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+ =
100
1
100
1
0
T T
T
R
R
T
(2)
Ecuacin en la que:
T
R
=resistencia a la temperatura T [=]
0
R
=resistencia a 0C [=]
=
0
5
10 32 7
T
y P Q
T
y P Q
V
x .
VTO
o o o
i
i i i
L
(2)
donde:
V
L
: volumen de lquido en el biorreactor, litros.
Q : flujo volumtrico de aire, litros/min.
P : presin total absoluta, atm.
T : temperatura del aire,
0
K.
y : fraccin mol de oxgeno.
7.32 x 10
5
: factor de conversin.
i =a la entrada del biorreactor.
o =a la salida del biorreactor.
En esta prctica para que haya una transferencia neta de oxgeno debe haber consumo
del mismo, por lo que como consumidor de oxgeno se emplea sulfito de sodio. En
este caso la reaccin de oxidacin es tan rpida que la concentracin de oxgeno
disuelto en el lquido es cero. La reaccin que se efecta es:
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50
2 Na
2
SO
3
+O
2
2Na
2
SO
4
Otro parmetro importante que determina la velocidad de transferencia de oxgeno de
un biorreactor es la fraccin de gas retenido o "gas holdup", definido como la fraccin
de la unidad de volumen de la mezcla gas-lquido que es ocupada por la fase gaseosa.
Cuando el tamao promedio de las burbujas es constante, una mayor fraccin de gas
retenido, implica una mayor rea interfacial gas-lquido y en consecuencia una mayor
transferencia de oxgeno.
Columna
La velocidad de transferencia de oxgeno es determinada de manera importante por el
rea superficial de las burbujas de aire, de aqu que el aire se disperse en forma de
burbujas pequeas para proveer una gran rea de contacto entre las fases lquida y
gaseosa. Sin embargo, en algunos caldos de fermentacin, las burbujas pequeas
tienden a unirse formando burbujas ms grandes. As que an con una dispersin
primaria muy fina y dependiendo de las propiedades fsicas del caldo de cultivo y de la
intensidad de la turbulencia dentro del biorreactor, las burbujas pueden crecer hasta
aproximadamente 6 mm de dimetro despus de dejar la zona de dispersin.
Este fenmeno conocido como coalescencia de las burbujas, es causado por el hecho
de que una pelcula lquida entre dos burbujas de aire adyacentes se hace cada vez
ms delgada hasta que eventualmente se rompe.
En una dispersin gas-lquido cuyo comportamiento es 100% coalescente, el lquido es
un lquido puro. Al ir aumentando la concentracin de electrolitos disueltos en dicho
lquido, se va inhibiendo la coalescencia de las burbujas. Tambin la presencia de
protenas, alcoholes y substancias surfactantes, afecta el grado de coalescencia de las
burbujas.
Cu
2+
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La coalescencia de las burbujas afecta entonces el dimetro de las burbujas. ste junto
con la fraccin de gas retenido determinan el rea superficial de contacto entre las
fases lquida y gaseosa, de acuerdo a la siguiente ecuacin:
( ) ( )
=
1
6
b
d
a (3)
donde:
a: rea interfacial gas-lquido.
: fraccin de gas retenido.
d
b
: dimetro de las burbujas.
Airlift
Si el oxgeno molecular no fuera continuamente transferido del aire al caldo de cultivo
de microorganismos, el oxgeno disuelto sera consumido en pocos segundos bajo
condiciones normales de fermentacin, debido a la baja solubilidad del oxgeno en los
caldos de cultivo. El suministro del oxgeno al caldo de cultivo de microorganismos, es
por lo tanto, un aspecto muy importante en el diseo de biorreactores para procesos
aerbicos. En el transporte de oxgeno de la fase gaseosa al caldo de cultivo de
microorganismos, la resistencia de la pelcula lquida en la interfase gas-lquido es, en la
mayora de los casos, el paso limitante de la velocidad de suministro de oxgeno.
