EVALUACIN DE PRETRATAMIENTO DE AIREACIN PARA

PREPARAR UN INCULO PARA EL HIDRGENO DE DOS ETAPAS

Y EL PROCESO DE PRODUCCIN DE METANO
Andrea Giordano, Valentina Sarli, Maria Cristina Lavagnolo, Alessandro Spagni
a
Acqua & Sole, Manzola Fornace, Corteolona, PV, Italia
b
ENEA, la Agencia Nacional Italiana para las Nuevas Tecnologas, la Energa y el Medio
Ambiente, la Seccin de Gestin del Agua, Bologna, Italia
c
Departamento de Ingeniera Industrial, Universidad de Padova, a travs Marzolo 9, 35131
Padua, Italia

Recibido el 19 de Marzo 2014,
Revisada 08 de mayo 2014,
Aceptado 10 mayo de 2014,
Disponible en lnea 17 de mayo 2014

REFLEJOS
Estrs aerbico se evalu para la seleccin de un H
2
-produccin de inculo.
El potencial de hidrgeno bioqumica fue probado en los residuos de la industria
alimentaria.
El inculo producido fue eficaz en H
2
y CH
4
de produccin en un proceso de dos
etapas.
Una alta recuperacin de energa en forma de H
2
y CH
4
se logr a partir de residuos.

ABSTRACTO
Este estudio evala el efecto del pretratamiento de aireacin para preparar un inculo para
H
2
y CH
4
de produccin en un proceso de dos etapas. Adems, se evalu el potencial de
hidrgeno bioqumica y el potencial de metano bioqumica de los residuos de la industria
de la alimentacin en un proceso de dos etapas. Los resultados confirmaron la posibilidad
de utilizar un estrs aerbico para la seleccin de un inculo de hidrgeno productoras. El
inculo era bastante estable ya que no se observ actividad hidrogentrfica-metanognica
durante 25 das. Los rendimientos medidos utilizando glucosa como sustrato fueron de
aproximadamente 160 y

de glucosa para la obtencin de hidrgeno y

metano, respectivamente, que estn de acuerdo con otros estudios que utilizan choque
trmico para el tratamiento previo del inculo. Cuando se utilizan residuos de la industria
alimentaria (molienda de trigo) como sustrato, un menor rendimiento de H
2
se logra
mediante el inculo pretratado aerbicamente si se compara con choque trmico, sin
embargo, cuando se combina con la produccin de metano en un proceso de dos etapas,
mucho mayor rendimiento de CH
4
ese alcanz.
Palabras clave
Produccin biolgica de hidrgeno; el metano; fermentacin oscura; los desperdicios de
alimentos; trigo.

1. Introduccin
Durante la ltima dcada, importantes esfuerzos se han dedicado a desarrollar
tecnologas ambientalmente sostenibles para la produccin de hidrgeno; de hecho,
mientras que el hidrgeno es un vector energtico limpio, hoy en da se produce sobre todo
el uso de combustibles fsiles no renovables ( Das y Veziroglu, 2001).
La Produccin biolgica de hidrgeno se puede realizar a travs de los procesos
fotosintticos o oscuros fermentativa (Das y Veziroglu, 2001). Recientemente se han
propuesto varios procesos biotecnolgicos que se aplican diferentes condiciones de
funcionamiento (sustratos puros y mixtos, cultivos puros y mixtos, por lotes y reactores
continuos, etc) para la produccin biolgica de hidrgeno (Das y Veziroglu, 2001). El uso
de cultivos mixtos parece ser ms prometedor en comparacin con cultivos puros, ya que se
pueden adaptar fcilmente a diferentes sustratos pertenecientes a los recursos renovables o
de residuos orgnicos. Por otra parte, bien desarrollados y en gran medida aplicados los
sistemas tecnolgicos para el tratamiento anaerbico de las aguas residuales y los desechos
slidos orgnicos podran adaptarse fcilmente para la produccin de hidrgeno (Li y Fang,
2007).
Aunque numerosas bacterias son capaces de producir hidrgeno, durante anaerbica
procesos de produccin de hidrgeno por lo general no se detecta debido a su rpida
utilizacin por otros microorganismos (Das y Veziroglu, 2001). En la realizacin de
pruebas de produccin de biohidrgeno, por lo tanto, el inculo es por lo general
trmicamente (principalmente) o pretratado qumicamente con el fin de eliminar
