Sala Limpa

26/01/13 ARQUIVOS H.
ELLIS
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vol ta

SADE SEXUAL E REPRODUTIVA

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EDIO:
Volume 03 - nmero 04 - Abril / Junho -
2007
Carta aos leitores
Mensagem para os leitores
Reproduo Humana
CRIOPRESERVAO DE OCITOS:
ONDE ESTAMOS
SALA LIMPA: CONDIO SINE QUA
NON NOS LABORATRIOS DE
REPRODUO ASSISTIDA?
Disfunes Sexuais
MESA REDONDA: TRATAMENTO DA
EJACULAO PRECOCE
MINHA OPINIO SOBRE: QUE
ESQUEMA ANTIBITICO EU USO E
COMO PREPARO O PACIENTE PARA A
OPERAO DE PROTESE PENIANA?
COMO O CNCER INTERFERE NA
SEXUALIDADE DA MULHER

Volume 03 - Nmero 4 - Abril / Junho - 2007
Sala Limpa - Classe 100/ISSO 5 - Condio Sine Qua
Non nos labortrios de reproduo assistida?
EDSON BORGES JR.
Doutor em Urologia pela UNIFESP; Diretor Cientf ico do Fertility Centro de Fertilizao
Assistida em So Paulo, S.P.
Estudos recentes tm demonstrado que gametas e embries humanos so sensveis a poluentes
f reqentemente presentes nos ambientes clnico e laboratorial. Agentes atmosf ricos
considerados potencialmente txicos para os embries humanos incluem partculas (f umaa e
poeira), componentes orgnicos volteis (lcool e acetona), gases inorgnicos (monxido de
carbono), componentes ref erentes s instalaes do laboratrio (adesivos, tintas, produtos de
limpeza, etc...), dentre outros.
A manuteno da qualidade do ar no ambiente clnico e laboratorial dentro dos limites
estabelecidos pelas normas da ANVISA, de acordo com a Resoluo da Diretoria Colegiada -
RDC n 33, de 17 de f evereiro de 2006, pode ser controlada pela instalao de um sistema de
f iltros Classe 100/ISO 5 especf icos para Sala Limpa (ambiente CLSSE 100), o qual exige um alto
investimento f inanceiro. Pela def inio, Sala Limpa Classe 100/ISO 5 uma sala na qual a
concentrao de partculas < 0,5 micron no seja maior que 100 por p cbico ou maior que
3.520 por metro cbico de rea do laboratrio.
Alm disso, sabe-se que segundo a norma NBR/ISO 14644-1 da Associao Brasileira de
Normas Tcnicas (ABNT) utilizada pela ANVISA nessa determinao, def inido que a
manipulao das amostras deve somente ser realizada em uma rea limpa classif icada, no
mnimo, como ISO Classe 5. Por essa razo, entende-se que necessria a existncia de
ambiente com f iltros classe 100/ISO 5 apenas nos microambientes de micromanipulao de
gametas e embries.
Dessa f orma, o controle da qualidade do ar em laboratrios de Reproduo Humana Assistida
pode ser realizado com um menor investimento conciliado a pequenas padronizaes da rotina
laboratorial. A instalao de cabinas e mdulos de f luxo unidirecional (laminar) so equipamentos
capazes de criar ambiente Classe 100/ISO 5. Esses mdulos so equipados com pr-f iltro
sinttico absoluto e terminal (HEPA), sendo que a localizao dos equipamentos relacionados
manipulao de gametas e embries no interior destas cabinas of erece total proteo ao produto
manipulado. Filtros para controle de partculas e microorganismos quando acoplados s
incubadoras garantem a qualidade do ar no ambiente de cultivo embrionrio. Desta f orma, a
instalao e a calibrao anual dos sistemas de f iltragem destes equipamentos podem garantir a
manuteno de microambientes estreis descartando a necessidade do sistema Classe 100/ISO
5 em todo o ambiente laboratorial.
Sabe-se que o f uncionamento adequado de um ambiente estril est diretamente relacionado
quantidade de gerao interna de contaminantes, quantidade de pessoas no ambiente e tipo de
vestimenta utilizada. Visando a manuteno dos microambientes estreis, o laboratrio pode ser
separado do ambiente externo por uma antecmara que contenha um vestirio anexo e sala de
escovao, permitindo que o prof issional passe de um setor para o outro levando consigo o
mnimo de contaminao possvel. Alm disso, a utilizao de vestimentas especiais
conf eccionadas com materiais sintticos (polister de alta densidade), isentos de algodo e com
baixa reteno de carga eletrosttica bem como o uso de toucas, mscaras descartveis, luvas
sem talco e tamancos autoclavveis podem minimizar signif icativamente a contaminao da rea
e, assim, a manuteno da qualidade do ar.
A exposio dos gametas e pr-embries ao ambiente no controlado pode ser mnima quando
existe limitao do trf ego e dos movimentos dos prof issionais, resultado da manuteno dos
materiais e meios de cultura no ambiente de trabalho e da adequada distribuio dos
equipamentos. Algumas adequaes na postura do prof issional como: evitar entrar no laboratrio
se estiver com problemas de sade, evitar cosmticos de qualquer espcie, no utilizar objetos
como relgio, aliana, bijuterias em geral, no levar objetos como celulares chaves e livros para o

26/01/13 ARQUIVOS H.ELLIS
como relgio, aliana, bijuterias em geral, no levar objetos como celulares chaves e livros para o
laboratrio, tambm colaboram de f orma positiva no controle da qualidade laboratorial. Assim, as
alteraes na rotina laboratorial so uma alternativa para a obteno de resultados semelhantes
aos encontrados nos sistemas de Sala Limpa e dependem exclusivamente da conscientizao
por parte dos prof issionais em relao implementao de algumas normas.
