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EXTRAO DE LEO ESSENCIAL DO CRAVO-DA-NDIA EM CO

2

SUPERCRTICO UTILIZANDO ANLISE CROMATOGRFICA


Rui Mrcio Franco
1
, Regina Ferronatto
2
, Osmar Tomazeli Junior
3
, Jacir Dal Magro
4
,

Gilza
Maria de Souza Franco
5
, Maite Cristina Sordi
6



RESUMO: leos essenciais so encontrados em bolsas secretoras presentes nos vegetais,
como: flores e sementes. A extrao por CO
2
apresenta caractersticas fsicas e qumicas
como: relativamente no-txico, no inflamvel e menor temperatura. O objetivo foi extrair
leo essencial do cravo-da-ndia (Eugenia caryophyllata Thunb) em diferentes presses de
arraste utilizando a anlise cromatogrfica. Colocou-se 81,58g de p de cravo-da-ndia no
extrator supercrtico a 25C (fixa), vazo de CO
2
de 2 L/min, calculado e medido utilizando
cronmetro para verificao da vazo no experimento e presso inicial de 80 bar,
aumentada em 25 bar a cada 15 minutos, at atingir presso final de 280 bar. A massa em
cada extrao foi pesada e calculada o rendimento. Maior rendimento foi 16,85% (balo 3)
ocorrido em condies mais propicias de extrao do leo e menor de 3,46% (balo 2),
devido a perda de presso no extrator. A CCD foi positiva para terpenos e negativo para
flavonides. Concluiu-se que, os resultados obtidos a 155 bar e temperatura de 25
o
C
durante 20 minutos, mostrou-se melhor condio de arraste do leo do cravo-da-ndia,
entretanto, so necessrios o uso de novos eluentes na extrao por CO2 supercrtico, que
visem melhorar o rendimento do leo essencial do cravo-da-ndia.
PALAVRAS-CHAVE: leos essenciais; extrao por CO
2
supercrtico; cravo-da-ndia.


INTRODUO: leos essenciais so substncias odorferas, volteis temperatura
ambiente, encontrados em vrias partes das plantas (BROWN; MORRA, 1995). Podemos
agrup-los em duas grandes classes, com base em sua origem biossinttica: a) derivados
dos terpenides, formados via cido mevalnico-acetato (FERRACINI et al., 1995); e b)
compostos com anis aromticos, formados via cido chiqumico-fenil propanides.
O gnero Eugenia um dos maiores da famlia Myrtaceae (ROMAGNOLO; SOUZA, 2006) e
assumem destaque especial por serem utilizadas como plantas medicinais (OLIVEIRA,
DIAS; CMARA, 2005). O cravo cravo-da-ndia uma gema floral seca sendo usado
principalmente como condimento na culinria (MAZZAFERA, 2003), devido seu marcante
aroma (OLIVEIRA et al., 2006) e sabor (OLIVEIRA; DIAS; CMARA, 2005), conferido por
um composto fenlico voltil (RAINA et al., 2001), o eugenol (BROWN; MORRA, 1995,
BROWN et al., 1991). O principal interesse cientfico nos metablitos secundrios est na
grande capacidade biossinttica dos vegetais relacionados (RAVEN et al., 2001), seja
quanto ao nmero de substncias, ou ainda, a diversidade de metablitos em uma nica
espcie (MONTANARI; BOLZANI, 2001). So sintetizados em uma parte da planta
(MAZZAFERA, 2003; CARRASCO et al., 2008) e armazenados em outra, e sua
concentrao pode variar muito durante todo o dia. Entre os principais compostos
identificados classificados esto os terpenides (SANTOS, 2001) e so classificados de
acordo com o seu nmero de unidades de isopreno. Categorias muito conhecidas de
terpenides so os monoterpenides, que tem duas unidades de isopreno (SIMES;
SPITZER, 2001); os sesquiterpenides (trs unidades de isopreno) e os diterpenides

