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Hecho por: Paloma Mara Andgar Rocamora.

Curso acadmico 2013/2014.
Fisiologa Vegetal.
Grado en Biologa.
Universidad de Murcia.

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ndice de prcticas:
1. Medida del potencial hdrico en tejidos vegetales. 3-6
2. Medida de la transpiracin. 7-10
3. Pigmentos de cloroplastos: extraccin y cromatografa. 11-
16
4. Espectro de absorcin de las clorofilas y determinaciones
cuantitativas. 17-21
5. Reaccin de Hill. 22-25
6. Efecto de la luz y la temperatura sobre la fotosntesis. 26-29
7. Influencia del cido Indolactico sobre el crecimiento de
secciones del coleptilo de Avena. 30-33
8. Efecto del cido Giberlico sobre la movilizacin de
reservas en el endospermo de semillas de Cebada. 34-42
9. Efecto de Kinetina sobre la senescencia de hojas. 43-45
10.Localizacin del crecimiento en tallos y races. 46-47
11. Ensayo de germinacin de semillas. 48-54
12. Ensayo de viabilidad de semillas. 55-57
13. Extraccin y medida de la actividad del enzima Lipasa de
semillas de Ricino. 58-62
14. Determinacin de acidez y slidos solubles en frutos.
Clculo del ndice de madurez. 63-66


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Prctica 1. Medida del potencial
hdrico en tejidos vegetales.

1- Propsito.
Medir el potencial hdrico del tubrculo de la patata. Se basa en la propiedad de las
disoluciones que presentan distinto potencial hdrico y que al contactar se produce un
flujo de agua hasta alcanzar un equilibrio.

2- Material necesario.

- Material vegetal: tubrculos de patata blanca o dulce.
- Taladracorchos.
- Hoja de afeitar.
- Disoluciones de azcar de 200ml cada una de las siguientes molalidades: 0.15,
0.20, 0.25, 0.30, 0.35, 0.40 y 0.50.
- Ocho vasos de plstico.
- Balanza.
- Bistur.
- Cilindro graduado.
- Regla medidora.
- Papel de filtro.
- Papel de aluminio.

3- Fundamento terico.

w patata > w disolucin de sacarosa: para alcanzar el equilibrio habr un flujo de
salida hdrico en el cilindro de tubrculo de patata. El cilindro en cuestin pesar menos
que al inicio.

w patata < w disolucin de sacarosa: para alcanzar el equilibrio habr un flujo de
entrada hdrico en el cilindro de tubrculo de patata. En este caso, el cilindro pesar ms
que al inicio.

4

w patata < w disolucin de sacarosa: no se produce ningn tipo de flujo hdrico
entre la patata y la disolucin; por lo que el cilindro pesar lo mismo al inicio que al
final.

4- Procedimiento.
Usando el taladracorchos sacamos 14 cilindros de 4 cm de longitud por 2 cm de ancho.
Los secamos un poco con papel de filtro y seguidamente los pesamos de dos en dos,
tomando nota del peso fresco total. Repetimos con el resto de cilindros y los
introducimos seguidamente en los siete vasos (cada uno con su molalidad especfica).

Cubrir los vasos con papel de aluminio y los guardamos en el armario situado en la
esquina de la mesa de laboratorio durante 24 horas.

Lavar y ordenar instrumental.
Desechar los restos de patata al contenedor orgnico.

Pasadas las 24 horas, sacamos los cilindros (cada par a la vez) de las disoluciones, los
secamos rpidamente con el papel de filtro y los pesamos, tomando nota del peso fresco
total final.
Lavar y ordenar el instrumental.
Desechar los cilindros de patata y los vasos de plstico una vez acabado el anlisis del
experimento.
5- Resultados. Tablas y grfica descriptiva.

Concentracin
molal.
(Mol/L)

0.15

0.2

0.25

0.30

0.35

0.40

0.5
Masa de
Sacarosa (g)
10.29 13.73 17.17 20.60 24.03 27.46 34.33
Masa
cilindros de
patata (g).
Inicial.

4.46

4.78

4.67

4.89

4.77

5.01

4.96

5
Masa
cilindros de
patata (g).
Final.

4.68

4.97

4.68

4.59

4.43

4.17

4.92



Media de
los
porcentajes
Grupo
3
Grupo
6
Grupo
5
Grupo
7
Grupo
9
Grupo
8
Grupo
10
4.74 3.42 0.14 -5.35 -7.81 -15.15 -20.63


1) -= m * i * R* T ; i= 1 para la sacarosa; no electrolito.
2) -= 0.25 * 1*0.083 *293
3) -= 6.08 bares
6.08* (1bar/ 100000 Pa) = -608000 Pa = -0.628 MPa







Concentracin
Molal
Grupo
3
Grupo
6
Grupo
5
Grupo
7
Grupo
9
Grupo
8
Grupo
10
0.15
4.9 4.48 7.95 4.7 5.56 4 1.78
0.20
4 3.41 5.65 5.7 4.9 1.57 -0.68
0.25
0.32 3.62 1.36 4.06 0.91 -9.2
0.30 -6.01 0.95 -0.69 -0.47 -6.02 -20.52
0.35 -7.2 -5.31 -1.8 -1.68 -2.97 -10.6 -24.5
0.40 -16.7 -10.15 -11.96 -17.2 -14 -17.06 -
30.025
0.50 -20.9 -18.91 -18.6 -9.17 -21.55 -23.34 - 28.37

6














7
Prctica 2. Medida de la
transpiracin.

1- Propsito.
Estudiar los efectos de varios factores ambientales sobre la velocidad de transpiracin.

2- Material necesario.

- Planta.
- Tiesto.
- Fuente de luz brillante.
- Secador de mano.
- Granatario.
- Papel de filtro.
- Papel de aluminio.
- Estacin meteorolgica.

3- Procedimiento.
Utilizaremos el Mtodo Gravimtrico, en el que se estima la prdida de agua del
sistema planta-suelo a travs de las prdidas de peso medidas con un granatario. A
continuacin se explica paso a paso:
1- Forrar el tiesto con papel de aluminio para evitar que el agua contenida en el
tiesto se derrame o se evapore.
2- Pesar la maceta (P2).
3- Dejar 5 minutos en las condiciones de laboratorio (condiciones control). A
determinar con la estacin meteorolgica. En este caso, 23.5 C y humedad
relativa del 58 %.
4- Pesar la maceta (P4). Calcular P2 - P4 (cantidad de agua transpirada en las
condiciones control).
5- Exponer la maceta a la fuente luminosa durante 10 minutos (en este caso, la
bombilla es de 100 W). Girar la maceta a intervalos regulares para que quede
iluminada por toda la superficie. La distancia entre la fuente luminosa y la
maceta es de 21 cm aproximadamente.
6- Pesar la maceta (P6). Calcular P4 P6 (cantidad de agua transpirada por
efecto a la exposicin luminosa).
7- Dejar reposar a la maceta en las condiciones control durante 5 minutos. Pesar la
maceta (P7).

8
8- Aplicar aire caliente con el secador de mano durante 5 minutos. Pesar la maceta
(P8) y calcular P7 P8 (cantidad de agua transpirada por efecto del aire
caliente).
9- Representar e interpretar los resultados.
10- Lavar y ordenar el instrumental.


4- Resultados. Tablas y grfica descriptiva.
Clculos de pesos y prdidas por transpiracin tras someter a la planta a diferentes tipos
de estrs:
P2 = 334.59 g, P4 = 334.48 g, P6 = 334.27 g, P7 = 334.17 g, y P8 = 331.73 g.

P2 P4 = 0.08 g P4 P6 = 0.21 g P7 P8 = 2.44 g

Velocidades medias de transpiracin:
V (P2 P4): 0.08g / 5 min = 0.016 g/min
V (P4 P6): 0.21g / 10 min = 0.021g/min
V (P7 P8): 2.44g / 5 min = 0.488g/min

9


5- Conclusiones.

La transpiracin de las plantas superiores puede acelerarse por la existencia de los
siguientes factores:
La exposicin a radiacin luminosa estimula la apertura de los estomas foliares,
aumentando la prdida de agua y de peso de la planta.
La temperatura afecta dependiendo del rango de valores en el que se encuentre:

A temperatura ambiente (aproximadamente 25 C) se abren los estomas y hay
prdida de peso por transpiracin.

En el intervalo de 30 C a 35 C, se estimulan los procesos fotorespiratorios que
hacen aumentar la concentracin de CO2 y provoca el cierre estomtico. La
transpiracin disminuye.