SALA LIMPA CLASSE 100/ISO5
Conveni entes Inconveni entes
Diminuio ef etiva do nmero de partculas
em todo o ambiente laboratorial
Controle e manuteno dos f atores
ambientais que so as principais f ontes de
contaminao
Manuteno de um ambiente estvel por
tempo maior
Alto Investimento
Mudana estrutural do servio
Necessidade de uma cadeia complexa de
f ornecedores de materiais e equipamentos.
Concluso: Medidas como microambientes especf icos para a manipulao de gametas e
embries associada rotina laboratorial adequada podem ser to ef icientes quanto um Ambiente
Sala Limpa Classe 100/ISO 5, com custos e manuteno signif icativamente menores.
Dessa maneira, a possibilidade de microambientes estreis nos locais onde realizada a
manipulao dos gametas e embries (f luxo laminar Classe 100/ISO 5 e sistema de f iltros nas
incubadoras), alm de pequenas modif icaes na rotina interna do laboratrio, podem ser
signif icativas na melhoria dos resultados de f ertilizao, implantao e gestao, evitando a
necessidade de instalao do sistema de Sala Limpa Classe 100/ISO 5, cujo alto investimento
pode inviabilizar a concretizao do projeto em alguns centros. Pode-se dizer que o grande
investimento em um sistema de f iltros para a instalao de reas limpas pode ser transf erido
para outras tecnologias.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ANVISA Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo da Diretoria Colegiada - RDC n 33, 17/02/2006.
http://e-legis.anv isa.gov .br/leisref /public/showAct.php?id=20954&word1.
Elder K, Dale B. in v itro f ertilization. 2 ed. Cambridge Univ ersity Press; 2000.
ESHRE guidelines f or good practice in IVF laboratories. Hum Reprod. 2000;15(10):2241-6.
Rev ised guidelines f or human embry ology and andrology laboratories. The Practice Committee of the American
Society f or Reproductiv e Medicine and the Practice Committee of the Society f or Assisted Reproductiv e
Technology . Fert Steril. 2006;86(5 Suppl):S57-S72.
Sala Limpa Disponv el em: http://www.setor1.com.br/gmp/salas_limpas.htm

SANDRO C. ESTEVES ANDROFERT
Centro de Ref erncia para Reproduo Masculina em Campinas, So Paulo, SP
mailto:s.esteves@androf ert.com.br
1 - INTRODUO
O objetivo principal da reproduo humana assistida, especialmente tratando-se das tcnicas de
alta complexidade, o manuseio dos gametas de f orma ef iciente e segura, com o intuito de
produzir pr-embries viveis e, em ltima anlise, propiciar o nascimento de bebs saudveis,
salvaguardando a sade dos indivduos envolvidos no processo. O impacto desta atividade na
medicina e na cincia, e os possveis riscos envolvidos, f azem com que seja necessrio
assegurar a segurana e a reprodutibilidade dos processos realizados.
A melhor maneira para atingir e manter nveis timos de qualidade e segurana no manuseio do
material biolgico a implantao de um sistema de gesto de qualidade. Regulamentaes
recentes, f ruto do trabalho de prof issionais de sade e especialistas em reproduo humana, e
validadas ou normalizadas por organismos of iciais, tm sido produzidas para padronizar as
operaes na rea de clulas e tecidos reprodutivos. Estas j incorporam os conceitos de
gesto de qualidade, hoje to comum em diversas disciplinas que envolvem tecnologia.
Este tem sido o caminho j adotado por alguns pases, como os integrantes da comunidade
europia (European Union Directive 2004, 2006), os EUA (FDA 2004), a Austrlia e a Nova
Zelndia. Recentemente, o Brasil tambm passou a integrar este grupo, a partir da promulgao
da resoluo normativa no. 33, de 17 de f evereiro de 2006, pela Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria (ANVISA 2006). Estes documentos baseiam-se na premissa de que necessrio
assegurar a sade pblica, prevenindo a transmisso de doenas inf ecto-contagiosas via
material biolgico.
Aqueles que trabalham com gesto de qualidade reconhecem que para implantar este sistema,
independentemente do modelo adotado, exige-se um esf oro de trabalho extraordinrio,
prof issionais altamente qualif icados e engajados, e investimento f inanceiro (Kastrop 2003).
Entretanto, devido s exigncias cada vez maiores na padronizao dos processos e avaliao
de ef icincia, que j vem ocorrendo em diversas reas, no h outro caminho para a reproduo
assistida a no ser adotar um destes modelos. Neste sentido, a rea de reproduo assistida,
acostumada a f igurar na vanguarda da cincia, viu-se surpreendida pelo f ato de que
determinadas disciplinas envolvidas com processamento de tecidos e terapia celular consideram
que vrios aspectos de segurana e qualidade no campo da reproduo assistida so
insatisf atrios (Hartshorne 2005). A melhora da padronizao, ef icincia, transparncia e
rastreamento de todas as atividades realizadas permitiro aumentar a segurana desta atividade,
alm de demonstrar a competncia tcnica dos servios, no sentido de que so capazes de
gerar resultados tecnicamente vlidos e com riscos praticamente nulos para a sade da
populao.