El k
L
a es un parmetro que sirve para conocer la rapidez con la que se transfiere
oxgeno del aire al lquido contenido en un biorreactor. Este coeficiente depende del
grado de coalescencia de las burbujas. Por ejemplo, el k
L
a empleando una solucin
acuosa con una fuerza inica de I=0.4, es ms grande, por un factor de seis, que el
obtenido con agua. Esto es debido a un aumento del rea interfacial.
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Un efecto importante de la circulacin del lquido es que disminuye la frecuencia de la
coalescencia al aumentar la velocidad del lquido. Esto es resultado de que las
distancias entre las burbujas de gas son ms grandes debido a que las fracciones de
gas retenido son menores y a que la distribucin de gas es ms uniforme. Adems,
porque disminuye el movimiento transversal de las burbujas de gas.
En general, en los biorreactores de columna de burbujas se obtienen fracciones de gas
retenido ms grandes, mientras que el los biorreactores airlift, la fraccin de gas
retenido disminuye al aumentar la velocidad de circulacin del lquido. La velocidad del
lquido representa por lo tanto, un parmetro muy importante para adaptar la fraccin de
gas retenido y el tiempo de residencia promedio de las burbujas a los requerimientos de
proceso.
En los biorreactores airlift de gran altura, la velocidad de transferencia de masa cambia
a lo largo de la ruta de flujo de una manera complicada, debido a que el rea interfacial
y la diferencia de concentracin de oxgeno cambian de un punto a otro debido a la
expansin o compresin, al consumo de oxgeno y a cambios en la presin hidrosttica
y en la velocidad local del lquido.
OBJETIVO
El alumno determinar la velocidad de transferencia de oxgeno, el coeficiente
volumtrico de transferencia de oxgeno y la fraccin de gas retenido global en
diferentes tipos de biorreactores
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MATERIALES Y MTODOS
Biorreactor
1. Biorreactor de tanque agitado.
2. Biorreactor de columna de burbujeo.
3. Biorreactor airlift
Instrumentos
1. Rotmetros.
2. Analizador de oxgeno en fase gaseosa.
3. Manmetros.
4. Termmetros.
5. Medidor de pH.
Reactivos
1. Na
2
SO
3
2. Almidn en solucin al 1%.
3. HCL 3N
4. NaOH 3N
5. Soluciones reguladoras de pH, de 4 y 9.
Mtodos
o Determinacin de la velocidad de transferencia de oxgeno: mediante el mtodo
combinado del balance de oxgeno con el del sulfito.
o Determinacin del k
L
a usando la siguiente ecuacin:
k
L
a =VTO / C*
o C* se calcula con la ecuacin de la ley de Henry.
o Determinacin de la fraccin de gas retenido global: mtodo de expansin de
gas.
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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Actividades previas
1. Preparar en el biorreactor una solucin de Na
2
SO
3
0.6N.
2. Adicionar Cu
2
SO
4
a la solucin de sulfito, para tener una concentracin final de
0.25 g/L.
3. Ajustar el pH a 7.6 y mantenerlo constante durante la experimentacin.
Condiciones de operacin
Tanque agitado
o Las velocidades de agitacin sern: 300, 500 y 700 rpm.
o Para cada velocidad de agitacin, se probarn las siguientes velocidades de
aireacin: 0.3, 0.6, 1.0, 1.3, 1.6 vvm.
Columna
o Velocidad de aireacin: 0.3, 0.6, 1.0, 1.3, 1.6 vvm.
Airlift
o Velocidad de aireacin: 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 y 2.5 vvm.
o Tipos de tubos de arrastre: de 2 dimetros diferentes.
Medicin de la concentracin de oxgeno gaseoso.
1. Una vez establecidas las condiciones de operacin, medir la concentracin del
oxgeno del aire que sale del biorreactor, utilizando el analizador de oxgeno
previamente calibrado.
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Medicin de la fraccin de gas retenido global.
Tanque agitado y columna
1. Medir el nivel del lquido sin airear y el nivel del lquido aireado para cada
condicin de operacin.
Airlift
1. Medir la diferencia de alturas del agua contenida en los manmetros de presin
diferencial de cada zona del biorreactor,
2. Medir la distancia entre las tomas de presin esttica de la zona de flujo
ascendente y entre las de la zona de flujo descendente.