10
Si la temperatura es superior a 40 C se observa un mecanismo de refrigeracin
que promueve la apertura estomtica y por tanto aumenta la transpiracin.

El efecto del viento en las hojas depende de algunas caractersticas fsicas de
ests como es su geometra, superficie, tamao y espesor.



Si aumenta la velocidad del viento, la capa de aire estacionaria que rodea a la
hoja pierde espesor de forma que a menor espesor de dicha capa habr menor
resistencia para la salida de agua por los estomas y la transpiracin aumentar.

Este efecto viene expresado por las siguientes ecuaciones:

J = c / R R= S / D Donde: J= flujo de agua, R= resistencia, D= cte, S=
espesor.











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Prctica 3. Pigmentos de
cloroplastos: extraccin y
cromatografa.

1- Propsito.
Extraer los pigmentos del cloroplasto con disolventes estndar y separarlos por tcnicas
de cromatografa en papel.

2- Material necesario.

- 1 g de tejido foliar de espinaca (sin nervios).
- ter etlico.
- Acetona 80%.
- Acetona pura.
- Agua destilada.
- CaCO3.
- Na2SO4 anhidro.
- Balanza.
- Mortero con su maja.
- Embudo de decantacin.
- Soporte con un aro para el embudo de decantacin.
- Papel de cromatografa de malla de celulosa Whatman N 1.
- Tubo capilar.
- Regla milimetrada.
- Cuentagotas / Pipeta Pasteur.
- Cmara cromatogrfica (o un tubo volumtrico con tapa de corcho que realiza
una funcin similar).


3- Procedimiento.

Se realiza una serie de cuatro extracciones para obtener los pigmentos cloroflicos del
tejido foliar:

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1- Primera extraccin: tras pesar el gramo de tejido foliar con la balanza, lo
depositamos en el mortero y aadimos CaCO3 para evitar la prdida de Mg.
Trituramos la mezcla con la maja hasta que obtengamos una pulpa muy fina.
Seguidamente adicionamos 6 ml de Acetona 80% y continuamos triturando.
Dejamos reposar la mezcla y mientras tanto preparamos el embudo de
decantacin poniendo 10 ml de ter etlico. Tras unos instantes de reposo,
recogemos el sobrenadante con un cuentagotas y lo depositamos en el embudo.

2- Segunda extraccin: aadimos otros 6 ml de Acetona 80%, trituramos la
mezcla hasta homogenizar, extraemos el sobrenadante con el cuentagotas y lo
aadimos al embudo.

3- Tercera extraccin: aadimos 3 ml de Acetona pura y 3 ml de ter etlico,
trituramos la mezcla hasta homogenizar, extraemos el sobrenadante con el
cuentagotas y lo aadimos al embudo.


4- Cuarta extraccin: esta vez aadimos 6 ml de ter etlico, trituramos por
ltima vez, dejamos decantar y aadimos al embudo. Tras esta ltima aadimos
50 ml de agua destilada al embudo, colocamos su tapn y agitamos realizando
movimientos circulares alrededor de un eje imaginario que parte al embudo
longitudinalmente en dos partes iguales (teniendo precaucin de que no se forme
demasiado gas y salga el tapn propulsado debido a la salida de gas desde su
interior).

Dejamos reposar la mezcla y observamos dos capas muy diferenciadas por su
distinta coloracin y densidad. Desechamos la fase inferior (acuosa, ms densa)
y decantamos la fase superior (de color verde intenso, menos densa) que
presenta los dos pigmentos en un vaso de precipitados que lleva Na2SO4
anhidro (acta como deshidratante del ter).

Lavar y ordenar el instrumental.

Los desechos producidos se deben de depositar en sus cubetas correspondientes.



A continuacin realizamos la Cromatografa:

Como fase estacionaria utilizaremos una tira de papel de cromatografa Whatman N
1 y como fase mvil (Fm) la mezcla obtenida en la cuarta extraccin (mezcla de
disolventes, Hexano 85 %, Benceno 5% y Acetona 10 %).


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Tras haber marcado con un punto el lugar donde colocamos las gotas de fase mvil
con el tubo capilar, introducimos la tira a la cmara cromatogrfica procurando que
slo la punta de flecha de la tira toque el disolvente de la cmara e inmediatamente
la tapamos.

Esperamos 20 minutos y observamos que la fase mvil se desplaza arrastrando a los
componentes de su disolucin.

4- Resultados y conclusiones.

Tras la espera obtenemos en la tira bandas coloreadas a distintas alturas.

dx : distancia recorrida por cada componente.
Cb: Clorofila B. Ca: Clorofila A. X1: Xantofila 1. X2: Xantofila 2. Bc: Beta
caroteno.

df : distancia recorrida por el disolvente de la cmara cromatogrfica. df: 8.5 cm.

Rf: dx / df


dCb: 2.1 cm; Rf= 2.1cm / 8.5cm = 0.25

dCa: 3.4 cm; Rf= 3.4 cm / 8.5cm = 0.4

dX1: 4.5 cm; Rf= 4.5 cm / 8.5cm = 0.53

dX2: 5.3 cm; Rf= 5.3 cm / 8.5cm = 0.62

dBc: 8.5 cm; Rf= 8.5 cm / 8.5cm = 1

- Describir los fenmenos envueltos en la separacin de pigmentos sobre el papel
(principios de cromatografa)

La fase estacionaria est constituida por el papel de filtro anteriormente citado.
La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la disolucin
y evaporando el disolvente. Luego el disolvente escogido para la fase mvil
asciende por capilaridad.

Despus de unos minutos tras ascender la fase mvil, si el disolvente elegido es
el adecuado, las sustancias se vern como manchas de distinto color y separadas.


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Formas estructurales:

o Clorofilas A, B y Xantofilas: presentes en los complejos antena de los
fotosistemas de los cloroplastos.







o Beta caroteno: presente en el centro activo de los complejos antena de los
fotosistemas de los cloroplastos.

o Pigmentos antocinicos: presentes en las vacuolas de las clulas
vegetales.



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- La localizacin de los pigmentos antocinicos dentro de la clula.

Se hallan en las vacuolas de las clulas vegetales y otorgan un coloracin rojiza,
prpura o azul.

- Los pigmentos que se desarrollaron en los rganos vegetales de las plantas que
crecieron en la oscuridad y los cambios de color de los plastidios que pueden
sufrir.

Las plantas crecidas en la oscuridad presentan un crecimiento etiolado que se
caracteriza por un tallo anormalmente alto y estrecho con coloracin plida,
comparadas con las plantas verdes crecidas en la luz; debido a que el pigmento
clorofila no puede funcionar si no hay radiacin luminosa de calidad (radiaccin
PAR).

La exposicin a una pequea cantidad de luz revierte el proceso de
``etiolizacin. Adems de iniciar el proceso de produccin de
``fotoasimilados, la luz inteviene en una serie de procesos
``fotomorfogenticos.

- Define:

Fluorescencia: propiedad de una sustancia que es capaz de devolver los fotones
radiantes lumnicos otra vez en forma de luz pero con una longitud de onda
mayor a la inicial.

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Fosforescencia: propiedad de una sustancia de almacenar energa y ms tarde
liberarla tambin en forma de luz.



























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Prctica 4.
Espectro de absorcin de las
clorofilas y determinaciones
cuantitativas.

1- Propsito.
Estudiar una tcnica usada para determinar la cantidad de clorofila total, clorofila ``a y
clorofila ``b presentes en las hojas, y determinar el espectro de absorcin de sta
clorofila extrada.

2- Material necesario.

- 0.5 g de hoja de espinaca.
- Etanol 80 %.
- Mortero con su maja (puede ser utilizado como homogenizador).
- Embudo Bchner.
- Plato caliente de laboratorio.
- Pipeta Pasteur/ cuentagotas.
- 2 Vasos de precipitados.
- Agua.
- Papel de filtro Whatman N 1.
- Espectrofotmetro.
- Cubeta de espectrofotmetro (10 mm).

3- Procedimiento.

En primer lugar realizamos la extraccin de clorofila, seguidamente determinamos las
cantidades de clorofila realizando sus espectros de absorcin y los clculos necesarios:
1- Extraccin de clorofila: Mtodo de Extraccin en Caliente. En primer lugar se
machacan 0.5 g de hoja de espinaca (sin nervios) en un mortero con su maja y se
le aaden 5 ml de Etanol 80 %. Tras haber homogeneizado y obtenido una
pulpa fina se introduce el sobrenadante en un tubo de ensayo.


