CURSO : Microbiologa Animal

PROFESOR : TAFUR ZEVALLOS, Lizandro

ALUMNA : BONIFACIO ESPINOZA, Jherson
CICLO : 2014 - I


TINGO MARIA 2014







































I. INTRODUCCION

Se han utilizado huevos fecundados para cultivar virus durante ms de 15
aos. El cultivo de virus gripal en huevo embrionado fue empleado por primera
vez por Burnet en 1935, demostrando que el embrin de pollo es un medio muy
sensible para el aislamiento de estos virus, siendo adems un medio estril y
poco costoso. Ha sido posible cultivar virus de diversos grupos en varias
cavidades del huevo fecundado, o en el propio embrin en desarrollo.
Tambin se emplearon huevos de pato y de ganso para cultivar ciertos virus,
pues estos animales tienen un periodo de incubacin mas prolongado que el
pollo; pero como regla, sigue usndose huevo de gallina de 6 a 8 das de
incubacin aproximadamente (a veces se usa huevos de mas tiempo de
incubacin).
Los virus slo pueden reproducirse en determinadas partes del embrin; por
consiguiente, se deben inyectar en la regin apropiada, P. ej. los mixovirus
crecen bien en la membrana corioalantoidea, en tanto que el virus de la
parotiditis prefiere la cavidad alantoidea. La infeccin puede producir una lesion
tisular local conocida como pstula, cuyo aspecto, a menudo, es caracteristico
del virus.

Objetivo:

Conocer y aplicar correctamente los mtodos adecuados para realizar
inoculaciones de virus en embriones aviares.















II. REVISION BIBLIOGRAFICA.


2.1. HUEVO EMBRIONADO

Los virus pueden propagarse en las membranas extraembrionarias o en el
propio embrin. Anatmicamente el huevo embrionado de gallina presentan en
su estructura las siguientes partes:
2.2. VAS DE INOCULACIN


Las vas de inoculacin y la edad del embrin a usar, depende del virus que va
a ser inoculado.
Con el objeto de visualizar las cavidades se inocular un colorante por va
alantoidea y otro por va amnitica. Tambin se inocular por va del saco de
yema o saco vitelino.

4.1 Biolgico
Huevos embrionados de 7 a 8 das y de 10 a 12 das
4.2 Material de vidrio
Placas de petri
4.3 Equipos e Instrumental
Jeringas de tuberculina con aguja
Ovoscopio
Pinzas de diseccin
Punzones de acero
Solucin fisiolgica
Tijeras curvas
4.4. Soluciones y Colorantes
Alcohol yodado
Azul de metileno al 1 % en agua destilada
Cinta adhesiva
Fucsina al 1 % en agua destilada


2.3. INOCULACIN POR VA ALANTOIDEA

Determinar mediante el Ovoscopio en huevos embrionados de 10 a
12 das, el lmite de la cmara de aire y colorear una marca entre los
vasos sanguneos de la membrana corioalantoidea, esta estara
aproximadamente a 1 cm. por debajo de la cmara de aire
Cargar la jeringa con azul de metileno.
Desinfectar la cscara con alcohol yodado sobre la cmara de aire
Perforar con el punzn estril hacer un pequeo agujero con cuidado
en las zonas marcadas.
Introducir la aguja de jeringa de 1ml. cargada con fucsina
(aproximadamente de la aguja) en un ngulo de 45 grados, e
inocular 0,2 ml del colorante.
Cortar con tijeras la cscara siguiendo la marca que seala la
cmara de aire, levantar la membrana corioalantoidea y observar el
lquido alantoideo coloreado, el cual se elimina vertindolo en un petri
con cuidado

2.3.1. Inoculacin por va amnitica

Determinar mediante el Ovoscopio en huevos embrionados de
10 a 12 das, el lmite de la cmara de aire y colorear una marca
entre los vasos sanguneos de la membrana corioalantoidea,
esta estara aproximadamente a 1 cm. por debajo de la cmara
de aire.
Cargar la jeringa con fucsina
Desinfectar la cscara con alcohol yodado sobre la cmara de
aire por encima del embrin.
Realizar una perforacin rectangular de 0,5 cm
2