1
Farmacutico bioqumico, Mestrando em Cincias Ambientais (Unochapec). E-mail: francomgj@gmail.com
2
Biloga, Mestranda em Cincias Ambientais (Unochapec)
3
Oceangrafo, Mestrando em Cincias Ambientais (Unochapec)
4
Qumico. Dr. em qumica orgnica. Programa de ps graduao em Cincias Ambientais (Unochapec)
5
Bacharel e licenciada em Cincias Biolgicas. Dra. em Ecologia, Programa de ps graduao em Cincias Ambientais
(Unochapec)
6
Biloga, Mestranda em Cincias Ambientais (Unochapec)
(quatro unidades de isopreno) (RAVEN et al., 2001). So importantes por atrair insetos
polinizadores e segundo Feresin et al. (2001), diversas outras funes biolgicas so
atribudas a essas substancias, como: defesa contra ataque de predadores, proteo contra
perda de gua (MOYNA et al. 2002) e inibidores de germinao (QUEIROZ et al., 2001).
Na CCD so utilizadas duas fases sendo uma fase fixa formando uma camada plana
(VOGEL et al., 2002) e uma fase mvel lquida do tipo open-bed (SALDAA et al., 1997).
De uso muito vantajoso, devido sua simplicidade, utilizando equipamentos relativamente
simples, onde a fase mvel avana por capilaridade, permitindo ainda a corrida de vrias
amostras simultaneamente em cada placa, conferindo agilidade ao processo.


METODOLOGIA: Obteno do leo de Cravo-da-ndia com CO
2
supercrtico: A atividade
de extrao de leo essencial de cravo-da-ndia (E. caryophillata) foi realizada no laboratrio
de anlise instrumental da Unochapec. A obteno do leo foi possvel atravs do uso de
extrao por CO
2
supercrtico. Foram utilizadas 81,58 gramas de p de cravo como massa
inicial, colocada no extrator supercrtico sob condio de 25C de temperatura constante,
vazo de CO
2
de 2 L/min, calculado e medido utilizando um cronmetro para verificao da
vazo no experimento, e presso inicial de 80 bar, aumentada em 25 bar a cada 15 minutos,
at atingir a presso final de 280 bar para o experimento. O leo essencial do cravo-da-ndia
extrado foi armazenado em beckers, que eram trocados a cada mudana de presso de
arraste. As massas obtidas em cada extrao foram pesadas e calculado o seu rendimento.
Para anlise cromatogrfica (CCD), as quantidades de leos extrados foram dissolvidas em
10 microlitros de acetona para que pudessem ser injetadas no cromatgrafo a gs. No
entanto estas anlises no puderam ser feitas por motivos de falhas na leitura dos
cromatgrafos pelo computador. Tambm foram realizadas anlise por cromatografia em
massa (camada delgada). Os quatro extratos obtidos foram diludos em 10 mL de
diclorometano (CH
2
Cl
2
) e aplicados em uma placa cromatogrfica em camada delgada. O
eluente utilizado foi uma soluo de Acetato de etila/Acetona/gua na proporo de 25:5:1.
Em seguida, a placa cromatogrfica foi revelada em Anisaldedo e Cloreto Frrico para
identificao de terpenos e flavonides, respectivamente.


RESULTADOS E DISCUSSES: A extrao de leo essencial a partir do uso de CO
2

supercrtico tendo como matria prima, o p de Cravo-da-ndia foi realizado em laboratrio
estabelecendo as seguintes condies padro para o experimento (Tabela 1).

Massa reagente do cravo-da-ndia = 81,58 gramas
Temperatura = mantida fixa em 25
o
C
Presso inicial de arraste = 105 bar
Presso final de arraste = 280 bar
Tempo de leitura = 20 minutos aps o arraste de leo essencial

Tabela 1. Presses (bar), tempo (min) e horrio utilizados na extrao por CO
2
supercrtico
do Cravo-da-ndia em laboratrio.
Presso (bar) Tempo de leitura (em
minutos)
Horrio de incio de
leitura
105 20 14h10min
130 40 14h30min
155 60 14h50min
180 80 15h10min
205 100 15h30min
230 120 15h50min
255 140 16h10min
280 160 16h30min

Calculou-se a massa de leo essencial, obtendo este valor depois de pesado inicialmente o
balo e aps a captura de leo essencial pelo mtodo de CO
2
supercrtico, sendo pesado
em balana analtica. Os valores extrados do leo so apresentados na tabela 2.