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Transferir el lquido verde resultante a un embudo Bchner forrado con dos
crculos de papel de filtro Whatman N 1.

Repetir la mezcla con otros 20 ml de Etanol 80 % y filtrar de nuevo con el
embudo Bchner.

Lavar con etanol el mortero y su maja.

Colocar el tubo de ensayo en un vaso de precipitados con agua hirviendo sobre
un plato caliente de laboratorio. El tubo de ensayo se calentar al ``bao Mara
durante 10 minutos.


Con un cuentagotas colocar la preparacin sobre una cubeta de
espectrofotmetro y tarar con agua para a continuacin calcular los valores a
645, 652 y 663 nm. Determinacin de cantidades de clorofila (clculos y
resultados expuestos en el apartado cuatro).


Imprimir la representacin obtenida e interpretarla.




Pasos de la obtencin del extracto de clorofilas en la probeta.



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4- Resultados y conclusiones.

D645: 0.3245
D652: 0.446
D663: 0.7305
0.02 = V /1000; 0.5=W
mg.clorofila a/ g tejido: ((12.7* 0.7305 2*0.3245) *(0.02*0.5))= 0.08628
mg.clorofila b/ g tejido: ((22.9 *0.3245) - (4.69*0.7305)) * (0.02* 0.5) = 0.0399
mg.clorofila total / g tejido: ((20.2*0.3245 + 8.02*0.7305) * (0.02*0.5)) = 0.1241
mg.clorofila total / g tejido: (0.446* (1000/34.5))* (0.2* 0.5) = 0.129

- Considerar en las observaciones la razn del uso de acetona de 80% como medio
de extraccin y como blanco en las determinaciones espectrofotomtricas. Con
respecto a las ecuaciones usadas en el clculo de la cantidad de clorofila qu
importancia tienen los coeficientes de absorcin usados y por qu fueron
utilizadas las lecturas de densidad ptica a 645, 663, 652 nm? El mtodo para
determinacin de clorofila presentado en ste experimento puede tener error?
Explicarlo.

Usamos Acetona porque las clorofilas no se disuelven en l.
.


- Qu importancia tiene el espectro de absorcin de un producto natural para su
identificacin? Cul es la diferencia entre espectro de absorcin y espectro de
accin y cmo se usan para obtener informacin sobre las respuestas de plantas
inducidas por luz?

Espectro de Absorcin: la medicin "in vitro" de la energa absorbida por una
molcula y es determinado por un espectrofotmetro que nos da una grfica de la
probabilidad de absorcin de la fraccin de radiacin versus la longitud de onda.
Conociendo el espectro de absorcin de algunas especies moleculares, se puede

20
predecir si la radiacin de una cierta longitud de onda puede producir un efecto
fotoqumico en dichas especies moleculares.
Espectro Activo o de Acciones: la cantidad de radiacin lumnica no ionizante
absorbida que es eficaz para producir la reaccin fotoqumica; por tanto, no es
necesariamente paralela con el Espectro de Absorcin, sin embargo los lmites de
este ltimo deben contener longitudes de onda que se encuentren en el espectro
activo.
Este experimento nos sirve para identificar de manera rpida y sencilla un
determinado pigmento, ya que al medir su absorbancia con el espectrofotmetro
todos van a presentar un espectro de absorcin distinto al de los dems.









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22
Prctica 5. Reaccin de Hill.


1- Propsito.
En esta prctica aislaremos cloroplastos de hojas de espinacas y mediremos su
absorbancia.
Realizaremos la reaccin de Hill con modificaciones: reacciones dependientes de la luz
y catalizada por NADP+ reductasa, en el cual, una sustancia distinta a NADP es
reducida. Tambin usaremos inhibidores de la reaccin para ver los distintos efectos que
se obtienen.
REACCIN DE HILL :
DCPIP+ + H2 DCPIP-H + O2

2 NADP+ + 2 H2O 2 NADPH + 2H+ + O2


2- Material necesario.

- 5 g de hojas de espinaca fresca.
- Tampn fosfato 0.05 M a pH 65
- 0.1 ml de disolucin saturada de Atrazina.
- Disolucin de 2, 6-diclorofenol indofenol 11 *10^-4 M
- Bao de hielo
- Papel de filtro.
- Mortero y maja fros.
- Centrfuga refrigerada.
- 5 tubos de ensayo.
- Papel de aluminio.
- Pipeta graduada de 10 ml.
- Pipeta graduada de 1 ml.
- Agua destilada.
- Tubo de colormetro.
- Bombilla de 100 W.
- Embudo Bchner.




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3- Procedimiento.

Primera parte. Aislamiento de los cloroplastos.
Pesamos en una balanza 5 gramos de espinacas, previamente troceadas y lavadas. Las
homogeneizamos en un mortero fro con 30 mL de tampn fosfato.
Tras homogeneizarlo lo filtramos con el embudo Bchner. Recogemos el filtrado y lo
colocamos en nuestro tubo de centrifugado.
Al pesar el tubo con la balanza obtenemos 4369 gramos que centrifugaremos a 2.500
revoluciones por minuto durante 5 minutos.
A continuacin, recogeremos de la centrifugadora nuestro tubo, del cual extraeremos el
precipitado (fase slida) desechando el sobrenadante. Le aadimos de nuevo 20 mL de
tampn fosfato, lo agitamos y volvemos a pesar (39 gramos).
Centrifugamos otra vez a 2.500 r/min durante 5 minutos, extraemos el sobrenadante y le
aadimos 5 mL de tampn fosfato.
Lo que hemos obtenido es lo que vamos a usar para medir la absorbancia a 620 nm.

Segunda parte. Reaccin de Hill a distintas condiciones.
Tubo Tampn
Tricina 0.05 M
(mL)
Cloroplastos
(mL)
Herbicida
(Atracina)
DCPIP
(mL)

1
2
3 (oscuridad)
4 (hervidos)
5 (herbicida)


10
5
5
5
5

0.5
0.5
0.5
0.5 (a 100 C)
0.5

-
-
-
-
0.1

-
5
5
5
5

Los cloroplastos se hierven durante 10 minutos al bao mara. Son los ltimos que se
aaden a los tubos.
Una vez que estn todos preparados se mezclan bien y el tubo 3 se tapa completamente
con papel de aluminio (oscuridad).
Ahora se meten todos los tubos al bao durante 15 minutos expuestos a la luz. Una vez
transcurrido este tiempo, medimos la absorbancia a 620 nm usando un
espectrofotmetro en todos los tubos comparndolos con uno blanco de agua destilada.

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4- Resultados y conclusiones.
Los resultados al medir la absorbancia a 620 nm son los siguientes:
Tubo Absorbancia
1 0.406
2 0.309
3 0.951
4 1.200
5 0.901


El tubo n 1 se ha utilizado como control, y por lo tanto se debe restar su valor al valor
de los dems tubos. Esto se hace para medir nicamente la absorbancia del DCPIP sin
tener en cuenta la absorbancia de los cloroplastos y del tampn fosfato. Por lo que
vamos a tener los valores reales de la absorbancia. Tras restar el valor del tubo n 1, los
datos quedaran as:

Tubo Absorbancia
2 -0.097
3 0.545
4 0.794
5 0.495


- El tubo 1 no ha sufrido ningn cambio ya que es el tubo control y no contiene DCPIP.
- El tubo 2 ha sufrido un cambio de color. El DCPIP en u estado oxidado es azul,
mientras que cuando est reducido es incoloro, por lo tanto, si dejamos un tubo con una
solucin de cloroplastos con DCPIP en las condiciones necesarias para que se d la
fotosntesis, lo que se producir es que la NADP reductasa le ceder electrones al
aceptor de electrones reducindolo, por lo cual el DCPIP que antes le daba un color azul
a la disolucin, ahora pasar a tener un color incoloro o mucho ms claro.
- En el tubo 3, puesto que lo pusimos en oscuridad, no se produce la fotosntesis y por lo
tanto tampoco la reaccin de Hill.
- El tubo 4, al hervirlo lo que hemos hecho ha sido destruir los cloroplastos.
- El tubo 5 contiene atrazina que bloquea la reaccin de Hill, se inhibe la fotosntesis. La
atrazina acta bloqueando el flujo de electrones entre las plastoquinonas que se

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encuentran entre el fotosistema II y el fotosistema I. Ocupan el sitio de unin de Qb
impidiendo que la Qa reducida ceda sus electrones y se oxide.

