LABORATORIO DE FISICOQUMICA III, FQ 30521

LABORATORIO DE FISICOQUIMICA EN BIOLOGIA Y FARMACIA, QU 30605

Manual de Prcticas
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PRACTICA N! "
ACTIVIDAD ENZIMATICA
#$%&TI'#(
Al )inali*ar la +rctica el alu,n ser ca+a* de-
1. Observar la actividad de la enzima catalasa.
2. Comparar la actividad de la catalasa de tejidos de organismos vivos, con un
catalizador no proteico.
3. Examinar los factores que afectan la actividad enzimtica.
INTR#.UCCI#N
!as cantidades de enzima pueden ser expresadas en moles, como las de cualquier
otro compuesto qu"mico, o pueden ser cuantificadas en t#rminos de actividad
enzimtica. !a actividad enzimtica es una medida de la cantidad de enzima activa
presente $ del nivel de actividad de la misma, por lo que la medida de la actividad es
dependiente de las condiciones, que deben ser especificadas cuando se dan valores de
actividad. !a actividad expresa la cantidad de sustrato convertido por unidad de
tiempo, teniendo en cuenta el volumen de reacci%n.
En el &istema 'nternacional de (nidades la unidad para la actividad catal"tica es
el )atal *)at+, pero es una unidad demasiado grande $ suele usarse la unidad de
actividad enzimtica *('+.
1 )at , 1 mol sustrato convertido x s
-1
, . x 1/
0
('
1 (' , 1 1mol sustrato convertido x min
-1
, 1.,.0 n)at
Otra unidad com2nmente usada es la actividad espec"fica. 3sta se refiere a la
actividad de una enzima por miligramo *mg+ de prote"na, $ se suele expresar en4 1mol
x min
-1
x mg
-1
+. !a actividad espec"fica da una idea de la pureza de la enzima.
Tipos de ensayo estudiados:
&eg2n la fase de la reacci%n estudiada
&eg2n el seguimiento de la reacci%n
Ensa$os continuos
Espectrofotom#tricos
5luorim#tricos
Calorim#tricos
6uimioluminiscencia
Ensa$os discontinuos
7adiom#tricos
Cromatogrficos
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Factores que afectan al ensayo:
5uerza osm%tica. !a ma$or"a de las enzimas no pueden tolerar concentraciones
de sal extremadamente altas. !os iones interfieren con los d#biles enlaces
i%nicos de las prote"nas. !as enzimas t"picas son activas en concentraciones
salinas de 1 a 8// m9. Existen excepciones como las enzimas de
las algas $ bacterias :al%filas.
;emperatura. ;odas las enzimas trabajan en un rango
de temperaturas espec"ficas del organismo al que pertenecen. !os aumentos de
temperatura generalmente provocan un incremento de la velocidad de
reacci%n. Esto se debe a alteraciones de la estructura de la prote"na debidas a
la interrupci%n de uniones i%nicas que resultan en la estabilizaci%n de la
estructuratridimensional de la enzima. !a temperatura %ptima de las enzimas
:umanas se encuentra generalmente entre los 38 $ los </ =C> la temperatura
media del organismo del ser :umano es 30 =C. ?s", las enzimas :umanas
comienzan a desnaturalizarse rpidamente a partir de los </ =C. En cambio, las
enzimas de las arqueas term%filas, que se encuentran en manantialescalientes,
son estables :asta a 1// =C.8 &in embargo, la idea de de una velocidad @%ptima@
para una reacci%n enzimtica es engaAosa, $a que la velocidad observada a
cualquier temperatura es el producto de dos velocidades, la velocidad de
reacci%n $ la velocidad de desnaturalizaci%n. &i se usase un ensa$o para medir
esta segunda actividad por segundo, la velocidad ser"a alta a altas
temperaturas, $ usando un ensa$o para cuantificar la formaci%n de producto
#sta ser"a baja a esas temperaturas.
pB. !a ma$or"a de las enzimas son sensibles al pB $ tiene un rango espec"fico en
el que se detecta actividad> todas tienen un pB %ptimo. El pB puede detener la
actividad enzimtica al provocar la desnaturalizaci%n de la estructura proteica
rompiendo enlaces i%nicos $ puentes de :idr%geno. !a ma$or"a de las enzimas
funcionan entre un pB . $ C> sin embargo, la pepsina estomacal tiene un pB
%ptimo de 2 $ la tripsina de C.
