La espectroscopia surgi con el estudio de la interaccin entre la radiacin y la materia como

funcin de la longitud de onda (). En un principio se refera al uso de la luz visible dispersada
segn su longitud de onda, por ejemplo por un prisma. Ms tarde el concepto se ampli
enormemente para comprender cualquier medida en funcin de la longitud de onda o de la
frecuencia. Por tanto, la espectroscopia puede referirse a interacciones con partculas de
radiacin o a una respuesta a un campo alternante o frecuencia variante (). Una extensin
adicional del alcance de la definicin aadi la energa (E) como variable, al establecerse la
relacin E=h para los fotones. Un grfico de la respuesta como funcin de la longitud de onda
(o ms comnmente la frecuencia) se conoce como espectro.
La espectrometra es la tcnica espectroscpica para tasar la concentracin o la
cantidad de especies determinadas. En estos casos, el instrumento que realiza tales medidas
es un espectrmetro o espectrgrafo.
La espectrometra a menudo se usa en fsica y qumica analtica para la identificacin
de sustancias mediante el espectro emitido o absorbido por las mismas.
La espectrometra tambin se usa mucho en astronoma y deteccin remota. La
mayora de los telescopios grandes tienen espectrmetros, que son usados para medir la
composicin qumica y propiedades fsicas de los objetos astronmicos, o para medir sus
velocidades a partir del efecto Doppler de sus lneas espectrales.
Segn la naturaleza de la excitacin medida

El tipo de espectrometra depende de la cantidad fsica medida. Normalmente, la
cantidad que se mide es una intensidad de energa absorbida o producida. Se pueden
distinguir estos tipos de espectrometra segn la naturaleza de la excitacin:

* Electromagntica. Interacciones de la materia con radiacin electromagntica como
la luz.

* De electrones. Interacciones con haces de electrones. La espectroscopia Auger
implica inducir el efecto Auger con un haz de electrones. En este caso la medida implica
la energa cintica del electrn como variable.

* De masa. Interaccin de especies cargadas con campos magnticos y/o elctricos,
dando lugar a un espectro de masas. El trmino "espectroscopia de masas" est
anticuado, ya que la tcnica es principalmente una forma de medida, aunque produzca
realmente un espectro para la observacin. Este espectro tiene la masa (m) como
variable, pero la medida es esencialmente de la energa cintica de la partcula.

* Acstica. Frecuencia de sonido.

* Dielctrica. Frecuencia de un campo elctrico externo.

* Mecnica. Frecuencia de un estrs mecnico externo, por ejemplo una torsin
aplicada a un trozo de material.
Segn el proceso de medida

La mayora de los mtodos espectroscpicos se diferencian en atmicos o moleculares
segn si se aplican a tomos o molculas. Junto con esta diferencia, se pueden distinguir
los siguientes tipos de espectrometra segn la naturaleza de su interaccin:

* De absorcin. Usa el rango de los espectros electromagnticos en los cuales una
sustancia absorbe. Incluye la espectrometra de absorcin atmica y varias tcnicas
moleculares, como la espectrometra infrarroja y la resonancia magntica nuclear
(RMN).
* De emisin. Usa el rango de espectros electromagnticos en los cuales una sustancia
irradia (emite). La sustancia primero debe absorber la energa. Esta energa puede ser de
una variedad de fuentes, que determina el nombre de la emisin subsiguiente, como la
luminescencia. Las tcnicas de luminescencia moleculares incluyen la
espectrofluorimetra.

* De dispersin. Mide la cantidad de luz que una sustancia dispersa en ciertas
longitudes de onda, ngulos de incidencia y ngulos de polarizacin. El proceso de
dispersin es mucho ms rpido que el proceso de absorcin/emisin. Una de las
aplicaciones ms tiles es la espectroscopia Raman.
ESPECTROMETRA DE ABSORCIN

La espectrometra de absorcin es una tcnica en la cual la energa de un haz de luz se
mide antes y despus de la interaccin con una muestra. Cuando se realiza con lser de
diodo ajustable, se la conoce como espectroscopia de absorcin con lser de diodo
ajustable. Tambin se combina a menudo con una tcnica de modulacin, como la
espectrometra de modulacin de longitud de onda, y de vez en cuando con la
espectrometra de modulacin de frecuencia a fin de reducir el ruido en el sistema.
ESPECTROMETRA DE FLUORESCENCIA

La espectrometra de fluorescencia usa fotones de energa ms elevada para excitar una
muestra, que emitir entonces fotones de inferior energa. Esta tcnica se ha hecho
popular en aplicaciones bioqumicas y mdicas, y puede ser usada con microscopa
confocal, transferencia de energa entre partculas fluorescentes, y visualizacin de la
vida media de fluorescencia.
ESPECTROMETRA DE RAYOS X

Cuando los rayos X con suficiente frecuencia (energa) interaccionan con una sustancia,
los electrones de las capas interiores del tomo se excitan a orbitales vacos externos, o
bien son eliminados completamente, ionizndose el tomo. El "agujero" de la capa
interior se llena entonces con electrones de los orbitales externos. La energa disponible
en este proceso de excitacin se emite como radiacin (fluorescencia) o quitar otros
electrones menos enlazados del tomo (efecto Auger). La absorcin o frecuencias de
emisin (energas) son caractersticas de cada tomo especfico. Adems, para un tomo
especfico se producen pequeas variaciones de frecuencia (energa) que son
caractersticas del enlace qumico. Con un aparato apropiado pueden medirse estas
frecuencias de rayos X caractersticas o energas de electrones Auger. La absorcin de
rayos X y la espectroscopia de emisin se usan en qumica y ciencias de los materiales
para determinar la composicin elemental y el enlace qumico.

La cristalografa de rayos X es un proceso de dispersin. Los materiales cristalinos
dispersan rayos X en ngulos bien definidos. Si la longitud de onda de los rayos X
incidentes es conocida, se pueden calcular las distancias entre planos de tomos dentro
del cristal. Las intensidades de los rayos X dispersados dan informacin sobre las
posiciones atmicas y permiten calcular la organizacin de los tomos dentro de la
estructura cristalina.
ESPECTROMETRA DE LLAMA

Las muestras de solucin lquidas son aspiradas en un quemador o una combinacin de
nebulizador/quemador, desolvatadas, atomizadas, y a veces excitadas a un estado
electrnico de energa ms alta. El uso de una llama durante el anlisis requiere
combustible y oxidante, tpicamente en forma de gases. Los gases combustibles
comunes que se usan son el acetileno (etino) o el hidrgeno. Los gases de oxidante
suelen ser el oxgeno, el aire, o el xido nitroso. Estos mtodos son a menudo capaces
de analizar elementos metlicos en partes por milln, billones, o posiblemente rangos
ms bajos de concentracin. Son necesarios detectores de luz para detectar la luz con
informacin que viene de la llama.

* Espectrometra de emisin atmica. Este mtodo usa la excitacin de la llama; los
tomos son excitados por el calor de la llama para emitir luz. Este mtodo suele usar un
quemador de consumo total con una salida de incineracin redonda. Se utiliza una llama
de temperatura ms alta que la usada en la espectrometra de absorcin atmica para
producir la excitacin de tomos de analito. Ya que los tomos de analito estn
excitados por el calor de la llama, no es necesaria ninguna lmpara elemental especial.
Puede usarse un policromador de alta resolucin para producir una intensidad de
emisin contra el espectro de longitud de onda por encima de un rango de longitudes de
onda que muestran lneas de excitacin de elementos mltiples. O bien puede usarse un
monocromador en una longitud de onda determinada para concentrarse en el anlisis de
un solo elemento en una cierta lnea de emisin. La espectrometra de emisin de
plasma es una versin ms moderna de este mtodo.

* Espectrometra de absorcin atmica (a menudo llamada AA). Este mtodo usa un
nebulizador pre-quemador (o cmara de nebulizacin) para crear una niebla de la
muestra, y un quemador en forma de ranura que da una llama de longitud de ruta ms
larga. La temperatura de la llama es lo bastante baja como para no excitar los tomos de
la muestra de su estado basal. El nebulizador y la llama se usan para desolvatar y
atomizar la muestra, pero la excitacin de los tomos de analito se realiza mediante
lmparas que brillan a travs de la llama en varias longitudes de onda para cada tipo de
analito. En la absorcin atmica, la cantidad de luz absorbida despus de pasar por la
llama determina la cantidad de analito en la muestra. Suele usarse un horno de grafito
para calentar, desolvatar y atomizar la muestra con el fin de obtener una mayor
sensibilidad. El mtodo del horno de grafito tambin puede analizar algn slido o
muestras mezcladas. A causa de su buena sensibilidad y selectividad, es un mtodo que
todava se usa para el anlisis de ciertos microelementos en muestras acuosas (y otros
lquidos).

* Espectrometra de fluorescencia atmica. Este mtodo usa un quemador con una
salida de incineracin redonda. La llama se usa para solvatar y atomizar la muestra, y
una lmpara emite luz a una longitud de onda especfica en la llama para excitar los
tomos de analito. Los tomos de ciertos elementos pueden entonces fluorescer,
emitiendo luz en diferentes direcciones. La intensidad de esta luz fluorescente sirve para
cuantificar la cantidad del elemento analizado en la muestra. Tambin puede usarse un
horno de grafito para la espectrometra de fluorescencia atmica. Este mtodo no es tan
comn como el de absorcin atmica o el de emisin de plasma.
ESPECTROMETRA DE EMISIN DE PLASMA

Es similar a la emisin atmica por llama, y la ha sustituido en gran parte.

* Espectrometra de plasma de corriente contnua (DCP). Un plasma de corriente
contnua se crea por una descarga elctrica entre dos electrodos. Es necesario un gas de
apoyo al plasma, y el ms comn es el argn. Las muestras pueden ser depositadas en
uno de los electrodos.

* Espectrometra de emisin ptica por descarga luminiscente (GD-OES)

* Espectrometra de emisin plasma-atmica acoplada inductivamente (ICP-AES)

* Espectrometra de ruptura inducida por lser (LIBS), tambin llamada
espectrometra de plasma inducida por lser (LABIOS)

* Espectrometra de plasma inducida por microondas(MIP)
ESPECTROMETRA DE CHISPA O ARCO

Se usa para el anlisis de elementos metlicos en muestras slidas. Para materiales no
conductores, se usa polvo de grafito para hacer conductora la muestra. En los mtodos
de espectroscopia de arco tradicionales se usa una muestra slida que es destruida
durante el anlisis. Un arco elctrico o chispa se pasan por la muestra, calentndola a
alta temperatura para excitar los tomos. Los tomos de analito excitado emiten luz en
varias longitudes de onda que pueden ser detectadas mediante mtodos espectroscpicos
comunes. Ya que las condiciones que producen la emisin por arco no son controladas
cuantitativamente, el anlisis de los elementos es cualitativo. Hoy da, las fuentes de
chispa con descargas controladas bajo una atmsfera de argn permiten que este mtodo
pueda ser considerado eminentemente cuantitativo, y su uso est muy extendido en los
laboratorios de control de produccin de fundiciones y aceras.
ESPECTROMETRA VISIBLE

Muchos tomos emiten o absorben la luz visible. A fin de obtener un espectro lineal
fino, los tomos deben estar en fase gaseosa. Esto significa que la sustancia tiene que
ser vaporizada. El espectro se estudia en absorcin o emisin. La espectroscopia de
absorcin visible a menudo se combina con la de absorcin ultravioleta (espectroscopia
UV/Vis). Aunque esta forma pueda ser poco comn al ser el ojo humano un indicador
similar, todava se muestra til para distinguir colores.
ESPECTROMETRA ULTRAVIOLETA

Todos los tomos absorben en la regin ultravioleta (UV) ya que estos fotones son
bastante energticos para excitar a los electrones externos. Si la frecuencia es lo bastante
alta, se produce la fotoionizacin. La espectrometra UV tambin se usa para la
cuantificacin de protenas y concentracin de ADN, as como para la proporcin de
protenas y ADN en una solucin. En las protenas se encuentran generalmente varios
aminocidos, como el triptfano, que absorben la luz en el rango de 280nm. El ADN
absorbe la luz en el rango de 260nm. Por esta razn, la proporcin de absorbancia
260/280nm es un buen indicador general de la pureza relativa de una solucin en
trminos de estas dos macromolculas. Tambin pueden hacerse estimaciones
razonables de la concentracin de ADN o protenas aplicando la ley de Beer.
ESPECTROMETRA INFRARROJA

La espectrometra infrarroja ofrece la posibilidad de medir tipos diferentes de
vibraciones en los enlaces atmicos a frecuencias diferentes. En qumica orgnica, el
anlisis de los espectros de absorcin infrarroja indica qu tipo de enlaces estn
presentes en la muestra.
ESPECTROMETRA RAMAN

La espectrometra Raman usa la dispersin inelstica de la luz para analizar modos
vibracionales y rotatorios de las molculas. Las "huellas digitales" que resultan son una
ayuda para el anlisis.
ESPECTROMETRA DE RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN)

La espectrometra de resonancia magntica nuclear analiza las propiedades magnticas
de ciertos ncleos atmicos para determinar diferentes ambientes locales electrnicos
del hidrgeno, carbono, u otros tomos en un compuesto orgnico u otro compuesto. Se
usa para determinar la estructura del compuesto.
ESPECTROMETRA DE FOTOEMISIN

La fotoemisin puede referirse a:
* Emisin de electrones a partir de la materia despus de la absorcin de fotones
energticos (efecto fotoelctrico).
* Emisin de fotones a partir de los semiconductores y metales cuando los electrones
que fluyen en el material pierden energa mediante deceleracin o recombinacin.
ESPECTROMETRA MSSBAUER

La espectrometra de transmisin o conversin electrnica (CEMS) de Mssbauer
prueba las propiedades de los ncleos de istopos especficos en ambientes atmicos
diferentes, analizando la absorcin resonante de rayos gamma de energa caracterstica,
lo que se conoce como efecto de Mssbauer.
OTROS TIPOS DE ESPECTROMETRA

* Fotoacstica. Mide las ondas sonoras producidas por la absorcin de radiacin.
* Fototermal. Mide el calor desarrollado por la absorcin de radiacin.
* De dicroismo circular.
* De actividad ptica Raman. Usa los efectos de la actividad ptica y la dispersin para
revelar informacin detallada sobre los centros quirales de las molculas.
* De terahertzios. Usa longitudes de onda por encima de la espectrometra infrarroja y
por debajo de las microondas o medidas de onda milimtricas.
* De dispersin inelstica de neutrones, como la espectroscopia Raman pero con
neutrones en vez de fotones.
* De tnel de electrones inelsticos. Usa los cambios de corriente debidos a la
interaccin de vibraciones electrnicas inelsticas a energas especficas que tambin
pueden medir transiciones pticamente prohibidas.
* Auger. Se usa para estudiar superficies de materiales a microescala. A menudo se usa
en relacin con la microscopa de electrones.
* De cavidad en anillo.
* De transformacin de Fourier. La transformacin Fourier es un mtodo eficiente para
tratar datos de espectros obtenidos usando interfermetros. Casi toda la espectrometra
infrarroja (FTIR) y la resonancia magntica nuclear (RMN) se realizan con la
transformacin de Fourier.
* De tiempo resuelto. Se usa en situaciones donde las propiedades cambian con el
tiempo.
* Mecnica. Implica interacciones con vibraciones macroscpicas, como los fotones.
Un ejemplo es la espectrometra acstica, que implica ondas sonoras.
* De fuerza. Usa una tcnica analtica basada en AFM.
* Dielctrica.
* Infrarroja termal. Mide la radiacin termal emitida por materiales y superficies, y se
usa para determinar el tipo de enlaces presentes en una muestra, as como su ambiente
reticular. Estas tcnicas son muy usadas por los qumicos orgnicos, mineralogistas y
gelogos.