RESULTADOS
1. Calcular la VTO, el k
L
a y la fraccin de gas retenido global, para cada condicin
de operacin.
2. Calcular C*.
3. Obtener la correlacin del k
L
a con la velocidad de aireacin, sta expresada en
vvm y en m/s.
4. Obtener la correlacin del k
L
a con la fraccin de gas retenido.
DISCUSIN Y CONCLUSIONES
La discusin deber contener al menos la siguiente informacin:
1. Comparacin de las diferentes condiciones de operacin y fracciones de gas
retenido con respecto a los valores del k
L
a.
2. Comparacin de los valores de k
L
a que obtuvo para cada uno de los biorreactores
empleados y explique el porqu de las diferencias.
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3. Cul es el aspecto de la dispersin gas-lquido para cada condicin de operacin.
4. Explicacin de los valores de k
L
a de los lquidos que promueven la coalescencia y
de los lquidos que la inhiben.
BIBLIOGRAFA
Tanque agitado y columna
1. Aiba, S., Humphrey, A. E., Millis, N. F. 1973. Biochemical engineering. Academic
Press.
2. Vant Riet, K. 1991. Basic bioreactor design. Mercel Dekker, Inc. USA.
3. Wang, D .I .C., Cooney, C. L, Demain, A. D., Dunill, P., Humphrey, A. E., Lilly, M. D.
1978. Fermentation and enzyme technology. J ohn Wiley and Sons.
Airlift
1. Chisti, M. Y. 1989. Airlift bioreactors. Elsevier Applied Science. England.
2. Merchuk, J . C. 1990. Why use airlift reactors. TiBTech. 8. 66-71.
3. Vant Riet, K. 1991. Basic bioreactor design. Mercel Dekker, Inc. USA.
4. Weiland, P., Onken, U. 1981.Differences in the behaviour of bubble columns and
airlift loop reactors. Ger. Chem. Eng. 4: 174-181.
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PRCTICA 6
Prctica 6. Mantenimiento de asepsia en biorreactores
Mantenimiento de asepsia en
biorreactores
INTRODUCCIN
En esta prctica la asepsia se considera como el conjunto de procedimientos
destinados a eliminar o retirar microorganismos de un biorreactor y de todas las
tuberas conectadas a l, con el propsito de asegurar que nicamente estn presentes
el o los biocatalizadores, microorganismos o enzimas, responsables de efectuar la
bioconversin de materias primas a un producto especificado. En consecuencia, la
asepsia del biorreactor y de las tuberas asociadas a l, garantizan que los procesos de
bioconversin se lleven a cabo sin contaminaciones por microorganismos extraos.
Los microorganismos contaminantes pueden competir con el microorganismo cultivado
por el substrato o pueden desplazarlo al tener una velocidad de crecimiento mayor,
incluso pueden producir substancias que daen al microorganismo cultivado o inactiven
a las enzimas. Por lo tanto, la presencia de microorganismos contaminantes ocasionan
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que los rendimientos y productividades de produccin establecidos no se puedan
alcanzar, ocasionando prdidas econmicas.
Para poder lograr la asepsia del biorreactor y de las tuberas asociadas a l, se deben
proponer desde la etapa de diseo, una geometra interna y arreglos de tuberas, que
eviten la acumulacin de substancias al llevar a cabo el vaciado de ellos. Las
substancias acumuladas pueden propiciar una contaminacin. Tambin, la asepsia se
facilita mediante una limpieza efectiva del biorreactor y tuberas, lo que se alcanza al
especificar materiales de construccin con un acabado que evite el atrapamiento de
partculas slidas con microorganismos. Las partculas slidas eventualmente limitan la
transferencia de calor, evitando el calentamiento de los microorganismos a la
temperatura de esterilizacin y por lo tanto, dejndolos viables para generar una
contaminacin.
Una vez lavado el biorreactor y las tuberas, el biorreactor se llena con medio de cultivo
para proceder a la esterilizacin. Despus de la esterilizacin, el biorreactor debe
operar aspticamente. Para lograrlo, es necesario el buen funcionamiento del sello
mecnico para mantener una presin positiva que evite la entrada de microorganismos.
