. Como la ovoalbmina en el huevo, o la casena de la
leche.
Todas las protenas realizan elementales funciones para la vida celular, pero
adems cada una de stas cuenta con una funcin ms especfica de cara a
nuestro organismo.
Debido a sus funciones, se pueden clasificar en:
Catlisis: Est formado por enzimas proteicas que se encargan de realizar
reacciones qumicas de una manera ms rpida y eficiente. Procesos que
resultan de suma importancia para el organismo. Por ejemplo la pepsina, esta
enzima se encuentra en el sistema digestivo y se encargan de degradar los
alimentos.
Reguladoras: Las hormonas son un tipo de protenas las cuales ayudan a que
exista un equilibrio entre las funciones que realiza el cuerpo. Tal es el caso de
la insulina que se encarga de regular la glucosa que se encuentra en la sangre.
Estructural: Este tipo de protenas tienen la funcin de dar resistencia y
elasticidad que permite formar tejidos as como la de dar soporte a otras
estructuras. Este es el caso de la tubulina que se encuentra en el
citoesqueleto.
Defensiva: Son las encargadas de defender al organismo. Glicoprotenas que
se encargan de producir inmunoglobulinas que defienden al organismo contra
cuerpos extraos, o la queratina que protege la piel, as como el fibringeno y
protrombina que forman cogulos.
Transporte: La funcin de estas protenas es llevar sustancias a travs de todo
el organismo donde son requeridas. Protenas como la hemoglobina que lleva
el oxgeno por medio de la sangre.

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Receptoras: Este tipo de protenas se encuentran en la membrana celular y
llevan a cabo la funcin de recibir seales y para que la clula as pueda
realizar su funcin. El acetilcolina que recibe seales para producir la
contraccin muscular
La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles estructurales
denominados: estructura primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y
estructura cuaternaria. Cada una de estas estructuras informa de la disposicin
de la anterior en el espacio.
Una de las reacciones ms utilizadas para la identificacin de protenas es la
de Biuret, propia de protenas, pero no de aminocidos, pues se debe a la
presencia del enlace peptdico. Cuando una protena se pone en contacto con
un lcali concentrado se forma una sustancia compleja denominada Biuret que
en contacto con una disolucin de sulfato cprico diluida da una coloracin
violeta caracterstica que identifica la presencia de protenas.

Prueba de Biuret

Proteinas: Albumina, Caseina, Gelatina.
Reactivos: Reactivo de biuret, hidrxido de sodio 10M.
Procedimiento: a o,5 mL de muestra adicionar 1 mL del reactivo de biuret;
mezcle fuertemente y observe los cambios de color.

Desnaturalizacin por calor y pH extremos.

Proteinas: Albumina, Caseina, Gelatina.
Reactivos: HCl 1 M, hidrxido de sodio 1 M, HNO3 concentrado
Procedimiento: En tres tubos de ensayo coloque 5 mL de cada una de las
protenas y adicione 0,5 mL de HCl, 0,5 mL de NaOH y o,5 mL de H2O.
Coloque los tubos por 10 minutos en bao de agua hirviendo y enfrie a
temperatura ambiente, posteriormente ajuste los tubos cidos y alcalinos hasta
la neutralidad, comente sus observaciones.
Por ltimo a 1mL de solucin de protena adicione lentamente por las paredes
del tubo de ensayo H2SO4 HNO3 concentrado hasta que se formen dos
capas, luego mezcle suavemente y anote sus observaciones.





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PREGUNTAS

1. Que importancia biolgica tienen los carbohidratos?
2. Que es la polarimetra?
3. Qu papel juega en la caracterizacin de carbohidratos?
4. Qu son los azcares reductores y no reductores mencione 3 de cada
uno?
5. Defina y dibuje las estructuras qumicas de la glucosa, la fructosa, la
sacarosa y la celulosa.
6. Investigue los mecanismos de reaccin de las pruebas de Fehling,
Tollens, benedict y la prueba de yodo.
7. Pierde valor nutricional una protena cuando se pone a calor excesivo?
8. A que se refiere el valor biolgico de una protena?
9. Porque los lpidos no son solubles en agua?
10. Esta el colesterol dentro de la fraccin saponificable o no saponificable
de una muestra de yema de huevo?


BIBLIOGRAFA

Hart H., Craine L. y Hart. D. Qumica Orgnica. McGraw Hill. Novena
edicin. Espaa. 1997.
McMurry, J. Qumica Orgnica. Quinta edicin, Thomson editores,
Mxico, 2001
The Merck Index: an encyclopedia of chemical. Drugs and Biologicals.
Budavari S. Guide for safety in the Chemical Laboratory.
Carey Francis A. Qumica Orgnica Mc Graw Hill , Tercera Edicin .
Espaa. 2000
Gonzlez M. Curso de Biomolculas. Universidad del pas Vasco. 2012