Alguns argumentam que a implantao de modelos de gesto de qualidade aumenta os custos
dos processos. Alm disto, questionam a aplicabilidade e a ef etividade de algumas medidas,
como a necessidade do controle da contaminao ambiental no laboratrio de f ertilizao in vitro
(FIV), uma vez que, hipoteticamente, o risco de inf eco advindo dos procedimentos de
reproduo assistida baixo, alm de que o desenvolvimento da cultura embrionria neste tipo
de ambiente poderia ser mais dif cil tecnicamente (Mortimer 2005).
Entretanto, nenhum destes crticos f oi capaz, at o momento, de apresentar evidncias que
comprovem que o controle da qualidade do ar do laboratrio de FIV desnecessrio, ou que tais
medidas diminuem a ef icincia dos processos. As crticas baseiam-se em conceitos empricos e,
portanto, no comprovados. Devido pequena biomassa dos gametas e embries, muito raro
observar a ocorrncia de sinais de inf eco clnica. Porm, isto no signif ica dizer que este
material estril. Alm disto, dif cil avaliar o risco real de inf eco, uma vez que os meios de
cultivo de gametas e embries utilizam antibiticos na sua composio, que mascaram a
extenso de uma possvel contaminao (Hartshorne 2005). Desta f orma, torna-se dif cil
def ender a prtica vigente que atualmente no segue os padres aceitos em outras reas
crticas.
As agncias reguladoras reconhecem que a normalizao e a padronizao dos procedimentos
so importantes para minimizar os riscos de inf eco. Muitas vezes, estas agncias utilizam o
Princpio da Precauo para avaliar o risco em sade (Commission of the EU Communities
2000). Este conceito no deve ser conf undido com os conceitos de evidncia cientf ica que os
cientistas utilizam na anlise de dados. O princpio da precauo empregado quando se
identif ica a existncia de risco potencialmente danoso, derivado de um f enmeno, produto ou
processo, mas cujas evidncias cientf icas no permitem determinar com exatido seu impacto
real. Nestes casos, um conjunto de medidas de segurana adotado. O controle da
contaminao ambiental no laboratrio de FIV insere-se neste contexto. As exigncias das
agncias reguladoras aplicadas reproduo assistida derivam daquelas j existentes para a
produo de linhagens celulares e para o manuseio de tecidos biolgicos com f inalidade de
terapia celular, alm daquelas exigidas das indstrias f armacuticas para o manuseio e preparo
de medicamentos injetveis.
2 - QUAIS AS EXIGNCIAS DA RDC 33 (ANVISA), ESPECFICAS PARA A PRTICA DA
REPRODUO ASSISTIDA NO BRASIL?
Esta resoluo, que entrou em vigor em f evereiro de 2006, regulamenta o f uncionamento dos
bancos de clulas e tecidos germinativos e, portanto, engloba todas as atividades da reproduo
assistida, tanto daquelas que envolvem a f ertilizao in vitro e suas tcnicas auxiliares, como
tambm os procedimentos simples, como o processamento de smen para a inseminao
intrauterina.
Os objetivos principais da RDC 33 so:
garantir padres tcnicos e de qualidade em todo o processo de obteno, transporte,
processamento, armazenamento, liberao, distribuio, registro e utilizao de clulas e tecidos
germinativos com f ins teraputicos reprodutivos;
garantir a disponibilidade de clulas e tecidos germinativos provenientes de doao voluntria e
annima para f ins teraputicos de terceiros ou para manuteno da capacidade reprodutiva do
prprio doador, com qualidade e segurana;
regulamentar o f uncionamento de bancos de clulas e tecidos germinativos para f ins
teraputicos reprodutivos.
A ANVISA (2006) estabeleceu, a partir da promulgao da resoluo, o prazo de um ano para
que os estabelecimentos, que passaro a ser denominados Banco de Clulas e Tecidos
Germinativos (BCTG), se adequassem resoluo. Entre vrios aspectos, so exigidos os
listados abaixo:
a - Implantao de um sistema de garantia da qualidade, que deve incluir:
a.1 - criao de um manual tcnico-operacional;
a.2 - elaborao e reviso peridica dos procedimentos operacionais padro (POPs) que
constam do manual tcnico-operacional;
constam do manual tcnico-operacional;
a.3 - treinamento peridico de pessoal;
a.4 - realizao de auditorias internas peridicas, para verif icar conf ormidade com as normas
tcnicas;
a.5 - elaborao de procedimentos para deteco, registro, correo e preveno de erros e
no-conf ormidades;
a.6 - cumprimento das normas de biossegurana;
a.7 - criao de um sistema de avaliao e controle de insumos, materiais e equipamentos.
b - Prover inf ra-estrutura adequada para o manuseio dos gametas, pela criao de salas
tcnicas, as quais devem ter um sistema de controle da contaminao ambiental com as
seguintes caractersticas:
b.1 - sala de processamento de smen: sistema de climatizao que mantenha presso positiva
em relao aos ambientes adjacentes; condies de controle da temperatura entre 21C a 24C;
umidade relativa do ar entre 40% e 60%; vazo mnima de ar total de 45 (m
3
/h)/m
2
; vazo mnima
de ar exterior de 15 (m
3
/h)/m2 e f iltragem mnima no insuf lamento com f iltros G3+carvo
ativado+F8;
b.2 - laboratrio de f ertilizao in vitro: o sistema de climatizao deve ser idntico ao da sala de
processamento, e a manipulao das amostras somente deve ser ef etuada em uma rea limpa
classificada, no mnimo, como ISO Classe 5
1
, segundo a norma NBR/ISO 14644-1 da
Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT 2005). Para a obteno dessas condies, o
BCTG pode utilizar as seguintes alternativas: 1) cabine de segurana biolgica Classe II Tipo A;
2) mdulo de f luxo unidirecional; 3) sala classif icada, como ISO classe 5 no mnimo.