Tambin, se requiere el ms alto aseguramiento posible de la integridad y eficiencia de
remocin del filtro para la esterilizacin del aire.
Existen diferentes mtodos para probar la integridad de filtros. Uno de ellos es la prueba
de la intrusin del agua. Es una prueba prctica y validada, que se puede considerar
para probar la integridad in situ de los filtros hidrofbicos para la esterilizacin del aire.
Otra prueba es la de mantenimiento de la presin.
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OBJETIVO
El alumno aplicar las pruebas de intrusin de agua y de mantenimiento de la presin
para probar la integridad de filtros de aire, con los que se garantice la operacin
asptica en biorreactores.
MATERIALES Y MTODOS
Biorreactor.
1. Biorreactor agitado de 30 L, equipado con prefiltros y filtros hidrofbicos para la
esterilizacin de aire.
Instrumentacin.
1. Cronmetro.
2. Rotmetro.
3. Manmetro.
4. Termmetro.
Reactivos
1. Agua desionizada
2. Isopropanol
Prueba de intrusin de agua
El principio de esta prueba es que si el lado corriente arriba de un filtro hidrofbico seco
se llena de agua y se presuriza, la naturaleza hidrofbica de la membrana porosa
prevendr el flujo del lquido a travs del filtro hasta que se alcanza la presin de la
intrusin. A presiones por debajo de la presin de intrusin ocurre un flujo pequeo pero
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medible del agua a travs de la membrana. La presencia de poros ms grandes en el
filtro ser detectada por un flujo creciente debido al agua que atraviesa estos poros. La
figura 1 muestra el principio de esta prueba.
Figura 1. Principio de la prueba de intrusin de agua. Si el tamao de los poros es como
el tamao del poro B, el flujo de agua ser menor que el flujo correspondiente a poros
del tamao del poro A.
La tabla 1 muestra el resultado de una prueba de intrusin de agua para un filtro de
membrana de la marca Pall. Los parmetros de la prueba son especficos para cada
filtro y deben ser proporcionados por el fabricante.
Carcasa
Aire
Agua
Filtro:
Membrana
hidrofbica
Aire
Agua
Membrana
hidrofbica
Presin
Poro A
Poro B
Unidad de filtracin
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Tabla 1. Parmetros de la prueba de intrusin de agua para un filtro de cartucho
EMFLON PFR de Pall.
Nmero de catalogo AB1PFR7PVH4
Presin de prueba 2500 mbar
Flujo mximo permisible 0.33 mL/min
Usando agua desionizada a una temperatura de 20 2C.
Prueba de mantenimiento de la presin
La prueba de mantenimiento de la presin es una forma modificada de una prueba de
flujo difusivo, que es la prueba de flujo hacia delante corriente arriba del filtro. sta
puede llevarse a cabo despus de la esterilizacin del filtro, antes de la filtracin y
despus de la filtracin estril, puesto que las conexiones estriles corriente abajo no se
desconectan. Una ventaja de la prueba de mantenimiento de la presin es que tambin
confirma la integridad de la unidad de filtracin, incluyendo los sellos de la carcasa.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Prueba de intrusin de agua
1. Instalar el filtro seco.
2. Llenar con agua desionizada el lado corriente arriba del filtro.
3. Aplicar una presin predeterminada, utilizando aire. Esto causa una disminucin
del nivel de agua dentro de la carcasa del filtro, debido a la compresin de los
pliegues del filtro y al paso de aire atrapado a travs de la membrana. Es
importante que los cambios de volumen corriente arriba del filtro debido a estos
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efectos se haya estabilizado, para que se puedan medir los flujos de agua muy
pequeos que pasan a travs de la membrana.
4. Dejar pasar 10 minutos para que ocurra la estabilizacin tanto del flujo como de
la temperatura.
5. Despus de la estabilizacin, medir el flujo de agua. Esto se puede hacer,
determinando el flujo de aire corriente arriba que es requerido para mantener la
presin constante.
6. Al terminar la prueba, drenar el agua del filtro y de las tubera.
7. Secar el filtro y la tubera.
8. Comparar los resultados de la prueba con los lmites especificados.
9. Si los resultados estn dentro de los lmites especificados, entonces el filtro est
listo para usarse.