&aturaci%n del sustrato. ?umentando la concentraci%n de sustrato aumenta la
velocidad de la reacci%n o actividad enzimtica. &in embargo, el l"mite de
saturaci%n limita la velocidad. (na enzima est saturada cuando los sitios
activos de todas las mol#culas estn ocupados la ma$or"a del tiempo. ? partir
del punto de saturaci%n la reacci%n no puede acelerarse mediante adici%n de
sustrato, sea cual sea la cantidad aAadida. En un grfico la velocidad de
reacci%n :abr"a alcanzado una meseta.
MAT&RIA/ R&QU&RI.#
C tubos de ensa$e de 13 x 1// mm
1 agitador de vidrio
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2 pipetas graduadas de 8 m!
1 vaso de precipitados de 18/ m!
1 gradilla metlica
1 parrilla de calentamiento con agitaci%n
R&ACTI'#(
Der%xido de :idr%geno al 3 E
?cido clor:"drico /.1 9
Bidr%xido de sodio /.1 9
Cianuro de potasio /.1 9
.&(ARR#//# &0P&RIM&NTA/
En los siguientes experimentos mide la velocidad de reacci%n de acuerdo a la siguiente
escala4 / , no :a$ reacci%n> 1 , lenta> 2 , moderada> 3 , rpida> < , mu$ rpida.
PART& A! Comparaci !" #a ac$i%i!a! !" #a ca$a#a&a ' "# !i(i!o !" ma)a"&o
1. Coloca en < tubos de ensa$e 1 m! de per%xido de :idr%geno al 3 E.
2. ?grega a cada tubo las siguientes sustancias4
Tu1 A2re2ar
1 (n poco de arena fina
2 (n poco de 9nO
2
3 (na porci%n de papa cruda
< (na porci%n de :"gado
3. 7egistra la velocidad de reacci%n en cada tubo $ compara los resultados obtenidos.
PART& $. E*"c$o !"# p+ &o,r" #a ac$i%i!a! "-im.$ica
1. Coloca una pequeAa cantidad de papa fresca en 3 tubos de ensa$e. (sa el agitador
$ un poco de arena fina para triturar la papa.
2. ?grega 1 m! de agua destilada al primer tubo, 1 m! de BCl /.1 9 al segundo $ 1 m!
de FaOB /.1 9 al tercer tubo. 7egistra el pB de cada tubo.
3. ?diciona a cada tubo 1 m! de per%xido de :idr%geno al 3 E $ registra los resultados
al cabo de 8 minutos.
PART& C! E*"c$o !" #a $"mp"ra$/ra
1. Coloca una pequeAa cantidad de papa en un tubo de ensa$e $ tritura con arena, Don
el tubo en un baAo de agua :irviendo durante 8 minutos.
2. ?Aade 1 m! de per%xido de :idr%geno al 3 E. Observa $ registra los resultados.
3. 7epite lo anterior pero a temperatura ambiente.
<. Coloca en dos tubos de ensa$e 1 m! de per%xido de :idr%geno al 3 E. Coloca uno de
los tubos en un baAo de agua a 30=C $ el otro tubo en un baAo de agua :elada,
durante 8 minutos. ?gregar una pequeAa cantidad de papa triturada a cada tubo.
Compara las velocidades de reacci%n.
PART& .! E*"c$o !" / i0i,i!or
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1. Coloca una pequeAa cantidad de papa en un tubo de ensa$e $ tritura con arena,
agrega 3 gotas de GCF /.1 9. 9ezcla bien el contenido del tubo.
2. ?Aade 1 m! de per%xido de :idr%geno al 3 E al tubo $ registra los resultados.
Antaci3n de ls resultads del e4+eri,ent 5 discusi3n
1. Elabora una tabla con los resultados obtenidos.
2. Hasado en tus anotaciones sobre la velocidad de las reacciones de los experimentos
anteriores, elabora un grfico de barras.
3. IDuede el per%xido de :idr%geno ser descompuesto por otros catalizadores
diferentes de los que se encuentran en los tejidos vivosJ. Explica.
4. Kescribe el efecto del tamaAo de part"cula, de la temperatura, el pB $ del in:ibidor
sobre la velocidad de reacci%n de la enzima.
R&F&R&NCIA(
&urve$ of C:emistr$, !aborator$ Experiments, 0t: Edition, ? 9anual for C:emistr$ 1/<,
8, .. Kepartment of c:emistr$, &o$ut:ern Oregon (niversit$, ?s:land, Oregon,
(&?, 1LLC, pgs. .L-02.
C'EFC'?& H'O!OM'C?& de las mol#culas al :ombre, ?daptaci%n de la versi%n azul del
H'O!OM'C?! &C'EFCE& C(77'C(!(9 &;(KN, Educational Drograms 'mprovement
Corporation, Oenezuela. 9#xico, 1L02, pgs. 2/1 P 2/<.