Ecuacin de la Reaccin de Hill:
DCPIP + H2O DCPIPH + O2
Oxidado Reducido
Color azul Incoloro

El agua es la que en ltima reduce al DCPIP, los electrones que se liberan en la fotolisis
del agua terminan tras el transporte de electrones por los fotosistemas reduciendo a una
ferredoxina la cual ceder sus electrones al DCPIP por accin de la NADP reductasa.
El tampn fosfato que aadimos en los tubos se encarga de mantener el pH en
condiciones fisiolgicas para que se pueda producir la fotosntesis y el 2,6-diclorofenol
cindofenol permite visualizar la reduccin de los aceptores de electrones que se dan en
la reaccin de Hill, al pasar de su estado oxidado azul al reducido incoloro.





















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Prctica 6. Efecto de la luz y la
temperatura sobre la fotosntesis.

1. Propsito.
Determinar el efecto de intensidad luminosa y temperatura sobre la velocidad de
fotosntesis en ramas de Elodea canadensis.


2. Material necesario.

- Ramas de Elodea.
- 100 ml de disolucin de bicarbonato sdico (0.1%)
- Tubo de ensayo grande.
- Hoja de afeitar.
- Vasija de vidrio.
- Regla.
- Fuente de luz blanca de alta intensidad.
- Termmetro.
- Vaso.
- Cronmetro.

3. Procedimiento.
El experimento est basado en la siguiente frmula qumica de produccin fotosinttica.

CO2 + H2O + luz = O2 + (CH2O)n

Se trata de calcular una tasa de produccin de burbujas (O2).
Tomamos una rama de Elodea y cortamos la base. Lo sumergimos con el pice hacia
abajo y la superficie del corte hacia arriba dentro del tubo de ensayo, el cual llenaremos
con 100 mL de bicarbonato sdico (01%), dejando la rama cubierta por completo.

Procederemos al conteo de burbujas tras un periodo de aclimatacin de 5 minutos.

Someteremos al tubo a las siguientes condiciones distintas de temperatura y energa
lumnica:



27
Condicin 1. Temperatura constante de 20C y distancias del tubo
respecto al foco luminoso variables:

Distancia
respecto a la luz
15 cm 30 cm 45 cm
N de Burbujas/
min
142

120 95

Posible suceso de fotoinhibicin?

Condicin 2. Distancia del tubo respecto al foco luminoso constante de
30 cm y temperaturas variables:

Temperatura 30C 40C 50C
N de Burbujas/
min
126 135 214





Termostato (izquierda) donde colocamos los tubos de ensayo con las ramas de
Elodea (derechas).


28

4. Resultados y conclusiones.
La relacin entre intensidad luminosa y distancia desde la planta a la fuente luminosa es
la siguiente:
As, si la distancia original (d1) entre la luz y la planta se dobla (d2), la intensidad
original (I1) queda dividida por cuatro.
-En la evaluacin de los resultados se debe considerar lo siguiente:


Gas desprendido por la planta: Oxgeno.

Fiabilidad del mtodo usado para estimar la velocidad de fotosntesis: Es inexacta
porque slo nos va a permitir ver si con unas condiciones determinadas afectan en
mayor o menor medida que otras, a la velocidad fotosinttica sobre un mismo trozo de
planta al que tambin van a afectar otros factores.

Las unidades usadas en la medida de la intensidad luminosa: Centmetros de
distancia de la fuente de energa.

La diferencia entre intensidad lumnica y cantidad de luz: A bajas intensidades
luminosas pueden o no desprenderse burbujas porque no llega la luz necesaria para que
se produzca la fotosntesis, un aumento de la intensidad har que aumente la velocidad
fotosinttica, hasta llegar a un punto de saturacin.

Razn del uso de la disolucin de bicarbonato sdico: La razn de usar bicarbonato
sdico es por la planta lo utiliza como fuente de carbono.

-Describir una situacin en dnde el aumento de concentracin de dixido de carbono
no tenga efecto sobre la velocidad de fotosntesis. Clasificar tambin todos los factores
que se considera que afectan a la fotosntesis y discutir cmo limitan stos factores el
proceso en una planta normal durante un periodo de 24 horas (da y noche).

Concentracin de CO2: La alta concentracin de CO2 es beneficiosa para la
fotosntesis porque se produce una saturacin de la enzima Rubisco y se alcanzan
velocidades mayores de fotosntesis. (La concentracin de CO2 regular la fotosntesis
en las horas del da en que un aumento de luz no influya en la velocidad fotosinttica).

Efecto de la luz: La luz es un factor esencial para que ocurra la fotosntesis porque
cuando aumenta la intensidad lumnica dentro de unos rangos ptimos la velocidad
fotosinttica se ver aumentada. Ocurre al contrario cuando la intensidad lumnica es
baja, hasta llegar a un punto en el que si la luz no es suficiente se anula la fotosntesis.
Se dice por ello que la luz es un factor limitante.

Temperatura: Si la temperatura es muy elevada puede llevarse a cabo un proceso de
desnaturalizacin de las molculas que intervienen en la fotosntesis, es necesario que
esta se encuentre dentro de un rango de valores ptimos. En verano, durante las horas
ms calurosas habr menos velocidad fotosinttica.

Tambin afectan la humedad del aire, del suelo y las cantidades de nutrientes.

29
Representar:
Velocidad de fotosntesis entre la intensidad lumnica
Velocidad de fotosntesis entre el n de burbujas.

























30
Prctica 7. Influencia del cido
Indolactico sobre el crecimiento de
secciones del coleptilo de Avena.

1- Propsito.
Ilustrar las tcnicas usadas en un bioensayo para auxinas y estudiar el efecto del cido
indolactico sobre el crecimiento de secciones de coleptilo de avena. Bioensayo AIA.

2- Material necesario.

- 25 coleptilos de Avena (Avena sativa) crecidas en la oscuridad.
- Bistur.
- Papel milimetrado o una regla.
- Agua destilada.
- Cinco cpsulas de Petri.
- Dos vasos de precipitados.
- Pipeta.
- Disolucin de AIA 10^-2 M
- 94 ml de disolucin tampn KH2PO4 001M con pH 45 conteniendo el 2%
(w/v) de sacarosa. Medio basal.

3- Procedimiento.
Germinacin de semillas y crecimiento de plntulas.
Esta parte de la prctica fue realizada por los profesores que impartieron las prcticas
unos das antes de la realizacin de sta.
Se estilizaron alrededor de 60 semillas de avena durante 5 minutos en disolucin de
hipoclorito sdico al 1%. Despus se lavaron a fondo con agua destilada, quitando los
restos de hipoclorito, empapndolas en agua destilada estril durante una hora
aproximadamente.
Una vez transcurrido este tiempo, se sembraron las semillas con vermiculita y si dejaron
crecer a 25C y una humedad relativa del 85% aproximadamente. En lugar de dejarlas
completamente a oscuras se dejaron crecer bajo la luz roja continua de baja intensidad,
con una bombilla de 10w.

31


Test de la seccin de coleptilo.
Tomamos 25 coleptilos de avena, de los que vamos a cortar secciones de 5 mm de
longitud, descartando los 3 primeros mm, donde se producen las auxinas de forma
natural. Podremos 5 secciones por placa de Petri (5 coleptilos distintos) que son las
que vamos a poner en contacto con las diferentes disoluciones.
Realizaremos disoluciones seriadas (desde la disolucin 1 a la 6) para obtener las
distintas concentraciones de AIA, en las que vamos a incubar las secciones de los
coleptilos.
1. Medio basal (MB): 20 ml de AIA
2. AIA 10^-4 M: 20 ml de MB + 200 micro l (0.2 ml) de AIA 10^-2 M
3. AIA 10^-5 M: 18 ml de MB + 2 ml de AIA 10^-4 M
4. AIA 10 ^-6M: 18 ml de MB + 2ml de AIA 10^-5 M
5. AIA 10^-7 M: 18 ml de MB + 2 ml de AIA 10 ^ -6 M
Tras 20 horas de incubacin medimos las secciones.

Realizacin de disoluciones seriadas de AIA en las cpsulas de Petri.


32

Corte de un coleptilo a bistur usando la regla.


4- Resultados y conclusiones.