Prueba de mantenimiento de la presin
1. Mojar la membrana del filtro con una mezcla de isopropanol agua 60:40 (v/v).
2. Instalar el filtro en la carcasa.
3. Presurizar la unidad de filtracin a una determinada presin.
4. Aislar la unidad de filtracin de la fuente de presin y de la tubera corriente bajo.
5. La difusin del gas a travs de la membrana mojada se mide cuantitativamente
como un descenso de la presin despus de un periodo de tiempo especificado.
6. Medir el volumen corriente abajo de la carcasa.
7. Mantener constante la temperatura en el volumen corriente abajo de la carcasa.
8. Verificar que no haya fugas en el sistema de tuberas corriente abajo.
9. Comparar los resultados con los valores publicados de la disminucin de la
presin, los cuales se basan en carcasas estndares con vlvulas corriente
arriba localizadas tan cerca como sea posible de la carcasa del filtro.
10. Si los resultados estn dentro de los lmites especificados, entonces el filtro est
listo para usarse.
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RESULTADOS
1. Elabore el isomtrico de tuberas que muestre la instalacin del filtro.
2. Dibuje un diagrama de bloques de los procedimientos experimentales realizados
en esta prctica.
3. Construya una grafica del flujo de agua en funcin del tiempo.
4. Realice una grafica de la presin en funcin del tiempo.
DISCUSIN Y CONCLUSIONES
La discusin versar al menos sobre lo siguiente:
1. Las especificaciones de los lquidos que se requieren para mojar la membrana de
filtros hidrofbicos en las pruebas de integridad de flujo difusivo.
2. La razn de que las pruebas de integridad de filtros deban ser correlacionados
con la prueba de la carga bacteriana lquida, la cual es un indicador del
desempeo de los filtros.
3. Tres pruebas que se han utilizado comnmente en filtros para la esterilizacin de
gas, as como sus ventajas y desventajas.
BIBLIOGRAFA
1. Lydersen B.K., Delia N.A., Nelson, K.M.L. 1994. Bioprocess engineering: systems,
equipment and facilities. J ohn Wiley and Sons, Inc. New York.
2. J ohnston P.R. 2004. Fluid sterilization by filtration. Interpharm, CRC Press LLC.
3. J ornitz. M.W. 2006. Sterile filtration. Springer-Verlag, Berlin.
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PRCTICA 7
Prctica 7. Esterilizacin del sistema de biorreaccin
Esterilizacin del sistema de
biorreaccin
INTRODUCCIN
Una esterilizacin adecuada del medio de cultivo es importante para garantizar el xito
de muchas fermentaciones industriales. Para lograr este propsito, se emplea cualquier
mtodo capaz de destruir o separar a los microorganismos contaminantes indeseables.
La tcnica ms comn es la destruccin de los microorganismos contaminantes. El
trmino destruccin, en este caso, significa la prdida de viabilidad del microorganismo.
La destruccin de microorganismos se puede llevar a cabo por varios mtodos:
1. Calor, ya sea seco o hmedo
2. Agentes qumicos
3. Radiaciones
4. Vibraciones snicas
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El mtodo ms comnmente utilizado para medios lquidos es el de calor hmedo ya
que es simple, confiable y econmico.
Cintica de muerte trmica de microorganismos
Generalmente se clasifica la velocidad de muerte de los microorganismos en: velocidad
de muerte logartmica y velocidad de muerte no logartmica.
Velocidad de muerte logartmica
La velocidad de muerte logartmica se puede expresar matemticamente mediante la
ecuacin:
-
dN
dt
kN = (1)
Separando variables e integrando.
ln
N
No
kt = (2)
N
No
kt = exp( ) (3)
La ecuacin (3) describe apropiadamente la cintica de muerte trmica de clulas
vegetativas.
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Velocidad de muerte no logartmica
Este tipo de comportamiento de muerte trmica se encuentra a menudo en esporas
bacterianas. Se proponen varias explicaciones para esta conducta: germinacin de
esporas, tcnicas experimentales deficientes, impactos mltiples para la inactivacin y
eventos secuenciales en la induccin de muerte.
