CURSO : Microbiologa Animal

PROFESOR : TAFUR ZEVALLOS, Lizandro

ALUMNA : BONIFACIO ESPINOZA, Jherson
CICLO : 2014 - I


TINGO MARIA 2014







































I. INTRODUCCION

Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos,
razn por la cual es difcil aislarlas. A menudo nuestro inters es caracterizar
una especie bacteriana, para lo cual debemos estar preparados para aislar,
cultivar e identificar a la misma. Si bien el aislamiento es un paso crucial en
este camino, comenzaremos examinando los medios de cultivo, ya que en
estos ltimos se basan muchos de los principios del aislamiento.
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de
los microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias
nutritivas que permitan el desarrollo y reproduccin de microorganismos. La
diversidad metablica de los microorganismos es enorme, por ello, la variedad
de medios de cultivo tambin lo es, no existiendo un medio de cultivo universal
adecuado para todos ellos.
El conocimiento de las necesidades nutritivas y fsicas de los microorganismos
es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado.
Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a
reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan.
OBJETIVOS:
Conocer la clasificacin, preparacin, esterilizacin y distribucin de los
medios de cultivo.
Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparacin
del medio de cultivo en la prctica microbiolgica.
Adquirir prctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir
de sus componentes individuales.
Reconocer la necesidad de evitar la contaminacin tanto de los medios
de cultivo como de los dems elementos utilizados en el laboratorio de
microbiologa.




II. REVISION BIBLIOGRAFICA.

2.1. TIPOS BSICOS DE MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO: SLIDO Y LQUIDO
Una forma muy til de poder aislar, identificar y conservar los
microorganismos es mediante el uso de medios de cultivo,
inicialmente ideados por Pasteur (que como ya sabemos se
considera el padre de la microbiologa), quien se dio
cuenta que los microorganismos podan crecer en soluciones que
tuvieran azcar y una fuente de nitrgeno.
Fue, Robert Koch, mdico alemn dedicado al estudio de los
microorganismos y considerado uno de los autores de la teora
microbiana, quien empez a cultivar y aislar microorganismos. Koch,
buscando mejorar la tcnica utilizada hasta ese momento, decidi
solidificar los medios de cultivo aadindoles que puedan haber en
una muestra (medio slido)
MEDIOS SEMISLIDOS
Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stos un
agente solidificante en una proporcin menor que para preparar
medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad
de las bacterias.

Segn su utilizacin:
a) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes
mnimos para que pueda crecimiento de bacterias que no
necesiten requerimientos especiales. El medio ms conocido de
agar nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al
caldo nutritivo. Otros representantes grupo son el agar tripticase
de soja, el agar Columbia, etc.
b) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las
sustancias nutritivas normales, serie de factores indispensables
para el crecimiento de microorganismos exigentes.
c) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el
crecimiento de ciertas bacterias una poblacin polimicrobiana. El
fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente
de una poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio
selectivo es el caldo selenito, que favorecer el crecimiento de
salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.
d) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un
medio selectivo impiden toda una poblacin microbiana, se
denomina inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse
variante ms restrictiva de los medios selectivos. Los medios
inhibidores se consiguen habitualmente de sustancias
antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el
desarrollo de determinada.
e) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia
caractersticas diferenciar gneros o especies. La adicin de un
azcar fermentable o un sustrato metabolizable este fin. El medio
MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los
grmenes lactosa de aquellos que no lo hacen.
f) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar
alguna cualidad especfica que para reconocer la identidad de un
microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos
asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato
especfico que vaya a ser metabolizado que nos muestre el
resultado.
g) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran
cantidad de clulas a partir de un microorganismo aislado.
Seemplean en la obtencin de vacunas, en la investigacin y en
la industria. Los medios para la multiplicacin suelen ser lquidos.
El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es medios.
h) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa
que, por diversas razones mantener. Fundamentalmente se
utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos
elLaboratorio de Microbiologa.
2.2. ATENDIENDO A SU COMPOSICIN:
Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin,
los medios de cultivo pueden ser clasificados en:
Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los ms
empleados se preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente
de vegetales. Su composicin no es exactamente definida, y por
consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos
inconvenientes en condiciones experimentales, donde la
reproductibilidad no podr ser exacta. En la prctica corriente estos
medios dan excelentes resultados y son los ms empleados.
Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin
exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua
destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de
composicin perfectamente definida.
Medios semisintticos: El gran nmero de factores de crecimiento
exigidos para ciertos grmenes hace que la fabricacin de un medio
sinttico para estos grmenes sea imposible o demasiado cara. En
este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un
extracto orgnico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos,
etc.).Ciertos grmenes no crecen en ningn medio por muy
enriquecido que est ste, hacindolo exclusivamente en clulas
vivas con unas caractersticas determinadas. Ejemplos de este tipo
son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.
SEGN SU ORIGEN:
NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y
cuya composicin qumica no se conoce exactamente.
SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin
qumica definida cuali ycuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultados reproducibles.
SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores
de crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo,
como por ejemplo extracto de levadura.

