TEMA 18.

EFECTO DE LOS XENOBITICOS SOBRE PROTENAS Y ADN

Una extensa variedad de xenobiticos (Xbs) pueden ejercer efectos primarios o
secundarios sobre los cidos nucleicos. Es interesante identificar los efectos directos
indirectos y los procesos bioqumicos implicados. En este tema veremos los aspectos
bsicos, algunos ejemplos de txicos especficos, fundamentalmente del ADN y algn
mtodo de estudio.
Como ya se ha comentado en otros temas, muchos Xbs (en su mayora
carcingenos) actan en el organismo mediante la formacin de especies reactivas de
oxgeno (ROS) o a travs de la formacin de aductos con las protenas y con el ADN
(ver el tema 16). La formacin de aductos requiere la existencia de grupos electroflicos
(deficientes en electrones) en el Xb ( carcingeno) y de centros nucleoflicos (ricos en
electrones) tales como grupos amino, sulfhidrilo, hidroxilo, presentes en otras molculas
(protenas, ARN y ADN). Estos aductos distorsionan la estructura de Las protenas y/o
cidos nucleicos y, por tanto, su funcin o replicacin en su caso. En el caso del ADN,
normalmente el dao producido puede ser reparado, pero si no lo es, se introduce una
base inapropiada en la nueva cadena de ADN, lo que originara una mutacin.

UNION
COVALENTE
DE
INTERMEDIARIOS
REACTIVOS
A
BIOMOLECULAS
La principal fuente de intermediarios reactivos derivados de los Xb es el hgado, ya
que es el lugar principal de su metabolismo. La unin covalente a protenas celulares (del
citoplasma, retculo endoplsmico o ncleo), as como a cidos nucleicos u otras
macromolculas, causa un dao que depender, fundamentalmente, de:
- La reactividad del compuesto y su vida media
- La extensin de la unin
- La molcula a la que se une.
- Lmite de tolerancia.
En el tema 16 veremos con ms detalle la formacin de aductos con protenas y c.
Nucleicos. A continuacin se muestran, nicamente, algunos ejemplos.

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EJEMPLO de compuestos que inducen toxicidad mediante su unin covalente a molculas

biolgicas.
Xenobitico

Metabolito reactivo propuesto

rgano blanco y sitio de unin

Bromobenceno
Acetaminofen

3,4-epxido y/o orto-quinona

Hgado
N-acetil-p-benzo quinonimina
Hgado

Cl4C
p-aminofenol

radical triclorometil y/o fosgeno

quinonimina

Hgado
Rin

Ipomeanol

epxido

Pulmn

PROTEINAS
La modificacin covalente de protenas puede tener profundos efectos sobre su
estructura y actividad biolgica. Algunos efectos bien conocidos incluyen la fosforilacin,
carboxilacin, metilacin, glicosilacin y unin a cidos grasos. Todo ello puede afectar a
la estructura de membranas, metabolismo energtico, transporte de metabolitos e iones,
etc.
La disminucin de la incorporacin de aminocidos radiactivos en protenas es
con frecuencia secundario a los efectos de los txicos sobre la produccin de energa o
sobre la sntesis de mARN. Muy pocos txicos inhiben la sntesis de protenas por
inhibicin de etapas implicadas en su sntesis. Entre ellos estn la cicloheximida, que
bloquea la peptidil transferasa, la puromicina, que produce la terminacin prematura de
la cadena y liberacin de la recien sintetizada. Otros inhibidores (CCl4 y tolueno)
producen la disgregacin de poliribosomas en monoribosomas y a veces en subunidades
ribosmicas.
Algunos txicos pueden inducir la sntesis especfica de protenas. La
metalotionena, por ejemplo, es una protena que une metales (Zn 2+, Cd2+, Hg2+, Me-Hg1+
y otros metales pesados catinicos). Esta capacidad se debe al alto contenido en cisteinas
(33%) y grupos SH. La administracin de stos metales hace que aumente la sntesis de
metalotionena al aumentar, previamente, la sntesis del mARN correspondiente. As, la
metalotionena del tejido renal aumenta por exposicin repetida al mercurio. Otros
agentes que inducen la sntesis de metalotioneina son los corticosteroides y el CCl4.

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REACCIONES CON PROTENAS. Entre los intermediarios reactivos que pueden

unirse de forma covalente a las protenas se encuentran los siguientes:
:

ALDEHIDOS

CARBONILOS Y :

HALUROSDE ALQUILO

EPXIDOS

ACIL GLUCURNIDOS

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FORMACION DE ADUCTOS DE ADN

Un gran nmero de Xbs pueden daar el ADN. En el siguiente esquema se
observa la conversin de un carcingeno en un aducto de ADN y las posibles
consecuencias.