El modelo de eventos secuenciales propone que la muerte ocurre de la siguiente
manera:
N N N
R
k
S
k
D
R S
(4)
Se propone que una espora resistente N
R
sufre inactivacin o muerte a un estado final
N
D
a travs de un intermediario sensible N
S
.
Se establecen las ecuaciones diferenciales:
dN
dt
k N
R
R R
= (5)
dN
dt
k N k N
S
R R S S
= (6)
La solucin a estas ecuaciones diferenciales simultneas es:
( ) ( )
= t k exp
k
k
t k exp
k k
k
N
N
R
R
S
S
S R
R
0
(7)
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67
Efecto de la temperatura sobre la cintica de muerte
Considerando la muerte trmica de los microorganismos de manera similar a las
reacciones qumicas, la relacin entre las constantes cinticas y la temperatura
presenta un comportamiento anlogo. La teora ms frecuentemente empleada es la
teora de Arrhenius.
Esta relacin se expresa matemticamente como:
k A
E
RT
=
exp (8)
Esterilizacin por lote
En el proceso de esterilizacin por lote, el medio se coloca en el fermentador y el
contenido se calienta a la temperatura de esterilizacin asignada. Para establecer la
relacin entre tiempo y temperatura se puede utilizar la ecuacin (1). Sin embargo, k
durante la esterilizacin por lote no es constante ya que la temperatura durante el
calentamiento y enfriamiento varan. Incorporando el efecto de la temperatura
establecido por la ecuacin de Arrhenius la ecuacin queda:
= =
TOTAL
t
No
N
A
E
RT
dt ln exp
0
(9)
El smbolo representa el grado de destruccin en todo el proceso.
El ciclo de esterilizacin est formado por tres perodos:
1. Elevacin de temperatura o calentamiento.
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2. Mantenimiento de temperatura
3. Descenso de temperatura o enfriamiento.
El perfil temperatura - tiempo durante la fase de calentamiento es funcin de varios
factores, por ejemplo: la forma en que se lleva a cabo el calentamiento, ya sea
inyeccin directa de vapor, calentamiento indirecto a la chaqueta, mediante serpentines
o elctricamente. La tabla 1 muestra las relaciones tiempo temperatura de acuerdo a
la forma de transferencia de calor.
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TIPO DE
TRANSFERENCIA DE
CALOR
RELACION
TEMPERATURA-
TIEMPO
a y b
Adicin de vapor al
medio
T To
at
bt
= +
+
1
1
(Hiperblica )
a
hs
MToC
=
b
s
M
=
Calentamiento con
dispositivo elctrico
( ) T To at = + 1
( lineal )
a
q
MToC
=
Calentamiento con vapor
(intercambiador de calor)
( )
T T be
H
at
= +
1
( exponencial )
a
Ua
MC
=
b
To T
T
H
H
=
Enfriamiento
(Intercambiador de calor)
( )
T T be
at
= +
1
a
WC
MC
e
Ua
MC
=
1
b
To T
T
=
Tabla 1. Relaciones tiempo temperatura de acuerdo a la forma de transferencia de
calor
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OBJETIVO
El alumno disear el ciclo de esterilizacin para un medio de cultivo en un biorreactor.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
Material y equipo
1. Fermentador de 12 litros.
2. Cronmetro
3. Cajas de Petri estriles.
4. Pipetas estriles.
5. Frascos de dilucin con agua estril.
6. Agar nutritivo
7. Mechero.
8. Esporas de Bacillus subtilis.
Trabajo experimental
1. Una vez montado el vaso conteniendo 12 litros de agua inocular con esporas de
Bacillus subtilis.
2. Establecer la temperatura de esterilizacin.
3. Anotar los datos de tiempo y temperatura durante todo el ciclo de esterilizacin,
en intervalos de un minuto.
4. Tomar cuatro muestras a diferentes tiempos: al principio del ciclo de esterilizacin
(N
o
), al final del perodo de calentamiento (N
1
), al final del perodo de
mantenimiento (N
2
), y al final del perodo de enfriamiento (N
3
).