Un espectrmetro (tambin llamado espectroscopio o espectrgrafo) es un instrumento
ptico que se usa para medir las propiedades de la luz sobre una porcin especfica del
espectro electromagntico. Su utilidad es realizar anlisis espectroscpicos para
identificar materiales. La variable medida es generalmente la intensidad de la luz, pero
tambin podra ser, por ejemplo, el estado de polarizacin. La variable independiente es,
por lo general, la longitud de onda de la luz, que suele expresarse como una fraccin de
metro, aunque a veces se expresa como una unidad directamente proporcional a la
energa del fotn, tales como el nmero de onda o los voltios de los electrones (que
tiene una relacin recproca a la longitud de onda).

Un espectrmetro se usa en espectroscopia para producir lneas espectrales y medir sus
longitudes de onda e intensidades. Son instrumentos que funcionan en una amplia
variedad de longitudes de onda, desde rayos gamma y rayos X hasta el infrarrojo lejano.
Si la regin de inters est restringida a un rango cercano al espectro visible, el estudio
se llama espectrofotometra.

En general, cada espectrmetro funcionar sobre una pequea porcin de este rango
total debido a las diferentes tcnicas usadas para medir las distintas porciones del
espectro. Por debajo de las frecuencias pticas (es decir, en el rango de las microondas y
radiofrecuencias), el analizador de espectro es un dispositivo electrnico estrechamente
relacionado.
Espectroscopios

Los espectroscopios se usan a menudo en astronoma y en
algunas ramas de la qumica. Los primeros aparatos de
este tipo eran simplemente un prisma con graduaciones
que marcaban las longitudes de onda de la luz. Los
espectroscopios modernos, como los monocromadores,
generalmente usan una rejilla de difraccin, una
hendidura mvil y una especie de fotodetector, adems de
estar automatizados y controlados por un ordenador. El
espectroscopio fue inventado por Gustav Robert Georg
Kirchhoff y por Robert Wilhelm Bunsen.

Cuando un material se calienta hasta la incandescencia
emite una luz que es caracterstica de la composicin
atmica del material. Las frecuencias de luz particulares
dan lugar a bandas bruscamente definidas en la escala,
que son similares a huellas digitales. Por ejemplo, el
elemento sodio tiene una doble banda amarilla muy
caracterstica, conocida como lneas D del sodio a
588.9950 y 589.5924 nanmetros, cuyo color ser
familiar a quien haya visto una lmpara de vapor de sodio de baja presin.

En el diseo del espectroscopio original, a principios del siglo XIX, la luz entraba en
una hendidura y una lente colimadora transformaba la luz en un haz delgado de rayos
paralelos. La luz pasaba entonces por un prisma (en espectroscopios porttiles, por lo
general un prisma Amici) que refractaba el haz de luz en un espectro, debido a que las

Comparacin de diferentes espectrmetros
basados en la difraccin: reflexin
ptica, refraccin ptica y fibra ptica.
diferentes longitudes de onda eran refractadas en cantidades diferentes por la dispersin.
Esta imagen se vea entonces a travs de un tubo con una escala que se transpona sobre
la imagen espectral, permitiendo su medida directa.

Con el desarrollo de la pelcula fotogrfica, se cre el espectrgrafo, que era ms
exacto. Estaba basado en el mismo principio que el espectroscopio, pero tena una
cmara en lugar del tubo de inspeccin. En aos recientes, la cmara ha sido sustituida
por circuitos electrnicos construidos alrededor del tubo fotomultiplicador, permitiendo
el anlisis espectrogrfico en tiempo real con mucha ms exactitud. En los sistemas
espectrogrficos tambin se usan series de fotosensores en lugar de la pelcula.

Tal anlisis espectral, o espectroscopia, se ha convertido en un importante instrumento
cientfico para analizar la composicin de material desconocido, y para estudiar
fenmenos y teoras astronmicas. El espectrmetro mide longitudes de onda.
Espectrgrafos

Un espectrgrafo es un instrumento
que transforma una forma de onda de
dominio temporal entrante en un
espectro de frecuencia, o generalmente
en una secuencia de tales espectros.
Hay varias clases de mquinas a las
que se llama espectrgrafos, segn la
naturaleza precisa de las ondas. Los
primeros espectrgrafos usaban papel fotogrfico como detector. La clasificacin
espectral de estrellas y el descubrimiento de la secuencia principal, la ley de Hubble y la
secuencia de Hubble, se hicieron con espectrgrafos que usaban papel fotogrfico. El
pigmento vegetal fitocromo fue descubierto con un espectrgrafo que usaba plantas
vivas como detectores. Los espectrgrafos ms recientes usan detectores electrnicos,
como cmaras CCDs que pueden usarse tanto para luz visible como para luz
ultravioleta. La eleccin exacta del detector depende de las longitudes de onda de la luz
que va a ser registrada.

El prximo Telescopio Espacial de James Webb contendr un espectrgrafo cercano al
infrarrojo (NIRSpec) y un espectrmetro en mitad del infrarrojo (MIRI).

Un espectrgrafo de escala usa dos rejillas de difraccin, giradas 90 grados una respecto
a la otra y colocadas cerca. Por lo tanto, se usa un punto de entrada y no una hendidura,
mientras que un segundo chip CCD registra el espectro. Con este pequeo chip se
consigue un espectro muy fino, y tiene como ventaja que la ptica colimadora no tiene
que ser optimizada para coma o astigmatismo, ya que la aberracin esfrica puede ser
establecida a cero.

A veces al espectrgrafo se le llama policromador, como analoga de monocromador.

Esquema de un espectrmetro de rejilla
El espectro electromagntico (o simplemente espectro) es el rango de todas las
radiaciones electromagnricas posibles. El espectro de un objeto es la distribucin
caracterstica de la radiacin electromagntica de ese objeto.

El espectro electromagntico se extiende desde las bajas frecuencias usadas para la
radio moderna (extremo de la onda larga) hasta los rayos gamma (extremo de la onda
corta), que cubren longitudes de onda de entre miles de kilmetros y la fraccin del
tamao de un tomo. Se piensa que el lmite de la longitud de onda corta est en las
cercanas de la longitud Planck, mientras que el lmite de la longitud de onda larga es el
tamao del universo mismo, aunque en principio el espectro sea infinito y continuo.
Rango del espectro

El espectro cubre la energa de ondas electromagnticas que tienen longitudes de onda
diferentes. Las frecuencias de 30 Hz y ms bajas pueden ser producidas por ciertas
nebulosas estelares y son importantes para su estudio. Se han descubierto frecuencias
tan altas como 2.9 * 1027 Hz a partir de fuentes astrofsicas.

La energa electromagntica en una longitud de onda particular (en el vaco) tiene una
frecuencia asociada f y una energa fotnica E. As, el espectro electromagntico puede
expresarse en trminos de cualquiera de estas tres variables, que estn relacionadas
mediante ecuaciones.

De este modo, las ondas electromagnticas de alta frecuencia tienen una longitud de
onda corta y energa alta; las ondas de frecuencia baja tienen una longitud de onda larga
y energa baja.

Siempre que las ondas de luz (y otras ondas electromagnticas) se encuentran en un
medio (materia), su longitud de onda se reduce. Las longitudes de onda de la radiacin
electromagntica, sin importar el medio por el que viajen, son, por lo general, citadas en
trminos de longitud de onda en el vaco, aunque no siempre se declara explcitamente.

Generalmente, la radiacin electromagntica se clasifica por la longitud de onda: ondas
de radio, microondas, infrarroja y regin visible, que percibimos como luz, rayos
ultravioleta, rayos X y rayos gamma.

El comportamiento de la radiacin electromagntica depende de su longitud de onda.
Las frecuencias ms altas tienen longitudes de onda ms cortas, y las frecuencias
inferiores tienen longitudes de onda ms largas. Cuando la radiacin electromagntica
interacciona con tomos y molculas, su comportamiento tambin depende de la
cantidad de energa por cuanto que transporta. La radiacin electromagntica puede
dividirse en octavas (como las ondas sonoras).

La espectroscopia puede descubrir una regin mucho ms amplia del espectro que el
rango visible de 400 nm a 700 nm. Un espectroscopio de laboratorio comn puede
descubrir longitudes de onda desde 2 nm a 2500 nm. Con este tipo de aparatos puede
obtenerse informacin detallada sobre las propiedades fsicas de objetos, gases o incluso
estrellas. La espectrometra se usa sobre todo en astrofsica. Por ejemplo, muchos
tomos de hidrgeno emiten ondas de radio que tienen una longitud de onda de 21.12
cm.
Tipos de radiacin

Aunque el esquema de clasificacin suele ser preciso, en realidad existe algo de
trasposicin entre tipos vecinos de energa electromagntica. Por ejemplo, las ondas de
radio a 60 Hz pueden ser recibidas y estudiadas por astrnomos, o pueden ser
conducidas a lo largo de cables como energa elctrica. Tambin, algunos rayos gamma
de baja energa realmente tienen una longitud de onda ms larga que algunos rayos X de
gran energa. Esto es posible porque "rayo gamma" es el nombre que se le da a los
fotones generados en la descomposicin nuclear u otros procesos nucleares y
subnucleares, mientras que los rayos X son generados por transiciones electrnicas que
implican electrones interiores muy energticos. Por lo tanto, la diferencia entre rayo
gamma y rayo X est relacionada con la fuente de radiacin ms que con la longitud de
onda de la radiacin. Generalmente, las transiciones nucleares son mucho ms
energticas que las transiciones electrnicas, as que los rayos gamma suelen ser ms
energticos que los rayos X. Sin embargo, hay transiciones nucleares de baja energa
(p.ej. la transicin nuclear de 14.4 keV del Fe-57) que producen rayos gamma que son
menos energticos que algunos de los rayos X de mayor energa.

Radiofrecuencia

Las ondas de radio suelen ser utilizadas mediante antenas del tamao apropiado (segn
el principio de resonancia), con longitudes de onda en los lmites de cientos de metros a
aproximadamente un milmetro. Se usan para la transmisin de datos, a travs de la
modulacin. La televisin, los telfonos mviles, las resonancias magnticas, o las redes
inalmbricas y de radio-aficionados, son algunos usos populares de las ondas de radio.

Las ondas de radio pueden transportar informacin variando la combinacin de
amplitud, frecuencia y fase de la onda dentro de una banda de frecuencia. El uso del
espectro de radio est regulado por muchos gobiernos mediante la asignacin de
frecuencias. Cuando la radiacin electromagntica impacta sobre un conductor, se
empareja con l y viaja a lo largo del mismo, induciendo una corriente elctrica en la
superficie de ese conductor mediante la excitacin de los electrones del material de
conduccin. Este efecto (el efecto piel) se usado en las antenas. La radiacin
electromagntica tambin puede hacer que ciertas molculas absorban energa y se
calienten, una caracterstica que se utiliza en en los microondas.

Microondas

La frecuencia super alta (SHF) y la frecuencia extremadamente alta (EHF) de las
microondas son las siguientes en la escala de frecuencia. Las microondas son ondas los
suficientemente cortas como para emplear guas de ondas metlicas tubulares de
dimetro razonable. La energa de microondas se produce con tubos klistrn y tubos
magnetrn, y con diodos de estado slido como los dispositivos Gunn e IMPATT. Las
microondas son absorbidas por la molculas que tienen un momento dipolar en lquidos.
En un horno microondas, este efecto se usa para calentar la comida. La radiacin de
microondas de baja intensidad se utiliza en Wi-Fi.

El horno microondas promedio, cuando est activo, est en un rango cercano y bastante
poderoso como para causar interferencia con campos electromagnticos mal protegidos,
como los que se encuentran en dispositivos mdicos mviles y aparatos electrnicos
baratos.

Rayos T

La radiacin de terahertzios (o Rayos T) es una regin del espectro situada entre el
infrarrojo lejano y las microondas. Hasta hace poco, este rango estaba muy poco
estudiado, ya que apenas haba fuentes para la energa microondas en el extremo alto de
la banda (ondas submilimtrica o tambin llamadas ondas terahertzios). Sin embargo,
estn apareciendo aplicaciones para mostrar imgenes y comunicaciones. Los
cientficos tambin buscan aplicar la tecnologa de rayos T en las fuerzas armadas,
donde podran usarse para dirigirlas a las tropas enemigas, ya que las ondas de alta
frecuencia incapacitan los equipos electrnicos.

