Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los

Inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los

desacoplantes.

Objetivos


1. Que el alumno relacione el consumo de glucosa con los cambios de pH producidos
por las levaduras.
2. Que el alumno describa las vas por las cuales la glucosa genera los cambios de
pH.
3. Que el alumno interprete el efecto de los inhibidores y los
desacoplantes sobre la salida de protones.

INTRODUCCION

las levaduras tienen un ncleo en donde reside la informacin gentica de la clula,
mitocondrias en donde se lleva a cabo la sntesis de ATP y un retculo endoplsmico y
aparato de Golgi que se encargan de la sntesis de protenas cuya localizacin final es
la membrana plasmtica o el exterior. A nivel de la membrana plasmtica, las
levaduras tienen una ATPasa de H+ que acopla la hidrlisis del ATP con el bombeo de
protones hacia afuera de la clula.

Como resultado de la actividad de la ATPasa de H+ en la levadura, se genera un
gradiente electroqumico de protones que se utiliza para impulsar el transporte de
nutrientes al interior de la clula, proceso catalizado por sistemas de transporte
llamados simportadores o uniportadores. Para darse una idea de la importancia de
esta enzima en la economa celular y en la energizacin de la membrana celular, basta
decir que la ATPasa de H+ consume hasta un 25 % del ATP que se sintetiza en la
clula.


Hiptesis
Si las levaduras consumen glucosa, se observar una disminucin progresiva de su
concentracin en el medio de cultivo con el tiempo y cambios en el pH extracelular.

Material
Tres vasos de precipitado de 100 ml.
Pipeta de 10 ml.
Potencimetro.
Piceta para enjuagar el electrodo del potencimetro.
Levadura (Saccharomyces cerevisiae) 200 mg/ml.
Solucin de glucosa (10%) para una concentracin final de
1%.
Agua destilada.




Mtodo

Experimento.

1 .Se prepar una solucin de levadura con concentracin al 10% en 50ml de agua
destilada, as como una solucin de glucosa al 10% en 50ml de agua destilada.








2. Se determin el Ph de la solucin de lavadura, posteriormente el Ph de la solucin
de glucosa, asi como su peso. Las mediciones de Ph y peso se determinaron dos veces mas
con un intervalo de 3min.






3. se adiciono 5ml de la solucin de glucosa a la solucin de levadura, se tom su
peso.

4. Se determin el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos
2 veces ms.




Anlisis de resultados
1. Se elabor una grfica con los resultados de cada uno de los experimentos;
utilizando los valores de las lecturas de pH vs. Tiempo.










0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5
5
3min 6min 10min 15min 20min 25min 30min 40min 50min
Determinacion de pH
Levadura Glucosa Sol. Levadura Glucosa
2. Analizar el significado de los cambios de pH en el experimento control.

Los cambios de pH en lo solucin de levadura-glucosa se debe a la protonacin de la
glucosa, efecto sucedido por la reaccin de levadura, la cual a nivel celular es
encargada de los acoplamientos de hidrolisis del ATP, el cual funciona como motor de
bombeo de protones H+ hacia a fuera de la clula.


La liberacin de H+ por la accin de la formacin de ATP, acto conseguido por la ATP
sintasa ubicado en la mitocondria de la levadura, al obtener los H+ de la glucosa para
la formacin de ATP as como el bombeo se genera un gradiente electroqumico de
protones que se utiliza para impulsar el transporte de nutrientes al interior de la clula.
Tambin se observ que de la misma forma el peso de la solucin disminua con el
tiempo debido a la liberacin de CO2 durante la fermentacin alcohlica sucedida en
la solucin.


Referencias
1. Pea A. Studies on the mechanism of K+ transport in yeast. Arch Biochem Biophys.
1975; 167:397-409.

2. Pardo JP. La ATPasa de H+ de la membrana plasmtica de los hongos. Mensaje
Bioqumico.