consumidores de hidrgeno mientras que las bacterias que producen hidrgeno son capaces
de sobrevivir debido a su capacidad de producir esporas (Li y Fang, 2007). Sin embargo,
estos pretratamientos son muy caros obstaculizar la aplicacin del proceso. Adems, el
nuevo crecimiento de los metangenos hidrogenotrficas a veces se ha observado
(Doungmanee et al., 2007 y Spagni et al., 2010), lo que impide o limita la aplicacin de
los sistemas de produccin continuos de biohidrgeno. Spagni et al. (2010) demostraron el
nuevo crecimiento de los metangenos, puede verse obstaculizado por el control de la
velocidad de carga orgnica en el reactor. Por el contrario, Doungmanee et al. (2007)
propusieron para controlar el crecimiento de los metangenos por la exposicin repetida del
lodo a alta temperatura (90 C durante 20 min).
La aireacin tambin se ha evaluado como tratamiento previo para la cosecha de la
produccin de biomasa de hidrgeno (Chang et al., 2011 , Ren et al., 2008 , Wang y Wan,
2008 y Zhu y Beland, 2006). Aunque la aireacin es tambin un proceso exigente de
energa que fcilmente podra ser implementada en muchas plantas, sopladores ya estn
disponibles en muchos sitios (por ejemplo, en plantas de tratamiento de aguas
residuales). Por otra parte, el uso de aireacin para controlar el proceso si el cambio de
H
2
se observa que producen a las condiciones hidrogenotrficas metanognicas parece ser
ms fcil que el uso de tratamiento trmico previo. De hecho, la aireacin requiere
sopladores y difusores que podran ser fcilmente movidos o son incluso ya estn
disponibles en el sitio, mientras que el tratamiento trmico tambin requiere de un equipo
que debe ser resistente al choque trmico.
Dado que los procesos fermentativos oscuros producen cidos grasos voltiles (AGVs)
junto con hidrgeno, se ha propuesto recientemente un proceso de dos pasos donde se
utilizan los AGVs producidos como sustrato para la produccin de metano biolgica
(Antonopoulou et al., 2008a ,Antonopoulou et al., 2008b , Chu et al., 2012 , Cooney et al.,
2007 , Hawkes et al., 2008 , Jung et al., 2013 ,Lu et al., 2009 , Venkata Mohan et al., 2008 ,
Xie et al., 2008a , Xie et al., 2008b y Zhu et al., 2008).Algunos estudios tambin han
demostrado que el proceso de dos etapas para H
2
y CH
4
produccin puede aumentar el
rendimiento de metano en la segunda etapa probablemente debido a la mejora de la
hidrlisis en la primera etapa ( Liu et al., 2006 y Pakarinen et al. , 2011 ).
Los mtodos normalizados para la determinacin del potencial de metano bioqumica
(BMP) de compuestos orgnicos se han aplicado por un largo tiempo (Angelidaki y col.,
2009) y tambin se han propuesto ensayos de lotes similares para evaluar el potencial de
hidrgeno bioqumica (BHP) de varios sustratos (e.g., Liu et al., 2013). Adems, un ensayo
de lote ha sido sugerido recientemente para la determinacin del potencial de hidrgeno y
metano para el proceso de fermentacin de dos etapas (Giordano et al., 2011).
Para el mejor conocimiento de los autores, no se han realizado estudios para evaluar el
pretratamiento aerobio de inculo para H
2
y CH
4
de produccin en el proceso de dos etapas,
y, adems, para evaluar especficamente la "estabilidad" de la produccin de hidrgeno
biomasa (es decir, si se observa bacterias que consumen hidrgeno nuevo crecimiento). Por
lo tanto, los objetivos del presente estudio son: (i) evaluar el uso de la tensin aerbico para
desarrollar un inculo de hidrgeno que producen; (ii) evaluar la "estabilidad" del inculo
de hidrgeno que producen (es decir, evaluar si se observa rebrote de metangenos
hidrogenotrficas); y (iii) evaluar la BHP y BMP de residuos orgnicos como un proceso
de dos etapas simulada (es decir, la produccin de biohidrgeno seguido por la produccin
de biometano en el AGV producido) utilizando el inculo preparado.