As exigncias da RDC 33 esto em concordncia com quelas da maioria das disciplinas que
processam clulas e tecidos para f ins teraputicos. Estas adotam a cabine de f luxo unidirecional
(que geralmente f ornece um ambiente classe ISO 5, ou qualidade de ar grau A; Tabela 1),
como f orma padro para minimizar os riscos de inf eco. Porm, para assegurar a qualidade do
ar no interior da cabine, importante que esta esteja inserida em um ambiente com controle da
qualidade do ar (Tabela 1). Da a importncia da presso positiva no insuf lamento e da f iltrao
do ar nas salas tcnicas, como exige a norma brasileira. Estas medidas objetivam salvaguardar
contra os riscos inerentes ao processamento dos tecidos, e valem tanto para o uso dos mesmos
de f orma autloga ou heterloga.
Tabel a 1. Classificao do ar das Salas Limpas de acordo com a norma ISO 14.644-1 e
Norma Europia (EU Directive 2004, classificao do ar adaptada de MHRA 2002) Estudos
sobre os efeitos da qualidade do ar na reproduo assistida
Classificao do ar
Contagem de
partculas
0,5m/m
3*
Contagem de
partculas
5m/m
3*
Controle
microbitico
ar
1
placas
2
Classif icao
ISO 14.644-1
ISO 5
ISO 6
ISO 7
ISO 8
3.520
35.200
352.000
3.520.000
29
293
2.930
29.300
ND
ND
ND
ND
Diretiva Europia
GRAU A
GRAU B
GRAU C
GRAU D
3.520
35.200
352.000
3.520.000
0
2.000
20.000
ND
<1 <1
10 5
100 50
200 100
*Nmero mximo de partculas permitidas por v olume de ar.
: no-def inido para condies em operao
1: no. mximo de unidades f ormadoras de colnia/m3
2: no. mximo de unidades f ormadoras de colnia por placa; aps 4h de incubao
ND=no-def inido
Evidentemente, o processamento de clulas e tecidos em uma Sala Limpa dif ere daquele
rotineiramente realizado na reproduo assistida, onde pouco ou nenhum controle da
contaminao ambiental aplicado. Hoje em dia, na reproduo assistida, elementos como
controle de acesso no laboratrio e paramentao, por exemplo, so muito variveis entre os
servios, e a monitorao das condies ambientais restringem-se, quando muito, ao controle da
temperatura das incubadoras e placas aquecedoras, e do pH dos meios de cultura.
praticamente consenso entre os especialistas que medidas devem ser adotadas para melhorar
a qualidade dos processos realizados no laboratrio de FIV. A maioria concorda, tambm, que
exigncias mnimas so necessrias (Gianaroli et al. 2000, Hill 2001, Mortimer 2005). Entretanto,
ainda motivo de debate quais devam ser as exigncias mnimas.
3 - O QUE A REGULAMENTAO BRASILEIRA TEM EM COMUM COM A DE OUTROS PASES
3 - O QUE A REGULAMENTAO BRASILEIRA TEM EM COMUM COM A DE OUTROS PASES
Todas exigem a implantao de um sistema de gesto de qualidade. A regulamentao brasileira
e a europia incluem especif icaes sobre a qualidade do ar nas reas crticas, ou seja,
naquelas onde se manipula o material biolgico. A americana, para bancos de tecidos, embora
no seja especf ica em relao qualidade do ar, exige que os servios controlem
adequadamente as condies ambientais, e que f orneam condies operacionais apropriadas,
as quais devem ser validadas, principalmente nos locais onde h risco de contaminao.
Em comparao regulamentao brasileira, a europia ainda mais rgida no que se ref ere ao
controle da qualidade do ar nas reas crticas (Tabela 2). Enquanto ambas exigem que a
manipulao das amostras biolgicas seja realizada em reas limpas, a norma europia exige
ainda que haja controle microbiolgico do ar e das reas de trabalho. Alm disto, a norma
europia exige que a qualidade do ar que circunda as reas crticas seja no mnimo do tipo D
(Tabela 1). De modo geral, necessrio que se instale f iltros terminais do tipo HEPA
2
no sistema
de insuf lamento para que se atinja qualidade do ar tipo D (Bernstein et al. 2005). No Brasil, no h
especif icao quanto ao controle microbiolgico, e exige-se apenas ventilao e f iltrao do ar
nas reas adjacentes rea limpa. A norma brasileira, entretanto, inclui outro ponto importante, o
qual veremos adiante, e que trata da exigncia de que o sistema de f iltrao inclua f iltros
contendo carvo ativado para a remoo de compostos orgnicos volteis (COV).