Carcingeno

Carcingeno
prximo

Carcingeno
ltimo

Aducto de
ADN

Detoxificacin

Reparacin

Normal

Mutacin

Muerte

Cncer

Existen 4 grandes clases de compuestos que ejercen sus efectos mediante la

formacin de aductos covalentes con bases del ADN (carcingenos genotxicos, sus
efectos se estudian en el tema 19):
a) hidrocarcuros aromticos policclicos (PAH),
b) aminas aromticas,
c) nitrosaminas
d) otros agentes alquilantes.
Todos ellos tienen grupos electroflicos o grupos que se pueden convertir en
electroflicos metablicamente (epxidos, hidroxilaciones). Estos grupos forman enlaces
Regin
covalentes con nuclefilos presentes en el ADN, lo que origina la accin cancergena. bahabaha
baha

a) HIDROCARBUROS AROMATICOS POLICICLICOS

Carcingeno

Carcingeno prximo

Carcingeno
ltimo
Se forman como productos de la combustin de petrleo y material
biolgico,
tambin se generan en el tabaco, whisky, carnes a la brasa y por combustin incompleta
de combustibles fsiles (carbn y gasolina). Forman aductos con bases pricas,
especialmente guanina, pero solamente tras la activacin enzimtica a carcingeno
prximo o ltimo.

Fenantreno inactivo

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b) AMINAS AROMATICAS
Se usan en la industria del tinte del caucho (goma). Un ejemplo es el 2acetilaminofluoreno (AAF) que causa en animales mltiples cnceres (vejiga, hgado,
intestino, odo, tiroides y pecho) (en ratas necesita del orden de g). Se ha usado como
insecticida y algunos compuestos relacionados se encuentran en las carnes cocinadas
(millonsima de g).

Carcingeno

Carcingeno prximo

Carcingeno ltimo

c) NITROSAMINAS

.
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Se forman en las carnes y pescados ahumados por interaccin entre aminas

naturales y nitritos aadidos como conservantes, pero su presencia mayoritaria est en el
tabaco y sus productos. Actualmente se sabe que los efectos carcingenos de las
nitrosaminas estn relacionados con los mecanismos bioqumicos que las activan (por ej.
las oxidasas microsomales de funcin mixta).

Espontnea

N-Methylnitrosourea

La mayora de las nitrosaminas requieren la activacin enzimtica para formar el

carcingeno ltimo. El mecanismo bioqumico por medio del cual se produce el cncer
se cree que tiene relacin con la metilacin de algunas bases nitrogenadas en el ADN,
probablemente con la escisin (eliminacin) de las bases nitrogenadas alquiladas ms que
con el nivel de alquilacin.

d) OTROS AGENTES ALQUILANTES

Entre los carcingenos qumicos ms significativos en la iniciacin del cncer
destacan los agentes alquilantes (metilo, etilo). Estos atacan grupos nucleoflicos del
ADN y pueden iniciar la secuencia de sucesos que dan lugar al crecimiento y replicacin
de clulas neoplsicas (cancerosas).

Un ejemplo es el cloruro de vinilo (gas descubierto en 1817, usado en la

industria del plstico como PVC):
Grupos metilo
unidos a N (izqda)
u O (derecha)
en Guaninas
contenidas en el
ADN

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Unin al resto de la molcula de ADN

Agente monofuncional
CH2=CH-Cl
Cloruro de vinilo

Otro ejemplo de este grupo es el gas mostaza, con grupos suficientemente

electrfilos que no requieren activacin (carcingeno directo). El trmino mostaza se
refiere a las ampollas que producen estos agentes en la piel. En agua, los compuestos
originarios forman un electrfilo que reacciona con nuclefilos biolgicos. Las mostazas
nitrogenadas reaccionan con las bases de los cidos nucleicos La reaccin del N 7 de la
guanina con la mecloretamina se ilustra en la figura.

La base modificada puede aparearse anormalmente durante la replicacin (3) e

inducir mutaciones, pero tambien puede ser eliminada del ADN (4), lo que produce
escisin de la cadena, o producir la fragmentacin del ADN (5) al romperse el anillo.
Tambin puede haber entrecruzamiento de cadenas de ADN (6). Puesto que los agentes
alquilantes modifican el crecimiento celular, la mitosis, la diferenciacin y la funcin de la
clula, las clulas que se estn dividiendo ms rpido, son las ms susceptibles a la accin
de estos agentes. En clulas que se dividen lentamente, los procesos de reparacin del
ADN pueden revertir los efectos de la modificacin del ADN. Las mostazas nitrogenadas
son, por tanto, mutgenas y carcingenas. Sin embargo, y debido a la propia accin de
estos agentes sobre las clulas en divisin, muchos de ellos se usan en el tratamiento
contra el cncer.
Finalmente, la estructura de las ADN polimerasas tambin influye en la inhibicin
de las mismas por txicos. La polimerasa- contiene uno o ms grupos SH crticos, por
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lo que es muy sensible a sustancias que reaccionan con estos grupos, como es el caso de
la N-etilmaleimida. La polimerasa- no tiene grupos SH crticos por lo que no es sensible
a tales sustancias.

