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PREVIO DE LA SEGUNDA PRACTICA DE BIOQUIMICA

(HOMOGENEIZACION Y CENTRIFUGACIN)
1.- Qu parmetros fsicos y qumicos se deben considerar durante una homogeneizacin?
FISICOS QUIMICOS

Tipo de tejido (duro, blando o semiduro)

Tipo de solucin (hipo,iso e hipertnica)

Tipo de buffer (en base a la forma, estructura de lo
que queramos separar)

Utilizacin de sustancias qumicas para la separacin
de organelos o macromolculas por ejemplo SDS
(detergentes)

2.- Qu tipo de homogenizado debe utilizarse para muestras blandas, duras y semiduras?
VIRTIZ POTER MORTERO
Tejido duro Tejido semiduro Tejido blando

3.- Qu caractersticas tiene una centrifuga y cuantos tipos de centrifuga existen?
Una centrfuga o centrifugadora es una mquina que pone en rotacin una muestra para acelerar por fuerza
centrfuga la decantacin o sedimentacin de sus componentes o fases (generalmente una slida y una
lquida), en funcin de su densidad. Existen diversos tipos de estos, comnmente para objetivos especficos.
Por esencia cualquier centrifuga esta compuesta por:
a) Motor
b) Flecha
c) Rotor
Existen distintos tipos de centrifugas las cuales son:
a) Centrifugas de baja velocidad o clnicas: Son tiles para partculas grandes como clulas,
precipitacin de sales insolubles.
b) Centrifugas de alta velocidad: Son tiles en la separacin de fracciones celulares insuficientes para la
separacin de ribosomas, virus y macromolculas.
c) Ultracentrfugas: Existen dos tipos de ultracentrfugas
-Analticas: Obtencin de datos precisos de propiedades de sedimentacin.
-Preparativas: Aislamiento de partculas de bajo S (coeficiente de sedimentacin).

4.- Cules son los parmetros fsicos que participan durante la centrifugacin de un homogenizado
tisular?
-El homogenizado tendr que ser una solucin isotnica
-La temperatura del homogenizado tendr que estar al menos 4
0
C
5.- Cules son los tipos de centrifugacin que existen?
-Centrifugacin diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las molculas. Esta diferencia debe ser
grande para que sea observada al centrifugar. Las partculas que posean densidades similares a la del medio
sedimentarn juntas. Este mtodo es inespecfico, por lo que se usa como centrifugacin preparativa para
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separar componentes en la mezcla (por ejemplo, para separar mitocondrias de ncleos y membrana)pero no
es til para separar molculas.
-Centrifugacin isopcnica: Partculas con el mismo coeficiente de sedimentacin se separan al usar medios
de diferente densidad. Se usa para la separacin de ADN con mucha frecuencia.
-Centrifugacin zonal: Las partculas a separar se separan por la diferencia en la velocidad de sedimentacin
a causa de la diferencia de masa de cada una. La muestra se coloca encima de un gradiente de densidad
preformado. Por la fuerza centrfuga las partculas sedimentan a distinta velocidad a travs del gradiente de
densidad segn su masa. Se debe tener en cuenta el tiempo de centrifugacin ya que si se excede, todas las
molculas podran sedimentar en el fondo del tubo de ensayo.
-Ultracentrifugacin: Permite estudiar las caractersticas de sedimentacin de estructuras subcelulares
(lisosomas, ribosomas y microsomas) y biomolculas. Utiliza rotores (fijos o de columpio) y sistemas de
monitoreo. Existen diferentes maneras de monitorear la sede las partculas en la ultracentrifugacin, el ms
comn de ellos mediante luz Uerfresones.
-Anexo:
La centrifugacin es un mtodo fsico por el cual se pueden separar slidos de lquidos de diferente densidad
mediante una fuerza rotativa , la cual imprime a la mezcla con una fuerza mayor que la de la gravedad,
provocando la sedimentacin de los slidos o de las partculas de mayor densidad.
Fundamento terico
El objetivo de la centrifugacin es separar slidos insolubles (de particulas muy pequeas difciles de
sedimentar) de un liquido. Para ello, se aplica un fuerte campo centrfugo, con lo cual las partculas tendern a
desplazarse a travs del medio en el que se encuentren con la aceleracin G. E = velocidad angular
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x radio


-Centrifuga clnica -Centrifuga de alta velocidad -Ultracentrfuga