Dejar caer una gota de solucin fisiolgica estril
Introducir con unas pinzas curvas a travs de sta rea dentro de
la cavidad alantoidea cogiendo al membrana amnitica hacia
arriba, formar una pequea tienda en cuya base se inyecta 0,2
ml de un colorante o del inculo problema
Tapar la abertura con cinta adhesiva
2.3.2. Cosecha

Cortar con las tijeras la cscara a nivel del lmite de la cmara de
aire.
Descargar el lquido alantoideo,
Extraer con pipeta Pasteur el lquido amnitico.
En caso de no haber lquido, hacer un lavado con suero
fisiolgico estril (1mL) y luego se colecta este lquido

ESQUEMAS DE LAS VIAS DE INOCULACION














III. MATERIALES Y METODOS.

3.1. Lugar y Fecha

La practica acerca de tcnicas de dilucin, realizamos en el laboratorio de
sanidad animal de la facultad de zootecnia de la Universidad Nacional
Agraria de la Selva (UNAS - Tingo Maria) ubicado en el distrito de Rupa
Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de Huanuco.
Geogrficamente, esta zona se encuentra situada entre las cordilleras
central y oriental. Esta considerada como bosque Tropical. Ubicado a una
latitud sur 9 17 58 y longitud oeste 76 01 07 a 660 m.s.n.m. el clima
que presenta es tropical hmedo, temperatura media anual de 24C, tiene
un precipitacin pluvial de 3.660 mm y una humedad relativa de 84% .

3.2. Materiales
huevos embrionados de 10 a 12 das, el lmite de la cmara de aire y
colorear una marca entre los vasos sanguneos de la membrana
corioalantoidea, esta estara aproximadamente a 1 cm. por debajo de
la cmara de aire
Cargar la jeringa con azul de metileno.
Desinfectar la cscara con alcohol yodado sobre la cmara de aire
Perforar con el punzn estril hacer un pequeo agujero con cuidado
en las zonas marcadas.
jeringa de 1ml. cargada con fucsina
0,2 ml del colorante.
Cortar con tijeras la cscara siguiendo la marca que seala la
cmara de aire, levantar la membrana corioalantoidea y observar el
lquido alantoideo coloreado, el cual se elimina vertindolo en un petri
con cuidado
3.3. Mtodos

El mtodo utilizado en la prctica fue terico prctico con las adecuadas
indicaciones del encargado del curso el profesor Tafur Zeballos.

IV. RESULTADOS.























V. DISCUSION

En la prctica, con la inoculacin de los virus New Castle ( virus solo como
suposicion en la practica) se debio
haber realizado una ensayo de Dosis letal 50%, pero por problemas de
mala manipulacin, los resultados obtenidos no fueron suficientes para
poder calcularlos.
Como trabajo, se nos pidi realizar un ejemplo de DL50 y su breve
explicacin.
La dosis letal 50 es la cantidad de una sustancia expresada en gr o mgr
capaz de matar al 50 % de los animales inoculados. La DL50 es una medida de
uso comn en Toxicologa y en Farmacologa, tambin se aplica para el clculo
de ttulo de un virus que en ese caso sera la cantidad de virus necesaria para
matar al 50% de la poblacin. En algunos casos suele usarse la DL25 o la
DL75.

VI. CONCLUCIONES

Debido a la mala manipulacin no se pudo realizar el clculo de la
dosis letal 50.
A travs de la inoculacin seriada de los huevos embrionados y
controlando cuantos mueren por cada dilucin se puede formar una
tabla que nos servira para poder hallar la dosis letal 50.


VII. BIBLIOGRAFIA

ACTON, J. (1967) Virologa. Edit. Interamericana. Mxico D.F.
MADIGAN, M. y J. PARKER (1997) Brock Microbiologa de los
Microorganismos. 8 Edic. Edit. Mc Graw Hill. Mexico D.F.
PRESCOTT L., J. HARLEY, D. KLEIN (1999). Microbiologia. 4 edic.
Edit. Mc Graw Hill Mexico D.F.