Radiacin infrarroja

La parte infrarroja del espectro electromagntico cubre el rango desde aproximadamente
los 300 GHz (1 mm) hasta los 400 THz (750 nm). Puede ser dividida en tres partes:

* Infrarrojo lejano, desde 300 GHz (1 mm) hasta 30 THz (10 m). La parte inferior de
este rango tambin puede llamarse microondas. Esta radiacin es absorbida por los
llamados modos rotatorios en las molculas en fase gaseosa, mediante movimientos
moleculares en los lquidos, y mediante fotones en los slidos. El agua en la atmsfera
de la Tierra absorbe tan fuertemente esta radiacin que confiere a la atmsfera
efectividad opaca. Sin embargo, hay ciertos rangos de longitudes de onda ("ventanas")
dentro del rango opacao que permiten la transmisin parcial, y pueden ser usados en
astronoma. El rango de longitud de onda de aproximadamente 200 m hasta unos
pocos mm suele llamarse "radiacin submilimtrica" en astronoma, reservando el
infrarrojo lejano para longitudes de onda por debajo de los 200 m.

* Infrarrojo medio, desde 30 a 120 THz (10 a 2.5 m). Los objetos calientes (radiadores
de cuerpo negro) pueden irradiar fuertemente en este rango. Se absorbe por vibraciones
moleculares, es decir, cuando los diferentes tomos en una molcula vibran alrededor de
sus posiciones de equilibrio. Este rango es llamado, a veces, regin de huella digital, ya
que el espectro de absorcin del infrarrojo medio de cada compuesto es muy especfico.

* Infrarrojo cercano, desde 120 a 400 THz (2500 a 750 nm). Los procesos fsicos que
son relevantes para este rango son similares a los de la luz visible.

Radiacin visible (luz)

La frecuencia por encima del infrarrojo es la de la luz visible. Este es el rango en el que
el Sol y las estrellas similares a l emiten la mayor parte de su radiacin. No es
probablemente una coincidencia que el ojo humano sea sensible a las longitudes de
onda que el sol emite con ms fuerza. La luz visible (y la luz cercana al infrarrojo) son
absorbidas y emitidas por electrones en las molculas y tomos que se mueven desde un
nivel de energa a otro. La luz que vemos con nuestros ojos es realmente una parte muy
pequea del espectro electromagntico. Un arco iris muestra la parte ptica (visible) del
espectro electromagntico; el infrarrojo (si pudiera verse) estara localizado justo a
continuacin del lado rojo del arco iris, mientras que el ultravioleta estara tras el
violeta.

La radiacin electromagntica con una longitud de onda entre aproximadamente 400 nm
y 700 nm es detectado por el ojo humano y percibida como luz visible. A otras
longitudes de onda, sobre todo al infrarrojo cercano (ms largo de 700 nm) y al
ultravioleta (ms corto que 400 nm) tambin se les llama luz a veces, sobre todo cuando
la visibilidad para los humanos no es relevante.

Si la radiacin que tiene una frecuencia en la regin visible del espectro
electromagntico se refleja en un objeto, como por ejemplo un plato hondo de fruta, y
luego impacta en nuestros ojos, obtenemos una percepcin visual de la escena. El
sistema visual de nuestro cerebro procesa la multitud de frecuencias reflejadas en
diferentes sombras y matices, y a travs de este fenomeno psicofsico que todava no se
entiende completamente, es como percibiramos los objetos.

En la mayor parte de las longitudes de onda, sin embargo, la informacin transportada
por la radiacin electromagntica no es directamente descubierta por los sentidos
humanos. Las fuentes naturales producen radiacin electromagntica a travs del
espectro, y nuestra tecnologa tambin puede manipular un amplio rango de longitudes
de onda. La fibra ptica transmite luz que, aunque no es adecuada para la visin directa,
puede transportar datos que luego son traducidos en sonido o imagen. La codificacin
usada en tales datos es similar a lo que se usa con las ondas de radio.

Luz ultravioleta

La siguiente frecuencia en el espectro es el ultravioleta (o rayos UV), que es la radiacin
cuya longitud de onda es ms corta que el extremo violeta del espectro visible.

Al ser muy energtica, la radiacin ultravioleta puede romper enlaces qumicos,
haciendo a las molculas excepcionalmente reactivas o ionizndolas, lo que cambia su
comportamiento. Las quemaduras solares, por ejemplo, estn causadas por los efectos
perjudiciales de la radiacin UV en las clulas de la piel, y pueden causar incluso cncer
de piel si la radiacin daa las molculas de ADN complejas en las clulas (la radiacin
UV es un mutgeno). El Sol emite una gran cantidad de radiacin UV, lo que podra
convertir rpidamente la Tierra en un desierto estril si no fuera porque, en su mayor
parte, es absorbida por la capa de ozono de la atmsfera antes de alcanzar la superficie.

Rayos X

Despus del ultravioleta vienen los rayos X. Los rayos X duros tienen longitudes de
onda ms cortas que los rayos X suaves. Se usan generalmente para ver a travs de
algunos objetos, as como para la fsica de alta energa y la astronoma. Las estrellas de
neutrones y los discos de acrecin alrededor de los agujeros negros emiten rayos X, lo
que nos permite estudiarlos.

Los rayos X pasan por la mayor parte de sustancias, y esto los hace tiles en medicina e
industria. Tambin son emitidos por las estrellas, y especialmente por algunos tipos de
nebulosas. Un aparato de radiografa funciona disparando un haz de electrones sobre un
"objetivo". Si los electrones se disparan con suficiente energa, se producen rayos X.

Rayos gamma

Despus de los rayos X duros vienen los rayos gamma. Son los fotones ms energticos,
y no se conoce el lmite ms bajo de su longitud de onda. Son tiles a los astrnomos en
el estudio de objetos o regiones de alta energa, y son tiles para los fsicos gracias a su
capacidad penetrante y su produccin de radioistopos. La longitud de onda de los
rayos gamma puede medirse con gran exactitud por medio de dispersin Compton.

No hay ningn lmite exactamente definido entre las bandas del espectro
electromagntico. Algunos tipos de radiacin tienen una mezcla de las propiedades de
radiaciones que se encuentran en las dos regiones del espectro. Por ejemplo, la luz roja
se parece a la radiacin infrarroja en que puede resonar algunos enlaces qumicos.

Espectrometra de absorcin

La espectrometra de absorcin se refiere a una variedad de tcnicas que emplean la
interaccin de la radiacin electromagntica con la materia. En la espectrometra de
absorcin, se compara la intensidad de un haz de luz medida antes y despus de la interaccin
con una muestra. Las palabras transmisin y remisin se refieren a la direccin de viaje de los
haces de luz medidos antes y despus de la absorcin. Las descripciones experimentales por lo
general asumen que hay una nica direccin de incidencia de la luz sobre la muestra, y que un
plano perpendicular a esta direccin pasa por la muestra. En la transmisin, la luz es
dispersada desde la muestra hacia un detector en el lado opuesto de la muestra. En la
remisin, la luz es dispersada desde la muestra hacia un detector en el mismo lado de la
muestra. La radiacin remitida puede estar formada por dos clases de radiacin: reflexin
especular (cuando el ngulo de reflexin es igual al ngulo del frecuencia) y reflexin difusa (en
todos los dems ngulos).

Otro descriptor asociado con la espectrometra de absorcin es la variedad de longitudes de
onda de radiacin que se usa en el haz de luz incidente. Por ejemplo, se habla de
espectrometra infrarroja o de microondas, que son a su vez ejemplos de espectrometra de
absorcin. Por otra parte, tambin se encuentran referencias a otros rangos de longitud de
onda, como la espectrometra de rayos X, que por lo general denotan una espectrometra de
emisin. Este artculo trata principalmente de la espectrometra ultravioleta-visible.

La espectrometra UV-visible se refiere a tcnicas donde se mide cunta luz de una longitud de
onda particular (color) es absorbida por una muestra. Ya que el color a menudo puede
correlacionarse con la presencia y/o la estructura de una sustancia qumica particular, y ya que
la absorbancia es una medida fcil y barata de hacer, la espectrometra de absorbancia se usa
ampliamente en clculos cualitativos, cuantitativos y estructurales. Por ejemplo, el ADN
absorbe luz en el rango ultravioleta (por eso la luz del sol es peligrosa), y por tanto la cantidad
de ADN en una muestra puede ser determinarse midiendo la absorbancia de la luz ultravioleta.

La relacin entre el color visible y el color de absorbancia es complicada; una muestra que
parece roja no absorbe en el rojo, sino que absorbe en otras longitudes de onda (colores) de
modo que la luz que pasa por la muestra se enriquece en rojo.

La palabra "color" se usa para indicar que la espectrometra de absorbancia no slo trata con la
luz en rango visible (fotones con una longitud de onda de aproximadamente 400 a 700
nanmetros), sino tambin con longitudes de onda que estn fuera del rango de la visin
humana (infrarrojo, ultravioleta, rayos X). Sin embargo, los principios son bastante similares
tanto para la luz visible como para la no visible.

Tcnicamente, la espectrometra de absorcin se basa en la absorcin de fotones por una o
ms sustancias presentes en una muestra (que puede ser un slido, lquido, o gas), y la
promocin subsiguiente del electrn (o electrones) desde un nivel de energa a otro en esa
sustancia. La muestra puede ser una sustancia pura, homognea o una mezcla compleja. La
longitud de onda en la cual el fotn incidente se absorbe es determinada por la diferencia en
los niveles de energa disponibles de las diferentes sustancias presentes en la muestra. Esta es
la selectividad de la espectrometra de absorbancia, la capacidad de generar fuentes de
fotones (luz) que son absorbidas slo por algunos componentes en una muestra. Tpicamente,
los rayos X se usan para revelar la composicin qumica, mientras que las longitudes de onda
cercanas al ultravioleta y el infrarrojo se usa para distinguir las configuraciones de diversos
ismeros detalladamente. En la espectroscopia de absorcin, los fotones absorbidos no son
emitidos de nuevo (como en la fluorescencia) sino que la energa que se transfiere al
compuesto qumico en la absorbancia de un fotn se pierde por medios no radiantes, como la
transferencia de energa por calor a otras molculas.

Aunque la intensidad relativa de las lneas de absorcin no vara con la concentracin, a
cualquier longitud de onda dada la absorbancia medida ( log (I / I0)) es proporcional a la
concentracin molar de las especies que absorben y el grosor de la muestra por la que la luz
pasa. Esto se conoce como ley de Beer-Lambert. El grfico de la cantidad de radiacin
absorbida respecto a la longitud de onda para un compuesto particular se conoce como
espectro de absorcin. El espectro de absorcin normalizado es caracterstico para cada
compuesto particular, no cambia con la concentracin y es como la "huella digital" qumica del
compuesto. En las longitudes de onda correspondientes a los niveles de energa resonantes de
la muestra, se absorben algunos de los fotones incidentes, lo que provoca una cada en la
intensidad de transmisin medida y una pendiente en el espectro. El espectro de absorcin
puede medirse usando un espectrmetro. Conociendo la forma del espectro, la longitud de
ruta ptica y la cantidad de radiacin absorbida, se puede determinar la estructura y la
concentracin del compuesto.

Los espectros de absorcin de luz visible pueden tomarse en cualquier material que sea
visiblemente claro. El poliestireno, el cuarzo, y las clulas de borosilicato (Pyrex), son los
materiales ms usados. La luz ultravioleta es absorbida por la mayor parte de cristales y
plsticos, por lo que se usan clulas de cuarzo. El Si-O presente en el cristal y el cuarzo, y el C-C
en el plstico absorben la luz infrarroja. Los espectros de absorcin infrarrojos se realizan
generalmente con una delgada pelcula de la muestra sostenida entre platos de cloruro de
sodio. Otros mtodos implican suspender el compuesto en una sustancia que no absorba en la
regin de estudio. Las emulsiones de aceite mineral (Nujol) y los cristales de bromuro de
potasio suelen ser los ms comunes. El NaCl y KBr, al ser inicos, no absorben el infrarrojo de
forma significativa, y el Nujol tiene un espectro infrarrojo relativamente sencillo.
Espectrometra como instrumento analtico

A menudo es de inters conocer no slo la composicin qumica de una muestra dada, sino
tambin las concentraciones relativas de varios compuestos de una mezcla. Para hacer esto
debe construirse una escala, o curva de calibracin, usando varias concentraciones conocidas
para cada compuesto de inters. El grfico que resulta de la concentracin respecto a la
absorbancia se hace a mano o usando un software de ajuste de curvas apropiado, que usa una
frmula matemtica para determinar la concentracin en la muestra. La repeticin de este
proceso para cada compuesto en una muestra da un modelo de varios espectros de absorcin
que en conjunto reproducen la absorcin observada. De esta manera es posible, por ejemplo,
medir la composicin qumica de los cometas sin tener muestras de ellos en la Tierra.

Un ejemplo simple: un cianuro estndar a 200 partes por milln da una absorbancia con un
valor arbitrario de 1540. Una muestra desconocida da un valor de 834. Ya que esta es una
relacin lineal y pasa por el origen, el valor desconocido se calcula fcilmente como 108 partes
por milln. Con este mtodo de proporcin no es necesario conocer los valores de los
coeficientes gobernantes, o cromforos, o la longitud de clula experimental.

En la prctica, el uso de una curva de calibracin, ms que un solo punto de comparacin,
reduce la incertidumbre en la medida final por exclusin de la interferencia aleatoria (ruido) en
la preparacin de los estndares.
Espectrometra de fluorescencia

La espectrometra de fluorescencia (tambin llamada fluorometra o espectrofluorimetra) es
un tipo de espectroscopia electromagntica que analiza la fluorescencia de una muestra. Se
trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz ultravioleta, que excita los electrones de las
molculas de ciertos compuestos y provoca que emitan luz de una menor energa,
generalmente luz visible (aunque no necesariamente). Una tcnica complementaria es la
espectrometra de absorcin.

Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluormetros o fluormetros.
TEORA DE LA FLUORESCENCIA

Las molculas tienen diferentes estados llamados niveles de energa. La espectrometra de
fluorescencia se refiere principalmente a estados vibracionales y electrnicos. En general, las
especies objeto de examen tendrn un estado electrnico basal (un estado de baja energa) de
inters, y un estado electrnico excitado de mayor energa. Dentro de cada uno de estos
estados electrnicos hay diferentes estados vibracionales.

En la espectroscopia de fluorescencia, primero se excita la muestra mediante la absorcin de
un fotn de luz, desde su estado electrnico basal a uno de los distintos estados vibracionales
del estado electrnico excitado. Las colisiones con otras molculas causan que la molcula
excitada pierda energa vibracional hasta que alcanza el estado vibracional ms bajo del estado
electrnico excitado.