Control.
Medio basal.
10^-7 10^-6 10^-5 10^-4
Grupo 3 3.2 mm 4.0 mm 6.0 mm 5.4 mm 3.6 mm
Grupo 4 3.0 mm 5.2 mm 3.8 mm 5.6 mm 4.0 mm
Grupo 5 1.3 mm 2.8 mm 5.2 mm 7.1 mm 5.1 mm
Grupo 6 2.8 mm 3.5 mm 4.1 mm 7.4 mm 2.3 mm
Grupo 7 4.4 mm 4.4 mm 7.4 mm 11 mm no
cuenta
6.0 mm
Grupo 8 4.9 mm 4.0 mm 5.2 mm 6.6 mm 3.8 mm
Grupo 9 3.2 mm 4.6 mm 6.8 mm 7.8 mm 6.6 mm
Grupo 10 3.1 mm 3.9 mm 5.6 mm 6.3 mm 3.9 mm
Media de los
datos.
3.24 mm 4.05 mm 5.51mm 7.62mm 4.41mm








33

Control.
Medio basal.
10^-7 10^-6 10^-5 10^-4
Grupo 3 64 % 80 % 120 % 108 % 72 %
Grupo 4 60 % 104 % 76 % 112 % 80 %
Grupo 5 26 % 56 % 104 % 144 % 102 %
Grupo 6 56 % 70 % 82 % 148 % 46%
Grupo 7 88 % 88 % 148 % 220 %No
cuenta
120 %
Grupo 8 98 % 80 % 104 % 132 % 76 %
Grupo 9 64 % 92 % 136 % 156 % 132 %
Grupo 10 62 % 78 % 112 % 126 % 84 %
Media de los
datos.
64.75 % 81 % 110.25 %

132.3 % 89%






























34
Prctica 8. Efecto del cido
Giberlico sobre la movilizacin de
reservas en el endospermo de
semillas de Cebada.

1- Propsito.
Estudiar el efecto del cido Giberlico sobre la actividad amilasa en el endospermo de
cebada, la cual es medida por la deteccin de azcares reductores.


2- Material necesario.

- 60 semillas de Trigo (Triticum spp) empapados en H2O durante toda la
noche. Asignado a los grupos de la banqueta ms cercana a la puerta y 60
semillas de Cebada (Hordeum leporinum) a los grupos de la banqueta ms
alejada de la puerta.

- Disolucin de Hipoclorito Sdico al 1%.
- cido Giberlico 10^-2 M
- 10ml de cido Dinitrosaliclico
- 1.2 ml de disolucin de D-glucosa
- Espectrofotmetro a 540 nm.
- 7 tubos de espectrofotmetro.
- 16 tubos de ensayo.

35
- 5 vasos de precipitados de 100 ml.
- Pipetas (de 1ml y de 10 ml).
- Agua destilada.

3- Procedimiento.

La preparacin de semillas de cebada y trigo y la concentracin de las disoluciones de
cido giberlico fueron llevadas a cabo por los profesores, previamente a la realizacin
de la prctica con el fin de agilizar la tarea.
Preparacin de semillas de cebada.

Bao de las semillas de trigo en la disolucin de hipoclorito sdico.
Tras esperar cinco minutos, se decanta el contenido en otro vaso de precipitados vaco
para eliminar la disolucin. Tras ste paso, se lava con agua destilada para eliminar
residuos de hipoclorito sdico.

Disoluciones de cido Giberlico.
Partiendo de la disolucin patrn de cido giberlico, se prepararon las distintas
disoluciones de ensayo por dilucin en serie:
1. Control: 1ml de H2O
2. 10^-5M: 1 ml de disolucin patrn + 9 ml de H2O.

36
3. 10^-6M: 1 ml de disolucin 10^-5M + 9 ml de H2O.
4. 10^-7M: 1 ml de disolucin 10^-6M + 9 ml de H2O.
5. 10^-8M: 1 ml de disolucin 10^-7M + 9 ml de H2O.
6. 10^-9M: 1 ml de disolucin 10^-8M + 9 ml de H2O.



Contabilizacin de las semillas de Trigo.

Tratamiento de las semillas con cido Giberlico.
Colocar en los tubos de ensayo preparados anteriormente 10 mitades de las semillas
(endospermo) por tubo. Tapar los tubos e incubar las semillas a temperatura ambiente
durante 20 horas.

37

6 Tubos de ensayo tras su incubacin con cido Giberlico durante 20 horas.

Deteccin de azcares reductores.
Para medir azcares reductores en el medio de incubacin se tomar 0.5 ml del medio
sobrenadante de cada tubo de los seis incubados.
Preparar una nueva serie de 10 tubos de ensayo que contengan:
1. 0.5 ml de 10^-9 M de A. G incubado + 0.5 ml de D-glucosa + 0.5 ml de agua
destilada + 1 ml de cido dinitrosaliclico.
2. 0.5 ml de 10^-8 M de A. G incubado + 0.5 ml de D-glucosa + 0.5 ml de agua
destilada + 1 ml de cido dinitrosaliclico.
3. 0.5 ml de 10^-7 M de A. G incubado + 0.5 ml de D-glucosa + 0.5 ml de agua
destilada + 1 ml de cido dinitrosaliclico.
4. 0.5 ml de 10^-6 M de A. G incubado + 0.5 ml de D-glucosa + 0.5 ml de agua
destilada + 1 ml de cido dinitrosaliclico.
5. 0.5 ml de 10^-5 M de A. G incubado + 0.5 ml de D-glucosa + 0.5 ml de agua
destilada + 1 ml de cido dinitrosaliclico.
6. 0.5 ml de Control incubado + 0.5 ml de D-glucosa + 0.5 ml de agua destilada +
1 ml de cido dinitrosaliclico.

38
7. 0 ml de D-glucosa+ 1ml de agua destilada + 1 ml de cido dinitrosaliclico.
8. 0.2 ml de D-glucosa + 0.8 ml de agua destilada + 1 ml de cido dinitrosaliclico.
9. 0.4 ml de D-glucosa + 0.6 ml de agua destilada + 1 ml de cido dinitrosaliclico.
10. 0.6 ml de D-glucosa + 0.4 ml de agua destilada + 1 ml de cido dinitrosaliclico.

A.G: cido Giberlico.
Hervir los 10 tubos durante 5 minutos, a continuacin aadir 10 ml de agua destilada a
temperatura ambiente y medir la absorbancia de cada tubo a 540 nm utilizando 11 tubos
de colormetro (uno ms que sirve para tarar, 1ml de agua).
Algunos de los pasos de la segunda sesin en fotografas:


Nueva serie de 10 tubos de ensayo, rotulados y listos para depositar las disoluciones
pertinentes.




39

Los 10 tubos tras un bao en agua hirviendo durante 5 minutos.


Los diez tubos de ensayo despus de aadir 10 ml de agua destilada a cada tubo
(temperatura ambiente) para enfriar las disoluciones con sus correspondientes
concentraciones de glucosa y de cido dinitrosaliclico.

4- Resultados y conclusiones.

40



[cido giberlico] [Glucosa] 10^-
2M
0 10^-9 10^-8 10^-7 10^-6 10^-5 0 0.2 0.4 0.6
Grupo 3 0.39 0.40 0.37 0.55 0.36 0.22 0 0.20 0.41 0.55
Grupo 4 0.35 0.49 0.54 0.39 0.27 0.30 0 0.18 0.35 0.53
Grupo 5 0.35 0.42 0.60 0.38 0.40 0.25 0 0.23 0.44 0.61
Grupo 6 0.34 0.44 0.66 0.56 0.37 0.19 0 0.17 0.38 0.59
Grupo 7 0.37 0.31 0.58 0.40 0.24 0.31 0 0.15 0.43 0.57
Grupo 8 0.42 0.41 0.33 0.31 0.25 0.31 0 0.21 0.34 0.54
Grupo 9 0.38 0.55 0.63 0.58 0.41 0.20 0 0.19 0.40 0.60
Grupo 10 0.38 0.40 0.54 0.38 0.29 0.30 0 0.19 0.35 0.52
Valor
medio de
absorbancia
0.37 0.43 0.53 0.44 0.32 0.26 0 0.19 0.39 0.56

Los resultados estn expresados en nm.




Curva patrn para la interpretacin de los datos obtenidos con las absorbancias de
glucosa en los 10 tubos analizados con colormetro.



41



Datos medios de absorbancia obtenidos en la prctica representados en la grfica
anterior.