Tabela 2. Valores extrados de massa do leo essencial do Cravo-da-ndia.
Nmero
do balo
Massa do balo (em
gramas)
Massa do balo +
extrato do leo (em
gramas)
Massa obtida do
leo essencial
(gramas)
1 0 0 0
2 71,97 74,46 2,49
3 65,12 76,09 10,97
4 70,68 73,19 2,51

Para o clculo do rendimento utilizou-se a frmula abaixo:

Rendimento = (massa obtida do leo essencial / Massa do balo) x 100

Onde:
Massa do leo essencial e massa do balo (em gramas)

Assim, para o balo 1 no se obteve o rendimento, devido ao fato de que no houve massa
de leo essencial obtida para o clculo, e tambm no se atingir o pico de arraste do leo do
cravo-da-ndia. Para o balo 2 obteve-se um rendimento de 3,46% (Tabela 3), um
rendimento baixo, que pode ter ocorrido devido a perda de presso do extrator, resultando
num extrato no adequado a presso de arraste de CO
2
necessria para extrao do leo
essencial do cravo-da-ndia.

Tabela 3. Rendimento obtido na extrao do leo essencial
do Cravo-da-ndia.
Nmero do balo Rendimento obtido (%)
1 0
2 3,46
3 16,85
4 3,55


Para o balo 3 obteve-se o maior rendimento 16,85% (Tabela 3), que pode ser explicado
devido s condies mais propicias de extrao do leo essencial, que por conseguinte,
acarretou numa melhor extrao do leo essencial para esta presso, onde se parece
verificar que a presso de CO
2
utilizada esteve mais prxima da ideal (favorvel para
extrao do leo essencial do cravo-da-ndia).
No balo 4 verificou-se um rendimento de 3,55% (Tabela 3), fato que tambm pode ser
explicado, devido a no ser necessariamente uma presso ideal de arraste para extrao do
leo essencial de cravo-da-ndia, ou tambm que pode ter ocorrido a fase final ou posterior
de arraste do leo de cravo-da-ndia, onde ainda se verificou ocorrncia de impurezas no
leo extrado neste balo.
Na cromatografia em camada delgada o resultado foi positivo para terpenos e negativo para
flavonides. O eluente utilizado nas propores de 25:5:1 no proporcionou uma boa
separao dos terpenos (Figura 1), tornando-se necessrio utilizar outras propores no
experimento.
Contudo, novos trabalhos em laboratrio devem ser conduzidos com uso de diferentes
polaridades a fim de melhorar a extrao por CO
2
supercrtico, visando o melhor rendimento
do leo essencial extrado do cravo-da-ndia (Eugenia caryophyllata).



Figura 1. Cromatografia em camada delgada
revelada com anisaldedo com aquecimento.


CONCLUSO: Os resultados experimentais obtidos a 155 bar e temperatura fixa de 25
o
C
durante 20 minutos, mostrou-se a melhor condio de arraste do leo do cravo-da-ndia
(Eugenia caryophyllata) em laboratrio. Esta presso foi obtida a maior eficincia
(rendimento) para o experimento quando comparado com as outras presses de arraste
(105, 130, 230, 250 e 280 bar), colaborando com Gil et al. (2002) e Mazzafera (2003) que
tambm encontram resultados semelhantes para este tipo de arraste em CO
2
supercrtico
nas presses utilizadas, sendo que, o melhor resultado foi descrito com temperatura um
pouco maior que a realizada no experimento (30
o
C).
O fluido supercrtico apresentou uma alta seletividade atravs da variao na presso e
mantida a temperatura fixa (25
o
C) na operao, fato constatado quando na presso de 155
bar, onde o experimento apresentou melhor resultado na extrao por CO
2
supercrtico do
leo essencial do cravo-da-ndia.
No entanto, para purificao de leos vegetais, principalmente quando estes leos
apresentem na sua composio, os terpenos, devem ser determinadas s condies timas
de operao e tambm, o desenvolvimento de um mtodo eficaz de extrao, visando
aumentar a eficincia do processo de extrao por meio de CO
2
supercrtico, que possibilite
melhor rendimento do produto (leo essencial do cravo-da-ndia).
Na cromatografia em camada delgada foi obtido resultado positivo para terpenos e negativo
para flavonides. O fato de se encontrar resultado negativo para flavonides indica que as
condies de extrao utilizadas no experimento devem ser aprimorada, pois, na
composio qumica do cravo-da-ndia se tem conhecimento de flavonides (em pequenas
propores).
Por fim, o eluente utilizado na pesquisa (Acetato de etila/Acetona/gua) na proporo de
25:5:1 no proporcionou uma boa separao dos terpenos e assim, so necessrios novos
trabalhos com outros eluentes, com intuito de melhorar a extrao em CO
2
supercrtico em
diferentes polaridades.


FONTE FINANCIADORA: Universidade Comunitria da Regio de Chapec
(UNOCHAPEC), Centro de Cincias Agro Ambientais e Alimentos (CCAA).


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