La molcula desciende luego a uno de los distintos niveles de vibracin del estado electrnico
basal, emitiendo un fotn en el proceso. Como las molculas pueden caer a cualquiera de los
diferentes niveles de vibracin en el estado basal, los fotones emitidos tendrn diferentes
energas y, por lo tanto, frecuencias. As pues, mediante el anlisis de las diferentes
frecuencias de luz emitida por espectrometra de fluorescencia, junto con sus intensidades
relativas, se puede determinar la estructura de los diferentes niveles de vibracin.

En un experimento tpico, se miden las diferentes frecuencias de luz fluorescente emitida por
una muestra, manteniendo la luz de excitacin a una longitud de onda constante. A esto se le
llama espectro de emisin. Un espectro de excitacin se mide mediante el registro de una
serie de espectros de emisin utilizando luz de diferentes longitudes de onda.
INSTRUMENTOS

En la espectrometra de fluorescencia se utilizan dos tipos generales de instrumentos:

* Fluormetros de filtro. Utilizan filtros para aislar la luz incidente y la luz fluorescente.
* Espectrofluormetros. Usan monocromadores de retculo de difraccin para aislar la luz
incidente y la luz fluorescente.

Ambos tipos de instrumentos utilizan el siguiente esquema. La luz de una fuente de excitacin
pasa a travs de un filtro o monocromador, e incide sobre la muestra. Una parte de la luz
incidente es absorbida por la muestra, y algunas de las molculas de la muestra producen una
fluorescencia. La luz fluorescente es emitida en todas las direcciones. Parte de esta luz
fluorescente pasa a travs de un segundo filtro o monocromador y llega a un detector, el cual
muy a menudo se encuentra a 90 con respecto al haz de luz incidente para minimizar el riesgo
de que la luz incidente reflejada o transmitida llegue al detector.

Diversas fuentes de luz pueden ser utilizadas como fuentes de excitacin, incluyendo el lser,
fotodiodos y lmparas; arcos de xenn y lmparas de vapor de mercurio. Un lser slo emite
luz de alta irradiancia en un intervalo muy estrecho de longitudes de onda, por lo general a
0,01 nm, lo que hace innecesario el monocromador de excitacin o el filtro. La desventaja de
este mtodo es que la longitud de onda de un lser no se puede cambiar mucho. Una lmpara
de vapor de mercurio es una lmpara lineal, lo que significa que emite luz cerca del pico de
longitudes de onda. Por el contrario, un arco de xenn tiene un espectro de emisin continuo
con intensidad casi constante en el rango de 300-800 nm, y una irradiancia suficiente para las
mediciones hasta justo por encima de 200 nm.

En los fluormetros pueden usarse filtros y/o monocromadores. Un monocromador transmite
luz de una longitud de onda y tolerancia ajustables. El tipo ms comn de monocromador
utiliza un retculo de difraccin; es decir, la luz colimada entra en una rejilla y sale con un
ngulo diferente dependiendo de la longitud de onda. El monocromador puede entonces
seleccionar qu longitudes de onda transmite. Para permitir mediciones de anisotropa se
aaden dos filtros de polarizacin: uno despus del monocromador de excitacin o filtro, y
otro antes del monocromador de emisin o filtro.

Como se mencion antes, la fluorescencia se mide ms a menudo en un ngulo de 90 en
relacin a la luz de excitacin. Esta geometra se utiliza en lugar de colocar el sensor en la lnea
de la luz de excitacin en un ngulo de 180 a fin de evitar la interferencia de la luz de
excitacin transmitida. El monocromador no es perfecto y transmitir la luz con otras
longitudes de onda diferentes a las establecidas. Un monocromador ideal slo transmite luz en
el rango especificado y tiene una transmisin independiente de la longitud de onda. Al medir
en un ngulo de 90, slo la luz dispersa por la muestra provoca luz. Esto se traduce en una
mejor relacin seal-ruido, y reduce el lmite de deteccin a un factor de aproximadamente
10000, si se compara con la geometra de 180. Por otra parte, la fluorescencia tambin puede
ser medida desde la parte delantera, procedimiento que se utiliza a menudo para las muestras
turbias.

El detector puede ser de un solo canal o de mltiples canales. El detector de un nico canal
slo puede detectar la intensidad de una longitud de onda en cada momento, mientras que el
de mltiples canales detecta la intensidad en todas las longitudes de onda simultneamente,
con lo que el monocromador de emisin o filtro es innecesario. Los diferentes tipos de
detectores tienen sus ventajas y desventajas.

El fluormetro ms verstil, con monocromadores dobles y una fuente de luz de excitacin
continua, puede registrar tanto un espectro de excitacin como un espectro de fluorescencia.
Al medir los espectros de fluorescencia, la longitud de onda de la luz de excitacin se mantiene
constante, de preferencia en una longitud de onda de alta absorcin, y el monocromador de
emisin escanea el espectro. Para medir los espectros de excitacin, la longitud de onda que
pasa a travs del filtro o monocromador de emisin se mantiene constante y el
monocromador de excitacin va escaneando. El espectro de excitacin generalmente es
idntico al espectro de absorcin, ya que la intensidad de la fluorescencia es proporcional a la
absorcin.
ANLISIS DE LOS DATOS

A bajas concentraciones, la intensidad de fluorescencia es, por lo general, proporcional a la
concentracin del fluorforo.

A diferencia de la espectrometra visible o ultravioleta 'estndar', los espectros independientes
del dispositivo no son fciles de alcanzar. Son varios los factores que influyen y distorsionan los
espectros, y son necesarias correcciones para lograr el espectro 'verdadero', es decir,
independiente de la mquina.

Los distintos tipos de distorsiones se pueden clasificar en relacin al instrumento o a la
muestra. En primer lugar, veamos las distorsiones derivadas del instrumento. Como punto de
partida, la intensidad de las fuentes de luz y las caractersticas de la longitud de onda varan
con el tiempo durante cada experimento. Por otra parte, ninguna lmpara tiene una
intensidad constante en todas las frecuencias. Para corregir esto, se puede aplicar un haz
separador despus del filtro o monocromador de excitacin, para dirigir una porcin de luz a
un detector de referencia.

Adems, debe tenerse en cuenta el rendimiento de transmisin de los monocromadores y los
filtros, ya que tambin puede cambiar con el tiempo. La eficacia de la transmisin del
monocromador vara dependiendo de la longitud de onda. Esta es la razn por la que debe
colocarse un detector de referencia despus del filtro o monocromador de excitacin. El
porcentaje de fluorescencia recogido por el detector tambin depende del sistema. Por otra
parte, la eficiencia cuntica del detector, es decir, el porcentaje de fotones detectados, vara
entre los diferentes detectores, segn la longitud de onda y el tiempo.

La correccin de todos estos factores instrumentales para conseguir un "estndar" del
espectro es un proceso tedioso, que slo se aplica en la prctica cuando es estrictamente
necesario. Es el caso de las mediciones de rendimiento cuntico o cuando se encuentra la
longitud de onda con la mayor intensidad de emisin, por ejemplo.

Como se mencion anteriormente, tambin surgen distorsiones de la muestra. Por lo tanto,
algunos aspectos de la muestra deben tenerse en cuenta tambin. En primer lugar, la
fotodescomposicin puede disminuir la intensidad de fluorescencia con el tiempo. La
dispersin de la luz tambin debe tenerse en cuenta. Los tipos ms importantes de dispersin
en este contexto son la dispersin de Rayleigh y la de Raman. La luz dispersa por dispersin de
Rayleigh tiene la misma longitud de onda que la luz incidente, mientras que en la dispersin
Raman la luz cambia a longitudes de onda ms largas. La dispersin de Raman es el resultado
de un estado electrnico virtual inducido por la luz de excitacin. A partir de este estado
virtual, las molculas pueden volver a un nivel vibracional distinto del estado basal. En los
espectros de fluorescencia siempre se observa una diferencia de nmero de onda constante
en relacin con la excitacin; por ejemplo, en el agua el pico aparece a un nmero de onda
3600 cm-1 inferior a la luz de excitacin.

Otros aspectos a considerar son los efectos del filtro interior. Estos incluyen la reabsorcin,
que ocurre porque otra molcula o parte de una macromolcula absorbe las longitudes de
onda en la que el fluorforo emite radiacin. Si este es el caso, una parte o la totalidad de los
fotones emitidos por el fluorforo pueden ser absorbidos de nuevo. Otro efecto del filtro
interno se produce a causa de las altas concentraciones de absorcin de las molculas,
incluyendo el fluorforo. El resultado es que la intensidad de excitacin de la luz no es
constante a lo largo de la solucin. Como resultado, slo un pequeo porcentaje de la luz de
excitacin llega a los fluorforos que son visibles para el sistema de deteccin. Los efectos del
filtro interior cambian el espectro y la intensidad de la luz emitida y, por tanto, deben ser
considerados al analizar el espectro de emisin de luz fluorescente.
APLICACIONES

La espectrometra de fluorescencia se utiliza en anlisis bioqumicos, mdicos, qumicos y de
investigacin de compuestos orgnicos. Tambin se ha utilizado para diferenciar los tumores
malignos de piel de los benignos.

La fluorescencia tambin puede utilizarse para reorientar los fotones.
Fluorescencia del triptfano

Este tipo de fluorescencia es una prueba importante que puede ser usada para estimar la
naturaleza del microambiente del triptfano (un aminocido). Cuando se realizan
experimentos con desnaturalizantes, surfactantes u otras molculas anfiflicas, el
microambiente del triptfano puede cambiar. Por ejemplo, si una protena que contiene un
nico triptfano en su ncleo "hidrofbico" se desnaturaliza con el aumento de temperatura,
aparece un cambio de color en el espectro de emisin del rojo. Esto se debe a la exposicin del
triptfano a un medio ambiente acuoso en contraposicin a una protena hidrofbica interior.
En contraste, la adicin de un tensioactivo a una protena que contiene triptfano, que se
encuentra expuesto al solvente acuoso, causar un cambio al espectro azul de emisin si el
triptfano est incrustado en la vescula o micela de surfactante. Las protenas que carecen de
triptfano puede ser enlazadas a un fluorforo.

A 295 nm, el espectro de emisin del triptfano es dominante sobre la fluorescencia ms dbil
de la tirosina y fenilalanina.
Espectrometra de rayos X

La espectrometra de rayos X es un conjunto de tcnicas espectroscpicas para la
determinacin de la estructura electrnica de materiales mediante el uso de excitacin por
rayos X.
ESPECTROMETRA DE EMISIN POR RAYOS X

Karl Manne Georg Siegbahn de Uppsala, Suecia (Premio Nobel 1924), fue uno de los pioneros
en el desarrollo de rayos X espectrometra de emisin (tambin llamado X-espectroscopa de
fluorescencia de rayos). Midi las longitudes de onda de los rayos X en muchos elementos de
alta precisin, utilizando electrones de alta energa como fuente de excitacin.

Los rayos X intensos y de longitud de onda sintonizable son tpicamente generados con
sincrotrones. En un material, los rayos X pueden sufrir una prdida de energa en comparacin
con el haz de luz que entra. Esta prdida de energa del haz re-emergente refleja una
excitacin interna del sistema atmico, de forma anloga a la conocida espectrometra Raman
que se utiliza ampliamente en la regin ptica.

En la regin de los rayos X hay suficiente energa para producir cambios en el estado
electrnico (transiciones entre orbitales, lo que contrasta con la regin ptica, donde la
prdida de energa es a menudo debida a los cambios en el estado de rotacin o los grados de
libertad vibracionales). Por ejemplo, en la regin ultraligera de los rayos X (por debajo de
aproximadamente 1 k eV), las excitaciones de los campos cristalinos dan lugar a la prdida de
energa.

Podemos pensar en el proceso fotn-dentro-fotn-fuera como un evento de dispersin.
Cuando la energa del rayo X corresponde a la energa de enlace de un nivel electrnico bsico,
este proceso de dispersin potencia su resonancia en muchos rdenes de magnitud. Este tipo
de espectrometra de emisin de rayos X se conoce a menudo como dispersin inelstica
resonante de rayos X (RIXS).

Debido a la amplia separacin de energas orbitales de los niveles bsicos, es posible
seleccionar un determinado tomo de inters. As, se puede obtener informacin valiosa sobre
la estructura electrnica local de sistemas complejos, y los clculos tericos son relativamente
sencillos de realizar.
Instrumentos

Existen varios diseos eficientes para analizar un espectro de emisin de rayos X en la regin
de los rayos X ultra ligeros. La cifra de valor para estos instrumentos es el rendimiento
espectral, es decir, el producto de la intensidad detectada y el poder de resolucin espectral.
Por lo general, es posible cambiar los parmetros dentro de un cierto rango, mientras se
mantiene su producto constante.

Espectrmetros de rejilla

Normalmente, los rayos X que emergen de una muestra deben pasar una hendidura que
define la fuente, y luego los elementos pticos (espejos y/o rejillas) los dispersan por
difraccin segn su longitud de onda y, por ltimo, se coloca un detector en sus puntos
focales.

Monturas de rejilla esfrica

Henry Augustus Rowland (1848-1901) desarroll un instrumento que permita el uso de un
solo elemento ptico que combina la difraccin y la concentracin: una rejilla esfrica. La
reflectividad de los rayos X es baja, independientemente del material utilizado y, por tanto, la
incidencia sobre la rejilla es necesaria.

Imaginemos un crculo con la mitad del radio R tangente al centro de la superficie de la rejilla.
Este pequeo crculo se llama crculo de Rowland. Si la hendidura de entrada estn en
cualquier parte de este crculo, un haz de luz que pase por la hendidura y golpee la rejilla se
dividir en un haz reflejado especularmente, y en haces de todos los rdenes de difraccin,
que van a concentrarse en determinados puntos en el mismo crculo.

Monturas de hendidura plana

Los espectrmetros de hendidura plana son similares a los espectrmetros pticos. En primer
lugar necesita una ptica que convierta los rayos divergentes emitidos por la fuente de rayos X
en un haz paralelo. Esto puede lograrse mediante la utilizacin de un espejo parablico. Los
rayos paralelos que salen de este espejo golpean una rejilla plana (con una distancia de ranura
constante) en el mismo ngulo, y son difractados en funcin de su longitud de onda. Un
segundo espejo parablico, a continuacin, recoge los rayos difractados en un cierto ngulo y
crea una imagen en un detector. Un espectro dentro de un determinado rango de longitud de
onda puede ser registrado simultneamente usando un detector sensible de posicin
bidimensional tal como una placa fotomultiplicadora de microcanal o un chip CCD sensible a
los rayos X (tambin se pueden utilizar placas de pelcula fotogrfica).