2. Mtodos
2.1. Sustratos
Glucosa (reactivos Carlo Erba, Italia) se utiliz como sustrato para ambas pruebas
BHP y BMP. Por otra parte, dos residuos de una industria tpica comida italiana (es decir,
el procesamiento de molino de harina) se utilizaron como materia prima: el salvado (i) de
trigo Triticum durum para la produccin de trigo duro de la pasta italiana tpica (producido
en un molino de harina en el provincia de Pava, Italia del Norte); (ii) el salvado de
trigo Triticum aestivum para la produccin del pan de trigo comn (producido en un molino
de harina en la provincia de Alessandria, norte de Italia). Antes de su uso, los desechos se
almacenaron a -20 C.
De slidos totales (TS) y slidos voltiles (VS) del salvado de trigo (tanto blando y
duro) eran 88% y 84%, respectivamente.
2.2. Inculo y pretratamiento aerbico
El lodo mesoflico granular procedente de una escala completa de flujo ascendente
de manto de lodos anaerobios (UASB) tratamiento de los residuos de la industria
alimentaria (procesamiento de papa) se utiliz como inculo para la estimacin del
potencial de hidrgeno bioqumico y el metano ( Giordano et al., 2011 ). El lodo tena un
contenido de TS y VS de 124 20 y 83 8 g L
-1
, respectivamente, mientras que el pH fue
de 7,3 0,5.
Pretratamiento aerbico se llev a cabo el mantenimiento de aproximadamente 2L
de la lodo granular aireado continuamente en un recipiente de plexigls usando un soplador
de acuario y una piedra porosa. La aireacin se mantuvo a aproximadamente 100
L
aire
L
lodos
-1
h
-1
. Despus de 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12 y 14 das de la aireacin, el lodo
granular se utiliz para la determinacin de la BHP.
El mismo lodo granular sin tratamiento previo se utiliz para la determinacin de la BMP.
2.3. La produccin de hidrgeno mediante fangos aerbicos pretratadas
Los experimentos se llevaron a cabo en el modo por lotes, en 1 L de botellas de
Pyrex de vidrio mantenido a temperatura constante (35 1 C) en un armario termosttico.
Para cada duracin (2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12 y 14 das) del pretratamiento aerbico,
dos botellas se prepararon con 120 g (peso-goteo hmedo) de inculo y 6,9 g de glucosa. El
pH se corrigi a 7,2 0,1 mediante el uso de monohidrato de carbonato de sodio
(aproximadamente 0,25 a 0,6 g). Se aadi agua del grifo para alcanzar el volumen final de
600 ml, lo que resulta en una concentracin de glucosa de 11,5 g L
-1
(12,305 g de DQO
(demanda qumica de oxgeno) L
-1
; 64 mmol L
-1
).
Las botellas se sellaron hermticamente con tapones de rosca ("la serie C Omnifit")
que contenan tres vlvulas para toma de muestras. Las condiciones anaerobias se
obtuvieron por lavado de las botellas con N
2
durante aproximadamente 5-10 minutos antes
del comienzo de los experimentos.
Dos botellas "en blanco" se prepararon como se ha descrito anteriormente pero sin
la adicin de glucosa. Todos los resultados se han expresado como valores netos (restando
el espacio en blanco).
Ms detalles de los procedimientos, incluyendo la adicin de macro y
microelementos, se presentan en otras partes ( Giordano et al., 2011 ).
2.4. Estabilidad del inculo aerbico pretratado para la produccin biolgica de
hidrgeno
Para este experimento, tres botellas (preparado como se describe en la Seccin 2.3 )
se llenaron con 120 g (peso-goteo hmedo) de lodos aerbicamente (durante 4 das)
pretratados, 6,9 g de glucosa y agua del grifo hasta un volumen final de 600 ml. Cuando la
glucosa se agota, tambin resaltado por el final de la produccin biolgica de hidrgeno, se
aadi otro 6,9 g de glucosa dos veces consecutivas (sin ningn tipo de lodos adicional).
Los ensayos se realizaron a 35 1 C.
Dos botellas en blanco tambin se organizaron como se describe en la Seccin 2.3 .
2.5. Potencial de hidrgeno Bioqumica (BHP) y la subsiguiente potencial bioqumico de
metano (BMP)
Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con el mtodo para la estimacin de
BHP y BMP describen en Giordano et al. (2011) .
Tres botellas de 1L se llenaron con 120 g de lodo granular aerbicamente pretratado
(de 4 das de aireacin), los sustratos y agua del grifo hasta el volumen final de 600 ml. Al
comienzo de la prueba, si es necesario, el pH se corrigi a 7,2 0,1 mediante la adicin de
Na
2
CO
3
H
2
O. Los sustratos ensayados fueron dos residuos de la industria alimentaria
(vase la seccin 2.1 ) y la glucosa para la comparacin: las pruebas se realizaron con
aproximadamente (se midieron las cantidades precisas para cada botella) 15-16 g de
residuos del proceso de molienda.
Las botellas se sellaron hermticas utilizando los mismos tapones de rosca (Omnifit
Serie C) descrito anteriormente y se incubaron a 35 1 C hasta el final de la produccin
de hidrgeno.
Entonces, para la evaluacin de la BMP, 120 g de lodo granular no tratada
previamente (por lo tanto, que contiene bacterias metanognicas) se aadieron a cada
botella con el fin de evaluar la produccin de metano a partir de los AGVs
producidos. Debido a la disminucin del pH medido durante los procesos de produccin de
hidrgeno, 1.6 a 2.5 g de Na
2
CO
3
H
2
O se aadieron a las botellas con el fin de
aumentar el pH a 7,2 0,1 para optimizar la produccin de biometano.
Dos botellas en blanco se organizaron tambin en estos experimentos como se
describe en la Seccin2.3 .
2.6. Los anlisis
La produccin de gas se midi a temperatura ambiente usando el mtodo de
desplazamiento de agua en una solucin de hidrxido de sodio (1 M) para permitir la
eliminacin de dixido de carbono. Los volmenes de gas se convirtieron a condiciones
estndar (STP). El volumen de gas producido se corrigi sustrayendo la produccin de los
"espacios en blanco" botellas.
Muestras de lquidos y gases se recogieron a travs de las vlvulas de los tapones de
rosca. Se tomaron muestras de gas del espacio de cabeza de las botellas utilizando una
jeringa hermtica 2-ml.Las muestras lquidas se centrifugaron durante 15 min a 5000 g y se
filtraron utilizando filtros de nylon (Millipore) con 0,45 m de porosidad. Las muestras de
licor mezclado se utilizaron para la medicin de AGVs, la glucosa y pH.
La composicin del gas y de AGV (actico (HAc), propinico (HPr), i - (Hibu) y n -
butrico (HnBu), valrico (HVa), caproico (HCa) y heptanoico (HHe) cidos) se midieron
mediante cromatografa de gases tcnicas que se describen en Spagni et al. (2010) . AGVs
se expresaron como COD para la estimacin de balance de masa, de acuerdo con las
siguientes equivalencias (unidad en g de DQO / g de cido) informado por Batstone et al.
(2002) : 1,07 por HAc, 1,51 para HPr, 1,82 para HnBu, 2,04 para la HVA, 2,21 para HCa y
2,34 para HHe (ntese que Hibu nunca se detect en este estudio). El pH se midi
utilizando sondas de Crison y el pH-metro. TS y VS se midieron segn los Standard
Methods ( APHA et al., 2005 ).
DQO de la materia prima se estim por la oxidacin de aproximadamente 1 g de
sustrato con dicromato de acidificada de acuerdo con el mtodo de reflujo abierto descrito
en mtodos estndar ( APHA et al., 2005 ).
La glucosa se midi segn el mtodo de fenol-cido sulfrico ( Dubois et al.,
1956 ). La glucosa tambin se expres en trminos de DQO (g
C O D g l u
) Utilizando la
equivalencia de 1,07 g de DQO / g de glucosa.