2.3. MEDIOS DE CULTIVOS COMUNES.

2.3.1. Agar nutritivo:
El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina
para todo tipo de bacteria. Es muy util porque permanece solido incluso a
relativas altas temperaturas. Adems, el crecimiento bacteriano en este
agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias
pequeas.
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece como
una sustancia espesa, con colonias difcilmente observables. El agar
nutritivo contiene normalmente (w/v).
0.5 % Peptona
0.3 % extracto de carne/extracto de levadura
1.5 % agar
0.5% NaCl
Agua destilada
pH casi neutro (6.8) a 25 C.












Agar sangre:

Medio de cultivo slido
Medio general enriquecido de aislamiento
Compuesto por Agar base
Columbia+Sangre de carnero o caballo
Se aade la sangre despus de esterilizar












-Aislamiento de bacterias exigentes
-Deteccin de hemlisis Es un medio de aislamiento especialmente
diseado para facilitar el crecimiento de microorganismos exigentes.
-Est adaptado para el cultivo de la mayora de las especies bacterianas,
con independencia de su metabolismo.
Agar chocolate.
Medio de cultivo enriquecido
Se aade sangre de carnero o caballo antes de esterilizar
Aislamiento de bacterias exigentes















Estreptococo alfa-hemoltico en medio Agar sangre
El agar chocolate se usa para cultivo de bacterias respiratorias
fastidiosas como por ejemplo Haemophilus influenzae


2.3.2. Agar Selectivo.

AGAR MACCONKEY

Lleva cristal violeta, lo que hace que sea selectivo y diferencial
Inhibe el crecimiento de m.o Gram +
Las colonias sospechosas de Shigella no fermentan a la lactosa
Son incoloras y transparentes
Otros microorganismos que fermentan a la lactosa (coliformes) son
colonias rosas o rojizas( Ejem: E.coli).















AGAR HEKTOEN

Medio slido
Medio de aislamiento Selectivo
Ideal para Salmonella y Shigella













Colonias verde-azuladas con o sin
punto negro Salmonella

AGAR SABOURAUD

Aislamiento selectivo de levaduras y hongos
El pH del agar es ligeramente cido, lo que favorece el crecimiento
fngico ms que el crecimiento bacteriano.


















AGAR UREA CHRISTENSEN

Es un medio slido, diferencial y de identificacin
Se utiliza para diferenciar bacterias que hidrolizan o no la urea
Resultados:
-Positivo: de color rosa contienen la enzima ureasa.
-Negativo: de color amarillo no contienen la enzima ureasa.









AGAR KIA
Medio slido diferencial
Se utiliza para diferenciar bacterias gram especialmente
enterobacterias
En base a la fermentacin de glucosa y lactosa
Posee un color anaranjado.
Utiliza como indicador de pH el rojo fenol .


RESULTADOS
1-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no fermentador de azcares.2-Pico cido/fondo
cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta
glucosa, y lactosa.
2-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el
microorganismo solamente fermenta la glucosa.3-4,4A-La presencia de
burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo
produce gas.5-El ennegrecimiento del medio indica que el
microorganismo produce cido sulfhdrico.




Agar Salmonella Shigella
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial
Es utilizado para el aislamiento de especies de Salmonella y Shigella a
partir de muestras clnicas y de alimentos
El color del medio preparado es rojo-naranja
































AGAR MANITOL SAL

Medio slido
Medio de cultivo selectivo y diferencial
Aislamiento selectivo de estafilococos

. En este medio las colonias de otros
microorganismos que fermentan la lactosa son
colonias rojizas y mucosas
El color del medio preparado es rojo-naranja
Las colonias son transparentes translcidas u opacas y suelen ser
lisas

























AGAR CETRIMIDA

Medio slido
Medio de aislamiento Selectivo
Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas
aeruginosa y de otras especies del gnero Pseudomonas

Los estafilococos que fermentan el manitol se visualizan como colonias amarillas
rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas,
rodeadas de una zona del mismo color o prpura.
Las colonias caractersticas presentan una
pigmentacin verde plido espontnea y
fluorescencia verde bajo luz ultravioleta
III. MATERIALES Y METODOS

3.1. Lugar y fecha de la prctica
La presente prctica se realiz laboratorio de Sanidad Animal de la
Facultad de Zootecnia en la Universidad Nacional Agraria de la Selva
(UNAS) - Tingo Mara, Per. Geogrficamente, esta zona se
encuentra situada entre las cordilleras Central y Oriental. Esta
considerada como Bosque Tropical Hmedo Pre - montaoso,
ubicado en una latitud Sur 9 17 58 y longitud Oeste 76 01 07 a
665 m.s.n.m. El clima que presenta es tropical hmedo, la
temperatura media anual es de 24 C.
3.2. Materiales
Placas petri
Agar universal
Agar Mac Conkey
Caldo de enriquecimiento
Bao maria
Mechero
3.3. Metodologa
La prctica consisti en una breve explicacin terica por parte del
tcnico encargado del laboratorio, adelantndonos de como iba a
realizarse la prctica, habiendo participacin directa de los alumnos
para hacer la siembra de bacterias.