Interfermetros

En lugar de utilizar el concepto de interferencia de haz mltiple que producen las rejillas, se
puede dejar simplemente que dos rayos interfieran. Registrando la intensidad de dos de esos
rayos co-lineales en algn punto fijo y cambiando su fase relativa, se obtiene una intensidad
del espectro en funcin de la diferencia de longitud de ruta. Se puede demostrar que esto es
equivalente a una transformada de Fourier del espectro en funcin de la frecuencia. La mayor
frecuencia registrable de dicho espectro depende del tamao mnimo de paso elegido en la
exploracin y de la resolucin de frecuencia (es decir, cmo de bien una cierta onda puede
definirse en trminos de su frecuencia). Esta ltima caracterstica permite un diseo mucho
ms compacto para lograr alta resolucin que para un espectrmetro de rejilla, porque las
longitudes de onda de los rayos X son pequeas en comparacin con las diferencias de
longitud de ruta alcanzables.
Espectrometra de absorcin atmica

En qumica analtica, la espectrometra de absorcin atmica es una tcnica para determinar
la concentracin de un elemento metlico determinado en una muestra. Puede utilizarse para
analizar la concentracin de ms de 62 metales diferentes en una solucin.

Aunque la espectrometra de absorcin atmica data del siglo XIX, la forma moderna fue
desarrollada en gran medida durante la dcada de los 50 por un equipo de qumicos de
Australia, dirigidos por Alan Walsh.
PRINCIPIOS EN LOS QUE SE BASA

La tcnica hace uso de la espectrometra de absorcin para evaluar la concentracin de un
analito en una muestra. Se basa en gran medida en la ley de Beer-Lambert.

En resumen, los electrones de los tomos en el atomizador pueden ser promovidos a orbitales
ms altos por un instante mediante la absorcin de una cantidad de energa (es decir, luz de
una determinada longitud de onda). Esta cantidad de energa (o longitud de onda) se refiere
especficamente a una transicin de electrones en un elemento particular, y en general, cada
longitud de onda corresponde a un solo elemento.

Como la cantidad de energa que se pone en la llama es conocida, y la cantidad restante en el
otro lado (el detector) se puede medir, es posible, a partir de la ley de Beer-Lambert, calcular
cuntas de estas transiciones tienen lugar, y as obtener una seal que es proporcional a la
concentracin del elemento que se mide.
INSTRUMENTOS

Para analizar los constituyentes atmicos de una muestra es necesario atomizarla. La muestra
debe ser iluminada por la luz. Finalmente, la luz es transmitida y medida por un detector. Con
el fin de reducir el efecto de emisin del atomizador (por ejemplo, la radiacin de cuerpo
negro) o del ambiente, normalmente se usa un espectrmetro entre el atomizador y el
detector.

Tipos de atomizadores

Para atomizar la muestra normalmente se usa una llama, pero tambin pueden usarse otros
atomizadores como el horno de grafito o los plasmas, principalmente los plasmas de
acoplamiento inductivo.

Cuando se usa una llama, se dispone de tal modo que pase a lo largo lateralmente (10 cm) y no
en profundidad. La altura de la llama sobre la cabeza del quemador se puede controlar
mediante un ajuste del flujo de mezcla de combustible. Un haz de luz pasa a travs de esta
llama en el lado ms largo del eje (el eje lateral) e impacta en un detector.

Anlisis de los lquidos

Una muestra de lquido normalmente se convierte en gas atmico en tres pasos:

1. Desolvacin. El lquido disolvente se evapora, y la muestra permanece seca.
2. Vaporizacin. La muestra slida se evapora a gas.
3. Atomizacin. Los compuestos que componen la muestra se dividen en tomos libres.

Fuentes de luz

La fuente de luz elegida tiene una anchura espectral ms estrecha que la de las transiciones
atmicas.

* Lmparas de ctodo hueco. En su modo de funcionamiento convencional, la luz es producida
por una lmpara de ctodo hueco. En el interior de la lmpara hay un ctodo cilndrico de
metal que contiene el metal de excitacin, y un nodo. Cuando un alto voltaje se aplica a
travs del nodo y el ctodo, los tomos de metal en el ctodo se excitan y producen luz con
una determinada longitud de onda. El tipo de tubo catdico hueco depende del metal que se
analiza. Para analizar la concentracin de cobre en un mineral, se utiliza un tubo catdico de
cobre, y as para cualquier otro metal que se analice.

* Lsers de diodo. La espectrometra de absorcin atmica tambin puede ser llevada a cabo
mediante lser, principalmente un lser de diodo, ya que sus propiedades son apropiadas para
la espectrometra de absorcin lser. La tcnica se denomina espectrometra de absorcin
atmica por lser de diodo (DLAAS o DLAS), o bien, espectrometra de absorcin por
modulacin de longitud de onda.
MTODOS DE CORRECCIN DE FONDO

El estrecho ancho de banda de las lmparas catdicas huecas hace que sea raro el
solapamiento espectral. Es decir, es poco probable que una lnea de absorcin de un elemento
se solape con otra. La emisin molecular es mucho ms amplia, por lo que es ms probable
que algunas bandas de absorcin molecular se superpongan con una lnea atmica. Esto puede
resultar en una absorcin artificialmente alta y un clculo exagerado de la concentracin en la
solucin. Se utilizan tres mtodos para corregir esto:

* Correccin de Zeeman. Se usa un campo magntico para dividir la lnea atmica en dos
bandas laterales. Estas bandas laterales estn lo suficientemente cerca de la longitud de onda
original como para solaparse con las bandas moleculares, pero estn lo suficientemente lejos
como para no coincidir con las bandas atmicas. Se puede comparar la absorcin en presencia
y ausencia de un campo magntico, siendo la diferencia la absorcin atmica de inters.

* Correccin de Smith-Hieftje (inventada por Stanley B. Smith y Gary M. Hieftje) - La lmpara
catdica hueca genera pulsos de alta corriente, provocando una mayor poblacin de tomos y
auto-absorcin durante los pulsos. Esta auto-absorcin provoca una ampliacin de la lnea y
una reduccin de la intensidad de la lnea a la longitud de onda original.

* Lmpara de correccin de deuterio. En este caso, se usa una fuente de amplia emisin (una
lmpara de deuterio), para medir la emisin de fondo. El uso de una lmpara separada hace de
este mtodo el menos exacto, pero su relativa simplicidad (y el hecho de que es el ms antiguo
de los tres) lo convierte en el ms utilizado.
Espectrometra de emisin

La espectrometra de emisin es una tcnica espectroscpica que analiza las longitudes de
onda de los fotones emitidos por los tomos o molculas durante su transicin desde un
estado excitado a un estado de inferior energa. Cada elemento emite un conjunto
caracterstico de longitudes de onda discretas en funcin de su estructura electrnica.
Mediante la observacin de estas longitudes de onda puede determinarse la composicin
elemental de la muestra. La espectrometra de emisin se desarroll a finales del siglo 19, y los
esfuerzos tericos para explicar los espectros de emisin atmica condujeron a la mecnica
cuntica.

Hay muchas maneras en que los tomos pueden ser llevados a un estado excitado. El mtodo
ms simple es calentar la muestra a una temperatura alta, producindose las excitaciones
debido a las colisiones entre tomos de la muestra. Este mtodo se utiliza en la espectrometra
de emisin de llama, y fue tambin el mtodo utilizado por Anders Jonas ngstrm cuando
descubri el fenmeno de las lneas de emisin discretas en 1850.

A pesar de que las lneas de emisin estn causadas por una transicin entre estados
energticos cuantizados, y pueden ser muy agudas a primera vista, tienen una anchura finita;
es decir, se componen de ms de una longitud de onda de luz. Esta ampliacin de la lnea
espectral tiene muchas causas diferentes.

Las lneas de emisin en los gases calientes fueron descubiertas por ngstrm, y la tcnica fue
desarrollada por David Alter, Gustav Kirchhoff y Robert Bunsen.

La espectrometra de emisin suele llamarse a menudo espectrometra de emisin ptica,
debido a la naturaleza de la luz que se emite.
TCNICA EXPERIMENTAL EN LA ESPECTROMETRA DE EMISIN POR
LLAMA

La solucin que contiene la sustancia que va a ser analizada se conduce al quemador y se
dispersa en la llama como un spray fino. El solvente se evapora en primer lugar, dejando
partculas slidas finamente divididas que se desplazan a la regin ms caliente de la llama,
donde se producen tomos e iones gaseosos. Los electrones son entonces excitados, tal como
se describi ms arriba. Es comn usar un monocromador para permitir una deteccin fcil.

En un nivel simple, la espectrometra de emisin por llama se puede observar utilizando slo
un mechero Bunsen y muestras de metales. Por ejemplo, el metal sodio colocado en la llama
se iluminar de amarillo, el metal calcio de rojo y el cobre crear una llama verde.

Hay cuatro etapas principales durante la espectrometra de emisin por llama:

1. Evaporacin: La muestra que contiene partculas metlicas se deshidrata por el calor de la
llama, y el disolvente se evapora.

2. Atomizacin: En esta etapa, los iones metlicos que se encontraban en el disolvente se
reducen a tomos de metal. Por ejemplo, Mg2 + (aq) + 2e Mg (g). Los electrones en los
tomos de metal absorben la energa del calor de la llama y pasan a niveles ms altos de
energa.

3. Excitacin: Los electrones en estado basal de los tomos de metal son ahora capaces de
absorber la energa del calor de la llama. El cuanto (cantidad) de energa absorbido depende
de las fuerzas electrostticas de atraccin entre los electrones con carga negativa y el ncleo
de carga positiva. Esto, a su vez, depende del nmero de protones en el ncleo. Como los
electrones absorben energa, se desplazan a niveles ms altos de la energa y pasan a estado
excitado.

4. Emisin de radiacin: Los electrones en estado excitado son muy inestables y se mueven
hacia un estado basal con bastante rapidez. Cuando lo hacen, emiten la energa que
absorbieron. Para algunos metales, esta radiacin corresponde a longitudes de onda de luz en
la regin visible del espectro electromagntico, y se observan como un color caracterstico del
metal. Como los electrones de diferentes niveles de energa son capaces de absorber luz, el
color de la llama ser una mezcla de todas las diferentes longitudes de onda emitidas por los
distintos electrones en el tomo de metal que se investiga.
Espectrometra ultravioleta-visible

La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UV-Vis implica la espectroscopia
de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y
adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano.
En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a transiciones
electrnicas.

Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de fluorescencia, que trata con
transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometra de
absorcin mide transiciones desde el estado basal al estado excitado.
APLICACIONES

La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de
soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos orgnicos muy conjugados.

Soluciones de iones metlicos de transicin

Las soluciones de iones metlicos de transicin pueden ser coloreadas (es decir, absorben la
luz visible) debido a que los electrones en los tomos de metal se pueden excitar desde un
estado electrnico a otro. El color de las soluciones de iones metlicos se ve muy afectado por
la presencia de otras especies, como algunos aniones o ligandos. Por ejemplo, el color de una
solucin diluida de sulfato de cobre es muy azul; agregando amonaco se intensifica el color y
cambia la longitud de onda de absorcin mxima.

Compuestos orgnicos

Los compuestos orgnicos, especialmente aquellos con un alto grado de conjugacin, tambin
absorben luz en las regiones del espectro electromagntico visible o ultravioleta. Los
disolventes para estas determinaciones son a menudo el agua para los compuestos solubles en
agua, o el etanol para compuestos orgnicos solubles. Los disolventes orgnicos pueden tener
una significativa absorcin de UV, por lo que no todos los disolventes son adecuados para su
uso en espectrometra UV. El etanol absorbe muy dbilmente en la mayora de longitudes de
onda. La polaridad y el pH del disolvente pueden afectar la absorcin del espectro de un
compuesto orgnico. La tirosina, por ejemplo, aumenta su mximo de absorcin y su
coeficiente de extincin molar cuando aumenta el pH de 6 a 13, o cuando disminuye la
polaridad de los disolventes.

Aunque los complejos de transferencia de carga tambin dan lugar a colores, stos son a
menudo demasiado intensos para ser usados en mediciones cuantitativas.

La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solucin es directamente
proporcional a la concentracin de la solucin. Por tanto, la espectrometra UV/VIS puede
usarse para determinar la concentracin de una solucin. Es necesario saber con qu rapidez
cambia la absorbancia con la concentracin. Esto puede ser obtenido a partir de referencias
(las tablas de coeficientes de extincin molar) o, con ms exactitud, determinndolo a partir de
una curva de calibracin.

El espectrofotmetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la Cromatografa Lquida de
Alta Resolucin (CLAR). La presencia de un analito da una respuesta que puede ser
proporcional a la concentracin. Para resultados precisos, la respuesta del instrumento al
analito debe compararse con la respuesta a un estndar, lo que es muy similar al uso de curvas
de calibracin. La respuesta (por ejemplo, el pico de altura) para un concentracin particular
se conoce como factor de respuesta.
LEY DE BEER-LAMBERT

La espectrometra UV-Vis se utiliza con mayor frecuencia en forma cuantitativa para
determinar las concentraciones de especies absorbentes en solucin, usando la Ley de Beer-
Lambert:

-

donde A es la absorbancia medida, I0 es la intensidad de la luz incidente a una determinada
longitud de onda, I es la intensidad de transmisin, L la longitud de ruta a travs de la muestra,
y c la concentracin de las especies absorbentes. Para cada especie y longitud de onda, es
una constante conocida como absortividad molar o coeficiente de extincin. Esta constante es
una propiedad fundamental molecular en un solvente dado, a una temperatura y presin
particular, y tiene como unidades 1/M * cm o, a menudo, U/M * cm.

La absorbancia y extincin a veces son definidas en trminos de logaritmo natural en lugar de
logaritmo de base 10.