2.7. La estimacin del rendimiento de biogs y la masa equilibrio
Varias unidades diferentes se han utilizado para estimar el rendimiento de
produccin de hidrgeno, que hace que la comparacin entre los sustratos difciles. En este
estudio, la cantidad de electrones (como el bacalao) se utilizaron para el balance de masa y
la estimacin del rendimiento como se propuso anteriormente en Giordano et
al. (2011) ; Por otra parte, las estimaciones se realizaron sobre la base de los sustratos
aplicados en lugar de los convertidos porque la cantidad de sustratos convertidos no
siempre se puede determinar para sustratos complejos ( Kraemer y Bagley, 2005 ). La
equivalencia de g
DQO
/ g de AGV, H
2
, CH
4
y la glucosa se asumi desde Batstone et
al. (2002).
Los rendimientos de gas (como%) tambin se estimaron, en base COD, respecto a la
cantidad inicial de los sustratos con el fin de evaluar la fraccin de la materia orgnica
(como la equivalencia de electrones) que se puede convertir a los gases energticos, usando
la siguiente ecuacin:
Ecuacin( 1 )

donde Ri es la recuperacin de gas i (H
2
o CH
4
;% COD / DQO), Pi es el acumulativo
(final) H mximo
2
o CH
4
(mol) producido, COD es la cantidad de sustratos aadido (g
COD) al comienzo del experimento (es decir, al comienzo de la prueba BHP), y Fi es la
equivalencia de la DQO (gcod / mol), es decir, 16 y 64 para H
2
y CH
4
(Batstone et al.,
2002 ).
Glucosa y AGV tambin se expresaron en trminos de COD (vase la seccin 2.6 ).
3. Resultados y discusin
3.1. Efecto del pretratamiento aerbico sobre la produccin de biohidrgeno
Aireacin continua durante 2 das alterada en gran medida el aspecto de los
grnulos, ya que su color cambi de oscuro-negro (tpico del lodo granular anaerbico) a
brillante gris-marrn. Sin embargo, el pretratamiento aerobio duracin de 2 das no fue
suficiente para inhibir completamente los metangenos hidrogenotrficas desde el biogs
producido presentaron una cantidad significativa de metano (aproximadamente
20%). Como resultado, el rendimiento de hidrgeno medido era de

(Fig.
1).



Figura 1. Acumulada de gas (hidrgeno) de produccin especfica (CGP) tendencias
medidas de diferente duracin (2-14 das) del tratamiento previo de aireacin. Los valores
medios de dos repeticiones.
El rendimiento de hidrgeno obtenido con la duracin de aireacin de 3-12 das fue
mayor que el anterior (aireacin de 2 das), que muestra los valores
de

. El biogs se componen principalmente de hidrgeno con una

concentracin que vara de 60% a 70% y la parte restante en forma de CO
2
, mientras que la
concentracin de metano estaba por debajo del lmite de deteccin del instrumento (2%),
confirmando la eficacia del pretratamiento aerbico en el seleccin de una biomasa capaz
de producir biolgicamente hidrgeno ( Ren et al., 2008 ).
La aireacin de lodos prolongado hasta 14 das caus una disminucin de la medida
H
2
rendimiento (

). Sin embargo, contrariamente a la pre-tratamiento

aerbico duracin de 2 das, no hay metano se midi en el biogs; Por otra parte, ninguna
de glucosa se detect al final de la prueba que confirma que el sustrato se agote
completamente durante el metabolismo fermentativo. Por lo tanto, un tratamiento aerbico
prolongado pareci cambiar las bacterias reacciones bioqumicas a las vas no relacionadas
con la produccin biolgica de hidrgeno. De hecho, es bien sabido que las diferentes vas
fermentativas de monosacridos y cidos pueden dar lugar a diferentes H
2
rendimientos (Li
y Fang, 2007). Por ejemplo, 4 o 2 moles de H
2
puede ser producido a partir de la
fermentacin de la glucosa si los productos finales incluyen el cido actico o butrico,
respectivamente; adems, algunos otros productos finales de fermentacin, como el etanol,
lactato o propionato pueden conducir a ninguna produccin o, incluso, el consumo de
hidrgeno ( Li y Fang, 2007 y Guo et al., 2010). Sin embargo, ya que el AGV no fueron
controlados en este experimento, el efecto de la duracin del tratamiento previo aerbico en
las vas fermentativas requiere ms investigaciones.
Los rendimientos de hidrgeno obtenidos de

son
equivalentes a 1,0-1,2 mol de H
2
por mol de glucosa (

), Que se incluyen en
los intervalos obtenidos en los estudios anteriores y la aplicacin de las condiciones de
funcionamiento similares pero utilizando otro tratamiento previo (por ejemplo, choque
trmico) para el inculo (Giordano et al., 2011 y Li y Fang, 2007). Estos resultados, por el
contrario, son diferentes a los obtenidos por Chang et al. (2011) que alcanz la produccin
de hidrgeno por un inculo aerbicamente pretratado que eran mucho ms bajos que los
obtenidos por cido, base o pretratamiento de choque trmico. Por otra parte, los mismos
autores (Chang et al., 2011) aplican un tratamiento previo aerbicos con una duracin de 24
h, que es 3 veces menor de lo que se requiere en este estudio para inhibir completamente
los metangenos. Sin embargo, ellos (Chang et al., 2011) utiliz como inculo la biomasa
obtenida por un proceso de lodos activados (obtenida de un proceso de tratamiento aerbico
de aguas residuales), que ya se aclimataron a las condiciones aerbicas y, supuestamente,
que carece de actividad metanognicas.
Wang y Wan (2008) tambin encontraron que 24 h de aireacin de lodos obtenida
de un digestor anaerbico primaria fueron suficientes para seleccionar para un inculo de
hidrgeno productoras: sin embargo, de nuevo, los rendimientos obtenidos por el
tratamiento previo de hidrgeno aerbico eran mucho ms bajos que los obtenidos por
choque trmico. Por otra parte, Zhu y Beland (2006) demostraron que el pretratamiento de
aireacin de 30 min de los lodos recogidos de un digestor anaerbico primaria no inhibi
completamente la actividad metanognicas, que confirma que la aireacin ya debera estar
obligada a seleccionar un inculo de hidrgeno que producen. Por el contrario, Ren et al.
(2008) informaron de la desaireacin repetida (es decir, mediante el control de la
concentracin de oxgeno disuelto y la alimentacin de glucosa) como el mtodo de
pretratamiento ms eficaz para la seleccin de produccin hidrgeno de la comunidad
microbiana. Este estudio, por lo tanto, lo que confirma los rendimientos obtenidos en
estudios previos utilizando como inculo el mismo lodo anaerbico, pero despus del
tratamiento trmico (Giordano et al., 2011), apoya la conclusin de que la fuente de inculo
y de otros factores, tales como la duracin o la intensidad del tratamiento, afectados en gran
medida la eficacia del tratamiento previo (Ren et al., 2008 y Li et al., 2010).
Los resultados muestran que se requieren de 3-4 das para obtener la biomasa de
hidrgeno productoras de lodo granular anaerbico. El largo tiempo que se necesita para
inhibir los metangenos hidrogenotrficas observados en este estudio se puede explicar por
la fuerte relacin fsica entre los micro-organismos en lodo granular. De hecho, el
pretratamiento trmico tambin se ha observado que es ms largo para grnulos anaerobios
que para lodos anaerobios suspendidos (Alibardi et al., 2012).Adems, alta tolerancia de
grnulos anaerobios tambin se ha descrito anteriormente para condiciones cidas ya se
encontraron metangenos a ser muy activo en los sistemas que producen hidrgeno a pH de
4.5 a 5.5 operados (Spagni et al., 2010 y Zhou y Ren, 2007).
3.2. Estabilidad del inculo aerbico pretratado para la produccin biolgica de
hidrgeno
El experimento se llev a cabo utilizando el lodo granular aerbicamente
pretratados durante 4 das.
La degradacin anaerobia de la glucosa mostr una produccin total de hidrgeno
de 1122 44 ml, resultando un rendimiento de