Tabla de equivalencia entre las medias de las absorbancias (nm, segunda fila con
valores) de los distintos tubos de los distintos grupos y los ml de D-glucosa 10^-2 M
hidrolizada (datos provenientes de la curva patrn, tercera fila con valores):

Tubos con 5 ml de [cido giberlico] Tubos con diferentes
concentraciones de
[Glucosa] 10^-2M
0 10^-9 10^-8 10^-7 10^-6 10^-5 0 0.2 0.4 0.6

0.37 0.43 0.53 0.44 0.32 0.2 0 0.19 0.39 0.56

0.225 0.26 0.32 0.265 0.19 0.115

0 0.11 0.235 0.335



La presencia de cido Giberlico, la actividad amilasa y la presencia de azcares
reductores en el endospermo parecen necesarios en el crecimiento normal de las
semillas de cebada, ya que sus tejidos de reserva estn compuestos mayoritariamente

42
por almidn y sin estos tres componentes no se puede hidrolizar el almidn en glucosa y
utilizar esta como combustible hasta que la planta pueda realizar la fotosntesis. Se
observa que en plantas con dficit en la sntesis de giberelinas se produce enanismo en
las plantas que germinan.

























43
Prctica 9. Efecto de Kinetina sobre
la senescencia de hojas.


1- Propsito.
Estudiar la influencia de las citoquininas en el retraso de la senescencia, midiendo la
retencin de clorofila en las hojas separadas de la planta.

2- Material necesario.

- Hojas verdes de plantas jvenes de perejil.
- Acetona al 80 %.
- Cpsulas Petri.
- 3 disoluciones de Kinetina de concentraciones 10, 1 y 0.1 mg/ L.
- Mortero con su maja.
- Espectrofotmetro.

3- Procedimiento.

1- Seleccionar hojas sanas de perejil y pesar cuatro lotes de 0,5 gr cada uno. Cortar las
hojas en trozos de 1-2 centmetros de longitud.
2- Preparar cuatro placas de Petri con 25 ml de cada una de las siguientes disoluciones:
- Placa 1: agua destilada.
- Placa 2: 25 mL de Kinetina 10mg/L.
- Placa 3: extraemos 25 mL de la disolucin anterior y le aadimos 225 mL de agua,
obteniendo de esta manera la disolucin de concentracin de Kinetina 1mg/L.
- Placa 4: realizamos el mismo proceso que el anterior y obtenemos la concentracin de
Kinetina 01mg/L.

3- Colocar las secciones en las placas y taparlas. Guardarlas en la oscuridad durante 7
das.


44

Hojas de perejil con distintos tratamientos con kinetina antes de incubar en oscuridad
durante una semana.

4- Transcurrido este tiempo, determinar el contenido en clorofila total (mg clorofila/g
tejido) de las hojas de cada tratamiento, utilizando el procedimiento descrito en el
apartado E. Determinar, asimismo, el contenido de clorofila de hojas recin cortadas de
la planta, siendo este el valor que nos proporcionar una referencia sobre la prdida de
clorofila que experimentan las hojas en cada tratamiento.
5- El procedimiento para determinar el contenido en clorofila de las hojas es el
siguiente:
a) Extraccin de clorofila: Colocar 0,5g de hojas limpias en el mortero. Triturar el tejido
hasta que se quede una fina pulpa y aadir 20 ml de acetona al 80%. Transferir el
sobrenadante a una probeta. Repetir la trituracin de la pulpa con otros 15 ml de acetona
y volver a transferir el sobrenadante a la probeta. Volver a repetir el proceso aadiendo
10 ml de acetona. El volumen final de la probeta debe llegar hasta los 50 ml. Filtrar los
50 ml con un embudo Bchner y papel de filtro.

b) Determinacin de la cantidad de clorofila: Con ayuda del espectrofotmetro, anotar
la absorbancia de cada extracto. Se tiene que medir a 652 nm. La cantidad total de
clorofila se calcula empleando la siguiente ecuacin:
Clorofila (mg/g) = ((D652 *100) / 34.5) * (V / (100 * W))


45
D652 = Valor espectrofotmetro.
V = Volumen final en ml (50).
W = Peso muestra en g (0.5).


4- Resultados y conclusiones.

Absorbancia a 652
nm
Clorofila total
(mg/g)
Placa 1 0.203 0.588
Placa 2 0.516 1.496
Placa 3 0.202 0.588
Placa 4 0.115 0.34

Diferentes efectos de las citoquininas sobre las plantas:
Inducen la divisin celular, la formacin de rganos en cultivo de tejidos, activan el
crecimiento de yemas laterales, estimulan la movilizacin de nutrientes, estimulan la
prdida de agua por transpiracin, eliminan la dormicin que presentan las yemas
laterales y semillas de algunas especies.
La kinetina acta suprimiendo la expresin de los genes especficos de la senescencia o
favoreciendo la actividad de los genes implicados en la fotosntesis incrementando la
presencia de ARNm y protenas del aparato fotosinttico. Adems intervienen evitando
la alteracin de los cloroplastos.
Una forma para evitar la senescencia de las hojas es aumentando la concentracin de
xido ntrico y disminuir la concentracin de etileno.









46
Prctica 10. Localizacin del
crecimiento en tallos y races.


1- Propsito.

En las plantas el crecimiento lo vamos a encontrar en unas zonas concretas, no va a
estar distribuido por todo el organismo.
Podemos ver que la raz slo tiene una regin de crecimiento, situada a unos 2mm del
extremo.
En el tallo el crecimiento ocurre por debajo del pice.

2- Material necesario.

- Cmara hmeda.
- Plntulas de Altramuz y Habichuelas.
- Marcaje (rotulador de punta fija).
- Regla milimetrada.
- Recipientes.
- Vermiculita.


3- Procedimiento.

Cogeremos 7 plntulas de guisante que presenten races rectas y que sean 2cm de largo.
Usando la regla milimetrada vamos a marcar rpidamente a las races de 6 plntulas(dos
habichuelas, dos altramuces, un altramuz en oscuridad y una habichuela en oscuridad),
que tener cuidado de no daar a las races].
Colocaremos por cada recipiente con vermiculita dos plntulas.
1- Dos habichuelas.
2- Dos altramuces.

47

Vamos a dejar que crezcan durante una semana. Una vez pasados los dos das
mediremos las distancias entre las seales en todas las races. Sacamos los incrementos
de longitudes.


























48
Prctica 11. Ensayo de germinacin
de semillas.

1- Propsito.
Determinar la capacidad de germinar y de que pueda germinar de una semilla,
estudiando la influencia de diferentes factores fsicos y qumicos que actan sobre ella.
Observar los diferentes rganos que aparecen en la germinacin de distintos tipos de
semillas.

2- Fundamento terico.

Las semillas son la unidad de reproduccin sexual de las plantas y tienen la funcin de
multiplicar y perpetuar la especie a la que pertenecen. Adems, es uno de los elementos
ms eficaces para que la especie se disperse, tanto en el tiempo como en el espacio.

Para que la semilla cumpla con su objetivo es necesario que el embrin se transforme en
una plntula, que sea capaz de valerse por s misma y, finalmente convertirse en una
planta adulta. Todo ello comprende una serie de procesos metablicos y morfogenticos
cuyo resultado final es la germinacin de las semillas.

Las semillas, atendiendo a la posicin de los cotiledones respecto a la superficie del
sustrato, pueden diferenciarse en la forma de germinar. Podemos distinguir dos tipos
deferentes de germinacin: epigea e hipogea





49


Para que el proceso de germinacin, es decir, la recuperacin de la actividad biolgica
por parte de la semilla, tenga lugar, es necesario que se den una serie de condiciones
ambientales favorables como son: un sustrato hmedo, suficiente disponibilidad de
oxgeno que permita la respiracin aerobia y, una temperatura adecuada para los
distintos procesos metablicos y para el desarrollo de la plntula.

En el proceso de germinacin podemos distinguir tres fases o etapas:

1- Fase de hidratacin: Durante esta fase se produce una intensa absorcin de agua
por parte de los distintos tejidos que forman la semilla. Esta fase se produce tanto en
semillas vivas y muertas y, por tanto, es independiente de la actividad metablica de
la semilla. En las semillas viables, su metabolismo se activa por la hidratacin.

2- Fase de germinacin: Representa el verdadero proceso de la germinacin. En ella se
reanuda la actividad metablica, necesaria para el correcto desarrollo de la plntula. En esta
fase la absorcin de agua se reduce considerablemente, llegando incluso a detenerse.


50
3- Fase de crecimiento: Es la ltima fase de la germinacin y se asocia con la emergencia de
la radcula (cambio morfolgico visible). Esta fase se caracteriza porque la absorcin de
agua vuelve a aumentar, as como la actividad respiratoria.