Tabel a 2. Controle da qualidade do ar nas salas tcnicas onde se realiza manipulao de
clulas e tecidos germinativos. Comparao entre as normas brasileira (RDC 33/2006;
ANVISA) e europia (Comission Directive 2004/23/EC, 2006/86/EC)
Brasil Comunidade Europia
1. Qualidade do ar nos
ambientes (salas) onde
se
realiza a manipulao de
material biolgico (as
reas crticas esto
inseridas nestes
ambientes)
sistema de presso positiva
com vazo mnima de ar total
de 45(m
3
/h)/m
2
; vazo mnima
de ar exterior de 15(m
3
/h)/m
2
e
f iltragem mnima no
insuf lamento com f iltros G3 +
F8; controle de temperatura e
umidade relativa do ar
No mnimo GMP* Grau D
(tabela 1)
2. Qualidade do ar
nas reas crticas
no mnimo, ISO Classe 5
(NBR/ISO 14644-1). Para a
obteno dessas condies,
pode-se utilizar as seguintes
alternativas: 1) cabine de
segurana biolgica Classe II
Tipo A; 2) mdulo de f luxo
unidirecional; 3) sala
classif icada, como ISO classe
5 no mnimo.
Em geral exige-se GMP grau A.
Em algumas situaes, aceitase
que a qualidade do ar seja
inf erior:
(a) quando demonstrado que a
exposio do material biolgico
ao ambiente grau A
prejudicial;
(b) quando demonstrado que o
risco de transmisso de
inf eco bacteriana ou f ngica,
pelo modo/via de transf erncia
do material biolgico, menor
do que o risco de transmisso
destes agentes pelo transplante
de clulas ou tecidos;
(c) quando no f or tecnicamente
possvel realizar determinando
processo num ambiente grau A
(exemplo: existncia de um
determinado equipamento na
rea de processamento que no
permite que se atinja a
qualidade do ar grau A)
3. Controle de
compostos orgnicos
volteis
Exige a instalao de f iltros de
carvo ativado no insuf lamento
do ar
No especif ica
4. Controle
microbiolgico
No especif ica
GMP grau A; aceita-se
qualidade inf erior em algumas
situaes (vide item qualidade
do ar nas reas crticas)
*GMP: como def inido pelo guia europeu para boas prticas de manuf atura e pela Norma Europia 2003/94/EC
4 - COMO REALIZAR O CONTROLE DA CONTAMINAO AMBIENTAL NO CONTEXTO DA
REPRODUO ASSISTIDA
A despeito dos grandes avanos obtidos nos ltimos anos nas tcnicas de reproduo
assistida, o processo ainda permanece pouco ef etivo quando se analisam as taxas de sucesso
assistida, o processo ainda permanece pouco ef etivo quando se analisam as taxas de sucesso
e o nmero de crianas nascidas em relao ao nmero de vulos e pr-embries produzidos.
Para que cada beb nasa, necessria a obteno e a gerao de aproximadamente 25 vulos
e 14 pr-embries, respectivamente (Esteves, comunicao pessoal). Cerca de quatro em cada
dez casais, que recorrem reproduo assistida, conseguem engravidar e, destes, apenas trs
tem o privilgio de ver o nascimento do beb (CDC 2003, REDLARA 2003).
A concepo nos seres humanos envolve a coordenao de uma cascata complexa de eventos
bioqumicos e moleculares entre os gametas masculinos e f emininos, que resultam na produo
de embries viveis capazes de implantar no tero materno. No contexto da f ertilizao in vitro, o
sucesso da embriognese no perodo pr-implantacional depende de vrios f atores, entre eles,
do ambiente onde so realizados os processos de manipulao dos gametas e a cultura dos pr-
embries. Os pr-embries humanos produzidos no laboratrio esto desprotegidos, pois no
possuem: (1) as barreiras f sicas f ornecidas pelas superf cies epiteliais existentes na tuba
uterina e no tero; (2) mecanismos de def esa imunolgica; e (3) mecanismos de detoxif icao
existentes no f gado, pulmes e intestino. Portanto, os gametas e pr-embries cultivados in vitro
so mais sensveis s inf luncias do ambiente, quando comparados a outros organismos mais
complexos, como o corpo humano, que possuem sistemas bem desenvolvidos de proteo.
Apesar disto, o ambiente f sico para a cultura in vitro dos gametas e pr-embries mudou muito
pouco nos ltimos 45 anos.
At recentemente, pouco se sabia sobre a inf luncia da contaminao ambiental nos resultados
dos processos realizados no laboratrio de FIV. Somente a partir dos estudos de Cohen et al.
(1997), demonstrou-se que a contaminao ambiental no laboratrio de FIV no se restringia aos
microorganismos e s partculas inertes, mas tambm aos gases txicos volteis (compostos
orgnicos volteis, COV). Geralmente, os laboratrios de FIV localizam-se em regies urbanas,
onde a poluio ambiental circundando o laboratrio, derivada da emisso dos veculos a motor,
indstrias, etc., constituem uma f onte inesgotvel de elementos particulados e gases volteis.
Cohen et al. (1997), em um estudo observacional de longa durao, demonstraram haver relao
inversa entre as taxas de implantao e gravidez e o aumento dos gases volteis no ambiente do
laboratrio de FIV. Embora a eliminao dos elementos particulados seja importante, e deve f azer
parte do controle da poluio ambiental, a eliminao dos COV igualmente importante e deve
ser abordada de f orma simultnea. Portanto, dif erentemente de outras reas da sade e da
indstria, a obteno de uma Sala Limpa para a cultura dos pr-embries in vitro deve,
obrigatoriamente, levar em considerao estes dois elementos.
4.1 - Controle dos elementos particulados no ar do laboratrio de FIV
O termo rea limpa (Sala Limpa ou Cleanroom) ref ere-se ao ambiente onde h controle da
contaminao do ar por elementos particulados em suspenso.