)
Despus de 7 das (carga de glucosa I en la figura. 2a). Este rendimiento fue ligeramente
ms alto que el valor obtenido en el experimento anterior (

informa en la
seccin 3.1) para la misma duracin de tratamiento previo (4 das) lo que sugiere una ligera
variabilidad del procedimiento.

Figura 2. Tendencias para (a) de gas especfica acumulada (H
2
) Produccin (CGP), (b)
los cidos grasos voltiles (AGVs) y (c) COD balance de masa se mide por adiciones
repetidas de sustrato. Bares para los errores estndar.

Con la segunda carga de glucosa, se logr un rendimiento mucho ms bajo que el
primero, que alcanz el valor de

. La tercera adems mostr un rendimiento

de H
2
de

, Que era an ms baja que los dos primeros (Fig.

2a). Composicin de biogs consisti de hidrgeno con una concentracin de 60-70% con
el porcentaje restante de dixido de carbono. No se observ una variacin significativa de
la composicin del biogs para las siguientes cargas. Las concentraciones de metano eran
siempre por debajo del lmite de deteccin del instrumento para toda la duracin del
experimento de 25 das. Por lo tanto, el tratamiento previo aerbico inhibida de forma
estable metangenos hidrogenotrficas al menos durante la duracin del experimento.
Los resultados muestran que aunque no se observ actividad metanognicas, la
segunda y la tercera adicin de glucosa produjo una cantidad mucho menor de
hidrgeno. El anlisis qumico (datos no mostrados) revel el consumo de glucosa siempre
por encima de 94% al final de cada carga (es decir, justo antes de la segunda y tercera
carga) lo que sugiere que la inferior H
2
produccin no fue causada por una utilizacin de
sustrato limitada. Las tendencias VFAs demostraron que las diferentes vas metablicas
participaron durante las adiciones posteriores de sustratos. HnBu fue el principal cido
producido durante la fermentacin de la primera carga de glucosa, alcanzando la
concentracin de 33 mmoles L
-1
(Fig. 2b). HAc mostr una concentracin ligeramente
inferior (30mmol L
-1
) que HnBu. Los otros cidos monitorizados, por el contrario,
mostraron concentraciones muy bajas con los valores generalmente inferiores al lmite de
deteccin del instrumento (0,05-0,1 mmol L
-1
dependiendo del cido), con la excepcin de
HCa que mostr un valor de hasta 4,0 mmoles L
-1
justo antes de la segunda adicin de
glucosa.
El cido actico es el producto final preferible del proceso fermentativo oscuro
desde 4 moles de H
2
puede ser tericamente obtiene a partir de 1 mol de glucosa (Guo et al,
2010.); metabolismo microbiano a travs de la va de butirato, en cambio, conduce a un
rendimiento de

(Guo et al., 2010 ). De acuerdo con los rendimientos

tericos de

y 1

1 de las reacciones fermentativas oscuros

(Guo et al., 2010), y para la concentracin de cido (HAc = 30 mmol L
-1
y HnBu = 33
mmol L
-1
) medida en el extremo de la primera carga, la produccin de se puede esperar (2
moles de H 2 / mol de HAc producido y HnBu).
Dado que el volumen final de lquido de las botellas era 0,6 L, la cantidad de H
2

producido, se estima en 1.694 ml (126 mmoles L
-1
* 22,414 ml mmol
-1
* 0,6 L). Este
resultado confirma que el hidrgeno producido es de 66% (1122 mL/1694 ml * 100) de la
cantidad prevista por las reacciones estequiomtricas. El que carece de 44% podra estar
relacionado con la participacin de otras reacciones metablicas que no producen o incluso
consumen hidrgeno (ver ms abajo). La segunda adicin de glucosa se caracteriza por una
muy alta acumulacin de cido propinico (Fig. 2b). Por otra parte, la concentracin de
HAc aument an ms hasta el 50 mol
HAc
L
-1
, que super los valores HnBu. El cido
caproico tambin se detect durante la primera carga, ligeramente acumulada despus de
cargar el segundo glucosa hasta la concentracin de 7,6 mmol L
-1
.
El cido propinico es el producto de un consumo de reaccin de H
2
(Guo et al.,
2010). La produccin de 28 mmol L
-1
de HPr podra estar relacionado con un consumo de
una cantidad equivalente de H
2
(Guo et al., 2010), que dio lugar a un acumulado H
2
el
consumo de 277 ml (28 mmol L
-1
* 22.414 ml mmol
-1
* 0.6 L). Aunque HAc se considera
generalmente como el producto final preferible de la metabolismo de la produccin de
biohidrgeno, varias especies microbianas tambin pueden usar que el cido para un H
2