Se produce slo en las semillas que germinan y obviamente se asocia a una fuerte
actividad metablica que comprende el inicio del crecimiento de la plntula y la
movilizacin de las reservas.

Cuando una semilla germina, la primera estructura que emerge, de la mayora de las
especies, despus de la rehidratacin de los diferentes tejidos es la radcula como
consecuencia de la elongacin celular y se produce porque los tejidos que la rodean sufren
un proceso de ablandamiento provocado por el desmantelamiento de la estructura de la
pared celular. Sin embargo, en otras semillas el crecimiento comienza por el hipoctilo.


3- Material necesario.

- 40 Semillas de dicotiledneas (20 de Altramuz y 20 de Garbanzo) y 20 de
monocotiledneas (trigo).
- Cpsulas Petri con discos de papel de filtro.
- Bandejas de plstico.
- Agua.
- Vaso de precipitados.
- Vermiculita.
- Disolucin de cido Abscsico (ABA) 0.1 mM.
- Disolucin de Hipoclorito Sdico al 5%.

4- Procedimiento.

Segn el grupo al que pertenezcamos realizaremos la prctica con semillas de
monocotiledneas (gramneas) o con dicotiledneas (garbanzos y habichuelas); en
oscuridad; en agua o en ABA.

El profesorado puso a imbibir las tres muestras en agua y en ABA.

En primer lugar tenemos que esterilizar con

Colocaremos 12 semillas en las placas de Petri con agua y otras 12 con ABA, ambas
placas estarn tendrn humedecidas dos capas de papel de filtro con sus respectivas
disoluciones.

Por otra parte tambin nos ha tocado realizar la siembra de 15 semillas de garbanzos y
otras 15 de habichuelas todas en la misma bandeja, con ABA en oscuridad.


51

Transcurridos 7 das contaremos el nmero de semillas germinadas y calcularemos el
porcentaje de germinacin.






52




5- Resultados y conclusiones.




ABA ABA Agua Agua
% Germinacin Longitud
Coleptilo
Raz.
% Germinacin Longitud
Coleptilo
Raz
Altramuz 50 1.82 cm 50 4.18 cm
Garbanzos 100 3.42 cm 90 3.84 cm



53
Podemos ver que para la avena, el ABA es un fuerte inhibidor de la germinacin. En el
caso de las habichuelas vemos que el ABA no tiene un gran efecto a la hora de inhibir la
germinacin. En el caso de los garbanzos inhibe la germinacin, pero tambin vemos
que hay un porcentaje de plantas que si que germinan.

En las plantas crecidas a oscuridad a simple vista podemos ver que presentan un color
blanco y que las plantas son bastante largas. Esto es debido a que al no estar siendo
iluminada, la planta tiende a alargarse para encontrar la luz. El color blanco es debido a
que la luz no est induciendo la sntesis de clorofilas.

Por otro lado, las plantas crecidas en la luz podemos ver que son ms cortas, pero tienen
color verde. Esto es debido a que en cuanto notan la presencia de luz se induce la
sntesis de clorofilas para empezar a fotosintetizar. De este modo la planta no tiene que
alargarse, ya que la planta tiene luz para comenzar con su anabolismo.

Diferencias entre plantas que crecen en luz y plantas que crecen en oscuridad.

La luz acta como activador de muchos procesos fisiolgicos como la produccin de
pigmentos.

Plantas crecidas a la luz posesin de pigmentos y color ms verdoso. Crecimiento
menor en elongacin y mayor crecimiento con yemas laterales y produccin de hojas.
Presencia de fototropismos con un crecimiento de las clulas produciendo una
orientacin del tallo hacia la luz.

Plantas crecidas en oscuridad no presentan pigmentos ni el color verdoso. Mayor
crecimiento en elongacin pero sin yemas ni hojas. Ausencia de fototropismo.

Papel de la luz en el crecimiento.

La luz es una fuente de informacin muy valiosa para la planta. La cantidad de luz que
incide sobre la planta en unidad de tiempo y superficie (irradiancia), su composicin
espectral, la direccin con que incide y su duracin diaria son aspectos que cambian
segn las condiciones ambientales y que proporcionan informacin a la planta como la
poca del ao, la presencia de plantas vecinas, etc. Esta informacin es utilizada por los
fotorreceptores de la planta (fitocromos, criptocromos y receptores de ultravioleta) de
forma que cambian segn las condiciones lumnicas y producen en consecuencia

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cambios en el desarrollo y en el crecimiento. Por ejemplo una plntula que est
enterrada y crece hasta salir a la superficie, al recibir los primeros fotones de luz estos
son captados por los fotorreceptores que al percibir el cambio lumnico modifican la
morfologa de la planta en un sentido ventajoso para esta, crecimiento lateral, formacin
de hojas, sntesis de pigmentos, etc.


Papel de la luz en la fotosntesis.

La luz influye en la diferenciacin de los protoplastos hasta cloroplastos, por lo que es
necesaria para la sntesis de clorofilas. Cuando hay luz, la membrana del proplasto se
invagina formando prolongaciones. La invaginacin se aplasta y evolucionan a
estructuras tpicas de tilacoides, donde ocurre una sntesis de clorofila y protenas. Sin
embargo, cuando no hay luz, la diferenciacin se detiene en el etioplasto que es incoloro
y contiene protoclorofila. Al aparecer la luz hay una transformacin directa de
etioplasto a cloroplasto.

















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Prctica 12. Ensayo de viabilidad de
semillas.

1- Propsito.
El propsito de la practica ser hacer una medida lo ms aproximada posible de la viabilidad de
una muestra de semillas
2- Fundamento terico.
El que una semilla germine y el que pueda germinar son dos hechos completamente
distintos. Una semilla puede germinar si est viva; que germine o no depender de
factores externos (temperatura, humedad) o internos (letargo).

Tambin procederemos a medir la capacidad de germinar una semilla, y la de que pueda
o sea capaz de hacerlo. Para ello usaremos un reactivo (cloruro 2, 3, 5-trifeniltetrazoilo)
que se denomina cloruro que en su forma oxidada es incoloro, pero cuando es reducido
genera un compuesto coloreado (rojizo). El cloruro de tetrazoilo acepta electrones de la
cadena de transporte de electrones de las clulas vegetales, por lo que si las clulas estn
vivas se producir el transporte de electrones y por ello la tincin de esas zonas con el
tetrazoilo al reducirse.

3- Material necesario.

- 10 semillas de dicotiledneas (Habichuelas).
- Placas de Petri.
- Bistur.
- Cuchilla de afeitar.
- Vaso de precipitados.
- Disolucin de Cloruro de Tetrazoilo.
- Pipeta milimetrada.

4- Procedimiento.
Tenemos 10 habichuelas, podremos 5 estarn hervidas y las otras 5 sern frescas. Las
debemos de partir longitudinalmente. Colocaremos las 20 en placas Petris bocabajo,
las 10 hervidas en una y el resto en la otra. A ambas placas aadiremos cloruro de 2,
3, 5-trifenilo de tetrazoilo.



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Habichuelas para imbibicin con H2O (izq.). Habichuelas hirviendo (der.).




Mitades de habichuela a falta de oscuridad para revelado con cloruro de tetrazolio.








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5- Resultados y conclusiones.



Mitades de habichuelas hervidas (izq.) y con AIA (der.). Revelado con cloruro de
tetrazolio.

El compuesto soluble e incoloro de 2,3,5-trifenil tetrazoilo que posee un potencial de
reduccin intermedio entre los transportadores de la cadena, al captar los electrones del
flujo respiratorio se reduce hasta formar un compuesto insoluble que se deposita sobre
el tejido de las semillas de garbanzo y lo tie de rosa.

Observamos que las 5 habichuelas que hervimos dan negativo para esta reaccin
mientras que las 5 restantes adquieren el color rosa.
Porcentaje de viabilidad:

Habichuelas 10 de 10 = 100%

En semillas hervidas no se producira la reaccin con el reactivo tetrazoilo porque al
hervirlas se lleva a cabo la desnaturalizacin de las protenas de la cadena de transporte
de electrones y por ello no se producira la reduccin del reactivo.







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Prctica 13. Extraccin y medida de
la actividad del enzima Lipasa de
semillas de Ricino.

1- Propsito.
Estudiar y medir la actividad de las lipasas presentes en semillas de ricino, siendo las
lipasas un grupo de enzimas que degradan los triglicridos. Para que la lipasa acte bien
tiene que estar en medio acido.