5. De cada una de las muestras tomadas, se hace una dilucin y se siembran por
duplicado en cajas de Petri utilizando la tcnica de vaciado en placas. Se
incuban a 30 C, hacer cuenta de colonias cada 24 h, durante tres das.
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71
MUESTRA DILUCIN
N
O
10
-1
10
-5
N
1
10
-1
10
-5
N
2
10
-1
10
-3
N
3
10
-1
10
-2
INFORME
1. Presentar en un cuadro los valores de temperatura y tiempo para el ciclo de
esterilizacin. Graficar los perfiles para las etapas de calentamiento,
mantenimiento y enfriamiento.
2. Determinar los valores de (a) y (b) de las ecuaciones de temperatura en funcin
del tiempo para las etapas de calentamiento y enfriamiento.
3. Calcular el coeficiente global de transferencia de calor (U
iD
) para las etapas de
calentamiento y enfriamiento.
4. Con los valores de No, N
1
, N
2
y N
3
determinar el grado de destruccin para el
calentamiento, mantenimiento, enfriamiento y el
ciclo de esterilizacin
.
5. En el perodo de mantenimiento determinar el valor de la energa de activacin
conociendo el valor de la constante de Arrhenius: A = 7.49 X 10
38
min
-1
.
6. Elaborar un cuadro de valores de (k) en funcin del tiempo y trazar la grfica
correspondiente. Obtendr el grado de destruccin para calentamiento,
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mantenimiento, enfriamiento y total por integracin grfica en la curva anterior y
por algn mtodo numrico.
7. En el caso de que la esterilizacin haya sido deficiente, recalcular el tiempo de
mantenimiento, suponiendo los criterios de diseo de calentamiento y
enfriamiento constantes y una poblacin final de microorganismos viables de 10
-3
( probabilidad de que en mil lotes de esterilizacin, uno resulte contaminado).
8. Realizar el escalamiento de las etapas de calentamiento, mantenimiento y
enfriamiento para un volumen de 10,000 litros de medio de cultivo. Graficar los
perfiles de temperatura vs. Tiempo para ambas escalas. El escalamiento se
efectuar con base al criterio de (P/V).
9. Discutir los perfiles obtenidos en ambas escalas con base en las siguientes
variables: volumen de trabajo, rea de transferencia de calor, coeficiente global
de transferencia de calor, flujo de vapor y flujo de agua de enfriamiento.
10. Calcular los tiempos del ciclo de esterilizacin para ambas escalas cuando se
usa una temperatura de mantenimiento de 121 C, No =10
6
UFC/mL y N =10
-3
. Discutir estos resultados.
11. Exponer sus conclusiones.
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73
NOMENCLATURA
a - rea de transferencia de calor: calcularla experimentalmente
A - Constante de Arrhenius, min
-1
.
C - Calor especfico del medio de cultivo, kcal/ kg C
C - Calor especfico del elemento enfriador, kcal / kg C
E - Energa de activacin, cal / g mol, kcal / kg mol
h - Entalpa relativa al medio. kcal / kg (entalpa del vapor a la temperatura del medio
de cultivo).
k - Constante especfica de velocidad de muerte, min.
-1
k
R
- Constante especfica de inactivacin de esporas resistentes.
k
s
- Constante especfica de intermediarios sensibles.
M - Masa inicial del medio, kg.
N - Concentracin de microorganismos en el tiempo t
No - Concentracin de microorganismos t
o
N
1
- Concentracin de microorganismos t
1
N
2
- Concentracin de microorganismos t
2
N
3
-
Concentracin de microorganismos t
3
N
D
-Concentracin de esporas inactivas.
N
R
-Concentracin de esporas resistentes.
N
S
- Concentracin de esporas sensibles
q - Velocidad de transferencia de calor, kcal / s
R - Constante Universal de los gases, 1.98 cal / g Mol K
s - Gasto masa de vapor, kg / s, kg / h, kg / min.
t - Tiempo, min, h.
T - Temperatura absoluta K
T
0
- Temperatura inicial del medio K
T
H
- Temperatura de la fuente de calentamiento K
T