Normas tcnicas dispem sobre as salas limpas e ambientes controlados associados,
classif icando-os de acordo com o grau de limpeza do ar (NBR/ISO 14644-1 da ABNT, Tabela 1)
(ABNT 2005). A contaminao consiste na presena de qualquer elemento indesejvel em um
determinado ambiente, e que possa prejudicar a qualidade e a segurana do processo e,
conseqentemente, prejudicar o produto f inal e o operador. Existem contaminantes particulados
(slidos, lquidos ou gasosos) vivos ou no-vivos, contaminantes inicos, radioativos,
vibratrios, entre outros. No laboratrio de FIV, as partculas (tamanho entre 0,1 a 10 m), sejam
slidas ou gasosas, so os elementos de interesse, pois provocam f enmenos f sicos, aderindo-
se entre si e aos objetos.
Existem dois tipos de partculas: aquelas que esto em suspenso constante (medem menos que
1 mcron e incluem os vrus, bactrias, esporos e outras partculas submicrnicas inertes ou no)
e aquelas que esto em suspenso temporria (medem entre 1 e 100 micra, e incluem os
resduos do processo de limpeza, resduos de vestimentas, escamas de pele, etc). As mais
nocivas so as que f icam em suspenso constante, depositando-se no processo com grande
aderncia. As partculas, alm de serem nocivas por si s, podem transportar microrganismos. A
menor partcula visvel ao olho humano mede 50 m, ao passo que as partculas crticas medem
cerca de 0,3 m, que o tamanho da menor bactria. No ar ambiente, existem cerca de 10 a 100
milhes de partculas por p
3
, enquanto nas Salas Limpas, este nmero varia entre 10-10.000
partculas/ p
3
, dependendo da sua classif icao. O princpio bsico para a remoo dos
elementos particulados do ar a sua movimentao por uma srie de f iltros. O ar ir arrastar as
partculas em suspenso, que f icaro retidas ao passarem por f iltros de ef icincia progressiva.
A circulao f orada do ar carrega as partculas para os f iltros, eliminando-as, e promovendo
trocas constantes do ar ambiente. Utilizam-se f iltros seqenciais, com poros cada vez menores.
Desta f orma, removem-se inicialmente as partculas maiores, como a poeira, e f inalmente as
menores, incluindo as bactrias. Os elementos de f iltrao f inal so os f iltros de alta ef icincia
para partculas submicrnicas tipo HEPA ou ULPA
3
. A ef icincia destes sistemas na reduo da
contaminao microbiolgica est validada (NEBB 1998, Bernstein et al. 2005).
4.2 - Controle dos Gases Volteis (Compostos Orgnicos Volteis, COV)
Equipamentos, instrumentos, materiais descartveis e aqueles utilizados na construo do
laboratrio, materiais de limpeza, etc., so f onte permanente de gases volteis, principalmente de
laboratrio, materiais de limpeza, etc., so f onte permanente de gases volteis, principalmente de
tolueno, benzeno, octano, xileno, aldedos, uma variedade de f reons, alm de derivados de
solventes hidroclorados, etanol e isopropanol. Tambm tm sido detectados no ar do laboratrio
traos de metanol, teres e aditivos de gasolina, que so marcadores da emisso de veculos
motorizados.
Laboratrios de FIV localizados na proximidade de centros cirrgicos que realizam anestesias
gerais com gases anestsicos, tipo enf lurano, possuem resduos destes no ar. Os materiais
descartveis, como as placas de Petri e tubos, alm de outros materiais plsticos, constituem
f onte de vrios COV, principalmente estireno (Gilligan et al. 1997). Alm disto, tem-se
demonstrado que o ar insuf lado por f iltros do tipo HEPA pode carregar grandes quantidades de
gases volteis, principalmente se no houver renovao do ar que circula. Muitos laboratrios
que empregam presso positiva utilizam um sistema f echado de recirculao do ar, com pouca
ou nenhuma comunicao com o ar exterior, f avorecendo o acmulo progressivo de COV (Hall et
al. 1998).
O ar existente nas incubadoras, utilizadas para a cultura dos pr-embries, composto de 90-
95% de ar ambiente. O restante do ar provm do dixido de carbono (CO
2
) utilizado para
equilibrar o pH da cultura embrionria. Porm, mesmo o CO
2
medicinal raramente f iltrado ou
examinado quanto presena de contaminantes metlicos (Higdon et al. 2003). Alm disto,
muitas vezes os tanques de estocagem dos gases apresentam-se deteriorados, e o sistema que
transporta os gases dos tanques para as incubadoras pode estar oxidado, especialmente
quando no se utiliza um sistema contendo tubos de ao inoxidvel. Desta f orma, o dixido de
carbono tambm pode ser f onte de COV.
Hall et al. (1998) mensuraram a quantidade de COV existente no laboratrio de FIV, nas reas
adjacentes e no ar exterior de sete servios que no utilizavam medidas de controle da
contaminao por gases volteis, embora todos j utilizassem f iltrao de particulados (HEPA) e
presso positiva. Os resultados observados f oram surpreendentes: as quantidades mdias de
COV no ar do laboratrio (2.862 g/m
3
), no interior das incubadoras de CO
2
(2.769 g/m
3
) e nas
salas circunjacentes ao laboratrio de FIV (centro cirrgico, transf erncia de pr-embries)
(4.372 g/m
3
) f oram signif icativamente maiores do que no ar exterior (533 g/m
3
).