La ley de Beer-Lambert es til para la caracterizacin de muchos compuestos, pero no sirve
como relacin universal para la concentracin y absorcin de todas las sustancias. En
molculas complejas de gran tamao, como los tintes orgnicos (Xylenol Naranja o Rojo
Neutro, por ejemplo), a veces se encuentra una relacin polinmica de segundo orden entre la
absorcin y la concentracin.
ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

El instrumento utilizado en la espectrometra ultravioleta-visible se llama espectrofotmetro
UV-Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a travs de una muestra (I), y la compara con la
intensidad de luz antes de pasar a travs de la muestra (Io). La relacin I / Io se llama
transmitancia, y se expresa habitualmente como un porcentaje (%T). La absorbancia (A) se
basa en la transmisin:

A = - log (%T)

Las partes bsicas de un espectrofotmetro son una fuente de luz (a menudo una bombilla
incandescente para las longitudes de onda visibles, o una lmpara de arco de deuterio en el
ultravioleta), un soporte para la muestra, una rejilla de difraccin o monocromador para
separar las diferentes longitudes de onda de la luz, y un detector. El detector suele ser un
fotodiodo o un CCD. Los fotodiodos se usan con monochomadores, que filtran la luz de modo
que una sola longitud de onda alcanza el detector. Las rejillas de difraccin se utilizan con
CCDs, que recogen la luz de diferentes longitudes de onda en pxeles.

Un espectrofotmetro puede ser nico o de doble haz. En un instrumento de un solo haz
(como el Spectronic 20), toda la luz pasa a travs de la clula muestra. La Io debe medirse
retirando la muestra. Este fue el primer diseo, y todava est en uso en la enseanza y
laboratorios industriales.

En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a la muestra. Un
haz se utiliza como referencia, y el otro haz de luz pasa a travs de la muestra. Algunos
instrumentos de doble haz tienen dos detectores (fotodiodos), y el haz de referencia y el de la
muestra se miden al mismo tiempo. En otros instrumentos, los dos haces pasan a travs de un
bloqueador que impide el paso de un haz. El detector alterna entre la medida del haz de
muestra y la del haz de referencia.

Las muestras para espectrofotometra UV-Vis suelen ser lquidas, aunque la absorbancia de los
gases e incluso de los slidos tambin puede medirse. Las muestras suelen ser colocadas en
una clula transparente, conocida como cubeta. Las cubetas suelen ser rectangulares, con una
anchura interior de 1 cm. Esta anchura se convierte en la longitud de ruta, L, en la Ley de Beer-
Lambert. Tambin se pueden usar tubos de ensayo como cubetas en algunos instrumentos.
Las mejores cubetas estn hechas con cuarzo de alta calidad, aunque son comunes las de
vidrio o plstico. El cristal y la mayora de los plsticos absorben en el UV, lo que limita su
utilidad para longitudes de onda visibles.
ESPECTRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un grfico de absorbancia de luz frente a una
longitud de onda en el rango del ultravioleta o la luz visible. Este espectro puede ser producido
directamente con los espectrofotmetros ms sofisticados, o bien pueden registrarse los datos
de una sola longitud de onda con los instrumentos ms simples. La longitud de onda se
representa con el smbolo . Del mismo modo, para una determinada sustancia, puede hacerse
un grfico estndar del coeficiente de extincin () frente a la longitud de onda (). Este grfico
estndar sera efectivamente "la concentracin corregida" y, por tanto, independiente de la
concentracin. Para una sustancia determinada, la longitud de onda en la cual se produce el
mximo de absorbancia en el espectro se llama max, y se pronuncia "lambda-max".

Las reglas de Woodward-Fieser son un conjunto de observaciones empricas que pueden
utilizarse para predecir max, la longitud de onda de la absorcin UV-Vis, para compuestos
orgnicos conjugados como dienos y cetonas.

Las longitudes de onda de los picos de absorcin pueden correlacionarse con los tipos de
enlace en una determinada molcula, y son valiosos para determinar los grupos funcionales
dentro de la molcula. La absorcin UV-Vis no es, sin embargo, una prueba especfica para
ningn compuesto determinado. La naturaleza del disolvente, el pH de la solucin, la
temperatura, la concentracin de electrolitos, y la presencia de sustancias interferentes
pueden influir en los espectros de absorcin de los compuestos, as como las variaciones en la
anchura de la hendidura (ancho de banda efectivo) en el espectrofotmetro.
Espectrometra infrarroja

La espectrometra de infrarrojos (espectroscopia IV) es un tipo de espectrometra de
absorcin que utiliza la regin infrarroja del espectro electromagntico. Como las dems
tcnicas espectroscpicas, puede ser utilizada para identificar un compuesto o investigar la
composicin de una muestra.

La espectrometra infrarroja se basa en el hecho de que los enlaces qumicos de las sustancias
tienen frecuencias de vibracin especficas, que corresponden a los niveles de energa de la
molcula. Estas frecuencias dependen de la forma de la superficie de energa potencial de la
molcula, la geometra molecular, las masas atmicas y, posiblemente, el acoplamiento
vibracional.

Si la molcula recibe luz con la misma energa de esa vibracin, entonces la luz ser absorbida
si se dan ciertas condiciones. Para que una vibracin aparezca en el espectro infrarrojo, la
molcula debe someterse a un cambio en su momento dipolar durante la vibracin. En
particular, una aproximacin de Born-Oppenheimer y aproximaciones armnicas; es decir,
cuando el hamiltoniano molecular correspondiente al estado electrnico estndar puede ser
aproximado por un oscilador armnico cuntico en las cercanas de la geometra molecular de
equilibrio, las frecuencias vibracionales de resonancia son determinadas por los modos
normales correspondientes a la superficie de energa potencial del estado electrnico
estndar. No obstante, las frecuencias de resonancia pueden estar, en una primera
aproximacin, en relacin con la longitud del enlace y las masas de los tomos en cada
extremo del mismo. Los enlaces pueden vibrar de seis maneras: estiramiento simtrico,
estiramiento asimtrico, tijeras, rotacin, giro y wag.

Con el fin de hacer medidas en una muestra, se transmite un rayo monocromo de luz infrarroja
a travs de la muestra, y se registra la cantidad de energa absorbida. Repitiendo esta
operacin en un rango de longitudes de onda de inters (por lo general, 4000-400 cm
-1
) se
puede construir un grfico. Al examinar el grfico de una sustancia, un usuario experimentado
puede obtener informacin sobre la misma.

Esta tcnica funciona casi exclusivamente en enlaces covalentes, y se usa mucho en qumica,
en especial en qumica orgnica. Se pueden generar grficos bien resueltos con muestras de
una sola sustancia de gran pureza. Sin embargo, la tcnica se utiliza habitualmente para la
identificacin de mezclas complejas.
PREPARACIN DE LA MUESTRA

Las muestras lquidas pueden ser prensadas entre dos planchas de una sal de alta pureza
(como el cloruro de sodio). Estas placas deben ser transparentes a la luz infrarroja para no
introducir ninguna lnea en el espectro de la muestra. Las placas obviamente son solubles en
agua, por lo que la muestra, los reactivos de lavado y el medio deben ser anhidros (es decir, sin
agua).

Las muestras slidas se preparan mezclando una cierta cantidad de muestra con una sal
altamente purificada (por lo general bromuro de potasio). Esta mezcla se tritura y se prensa
con el fin de formar una pastilla por la que pueda pasar la luz. La pastilla necesita ser prensada
a altas presiones para asegurar que sea translcida, pero esto no puede lograrse sin un equipo
adecuado (por ejemplo, una prensa hidrulica). Al igual que el cloruro de sodio, el bromuro de
potasio no absorbe la radiacin infrarroja, por lo que las nicas lneas espectrales provendrn
del analito.
MTODO TPICO

Un haz de luz infrarroja es generado y dividido en dos rayos. Uno pasa por la muestra, y el otro
por una referencia que suele ser la sustancia en la que est disuelta o mezclada la muestra.
Ambos haces se reflejan de vuelta al detector, pero primero pasan a travs del separador, que
alterna rpidamente cul de los dos rayos entra en el detector. Las dos seales se comparan y,
a continuacin, se registran los datos.

Hay dos razones por las que se utiliza una referencia:

* Evita que las fluctuaciones de energa elctrica de la fuente afecten a los resultados finales,
ya que tanto la muestra como la referencia se ven afectadas del mismo modo. Por esa misma
razn, tambin impide la influencia de variaciones sobre el resultado final, debido al hecho de
que la fuente no necesariamente emite la misma intensidad de luz para todas las longitudes de
onda
* Permite que los efectos del disolvente se anulen, porque la referencia es normalmente la
forma pura del disolvente en el que se encuentra.
USOS Y APLICACIONES

La espectrometra infrarroja se utiliza ampliamente tanto en la industria como en la
investigacin cientfica, porque es una tcnica rpida y fiable para medidas, control de calidad
y anlisis dinmicos. Los instrumentos actuales son pequeos y pueden ser transportados,
incluso para tomar medidas de campo. Con los avances en tecnologa de filtrado
computacional y la manipulacin de los resultados, se pueden medir con precisin las
muestras en una solucin (el agua produce una banda larga de absorbancia en el rango de
inters, lo que dara un espectro ilegible sin dicho tratamiento computacional). Algunas
mquinas incluso dicen automticamente qu sustancia est siendo analizada a travs de
miles de espectros de referencia almacenados en la memoria.

Haciendo medidas a una frecuencia especfica a travs del tiempo, se pueden seguir los
cambios en la naturaleza o la cantidad de un enlace en particular, lo que es especialmente til
para medir el grado de polimerizacin en la fabricacin de polmeros. Las mquinas modernas
pueden medir en el rango de inters con gran frecuencia, como 32 veces por segundo. Esto se
puede hacer mientras se toman medidas simultneas con otras tcnicas. As las observaciones
de reacciones qumicas son procesadas con mayor rapidez, y de forma ms precisa y exacta.
ESPECTROMETRA DE INFRARROJOS POR TRANSFORMADA DE
FOURIER

La espectrometra infrarroja por transformada de Fourier (FTIV) es una tcnica de anlisis para
obtener el espectro infrarrojo con mayor rapidez. En lugar de registrar los datos variando la
frecuencia de luz infrarroja monocromtica, se gua la luz IV (con todas las longitudes de onda
de pista utilizada) a travs de un interfermetro. Despus de pasar por la muestra, la seal
medida da el interferograma. La realizacin de una transformada de Fourier de la seal
produce un espectro idntico al de la espectrometra infrarroja convencional (dispersiva).

Los espectrofotmetros FTIV son ms baratos que los convencionales, porque es ms simple
construir un interfermetro que un monocromador. Adems, la medida de un solo espectro es
mucho ms rpida en esta tcnica, debido a que la informacin de todas las frecuencias se
toman al mismo tiempo. Esto permite hacer mltiples lecturas de una sola muestra y obtener
un promedio, lo que aumenta la sensibilidad del anlisis. Debido a sus mltiples ventajas, casi
todos los modernos espectrofotmetros de infrarrojos son FTIV.

Espectrometra Raman

La espectrometra Raman es una tcnica espectroscpica utilizada en fsica de la materia
condensada y tambin en qumica para el estudio de los modos vibracionales, rotacionales y
otros de baja frecuencia en un sistema. Se basa en la dispersin inelstica, o dispersin Raman,
de la luz monocromtica, que por lo general procede de un lser en el rango visible, infrarrojo
cercano, o ultravioleta cercano. La luz lser interacta con fonones u otras excitaciones en el
sistema, por lo que la energa de los fotones lser se desplaza hacia arriba o hacia abajo.

Normalmente, la muestra se ilumina con un rayo lser. La luz del punto iluminado se recoge
con una lente y se enva a travs de un monocromador. Las longitudes de onda cercanas a la
lnea lser, debidas a la dispersin elstica de Rayleigh, son filtradas, mientras que el resto de
la luz recogida se dispersa en un detector.

La dispersin Raman espontnea es generalmente muy dbil, y como resultado la principal
dificultad de la espectrometra Raman es separar la luz dbil dispersada inelsticamente de la
luz intensa lser por dispersin de Rayleigh. Histricamente, los espectrmetros Raman
utilizaban rejillas de difraccin hologrfica y mltiples etapas de dispersin para lograr un alto
grado de rechazo lser. En el pasado, los detectores de eleccin para las configuraciones de
dispersin Raman eran los fotomultiplicadores, lo que daba lugar a largos tiempos de
adquisicin. Sin embargo, la instrumentacin moderna en casi todo el mundo emplea filtros de
muesca o borde para rechazar el lser, as como espectrgrafos y detectores CCD.

Hay diferentes tipos avanzados de espectrometra Raman, como la de superficie potenciada, la
polarizada, la estimulada, la de transmisin, la compensada espacialmente y la hper-Raman.
TEORA BSICA

El efecto Raman se produce cuando la luz incide sobre una molcula e interacta con la nube
de electrones de los tomos de esa molcula. El fotn incidente excita uno de los electrones a
un estado virtual. La molcula se excita desde el estado basal a un estado de energa virtual, y
se relaja a un estado vibracional excitado, lo que genera la dispersin de Raman Stokes. Si la
molcula ya se encontraba en un estado elevado de energa vibracional, la dispersin Raman
se llama entonces dispersin Raman anti-Stokes.

Para que la molcula exhiba el efecto Raman es necesario un desplazamiento en la
polarizabilidad molecular, o cantidad de deformacin de la nube de electrones con respecto a
la coordenada vibracional. La cantidad del desplazamiento de polarizabilidad determinar la
intensidad de la dispersin Raman, siempre que el desplazamiento Raman sea igual al nivel
vibracional que est involucrado.
HISTORIA

Aunque la dispersin inelstica de la luz la predijo Smekal en 1923, no fue hasta 1928 cuando
se observ en la prctica. El efecto Raman fue nombrado despus de que uno de sus
descubridores, el cientfico indio Sir CV Raman, observara el efecto por medio de la luz del sol
(en 1928, junto con KS Krishnan e independientemente de Grigory Landsberg y Leonid
Mandelstam). Raman gan el Premio Nobel de Fsica en 1930 por este descubrimiento,
realizado utilizando la luz del sol, un filtro fotogrfico de banda estrecha para crear luz
monocromtica y un filtro "cruzado" para bloquear esta luz monocromtica.