proceso que consume con una estequiometra de

(Antonopoulou et al.,
2008a y Guo et al., 2010). Adems, el aumento concomitante de HAc y HPr observ para
la segunda carga de glucosa, lo que result en un bajo H2 rendimiento, tambin podra ser
justificado por las reacciones bioqumicas que son neutros para el rendimiento de hidrgeno
tal como la fermentacin de cido lctico (Antonopoulou y col., 2008a). Sin embargo,
puesto que el cido lctico no se control en este estudio, esta va puede no ser confirmado.
La tercera carga se caracteriz por la formacin de cidos voltiles grasos de alto
peso, como HVA (hasta 7,0 mmol L
-1
) y HCa (hasta 16,0 mmol L
-1
), aunque todava no se
observ un ligero incremento adicional de HAc y HnBu. El cido propinico, por el
contrario, se mantuvo casi estable lo que sugiere que el HPr producido (es decir, un H
2

consumido en el proceso) en las vas metablicas no estuvo involucrado durante la tercera
carga.
Es de sealar que se observaron dos picos de HHe justo despus de la segunda y
tercera adicin de glucosa (Fig. 2 b). Sin embargo, este cido graso de cadena larga se
consumi durante el metabolismo fermentativo, probablemente con la produccin de AGV
de cadena ms corta.
La formacin de cidos grasos de cadena larga puede justificar (al menos hasta
cierto punto) el H inferior 2 rendimientos de la segunda y tercera carga que el primero. De
hecho, tiene un peso molecular ms alto y, por lo tanto, un mayor contenido de DQO, la
mayor parte de los electrones se mantuvo dentro de la materia orgnica en lugar de ser
dirigido a la H 2 molcula.
Uso de las equivalencias COD informa en la seccin 2.7 , un balance de masas COD
se llev a cabo en la glucosa alimentado al sistema y los productos (H 2 y AGVs) medida
en el extremo de cada carga. Este balance de masas revel un cierre COD limitado (Fig. 2
c). La recuperacin del bacalao como H 2 era bastante limitado, aunque de acuerdo con un
estudio previo (Giordano et al., 2011 ), mostrando recuperaciones del 10,1% de la primera
carga al 6,6% y 4,6% para el segundo y el tercero de carga, respectivamente. La
recuperacin del bacalao como AGV tambin disminuy del 66% al 59% y el 49% medido
por primera, segunda y tercera carga de glucosa, respectivamente. Cabe sealar que la
recuperacin total de la disminucin de DQO (es decir, H 2 y AGVs) que pasa desde la
primera (77%) a la segunda (66%) y la tercera (54%) de carga soporta la hiptesis de que
otras rutas metablicas podran han participado durante la adicin posterior de la glucosa.
De hecho, otros productos finales de los procesos oscuros-fermentativa (tales como etanol y
cido lctico) que no estn involucrados en H 2produccin de proceso (y no fueron
controlados en este estudio) tambin se han descrito ( Guo et al., 2010 ).
Adems, varios estudios (por ejemplo, Wang et al., 2008) han demostrado que la
acumulacin de los productos finales (por ejemplo, etanol, cido actico, cido lctico) del
metabolismo fermentativo tambin pueden inhibir significativamente la produccin de
biohidrgeno.
La produccin de hidrgeno caus una disminucin del pH desde 7,7 hasta 4,7
despus de la degradacin de la primera cantidad de glucosa. Debido a que el pH no se
corrigi, ya que las condiciones cidas deben mejorar biolgica H 2 de produccin (Li y
Fang, 2007), que se redujo a 4,2 con la segunda adicin de glucosa y se mantuvo estable
con el tercero. Para la produccin biolgica de hidrgeno por dark-fermentacin, el valor
de pH ptimo parece estar cerca de 5.5 ( Li y Fang, 2007 ). Por lo tanto, los rendimientos
de hidrgeno reducidos tambin pueden ser causados por una inhibicin parcial debido a
los muy bajos valores de pH medidos en las botellas.
3.3. La produccin de hidrgeno y la produccin de metano subsiguiente
Todas las pruebas de BHP y BMP mostraron muy poco o incluso ningn retraso de fase de
confirmar la idoneidad del inculo utilizado y el tratamiento previo aplicado para el
hidrgeno y la produccin de metano (Fig. 3).

Figura 3. La produccin de gas acumulativo especfico (CGP) para medir el potencial de
hidrgeno bioqumica (BHP) y el potencial de metano bioqumica (BMP) de (a) glucosa,
(b) duro y (c) de trigo comn. Bares para los errores estndar.
Degradacin de la glucosa anaerbica por fermentacin oscura mostr un
rendimiento de produccin de hidrgeno de

(Fig. 3 a)
correspondiente a una

. Este resultado es
completamente de acuerdo con los ensayos descritos en la seccin anterior.
Los rendimientos de hidrgeno obtenidos a partir de desechos de la industria
alimentaria por el proceso fermentativo eran, sin embargo, mucho menor que la obtenida a
partir de glucosa, que muestra los valores de 45.8 0.4 y

para el trigo
duro y el trigo blando, respectivamente. Estos valores son inferiores a los obtenidos
por Hawkes et al. (2008) quienes reportaron rendimientos de

55 y en este estudio, utilizando la misma

unidad). Estos valores tambin son ms bajos que los rendimientos obtenidos por los
mismos sustratos en un estudio anterior utilizando el mismo inculo que era, sin embargo,
tratados por choque trmico (Giordano et al., 2011). Por lo tanto, los resultados de este
estudio sugieren que un H inferior
2
se obtiene el rendimiento cuando se utiliza un inculo
aerbicamente pretratado que cuando se utiliza el tratamiento trmico. Sin embargo, con
respecto al estudio anterior (Giordano et al., 2011), los residuos de comida industrial, se
almacen durante aproximadamente un ao en el laboratorio antes de su uso y, por lo tanto,
aunque los sustratos eran relativamente seco y se almacenaron a -20 C, una degradacin
parcial podra haber ocurrido. Adems, estas diferencias podran ser tambin debido a los
residuos heterogeneidad.
Es de destacar que, aunque las pruebas BHP se prolong durante casi una semana,
ms de 60% de hidrgeno se produce en los dos primeros das para todos los sustratos, lo
que confirma la alta actividad de los H
2
-microorganismos productores (Giordano et al.,
2011). Como era de esperar, los AGV se produjeron durante el proceso de produccin
biolgica de hidrgeno, y rpidamente degradado por las bacterias metanognicas (Fig.
4). HnBu y HAc fueron los dos principales AGV producidos para todos los substratos. Sin
embargo, mientras HnBu fue el cido graso principal producido durante la fermentacin de
la glucosa, HAc predomin cuando se usaron los dos residuos como alimento. A pesar de
esto, la fermentacin de los dos residuos result en H mucho ms baja
2
rendimientos. Por
otra parte, se observ la mayor concentracin HAc durante la fermentacin del trigo blando
(Fig. 4c), que, sin embargo, mostr el ms bajo rendimiento de H
2
entre los tres sustratos
ensayados. Este resultado sugiere que las vas fermentativas que producen cidos actico,
pero no producen H
2
o incluso consumen H
2
(Antonopoulou et al., 2008a y Guo et al.,
2010)