Tais observaes ref oram a tese do acmulo de COV em ambientes f echados e isolados, nos
quais existem f ontes emissoras de COV, como o caso dos laboratrios de FIV. Estudos
experimentais, analisando o impacto dos COV no desenvolvimento embrionrio de ratos
demonstraram relao inversa entre a taxa de f ormao de embries e de COV, principalmente
os aldedos, como a acrolena, conhecido COV derivado da atividade industrial e tambm
presente na f umaa do cigarro (Little e Mirkes 1990, Holyoak et al. 1996). Especula-se que a
presena de COV na cultura embrionria reduza ou iniba completamente a atividade da
glutationa-redutase (GSH), que serve como um importante substrato para as reaes
conjugadas de detoxif icao catalisadas pela glutationa S-transf erase.
A glutationa-redutase tambm um substrato da glutationa-peroxidase, que protege as
membranas celulares do dano peroxidativo. Mais recentemente, Worrilow et al. (2002)
demonstraram relao inversa entre os nveis de tolueno e as taxas de implantao de pr-
embries humanos.
Outros estudos demonstram que possvel reduzir substancialmente as concentraes de COV
no ar do laboratrio pela instalao de f iltros contendo substncias que adsorvem estes gases,
como o carvo ativado, o permanganato de potssio e a slica (Forman et al. 2004). O carvo
ativado possui poros de diversos tamanhos que criam um campo de atrao para molculas
ricas em eltrons, que f icam retidas. Compostos orgnicos volteis, como o benzeno e o tolueno,
so ef etivamente removidos pelo carvo ativado. Outros gases txicos, como os aldedos, so
ef etivamente removidos pelo permanganato de potssio, que os oxida, causando sua
degradao qumica. A instalao de f iltros contendo carvo ativado nas salas tcnicas uma
exigncia da norma brasileira e, sem dvida, representa um avano importante (Tabela 2).
5 - EXISTEM EVIDNCIAS QUE SUPORTAM A TESE DE QUE A QUALIDADE DO AR
INFLUENCIA OS RESULTADOS DA REPRODUO ASSISTIDA?
Alguns estudos sugerem que existe relao entre os gases volteis, a qualidade do ar como um
todo, e os resultados de implantao, gravidez e aborto nos processos envolvendo reproduo
assistida. Na Tabela 3, esto listados os estudos existentes at a presente data, os principais
resultados encontrados e a f ora de evidncia de cada um deles. A maioria destes estudos do
tipo observacional ou experimental. Estudos com maior f ora de evidncia cientf ica, do tipo
prospectivos, randomizados, com grupo controle, e com potncia estatstica adequada so
desejveis e necessrios para a comprovao do real benef cio do controle da qualidade do ar
no laboratrio de reproduo assistida. Isto no signif ica dizer que os estudos existentes tm
pouco valor. Pelo contrrio, pois so estudos importantes que f ornecem as bases para o
desenho de estudos mais conclusivos.
Tabel a 3. Estudos sobre os efeitos da qualidade do ar na reproduo assistida
Autores/Ano Desenho Resultados
Nvel de
evidncia
Autores/Ano Desenho Resultados evidncia
cientfica*
Little e Mirkes, 1990 Experimental
Demonstra a embriotoxicidade da
acrolena (COV) em ratos
5
Cohen et al., 1997 Experimental
Demonstra a existncia de nveis
elevados de compostos orgnicos
volteis (COV) no ar do laboratrio de FIV
4
Schimmel et al.,1997 Experimental
Demonstra a existncia de nveis
elevados de compostos orgnicos
volteis (COV) no ar das incubadoras do
laboratrio de FIV, e a possibilidade de
reduo dos mesmos pela f iltrao do ar
4
Hall et al., 1998 Experimental
Relao inversa entre o desenvolvimento
embrionrio em ratos e a concentrao
de acrolena (tipo de composto orgnico
voltil presente no ar)
5
Mayer et al, 1999
Prospectivo,
randomizado
Melhora nas taxas de gestao
utilizando- se um sistema de purif icao
de ar nas incubadoras
1
Racowsky et al,
1999
Coorte histrica
Reduo signif icativa das taxas de aborto
espontneo pela f iltrao do ar do
laboratrio de FIV e das incubadoras com
f iltros de carvo ativado
2
Boone et al., 1999 Coorte histrica
Construo de uma sala limpa Classe 100
para FIV, com conseqente melhora na
qualidade do ar do laboratrio e aumento
no nmero de pr-embries de elevada
qualidade disponvel para transf erncia
intra-uterina
2
Worrilow et al.,2000 Experimental
Diminuio da contaminao ambiental
pela construo de uma sala limpa
acoplada a um sistema de remoo de
COV para FIV
5
Worrilow et al.,2002 Coorte histrica
Relao entre aumento dos nveis de
COV e diminuio nas taxas de
implantao embrionria
2
Esteves et al.,2004 Coorte histrica
Controle da contaminao ambiental no
laboratrio de FIV ereas adjacentes,
pela construo de salas limpas com
sistema
de remoo de COV, acarretou aumento
nas taxas de embries de boa qualidade
e de gestao, e diminuio nas taxas de
aborto espontneo nos ciclos de FIV-ICSI
2
von Wyl and
Bersinger, 2004
Coorte histrica
Demonstra ef icincia dos sistemas de
remoo de gases volteis e particulados
4
Mortimer, 2005
Opinio de
especialista
Sugere ef eitos adversos pela adoo de
salas limpas na reproduo assistida,
especialmente na FIV
5
Esteves et al.,2006b Coorte histrica
Controle da contaminao ambiental no
laboratrio de FIV ereas adjacentes,
pela construo de salas limpas com
sistema
de remoo de COV, aumentou as taxas
de embries de boa qualidade e de
gestao, e diminuiu as taxas de aborto
espontneo nos ciclos de ICSI por f ator
masculino
2
Knaggs et al., 2007 Coorte histrica
Adequao do servio de reproduo
humana s normas europias de controle
da qualidade do ar nos laboratrios no
prejudicou os resultados da f ertilizao in
vitro. Os autores observaram um
incremento signif icativo nas taxas de
gestao clnica, atribuda a
implementao do controle da qualidade
do ar e do sistema de gesto de
qualidade.