Posteriormente, el arco de mercurio se convirti en la principal fuente de luz, primero con
deteccin fotogrfica y, a continuacin, con deteccin espectrofotomtrica. En la actualidad,
se utilizan lseres como fuentes de luz.
APLICACIONES

La espectrometra Raman se utiliza comnmente en qumica, ya que la informacin vibracional
es muy especfica para los enlaces qumicos de las molculas. Por lo tanto, proporciona una
huella dactilar de la molcula que puede ser identificada. La regin de huella digital de las
molculas orgnicas est en el rango de 500-2000 cm -1. Otra forma de uso de la tcnica es el
estudio de cambios en las uniones qumicas, por ejemplo cuando un sustrato se aade a una
enzima.

Los analizadores de gases Raman tienen muchas aplicaciones prcticas. Por ejemplo, se usan
en medicina para el seguimiento en tiempo real de las mezclas de gases respiratorios y la
anestesia durante la ciruga.

En fsica del estado slido, la espectrometra Raman espontnea se utiliza para, entre otras
cosas, caracterizar los materiales, medir la temperatura, y encontrar la orientacin
cristalogrfica de una muestra.

Al igual que ocurre con molculas individuales, un material slido tiene modos de fonn
caractersticos que pueden ayudar a identificarlo. Adems, la espectrometra Raman se puede
utilizar para observar otras excitaciones de baja frecuencia en los slidos, como plasmones,
magnones, y excitaciones de brecha en superconductores.

La seal Raman espontnea proporciona informacin sobre la poblacin de un modo fonn
determinado en el rango entre la intensidad Stokes (desplazada hacia abajo) y anti-Stokes
(desplazada hacia arriba).

La dispersin Raman mediante un cristal anisotrpico da informacin sobre la orientacin del
cristal. La polarizacin de la luz de dispersin Raman en relacin con el cristal, y la polarizacin
de la luz lser, pueden utilizarse para conocer la orientacin del cristal, siempre que la
estructura cristalina sea conocida.

Las fibras activas Raman, como la aramida y el carbono, tienen modos vibracionales que
muestran un cambio en la frecuencia Raman con estrs aplicado. Las fibras de polipropileno
tambin exhiben cambios similares.

El modo de respiracin radial es una tcnica de uso habitual para evaluar el dimetro de los
nanotubos de carbono.

La espectrometra Raman compensada espacialmente (SORS), que es menos sensible a las
capas superficiales que la espectrometra Raman convencional, se puede utilizar para
descubrir la falsificacin de medicamentos sin necesidad de abrir su embalaje interior, y para
monitorizacin no invasiva de tejido biolgico.

La espectrometra Raman se puede utilizar tambin para investigar la composicin qumica de
documentos histricos, como el Libro de Kells, y contribuir al conocimiento de las condiciones
sociales y econmicas en el momento en que los documentos fueron producidos. Esto es
especialmente til porque la espectrometra Raman es una forma no invasiva que permite
preservar este tipo de materiales.
MICROESPECTROMETRA RAMAN

La espectrometra Raman ofrece varias ventajas para el anlisis microscpico. Dado que se
trata de una tcnica de dispersin, las muestras no necesitan ser fijadas o seccionadas. Los
espectros Raman pueden ser obtenidos a partir de un volumen muy bajo (<1 m de dimetro);
estos espectros permiten la identificacin de especies presentes en ese volumen. El agua no
interfiere de manera apreciable. Por lo tanto, la espectroscopia Raman es adecuada para el
examen microscpico de minerales, materiales como cermica y polmeros, y clulas y
protenas. Un microscopio Raman consiste de un microscopio ptico estndar con un lser de
excitacin, un monocromador y un detector sensible (como un dispositivo de carga acoplada
(CCD), o un tubo fotomultiplicador (PMT)).

En visualizacin directa, todo el campo de visin se examina por dispersin sobre una pequea
gama de nmeros de onda (turnos Raman). Por ejemplo, un nmero de onda caracterstico
para el colesterol podra ser utilizado para registrar la distribucin de colesterol en un cultivo
celular.

El otro enfoque es la visualizacin hiperespectral o las imgenes qumicas, en las que miles de
espectros Raman son adquiridos por todo el campo de visin. Los datos pueden ser utilizados
para generar imgenes que muestran la ubicacin y la cantidad de distintos componentes.
Tomando el ejemplo del cultivo celular, una imagen hiperespectral podra mostrar la
distribucin de colesterol, as como de protenas, cidos nucleicos y cidos grasos. Las tcnicas
sofisticadas de procesamiento de imgenes y seales pueden utilizarse para ignorar la
presencia de agua, los medios de cultivo y otros interferentes.

La microscopa Raman y, en particular, la microscopa confocal, disponen de una resolucin
espacial muy alta. Por ejemplo, las resoluciones laterales y de profundidad son de 250 nm y 1,7
m, respectivamente, utilizando un microespectrmetro confocal Raman con la lnea de 632,8
nm de un lser de He-Ne con una abertura de 100 m de dimetro.

Dado que las lentes objetivo de los microscopios enfocan el rayo lser a varios micrmetros de
dimetro, el resultado del flujo de fotones es mucho mayor que los que se logran en las
configuraciones Raman convencionales. Esto tiene el beneficio aadido de una mayor
desactivacin de la fluorescencia. Sin embargo, el alto flujo de fotones tambin puede causar
la degradacin de la muestra, y por esta razn algunas configuraciones requieren un sustrato
que conduzca trmicamente (lo que acta como un disipador de calor) a fin de mitigar este
proceso.

Mediante el uso de la microespectrometra Raman, se pueden medir los espectros Raman,
resueltos en vivo en el tiempo y el espacio, de regiones microscpicas de la muestra. Como
resultado de esto, puede eliminarse la fluorescencia del agua, el medio y los intermediarios. En
consecuencia, este tipo de espectrometra es apropiada para examinar protenas, clulas y
rganos.

Para muestras biolgicas y mdicas, la microscopa Raman generalmente utiliza lseres de
infrarrojo cercano (diodos de 785 nm y 1064 nm). Esto reduce el riesgo de daar la muestra
mediante la aplicacin de alta potencia. Sin embargo, la intensidad del Raman en infrarrojo
cercano es baja (debido a la dependencia -4 de la intensidad de dispersin Raman), y la
mayora de detectores requieren mucho tiempo de registro. En la actualidad se dispone de
detectores ms sensibles, por lo que esta tcnica es apropiada para uso general. La
microscopa Raman de muestras inorgnicas, tales como rocas, cermicas y polmeros, puede
utilizar una gama ms amplia de longitudes de onda de excitacin.
ANLISIS RAMAN POLARIZADO

La polarizacin de la luz dispersada Raman tambin contiene informacin til. Esta propiedad
puede medirse utilizando un lser de excitacin polarizado y un analizador de polarizacin. Los
espectros adquiridos con el analizador, tanto en perpendicular como en paralelo al plano de
excitacin, pueden ser utilizados para calcular el coeficiente de despolarizacin. El estudio de
la tcnica es pedaggicamente til en la enseanza de las conexiones entre la teora de grupos,
la simetra, la actividad Raman y los picos en el espectro Raman correspondiente.

La informacin espectral que se deriva de este anlisis da una idea sobre la orientacin
molecular y la simetra vibracional. En esencia, permite al usuario obtener valiosa informacin
relativa a la forma molecular, por ejemplo, en qumica sinttica o anlisis polimrfico. A
menudo se utiliza para entender la orientacin macromolecular en entratamados cristalinos,
cristales lquidos o muestras de polmeros.
VARIACIONES DE LA ESPECTROMETRA RAMAN

Se han desarrollado diversas variaciones de la espectrometra Raman. El propsito habitual es
aumentar la sensibilidad (por ejemplo, una mayor superficie Raman), para mejorar la
resolucin espacial (microscopa Raman), o para adquirir informacin muy especfica
(resonancia Raman).

* Espectrometra Raman de superficie mejorada (SERS). Normalmente se hace en un coloide
de plata o de oro, o en un sustrato que contiene plata u oro. Los plasmones de superficie de
plata y oro son excitados por el lser, lo que resulta en un aumento en los campos elctricos
que rodean el metal. Teniendo en cuenta que las intensidades Raman son proporcionales a la
intensidad del campo elctrico, hay un gran aumento de la seal medida (de hasta 10 y 11).
Este efecto fue observado por Fleishman, pero prevaleci la explicacin propuesta por Van
Duyne en 1977.

* Hiper-Raman. Un efecto no lineal en el que los modos vibracionales interactan con el
segundo armnico del haz de excitacin. Para ello se requiere una potencia muy alta, pero
permite la observacin de los modos vibracionales que son normalmente "silenciosos". A
menudo se basa en una potenciacin de tipo SERS para incrementar la sensibilidad.

* Espectrometra Raman de resonancia. La longitud de onda de excitacin es equivalente a una
transicin electrnica de la molcula o cristal, a fin de que los modos vibracionales asociados
con el estado electrnico excitado se vean muy potenciados. Esto es til para el estudio de
molculas grandes, como los polipptidos, que pueden mostrar cientos de bandas en los
espectros Raman "convencionales". Tambin es til para asociar los modos normales con sus
cambios de frecuencia observados.

* Espectrometra Raman espontnea. Utilizada para estudiar la dependencia a la temperatura
de los espectros Raman de las molculas.

* Espectrometra Raman de pinzas pticas (OTRS). Se utiliza para estudiar partculas
individuales, e incluso procesos bioqumicos en clulas individuales atrapadas por pinzas
pticas.

* Espectrometra Raman estimulada. Un pulso de dos colores transfiere la poblacin desde el
estado basal a un estado excitado rovibracional, si la diferencia de energa se corresponde a
una transicin Raman permitida. Dos fotones de ionizacin ultravioleta, aplicados despus de
la transferencia de poblacin (pero antes de la relajacin), permite registrar el espectro Raman
intra-molecular o inter-molecular de un gas o grupo molecular. Esta es una tcnica til para
observar la dinmica molecular.

* Espectrometra Raman compensada espacialmente (SORS). La dispersin Raman se obtiene
de regiones compensadas lateralmente fuera del punto lser de excitacin, lo que disminuye
significativamente las aportaciones de la capa superficial en comparacin con la
espectrometra Raman tradicional.

* Espectrometra Raman anti-Stokes coherente (CARS). Se utilizan dos rayos lser para generar
un haz de frecuencia anti-Stokes coherente, que puede ser mejorada mediante resonancia.
Espectrometra de resonancia magntica nuclear

La espectrometra de resonancia magntica nuclear (RMN), ms comnmente conocida como
espectrometra RMN, es una tcnica que explota las propiedades magnticas de ciertos
ncleos. Las aplicaciones ms importantes para su uso en qumica orgnica son la
espectrometra RMN de protones y la de carbono-13. En principio, la RMN es aplicable a
cualquier ncleo que posea espn.

Pueden obtenerse muchos tipos de informacin mediante un espectro RMN. Al igual que se
utiliza la espectrometra de infrarrojos para identificar grupos funcionales, el anlisis de un
espectro RMN unidimensional proporciona informacin sobre el nmero y tipo de entidades
qumicas en una molcula.

El impacto de la espectrometra RMN en las ciencias naturales ha sido sustancial. Puede
utilizarse, entre otras cosas, para estudiar mezclas de analitos, para comprender efectos
dinmicos como el cambio en la temperatura y los mecanismos de reaccin, y es una
herramienta de valor incalculable para la comprensin de la estructura y funcin de las
protenas y los cidos nucleicos. Este tipo de espectrometra se puede aplicar a una amplia
variedad de muestras, tanto en solucin como en estado slido.
TCNICAS BSICAS DE ESPECTROMETRA RMN

Cuando se sitan dentro de un campo magntico, los ncleos activos de RMN (como el 1 H, o
el 13 C) absorben a una frecuencia caracterstica del istopo. La frecuencia de resonancia, la
energa de la absorcin y la intensidad de la seal son proporcionales a la fuerza del campo
magntico. Por ejemplo, en un campo magntico de 21 Tesla, los protones resuenan a 900
MHz. Es comn referirse a un imn de 21 T como imn de 900 MHz, aunque distintos ncleos
resuenan a una frecuencia diferente en este campo.

En el campo magntico terrestre, los mismos ncleos resuenan en frecuencias de audio. Este
efecto se utiliza en los espectrmetros RMN y otros instrumentos. Debido a que estos
instrumentos son fciles de transportar y baratos, a menudo se utilizan para la enseanza y el
trabajo de campo.
Desplazamiento qumico

Dependiendo del entorno qumico local, los diferentes protones en una molcula resuenan a
frecuencias ligeramente diferentes. Dado que tanto este desplazamiento como la frecuencia
de resonancia fundamental son directamente proporcionales a la fuerza del campo magntico,
el desplazamiento de frecuencia se convierte en un campo independiente de valor
adimensional conocido como desplazamiento qumico. El desplazamiento qumico se reporta
como una medida relativa de algunas frecuencias de resonancia de referencia. (Para los
ncleos 1 H, 13 C, y 29 Si, se usa como referencia el tetrametilsilano o TMS.) Esta diferencia
entre la frecuencia de la seal y la frecuencia de la referencia se divide por la frecuencia de la
seal de referencia para obtener el desplazamiento qumico. Los desplazamientos de
frecuencia son muy pequeos en comparacin con la frecuencia RMN fundamental. Un
desplazamiento de frecuencia tpico podra ser de 100 Hz, en comparacin con una frecuencia
RMN fundamental de 100 MHz, por lo que el desplazamiento qumico se expresa
generalmente en partes por milln (ppm).

Mediante la comprensin de los diferentes entornos qumicos, el desplazamiento qumico
puede ser utilizado para obtener informacin estructural sobre la molcula en una muestra. La
conversin de los datos en bruto a esta informacin se llama asignacin del espectro. Por
ejemplo, para el espectro 1H-RMN del etanol (CH3CH2OH), cabra esperar tres seales
especficas en tres desplazamientos qumicos especficos: uno para los grupos CH3, uno para el
grupo CH2 y otro para el grupo OH. Un grupo CH3 tpico tiene un desplazamiento de alrededor
de 1 ppm, un CH2 adjunto a un OH tiene un desplazamiento de alrededor de 4 ppm y un OH
tiene un desplazamiento en torno a 2-3 ppm, dependiendo del disolvente utilizado.

