Csar Agustn Corts Herrera

Hugo Alejandra Bahena Mendoza

Fernando Maldonado Vaca
Anastasia Zaitsev Zaitseva
Alma Amrica Pujol Quiroz

Mtodo Histolgico
La histologa proviene etimolgicamente del estudio de los tejidos, pero la
definicin abarca ms que eso, es el estudio de los componentes, estructura y
funcionamiento de las clulas, por ende los tejidos y rganos respectivamente; por
ello se dice recibe el apoyo de ciencias como son la citologa, histologa como tal e
histologa especfica, referido a los rganos.
Para su estudio la histologa se ayuda en la microscopa y para su correcta
utilizacin usa un proceso para preparar muestras y estas se pueden obtener por:
Se pueden obtener muestras por: 1-. Aspiracin y/o lavado, 2-. Frotis, 3-.
Puncin con aguja fina, 4-. Impronta, 5-. Biopsia, 6-. Puncin con troca, 7-.
Autopsia.
1) Sacar lquido de partes u rganos huecos para despus hacer un
frotis. ( mtodo citolgico)
2) Sirve para observar cantidad de clulas, parsitos, anomalas, etc. (
mtodo citolgico)
3) Proceso para sacar lquido de rganos o espacios ( mtodo
citolgico)
4) Se corta una muestra y se pone encima de un porta objetos para
dejar una marca (mtodo citolgico).
5) Muestra de tejido a un ser vivo, puede ser insicional o exicional
(mtodo histolgico)
6) Puncin pero con una aguja gruesa y se usa para rganos slidos
(mtodo hsitolgico)
7) Remocin de tejido a un cadver, puede ser de tipo mdico o
mdico-legal.
Las muestras de tejido se pueden ir degradando debido a :
a) Proceso qumico
b) Proceso celular
c) Proceso orgnico
Existen 2 mtodos para detener la degradacin que son :
a) Congelacin a -120 C.
b) Fijacin con sustancias qumicas y puede ser:
1. Inmersin: las piezas de tejido se introducen a una solucin
fijadora.
2. Perfusin: la solucin fijadora se introduce por el sistema
circulatorio del organismo para que llegue a todo el cuerpo.

Pasos del mtodo histolgico:
1. Deshidratacin y aclaracin: El tejido se somete a baos de alcohol,
empezando con alcohol al 50% y se le va aumentando el grado
hasta llegar a un alcohol del 100% para eliminar el agua, y despus
se utiliza xileno para eliminar el alcohol del tejido y permitir que la
parafina penetre.
2. Parafinacin: Se pueden utilizar distintos tipos de parafina segn la
necesidad, esta no es miscible en agua. El tejido se sumerge en
parafina y posteriormente a este tejido se le coloca en un contenedor
donde este se sumerge en ms parafina para crear un molde.
3. Seccin: Se utiliza un micrtomo y la muestra se corta para obtener
cortes precisos de esta de aproximadamente de 5-10 micrmetros.
Tambin se pueden hacer cortes de muestras congeladas para evitar
todo el proceso y nicamente realizar el corte en ella con un
criostato.
4. Tincin y montaje: Primero se desparafina la muestra y despus se
hidrata y se tie el tejido con colorantes hidrosolubles. Despus el
tejido se vuelve a deshidratar para que se fije permanentemente en
el portaobjetos mediante la adicin de un pegamento transparente.
Existen 3 tipos principales de colorantes:
a) cido Bsico
b) Distinguen componentes fibrosos de matriz extracelular.
c) Sales metlicas.
Los colorantes ms usados son:
I. Hematoxilina: Tie de color azul los componentes cidos
como el ADN o el ARN. (basoflicos)
II. Eosina: Tie de color rosa los componentes bsicos como
las regiones del citoplasma (acidfilos).
III. Azul de toloudina: Tie de azul los componentes del tejido
excepto los que no tengan polianiones como la matriz del
cartlago. Azul: metecromasa. No tie: metacromtico.

Histoqumica y citoqumica: tincin de los tejidos mediante un colorante
fluorescente dirigidos contra un componente celular particular; nos permite
observar macromolculas como son las enzimas, los cidos nucleicos, etc.
Inmunocitoqumica: la especificidad de la reaccin entre el antgeno y el
anticuerpo es el fundamento de la inmunocitoqumica.

Microscopa ptica: Un microscopio es un instrumento que incrementa el
tamao de imagen y permite ver ms detalles de lo que sera posible a
simple vista. La funcin del microscopio es la de ampliar una imagen hasta
un grado en el cual la retina pueda resolver la informacin que de otro
modo, estara por debajo de su lmite de resolucin. Los componentes del
microscopio de campo claro son:

Fuente luminosa
Lente condensador
Platina
Lente objetivo
Lente ocular

El poder de resolucin es la capacidad de una lente o sistema ptico de
microscopio de producir imgenes separadas de objetos que estn muy
cerca uno de otro.
La resolucin del microscopio ptico es de 0.22 m
Microscopio de contraste de fases: Aprovecha las pequeas diferencias en
el ndice de refraccin que hay en las diferentes partes de una muestra de
clulas a tejido. La luz que atraviesa ndices de refraccin mayor se refracta
y queda fuera de fase con respecto al haz luminoso principal que ha pasado
por la muestra.
Microscopio de campo oscuro: Solo los rayos de luz refractados por las
estructuras llegan al lente objetivo. Para lograr esto un condensador
especial ilumina la muestra de forma oblicua , por ello el campo se ve
obscuro y solo destacan las pequeas partculas de la muestra que reflejan
parte de la luz.
Microscopio de fluorescencia: Este microscopio detecta molculas con
fluorescencia natural (que emite luz de longitudes de onda dentro del
espectro visible frente a la luz UV)
Microscopio electrnico de transmisin (MET): Utiliza la interaccin de un
haz de electrones con la muestra para producir una imagen. Del ctodo
sale un haz de electrones atrados por el nodo, atravesando una serie de
lentes electromagnticos (lente condensador, objetivo y proyector). Se
captura en una placa fotogrfica.
Microscopio electrnico de barrido (MEB): El haz de electrones no
atraviesa la muestra, si no que barre su superficie. Es muy parecido al
MET, pero produce imgenes tridimensionales y tiene menor resolucin.