Figura 4. Los cidos grasos voltiles (AGVs) medidos para el potencial de hidrgeno
bioqumica (BHP) y el potencial de metano bioqumica (BMP) de (a) glucosa, (b) duro y
(c) de trigo comn.

El otro VFAs supervisado siempre mostr concentraciones muy bajas, lo que
confirma que su produccin se produjo con muy alta carga y en condiciones cidas, medido
durante el experimento anterior (vase la Seccin 3.2 ).
Los resultados confirman la eficacia de la utilizacin de los AGVs producidos por el
proceso de produccin biolgica de hidrgeno como sustrato para la produccin de metano
a travs de los procesos anaerbicos (Giordano et al., 2011 , Antonopoulou et al., 2008a y
Antonopoulou et al., 2008b).
El AGV se consume completamente en 4-7 das en condiciones metanognicas (es
decir, despus de 11-14 das del experimento, Fig. 4 ), lo que confirma la alta actividad de
los metangenos contenidas en el (no pretratado) inculo. Sin embargo, las tasas de
produccin de metano eran muy diferentes entre los tres sustratos (Fig. 3). De hecho,
mientras que en el mismo periodo (4-7 das) se obtuvo ms de 95% del rendimiento de
metano cuando se utiliza glucosa como sustrato (Fig. 3a), aproximadamente el 72% y el
65% del total de CH
4
rendimientos fueron obtenido para el trigo duro y el trigo blando,
respectivamente (Fig. 3b y c). Este resultado demuestra que, cuando se utiliza glucosa
como sustrato, la produccin de metano se realiza completamente en los AGVs producidos
durante la primera etapa de produccin H
2
, mientras que, durante la fermentacin de los dos
residuos, una cantidad significativa de metano se produce a partir de la orgnica asunto que
pareca estar todava contenida en los sustratos (y no fueron puestos en libertad durante la
primera etapa de produccin H
2
).
La Tabla 1 informa de la recuperacin de gas (tal como se define en la ecuacin.
(1)) obtenidos en este estudio y algunos datos de la literatura para la comparacin. Como ya
se ha dicho (Giordano et al., 2011 y Kraemer y Bagley, 2005), las unidades de uso comn
para la determinacin del rendimiento de hidrgeno (por ejemplo, gas de mol mol de
glucosa o hexosa) hacen difcil la comparacin entre los diferentes materiales (por ejemplo,
des echos). Por lo tanto, el concepto de recuperacin propuesto por Kraemer y Bagley
(2005) adoptada por Giordano et al. (2011) ta mbin se utiliz en este estudio. Un enfoque
similar, mediante el uso de la balanza electrnica equivalente, tambin fue adoptado
por Cota-Navarro et al. (2011) en la evaluacin de los perfiles en H
2
y CH
4
rendimientos
tratamiento de queso en polvo de suero de leche.

Tabla 1. Resumen de los principales resultados para el hidrgeno bioqumica y el potencial
de metano. Los valores se refieren a este estudio como media error estndar.

Sustancia COD / VS
equivalencia
(g DQO/g VS )
rendimiento
de H 2
(ml/g DQO )
rendimiento
de CH 4
(ml/g DQO )
Tipo de
prueba
Tratamiento
previo del
inculo
Recuperacin
de H2 %
COD/DQO
Recuperacin
de (CH4 %
COD/DQO)
Recuperacin
total de gas
(% COD /
DQO)
Referencias
Glucosa 1.07
un
159 9 284 3 Lote Aireacin 10.8 81.2 92.0 Este estudio
Trigo duro 1,19 0,26 45.8 0.4 274 8 Lote Aireacin 3.2 78.1 81.3 Este estudio
Trigo blando 1,14 0,21 29 3 251 9 Lote Aireacin 2.1 71.6 73.7 Este estudio
Glucosa
1.07
un
185 267 Lote Calor 13.3 75.5 88.8
Giordano et al.
(2011)
Trigo duro
1.19 76 243 Lote Calor 5.5 69.5 75.0
Giordano et al.
(2011)
Trigo blando
1.14 47 202 Lote Calor 3.4 57.8 61.2
Giordano et al.
(2011)
Pur de
papas
1.05 177 207 Lote Calor 12.6 59.3 71.9
Giordano et al.
(2011)
Steam-
peeling
1.14 134 183 Lote Calor 9.6 52.3 61.9
Giordano et al.
(2011)
Glucosa 1.07
un
320 248 Lote Calor 22.8 70.8 83.6 (Xie et al.(2008a)
Patatas 1.2
b
271
c
158
c
Lote Calor 15.9 37.6 53.5 (Xie et al.(2008b)
Patatas 1.22 58 192 Continuo NA 4.2 58.8 59.0 Zhu et al.(2008)
Wheatfeed
1.16
d
55
e
228
f
Continuo Calor 3.9 65.0 68.9
Hawkes et
al.(2008)
Mezclar
g