EFECTO DE LOS XENOBIOTICOS SOBRE EL ARN

La accin sobre el ARN no es tan importante como en el caso del ADN. Aunque
un txico puede inhibir la sntesis de todas las especies de ARN (mARN, tARN y rARN),
el mARN es el que exhibe las manifestaciones ms tempranas de la toxicidad, lo que
implica una disminucin de los niveles de enzimas y protenas de vida media corta.
En muchos casos la inhibicin de la sntesis de mARN es secundaria a otros
mecanismos. Por ej. la actinomicina D (antibitico, inhibidor especfico de la sntesis de
ARN), se une a la desoxiguanosina del ADN (se intercala entre 2 pares G-C adyacentes)
y bloquea el movimiento de la ARN polimerasa (ARNp) sobre el molde de ADN. A bajas
dosis se inhibe la sntesis de rARN y a altas dosis la de mARN. Otro ej. es la inhibicin
de la sntesis de mARN secundaria a la interferencia en la produccin de energa
(inhibicin de la fosforilacin oxidativa o alteraciones en la estructura mitocondrial).
La estructura de las ARNp tambin influye en la inhibicin de las mismas por
txicos. As, las ARNp muestran distinta sensibilidad a la -amanitina, toxina de la
amanita faloides (ver tema 17).

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TEST DE GENOTOXICIDAD (TEST DE AMES)

Se han desarrollado muchos tests de genotoxicidad para medir la capacidad de
mutgenos y carcingenos de producir cambios cuantificables en el genotipo de clulas
procariotas y eucariotas detectables mediante cambios en el fenotipo. Normalmente se
utiliza para ello la mutacin de genes, dao cromosmico, dao y reparacin del ADN y
transformacin celular. Se han desarrollado ensayos en bacterias, hongos, clulas de
roedores, humanas, etc.
La mayora de los ensayos de transformacin en mamferos miden la aparicin de
clulas alteradas morfolgicamente por el agente mutgeno o carcingeno. Suelen usarse
clulas derivadas de fibroblastos de ratn, que son clulas muy uniformes tanto en su
crecimiento como en la morfologa. Sin embargo, si el efecto es mediante un mecanismo
no-genotxico o epigentico, como ocurre con los promotores de tumores, no se detecta
mediante estas tcnicas. Ello se refleja parcialmente en la prdida de relacin entre
mutagnesis y carcinognesis. Hasta el momento se dispone de pocos ensayos para la
identificacin de promotores tumorales, y la mayora de ellos han sido identificados a travs
de experimentos de iniciacin-promocin en roedores.
Una de las pruebas que se utilizan para correlacionar la capacidad carcinognica con
la capacidad de afectar al ADN celular es el denominado TEST de AMES. Se realiza
aadiendo a cultivos de Salmonella typhimurium el carcingeno cuya mutagenicidad se
pretende analizar. Estos cultivos se realizan en un medio carente de histidina, de forma que
solamente crecen bactaerias con mutaciones en alguno de los genes que metabolizan este
aminocido. A mayor nmero de colonias mayor capacidad mutagnica del carcingeno. El
mayor problema de este Test es la utilizacin de bacterias, las cuales no son capaces de
activar metablicamente muchos carcingenos como ocurre en humanos y animales. Ello
llev a la adicin al medio de cultivo de extractos de hgado de animales. As se consigue
reproducir, con bastante fiabilidad, la correlacin observada en los ensayos con animales,
ahorrando tiempo y dinero.

SITIOS DE ACCIN DE FRMACOS SELECCIONADOS USADOS EN EL

TRATAMIENTO DEL CNCER

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Sntesis de
Pirimidinas

Mercaptopurina
Tioguanina
Inhibe la sntesis del anillo
de purina
Inhibe las interconversiones
de nucletidos

Sntesis de
purinas

Ribonucletidos
Hidroxiurea
Inhibe la reductasa de
Ribonucletido

Fluorouracilo
Inhibe la formacin
de dTMP

Arabinsido de C
Daunorrubicina
Doxorrubicina
Bleomicinas
Etopsido
Daan al ADN y
previenen su
reparacin

Metotrexato
Inhibe la sntesis del
anillo de purina
Inhibe la formacin de dTMP
Desoxirribonucletidos

Mostazas nitrogenadas
Agentes alquilantes
Modifica el ADN
ADN
Actinomicina D
Inhibe la sntesis de ARN
ARN

CCl4
Tolueno
Disgregacin de
polirribosomas
Vinblastina
Vincristina
Inhibe la funcin

Asparaginasa
Desamina a la asparagina
e inhibe la sntesis de protenas

Protena

Microtbulos

Enzimas, factores, etc.

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