IV. RESULTADOS


Medio de
cultivo
MOOS Importancia MOOS
E.M.B. Agar
Es utilizado para aislamiento
selectivo de bacilos Gram
negativos de rpido desarrollo
y escasas exigencias
nutriciales. Permite el
desarrollo de todas las
especies de la familia
Enterobacteriaceae.
Muchas especies de bacterias
Gram-negativas causan
enfermedades. Los cocos Gram-
negativos causan la gonorrea
(Neisseria gonorrhoeae),
meningitis (Neisseria meningitidis)
y sntomas respiratorios
(Moraxella catarrhalis), entre
otros. Los bacilos Gram-negativos
incluyen un gran nmero de
especies. Algunos de ellos causan
principalmente enfermedades
respiratorias (Haemophilus
influenzae, Klebsiella pneumoniae
, Legionella pneumophila,
Pseudomonas aeruginosa),
enfermedades urinarias
(Escherichia coli, Proteus mirabilis,
Enterobacter cloacae, Serratia
marcescens) y enfermedades
gastrointestinales (Helicobacter
pylori, Salmonella enteritidis,
Salmonella typhi). Otros estn
asociadas a infecciones
nosocomiales (Acinetobacter
baumanii).
Mac Conkey
agar
Se utiliza para el aislamiento
de basilos Gram negativos de
fcil desarrollo, aerobios y
anaerobios facultativos.
Estafilococo 110
Agar
Para el aislamiento y
diferenciacin preseuntiva de
estafilococos, en base a la
produccin de pigmentos, la
fermentacin de manitol y la
hidrlisis de gelatina, a partir
de alimentos y otras muestras.
Staphylococcus (del griego
, staphyl, "racimo de
uvas" y , kkkos, "grnula")
es un gnero de bacterias
estafilococceas de la clase Cocci.
Comprende microorganismos que
estn presentes en la mucosa y en
la piel de los humanos y de otros
Sal y manitol
agar
Medio de cultivo selectivo y
diferencia, utilizado para el
aislamiento y diferenciacin de
estafilococos.
mamferos y aves, incluyendo a 35
especies y 17 subespecies, muchas
de las cuales se encuentran en los
humanos. Las especies que se
asocian con ms frecuencia a las
enfermedades en humanos son
Staphylococcus aureus (el
miembro ms virulento y conocido
del gnero), Staphylococcus
epidermidis, Staphylococcus
saprophyticus, Staphylococcus
capitis y Staphylococcus
haemolyticus
Caldo
tetranionato
Utilizado para el
enriquecimiento selectivo de
salmonella spp. A partir de
heces, orina, alimentos y otros
materiales de importancia
sanitaria.
Salmonella
shigella agar
Medio de cultivo utilizado para
el aislamiento de Salmonella
spp. Y de algunas especies de
Shigella spp. A partir de heces,
alimentos y otros materiales
en los cuales se sospeche su
presencia.
Mueller hinton
agar
Ha sido recomendado
universalmente para la prueba
de sensibilidad a los
antimicrobianos.
Un antimicrobiano es una
sustancia que mata o inhibe el
crecimiento de microbios, tales
como las bacterias, hongos,
parsitos o virus. Basado en ello,
los siguientes pueden referirse a
agentes microbianos: Antibiticos,
Antifngicos, Antiparsitos entro
los cuales estn los:
Antihelmnticos, Antivirales.
Urea
Medio utilizado para la
identificacin de
microorganismos en base a la
actividad uresica. Es
particularmente til para
diferenciar Proteus spp. De
otros miembros de la familia
Enterobacteriaceae.
Las infecciones de vas urinarias
son causadas por una especie
bacteriana nica en ms de 95%
de los casos. Existe una gran
diferencia entre la flora bacteriana
urinaria en los pacientes con un
episodio inicial y la observada en
los pacientes con infecciones
recurrentes. Escherichia coli es
comn en el primer grupo, Proteus

VI. DISCUSION
En la preparacin de medios de cultivos en forma lquida (caldo nutritivo) y
slida (gelificantes) se trata es de conseguir un medio que rena las
condiciones fisiolgicas necesarias para que las clulas se desarrollen. Los
parmetros ms importantes a tener en cuenta son la presencia de agua, la
temperatura, el pH y el oxgeno. Los medios de cultivo pueden ser slidos,
semislidos o lquidos, con composicin qumica conocida o indefinida.


VII. CONCLUCION

Al finalizar el trabajo prctico estamos en capacidad y condiciones de: Preparar
adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de
medios de cultivo deshidratados. El medio de cultivo lquido (caldo nutritivo) y
gelificante fue preparado especficamente para el aislamiento de salmonella
shigella bacteria estudiada y posteriormente aislada.




VII. BIBLIOGRAFIA

BANKS W. HISTOLOGA VETERINARIA APLICADA. Editorial el manual
moderno. Mxico. 1986
Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2005 1993-2004 Microsoft
Corporation. Reservados todos los derechos.
http://www.ucv.ve/Farmacia/Micro_web/Catedras02/medicult.pdf
http://www.geocities.com/CapeCanaveral/Hall/3081/natural/caldo.htm