NA
h
25
i
42
i
Continuo Ninguno 2.8 18.9 21.8
Cooney et
al.(2007)
El suero de
queso
NA 41 310 Continuo Ninguno 2.9 88.5 91.4
Antonopoulou et
al. (2008b)
El suero de
queso
1.17
j
74
k
231
k
Continuo Calor 5
k
66
k
71
k

Cota-Navarro et
al. (2011)
Los
desperdicios
de alimentos
1.1 275
l
183
l
Continuo Calor 18.7 52.2 70.9 Han et al.(2005)
Los
desperdicios
de alimentos
1,19-1,46 27-118
l
267-276
l
Continuo Calor 1,8-8,0 76,2-78,9 80,7-84,7 Chu et al.(2012)

un
: Unidad como

.
b
: 1.2 Supuesto valor de Zhu et al. (2008) .
c
: gVS L
-1
.
d
: Supuesto de este estudio.
e
: Asumido el 84% de VS como en este estudio para el trigo.
f
: La produccin de metano se calcul tericamente.
g
: Glucosa + peptona + extracto de levadura.
h
: No disponible.
l
: Calculado a partir de los datos originales que se expresa como moles de gas / mol de
glucosa.
j
: Estimado en lactosa y contenido de casena.
k
: Estimado de equilibrio de e
-
.
l
: Supuesto recuperacin de H
2
y CH
4
.

El total de gas (H
2
y CH
4
) recuperado de la glucosa (92,0%) se aproxima a la de
cierre del balance de masas si el rendimiento del crecimiento de la biomasa de 0,1 g
DQO
de
biomasa por g
DQO
del sustrato (Batstone et al., 2002 se supone). La verificacin de la
balanza de masa confirma que un aumento de la produccin de biohidrgeno al rendimiento
mximo experimental de

(Li y Fang, 2007 y Guo et al., 2010) tiene que

dar lugar a una disminucin de la recuperacin de metano (Giordano et al., 2011).
La recuperacin de gas tambin confirma que mucha ms energa se podra obtener
de los desechos. De hecho, la recuperacin de gas comprendida entre 22% y 91% ha sido
observa da (Tabla 1) dependiendo de la naturaleza de los residuos utilizado, inculo, la
tecnologa y las condiciones de funcionamiento.
Se tiene que destacar, que el pretratamiento aerbico del inculo parece mejorar
significativamente la recuperacin total de gas (10-18%) si se compara con los mismos
residuos cuando el inculo fue pretratado trmicamente (Tabla 1). Esta mejora podra
explicarse por la heterogeneidad de sustrato o de una hidrlisis parcial de los residuos
durante el almacenamiento. Sin embargo, la mejora tambin podra ser debido a una mejor
actividad de hidrlisis del inculo utilizado. De hecho, aunque el objetivo de los
pretratamientos de la inculo es la inhibicin de los metangenos, los tratamientos previos
pueden tambin inhiben la mayor parte de las poblaciones que forman la comunidad
microbiana. Por ejemplo, el pretratamiento trmico (como otros tratamientos fuertes)
seleccionar microorganismos que son capaces de producir esporas. Dado que muchos
microorganismos que producen hidrgeno son capaces de formar esporas, mientras que no
son metangenos (Li y Fang, 2007), pretratamiento tal como choque trmico es a menudo
selectivo para un produccin de H
2
de inculo (Li y Fang, 2007). Sin embargo, los mismos
pretratamientos tambin podran afectar gravemente a otras bacterias que podran tener alta
actividad hidroltica, reduciendo, por lo tanto, la capacidad para degradar sustratos
complejos tales como los residuos o cultivos energticos. Los resultados de este estudio
muestran que bajo H
2
y alta de gas (como la suma de H
2
y CH
4
) los rendimientos( Tabla 1
), por lo tanto, sugieren que el pretratamiento de aireacin puede ser menos eficaz que otros
mtodos en la seleccin de la produccin H
2
de un inculo, mientras que, por el contrario,
podra ser ms adecuado en la preservacin de la actividad hidroltica que puede generar de
una comunidad microbiana ms estructurado. Aunque una investigacin especfica sobre la
comunidad microbiana no se llev a cabo en este estudio, Ren et al. (2008) demostraron
que los diferentes tratamientos previos (trmicos, qumicos, aireacin) provocaron
significativo y diverso cambio de la poblacin microbiana en el inculo. Por otra parte, los
mismos autores ( Ren et al., 2008 ) tambin encontraron que, entre los pretratamientos que
probaron, el pretratamiento aerbico garantiza la ms alta diversidad microbiana,
apoyando, por lo tanto, la hiptesis propuesta en este estudio.
Pakarinen et al. (2011) logr un aumento de hasta 64% de CH
4
en rendimiento
mediante la adicin de un termfilo en la etapa de produccin H
2
antes de una etapa
mesfila metanognicas en un proceso de dos etapas el tratamiento de ensilaje de hierba o
de maz. Sin embargo, el H
2
proucio siempre fue mucho menor que la de CH
4
(de 0,7% a
6,0% en volumen) que confirma los resultados de este estudio que un alto CH
4
se obtiene el
rendimiento cuando H
2
de produccin es relativamente baja.
4. Conclusiones
Los resultados de este estudio confirman la posibilidad de utilizar un estrs aerbico
para la seleccin de una produccin H
2
de inculo. Los rendimientos medidos utilizando
glucosa como sustrato fueron de aproximadamente 160 y

de H
2
y CH
4
,
respectivamente, que estn de acuerdo con otros estudios que utilizan el calor como shock
para cosechar una H
2
productores de inculo.
Cuando se utilizan residuos de la industria alimentaria en la alimentacin, el inculo
celular alcanz un rendimiento de H
2
ligeramente inferior si se compara con choque
trmico; Sin embargo, cuando se combina con la produccin de metano en un proceso de
dos etapas, mucho ms alto rendimiento de CH
4
se logr lo que sugiere una actividad
hidroltica superior del inculo seleccionado.