2- Material necesario.

- 6 semillas de Ricino.
- 2 ml de cido actico 0.1 M.
- NaOH 0.1 M.
- Disolucin de Fenolftalena.
- 2 tubos de ensayo.
- Bao de agua hirviendo (termostato).
- Vaso de precipitados.
- Mortero con su maja.
- Bao de agua a 35 C.
- Probeta.
- Bureta.
- Pipetas.
- Barilla de vidrio.
- 25 ml de agua destilada.
- Papel de parafilm.

3- Procedimiento.

1- Empezaremos por pelar las 6 semillas de ricino, quitndole la cpsula y la
cscara, dejando la semilla totalmente desnuda.



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2- Despus se colocan en un mortero y las trituramos aadiendo 10 ml de agua en
dos veces (5 ml) obteniendo una suspensin blanca homognea, teniendo la
precaucin de no inhalar el polvo, pues es txico.



4- Depositar la suspensin en una probeta. Enrasar con agua procedente del lavado
del mortero hasta 25 ml. Agitar el contenido tapando la boca de la probeta con
papel de parafilm.

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5- Depositar en cada uno de los dos tubos de ensayo (A, hervido), (B, problema),
10 ml de la suspensin y aadir 1ml de cido actico.

6- Hervir al bao mara a 100 C, el tubo A durante 5 minutos. Proteger su boca
con papel de aluminio.

7- Colocar los dos tubos de ensayo en una gradilla dentro del termostato a 35 C
durante 30 minutos.

8- Tras esto los sacamos, colocamos su contenido en un vaso precipitado primero
el tubo A, aadimos 4 gotas de fenolftalena y lo valoramos, lavamos el vaso de
precipitados, enrasamos de nuevo la bureta hasta 25 ml de base fuerte NaOH 0.1
N, aadimos 4 gotas de fenolftalena al vaso de precipitados y valoramos el
contenido del tubo B.

Cuando la preparacin se ponga de color rosa permanente ya est neutralizados
los equivalentes de cido de la suspensin problema con los de base fuerte.



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4- Resultados y conclusiones.

- Viraje del tubo A ml de NaOH
- Viraje del tubo B ml de NaOH.
Como podemos observar el tubo B requiere ms concentracin de NaOH para
neutralizar los cidos, puesto que ya habr cidos que se hayan hidrolizado, debido a la
accin de la lipasa. El volumen de NaOH que se ha necesitado se calcula de la siguiente
forma:

Vb-Va= Vlipasa

Vlipasa =11.3 2.7= 8.6 ml de lipasa

N de equivalentes = N x Vlipasa

N de equivalentes = 0,1 x 0,0086= 8.6 x 10-4 equivalentes de cido Ricinolico

N de equivalentes = N moles / valencia N moles = N equivalentes x valencia

Al ser un cido con un solo grupo COOH, la valencia por la que se multiplica el nmero
de equivalentes es 1.

N moles = N equivalentes x 1= 8.6 x 10-4 moles

Nmero de moles = gramos/ peso molecular

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Peso molecular cido Ricinoleico: 298.46g /mol

Gramos = 29846g/mol x 8.6x10^-4 = 0.239 g de cido Ricinolico

*Clculo de gramos de Ricinoleina dividimos los moles de acido por 3 (pues de la
Ricinoleina obtenemos 3 cidos ricinoleicos):

Gramos de Ricinoleina = (numero de moles x Pm)/3

Peso molecular de la Ricinolena: 932g /mol

Gramos Ricinolena = (932g/mol x (8.6x10^-4) ) / 3 =0.267 g


Conforme vamos aadiendo NaOH a la disolucin a valorar, los cidos se van
neutralizando y va tomando un tono ms claro. Dan sal sdica soluble. Anteriormente
los cidos grasos, insolubles, estaban emulsionados dndole ese aspecto translucido.


















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Prctica 14. Determinacin de acidez
y slidos solubles en frutos. Clculo
del ndice de madurez.


1- Propsito.
En esta prctica vamos a medir el grado de madurez de diferentes frutos climatricos
(maduracin disparada) y no climatricos (maduracin no disparada). Para ello vamos a
comparar sus grados Brix, es decir la acumulacin de slidos solubles (azucares), por
refractometria, con la concentracin de cidos acumulados (siendo el acido ctrico el
acido mayoritario) mediante valoraciones.

2- Fundamento terico.
En esta prctica queremos hacer una medida de la maduracin de los frutos (cambios de
sabor, color, textura en los frutos). Cuando un fruto madura, disminuye la acidez y
aumenta el dulzor (salvo en los ctricos).

Estudio con frutos no climatlicos.


ndice de madurez = SS / AT



El cido ctrico (a la izquierda) es un cido orgnico tricarboxlico que est presente en
la mayora de las frutas, sobre todo en ctricos como el limn y la naranja. Su frmula
qumica es C
6
H
8
O
7
.

En bioqumica aparece como un metabolito intermediario en el ciclo de los cidos
tricarboxlicos, proceso realizado por la mayora de los seres vivos.

El nombre IUPAC del cido ctrico es cido 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxlico.


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El citrato de sodio (a la derecha) es un compuesto qumico que, por lo general, se refiere
al ion del citrato unido a tres tomos de sodio: el citrato trisdico. Sin embargo, puede
tratarse tambin del citrato monosdico o del citrato disdico cuando el citrato se
encuentra unido a uno o dos tomos de sodio respectivamente. Qumicamente, los
citratos de sodio son sales sdicas del citrato tambin llamado cido ctrico que es un
componente comn de las clulas del cuerpo humano.

3- Material necesario.

- Limn.
- Naranja Salobre.
- Naranja Navel.
- Pomelo
- pHmetro
- Disolucin de Fenolftalena.
- NaOH 0.1 N
- Vaso de precipitados.
- Pipeta.
- Bureta.
- Exprimidora para zumos.
- Refractmetro.



4- Procedimiento.
Del limn extraeremos 2 ml de su jugo y la misma cantidad para los dos tipos de
naranja y para el pomelo.



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Para medir la acidez del limn se realiza una valoracin cido-base con una base fuerte
(NaOH al 0.1 N) utilizando la bureta para valorar los equivalentes de cido presentes en
la disolucin (dispuesto en un vaso de precipitados al que se le ha aadido
posteriormente 6 gotas de fenolftalena). Cuando la muestra se neutralice se pondr de
color rosa.

Tambin se realizar una valoracin cido-base con el pHmetro sin adicionar
fenolftalena.



Para medir el porcentaje de sacarosa en las disoluciones anteriores se utiliza el
refractmetro, tarando con agua destilada, para conocer los grados Brix. Las medidas
que hemos extrado del jugo del limn la pondremos en un vaso de precipitados y le
aadimos dos gotas de fenolftalena. Vamos agitando y aadiendo gota a gota la sosa.
Cuando se neutralice la muestra se pondr de color rosa.

5- Resultados y conclusiones.

Contenido slido soluble: mL (limn)

Los slidos solubles se determinan midiendo los grados de Brix con el porcentaje de
sacarosa utilizando refractmetros por medio de la presencia de azcares = grados
Brix

Resultados de la valoracin del zumo de limn con pHmetro:

1 pH 1ml de NaOH 0.1 N 2.37
2 pH 1ml de NaOH 0.1 N 2.87
3 pH 1ml de NaOH 0.1 N 3.43

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4 pH 1ml de NaOH 0.1 N 4.00
5 pH 1ml de NaOH 0.1 N 4.48
6 pH 1ml de NaOH 0.1 N 5.01
7 pH 0.5 ml de NaOH 0.1 N 5.34
8 pH 0.5 ml de NaOH 0.1 N 5.67
9 pH 0.5 ml de NaOH 0.1 N 6.01
10 pH 0.5 ml de NaOH 0.1 N 6.43
11 pH 0.5 ml de NaOH 0.1 N 7.30
12 pH 0.5 ml de NaOH 0.1 N 10.23


Resultados obtenidos de las mediciones de la concentracin de azcares y de la acidez
total de los ctricos estudiados:
Naranja Navel
SS AT
Naranja Salustre
SS AT
Limn
SS AT
Pomelo
SS AT
13 0.62 11.1 0.45 9.5 2.62 12.2 1.75

SS (grados Brix).



Fruta IM = SS/ AT
Naranja Navel 20.97
Naranja Salustre 24.67
Limn 3.62
Pomelo 6.98