A causa del movimiento molecular a temperatura ambiente, los tres protones metilo alcanzan
un promedio durante el curso del experimento RMN (que normalmente requiere unos pocos
milisegundos). Estos protones se degeneran y forman un pico al mismo desplazamiento
qumico.

La forma y el tamao de los picos son indicadores de la estructura qumica. En el ejemplo
anterior -el espectro de protones de etanol-, el pico de CH3 sera tres veces ms grande que el
OH. Del mismo modo, el pico de CH2 sera el doble en tamao al pico de OH, pero slo 2/3 del
tamao del pico de CH3.

El software de anlisis moderno permite analizar el tamao de los picos para comprender
cmo muchos protones dan lugar al pico. Esto se conoce como integracin, un proceso
matemtico que calcula el rea bajo un grfico (lo que, en esencia, es un espectro). El analista
debe integrar el pico y no medir su altura, porque los picos tambin tienen anchura y, por
ende, su tamao depende de su rea y no de su altura. Sin embargo, cabe mencionar que el
nmero de protones, o cualquier otro ncleo observado, es slo proporcional a la intensidad, o
integral, de la seal RMN, en los experimentos RMN unidimensionales ms simples. En
experimentos ms elaborados, como los que suelen utilizarse para obtener el espectro RMN
del carbono-13, la integral de las seales depende de la tasa de relajacin del ncleo, y de sus
constantes de acoplamiento escalar y dipolar. Muy a menudo, estos factores son poco
conocidos, por lo que la integral de la seal RMN es muy difcil de interpretar en los
experimentos ms complicados.
Acoplamiento-J

Parte de la informacin ms til para determinar la estructura en un espectro RMN
unidimensional proviene del acomplamiento-J o acoplamiento escalar (un caso especial de
acoplamiento espn-espn) entre los ncleos activos de RMN. Este acoplamiento surge de la
interaccin de los diferentes estados espn a traves de los enlaces qumicos de una molcula, y
resulta en la divisin de seales RMN. Estos patrones de divisin pueden ser complejos o
simples y, del mismo modo, pueden ser interpretables o engaosos. Este acoplamiento
proporciona informacin detallada sobre la conectividad de los tomos en una molcula.

El acoplamiento a ncleos equivalentes n (espn ) divide la seal en un multiplete n + 1 con
ratios de intensidad que siguen el tringulo de Pascal. El acoplamiento a espines adicionales
conducir a nuevas divisiones de cada uno de los componentes del multiplete; por ejemplo, el
acoplamiento a dos ncleos diferentes de espn , con constantes de acoplamiento muy
distintas, conducir a un doblete de dobletes (abreviatura: dd). Hay que tener en cuenta que el
acoplamiento entre ncleos que son qumicamente equivalentes (es decir, que tienen el
mismo desplazamiento qumico) no tiene efecto de los espectros RMN, y los acoplamientos
entre ncleos que son distantes (por lo general ms de 3 enlaces en molculas flexibles) suelen
ser demasiado pequeos para observar divisiones. Los acoplamientos de largo alcance, de ms
de tres enlaces, se observan a menudo en compuestos aromticos y cclicos, conduciendo a
patrones de divisin ms complejos.

Por ejemplo, en el espectro de protones para el etanol que se ha descrito anteriormente, el
grupo CH3 se divide en un triplete con una relacin de intensidad de 1:2:1 mediante los dos
protones CH2 vecinos. Del mismo modo, el CH2 se divide en un cuarteto con una relacin de
intensidad de 1:3:3:1 mediante los tres protones CH3 vecinos. En principio, los dos protones
CH2 tambin se dividen de nuevo en un doblete para formar un doblete de cuartetos
mediante el protn hidroxilo, pero el intercambio intermolecular del protn hidroxilo acdico a
menudo resulta en una prdida de informacin del acoplamiento.

El acoplamiento a cualquier ncleo de espn , tal como el fsforo-31 o el flor-19, funciona de
esta manera (aunque las magnitudes de las constantes de acoplamiento pueden ser muy
diferentes). Pero los patrones de divisin difieren de los descritos anteriormente para los
ncleos con espn superior a debido a que el nmero cuntico de espn tiene ms de dos
valores posibles. Por ejemplo, para el acoplamiento al deuterio (un ncleo de espn 1) divide la
seal en un triplete 1:1:1, porque el espn 1 tiene tres estados de espn. Del mismo modo, un
ncleo de espn 3/2 divide una seal 1:1:1:1 en un cuarteto y as sucesivamente.

El acoplamiento combinado con el desplazamiento qumico (y la integracin de protones) nos
dice no slo el entorno qumico de los ncleos, sino tambin el nmero de ncleos activos
RMN vecinos en la molcula. En los espectros ms complejos, con mltiples picos en
desplazamientos qumicos similares, o en el espectro de ncleos distintos del hidrgeno, el
acoplamiento es a menudo la nica manera de distinguir ncleos diferentes.
Acoplamiento de segundo orden (o fuerte)

La descripcin anterior asume que la constante de acoplamiento es pequea en comparacin
con la diferencia en frecuencias RMN entre los espines inequivalentes. Si la separacin del
desplazamiento disminuye (o la fuerza del acoplamiento aumenta), los patrones de intensidad
del multiplete se distorsionan, y luego se vuelven ms complejos y difciles de analizar
(especialmente si ms de dos espines estn involucrados). La intensificacin de algunos picos
en un multiplete se logra a expensas del resto, que a veces casi desaparece en el ruido de
fondo, aunque el rea integrada bajo los picos se mantenga constante. En la mayora de RMN
de alto campo, sin embargo, las distorsiones suelen ser modestas y las distorsiones
caractersticas (techo) pueden ayudar a identificar los picos.

Los efectos de segundo orden disminuyen cuando la diferencia de frecuencia entre multipletes
aumenta, por lo que el espectro RMN de alto campo (es decir, de alta frecuencia) muestra
menos distorsin que los espectros de frecuencia menor. Los primeros espectros a 60 MHz
eran ms propensos a la distorsin que los espectros de mquinas posteriores que operan en
frecuencias de 200 MHz o superiores.
Inequivalencia magntica

Pueden ocurrir efectos ms sutiles si los espines qumicamente equivalentes (es decir, ncleos
relacionados por simetra y con la misma frecuencia RMN) tienen diferentes relaciones de
acoplamiento respecto a los espines externos. Los espines que son qumicamente equivalentes
pero no son indistinguibles (sobre la base de sus relaciones de acoplamiento) se denominan
espines con inequivalencia magntica. Por ejemplo, los sitios 4 H del 1,2-diclorobenceno se
dividen en dos pares qumicamente equivalentes por simetra, pero un individuo miembro de
uno de los pares tiene diferentes acoplamientos a los espines que componen el otro par. La
inequivalencia magntica puede dar lugar a espectros muy complejos que slo pueden ser
analizados mediante modelado computacional. Estos efectos son ms comunes en los
espectros RMN de sistemas aromticos y otros no flexibles, mientras que el promedio
conformacional de los enlaces CC en molculas flexibles tiende a igualar los acoplamientos
entre protones en carbonos adyacentes, reduciendo los problemas con la inequivalencia
magntica.
ESPECTROMETRA DE CORRELACIN

La espectrometra de correlacin es uno de los diversos tipos de espectrometra de resonancia
magntica nuclear (RMN) bidimensional. Este tipo de experimento RMN es mejor conocido por
su acrnimo, COSY. Otros tipos de espectrometra RMN bidimensional son la espectrometra-J,
la de intercambio (EXSY), la de efecto Overhauser nuclear (NOESY), la de correlacin total
(TOCSY), y experimentos de correlacin heteronuclear como el HSQC, HMQC y HMBC. Los
espectros bidimensionales RMN proporcionan ms informacin acerca de una molcula que
los espectros RMN unidimensionales, y son especialmente tiles para determinar la estructura
de la molcula, en particular para molculas que son demasiado complicadas para la RMN
unidimensional. El primer experimento bidimensional, COSY, fue propuesto por Jean Jeener,
un profesor de la Universit Libre de Bruxelles, en 1971. Este experimento fue posteriormente
implementado por Walter P. Aue, Enrico Bartholdi y Richard R. Ernst, que publicaron sus
trabajos en 1976.
RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR DE ESTADO SLIDO

Una variedad de circunstancias fsicas impide que las molculas sean estudiadas en solucin, ni
tampoco mediante otras tcnicas espectroscpicas a un nivel atmico. En los medios de fase
slida, tales como cristales, polvos microcristalinos, geles, soluciones anisotrpicas, etc, se da
en particular el acoplamiento dipolar y la anisotropa de desplazamiento qumico, que se
convierten en dominantes para el comportamiento de los sistemas de espn nuclear. En la
espectrometra RMN convencional en estado de solucin, estas interacciones adicionales
daran lugar a una ampliacin considerable de las lneas espectrales. Diversas tcnicas
permiten establecer condiciones de alta resolucin, que pueden, al menos para los espectros
de 13 C, ser comparables a los espectros RMN en estado de solucin.

Dos conceptos importantes para la alta resolucin en la espectrometra RMN de estado slido
son la limitacin de la posible orientacin molecular mediante orientacin de la muestra, y la
reduccin de las interacciones magnticas nucleares anisotrpicas mediante giro de la
muestra. De este ltimo enfoque, destaca el mtodo del giro rpido en torno al ngulo mgico,
cuando el sistema est compuesto por ncleos de espines 1/2. Una serie de tcnicas
intermedias, con muestras de alineamiento parcial o movilidad reducida, se estn utilizando
tambin en espectrometra RMN.

Las aplicaciones de la RMN de estado slido suelen utilizarse en investigaciones sobre
protenas de la membrana, fibrillas de protenas, todo tipo de polmeros, anlisis en qumica
inorgnica, y tambin otras ms "exticas" como las hojas de plantas y las pilas de
combustible.
ESPECTROMETRA RMN APLICADA A PROTENAS

Gran parte de la reciente innovacin dentro de la espectrometra RMN se ha dado en el campo
de estudio de las protenas, y se ha convertido en una tcnica muy importante en la biologa
estructural. Un objetivo comn de estas investigaciones es obtener una alta resolucin de las
estructuras tridimensionales de las protenas, similar a lo que puede lograrse por cristalografa
de rayos X. En contraste con la cristalografa de rayos X, la RMN se limita sobre todo a las
protenas relativamente pequeas, de menos de 35 kDa, aunque los avances tcnicos
permiten la resolucin de estructuras ms grandes. La espectrometra RMN es a menudo la
nica manera de obtener informacin de alta resolucin, en todo o en parte, de protenas no
estructuradas.

Las protenas son varios rdenes de magnitud ms grandes que las pequeas molculas
orgnicas que se mencionaron anteriormente en este artculo, pero la misma teora se aplica a
la RMN. Debido al mayor nmero de elementos presentes en la molcula, los espectros
unidimensionales bsicos se ven solapados con la superposicin de seales, hasta el punto de
que el anlisis resulta imposible. Por lo tanto, se realizan experimentos multidimensionales (2,
3 o 4D) para hacer frente a este problema. Para facilitar estos experimentos, es conveniente
marcar isotpicamente la protena con 13 C y 15 N, debido a que los istopos 12 C
predominantes de forma natural no son activos a la RMN, mientras que el momento
cuadrpolo nuclear del istopo 14 N predominante de forma natural impide que se pueda
obtener informacin de alta resolucin a partir de este istopo de nitrgeno. El mtodo ms
importante utilizado para la determinacin de la estructura de las protenas utiliza
experimentos NOE para medir las distancias entre pares de tomos dentro de la molcula.
Posteriormente, las distancias obtenidas se utilizan para generar una estructura 3D de la
molcula usando un programa de ordenador.
Espectrometra Mossbauer

La espectrometra Mssbauer es un mtodo para determinar el grado de oxidacin qumica y
el entorno de los elementos qumicos. El efecto Mssbauer, que se basa en este
espectrmetro, le vali el Premio Nobel de Fsica a su descubridor, Rudolf Ludwig Mssbauer.
Esta tcnica es conocida sobre todo por el estudio del hierro, pero tambin es aplicable a
cualquier especie qumica cuyo ncleo atmico presente un espn no nulo.
TEORA BSICA

La muestra se excita mediante una radiacin gamma (fotones) que vara la energa de
transicin nuclear. Para eso, se dispone una fuente de radiacin que emite continuamente, y
se desplaza la fuente mediante oscilaciones, produciendo el efecto Doppler-Fizeau el cambio
de energa. Un detector se encuentra detrs de la muestra. Cuando la energa de radiacin
incidente se corresponde con la energa de transicin electrnica, la radiacin se absorbe, y
por lo tanto la intensidad recogida baja. As pues, esta es una espectrometra de absorcin.

El espectro Mssbauer consta de un conjunto de multipletes cuya forma y posicin
(desplazamiento qumico) es caracterstico tanto del nmero de oxidacin como de la
naturaleza y la geometra de los vecinos ms cercanos al elemento qumico estudiado.
APLICACIONES

* Corrosin acuosa. En la corrosin acuosa del hierro y el acero, se forman diferentes fases de
oxidacin. La espectrometra Mssbauer es parte del estudio de estas fases.

* Espectrmetro a bordo de sondas espaciales. Este instrumento es parte del equipo de las
sondas Spirit, Opportunity y Beagle 2 enviadas a Marte en 2003. Sus funciones son, entre
otras:
a) Determinar la composicin y abundancia de minerales ricos en hierro para posibles
operaciones futuras.
b) Medir el magnetismo de diversos materiales marcianos (suelo, polvo, rocas).

* Corrimiento al rojo gravitacional. La relatividad general predice que la frecuencia observada
de una seal emitida a la superficie de una estrella disminuye con la distancia al observador.
Intuitivamente, es una traduccin del hecho de que cualquier partcula, incluidos los fotones,
pierden la energa para salir de un campo gravitacional. Del mismo modo, una seal de
frecuencia emitida a la parte superior de una torre, ser captada en la parte inferior de la
torre de altura h con una frecuencia ' calculada segn la frmula,



donde g es la aceleracin de la gravedad terrestre y c la velocidad de la luz. Para una altura de
10 metros, y ' se diferencian slo en 10 elevado a -15, una diferencia muy difcil de medir.
Histricamente, la primera evidencia de este efecto tuvo lugar en 1960 por parte de RV Pound
y GA Rebka al utilizar el efecto Mossbauer descubierto un ao antes .