2
* Oxf ord Centre f or Ev idence Based Medicine, 2001 (Melhor ev idncia cientf ica = 1; Pior ev idncia = 5).
Por outro lado, se f altam estudos para comprovar de f orma def initiva o benef cio do controle da
qualidade do ar na reproduo assistida, tambm inexistem estudos indicando que tal sistemtica
seja prejudicial. Ao contrrio, um estudo recente demonstrou que a adequao rgida s normas
europias no que concerne ao controle da qualidade do ar no laboratrio de f ertilizao in vitro
no prejudicou a ef icincia dos processos realizados (Knaggs et al. 2007). Aqueles que criticam
a necessidade da implantao do controle da qualidade do ar no laboratrio de FIV baseiam-se
em conceitos empricos. Por exemplo, sugere-se que a circulao do ar no laboratrio de FIV, ao
se empregar sistemas de ventilao e f iltrao, ir diminuir a temperatura e resf riar os gametas,
alterando sua capacidade biolgica e, em ltima anlise, prejudicando os resultados (Mortimer
2005). Tais crticas so oportunas, pois abrem espao para que se discuta o conceito de
validao de processos, to f undamental nas prticas operacionais que envolvem a gesto da
qualidade. Validao signif ica estabelecer evidncia documentada que f ornea garantia de que
um determinado processo, equipamento ou ambiente ir consistentemente produzir um produto
que atinge especif icaes predeterminadas e atributos de qualidade (Hartshorne 2005).
Um processo validado para garantir que o desempenho de um sistema est de acordo com o
projeto para o qual f oi desenhado. Assim, no que se ref ere ao possvel resf riamento do material
biolgico ao se empregar sistemas de f iltrao no laboratrio de FIV, basta utilizar o conceito de
validao. Ao se verif icar a existncia da no-conf ormidade, utilizam-se medidas corretivas para
minimizar ou anular o problema. A validao dos processos deve f azer parte da rotina de cada
servio de reproduo humana, como parte da atividade operacional, seja ela intermitente ou no
(Esteves et al. 2006a). Para se trabalhar numa sala limpa, todos os processos anteriormente
executados devem ser revalidados f rente nova realidade. Em outras palavras, deve-se
reaprender a trabalhar em uma nova condio. No caso especf ico da temperatura, mencionada
acima, a compensao da queda da temperatura, que realmente ocorre quando se trabalha em
um laboratrio com sistema de ventilao controlada, deve ser realizada, por exemplo,
aumentando-se a temperatura das placas aquecedoras at que se atinja a temperatura ideal de
trabalho (Tabela 4) (Verza Jr. et al. 2007).
Tabel a 4. Exemplo de aferio e validao de um dos processos executados no interior da
sala limpa (ajuste da temperatura de uma das placas aquecedoras utilizadas para a
manuteno das clulas/tecidos biolgicos a 37.C). Observe o efeito da temperatura
ambiente e da ventilao forada na temperatura dos meios de cultivo de gametas e pr-
embries mantido na placa aquecedora, utilizando-se diferentes ajustes no termostato.
Sistema de ventilao/fluxo laminar
ligado desligado
Temperatura ambiente (.C) 23,5 24,5 25,5 23,5 24,5 25,5
Estao de micromanipulao de
gametas (ICSI)*
Placa aquecedora ajustada :
37.C
38,0.C
35,6
36,2
36,1
36,7
36,4
37,6
36,3
36,7
36,5
37,4
36,9
37,9
*Cabine de f luxo laminar unidirecional, onde est inserido o microscpio inv ertido e micromanipuladores,
utilizados para a injeo do espermatozide no v ulo (ICSI)
Placa aquecedora Tokai-heat, Japo
Temperatura do meio de cultiv o (20 microlitros de meio, recobertos com 2mL de leo mineral, dispostos numa
placa de Petri 50X9mm). Temperatura af erida com termmetro Greisinger GmH3230, Alemanha.
6 - NA PRTICA, POSSVEL TRABALHAR COM REPRODUO ASSISTIDA EM SALAS
LIMPAS?
Sim, a implantao de salas limpas no contexto da reproduo assistida j vem sendo adotada
por alguns, sem que f osse documentado qualquer prejuzo na ef icincia dos processos. Aqueles
que adotaram estes sistemas experimentaram aumento da ef icincia e melhora nas taxas de
sucesso do programa de reproduo assistida. Especula-se que tal melhora deva-se ao conjunto
de f atores composto pela adeso estrita s normas de boa prtica laboratorial e de gesto de
qualidade, alm do controle da contaminao ambiental (Boone et al. 1999, Worrilow et al. 2000,
Esteves et al. 2004, von Wyl e Bersinger 2004, Knaggs et al. 2007).
A nossa experincia com reproduo assistida no contexto do controle da contaminao
ambiental vem desde 2002, bem antes da regulamentao da ANVISA. Implantamos uma srie de
medidas durante a construo da nova sede da ANDROFERT - Centro de Ref erncia para
Reproduo Masculina, em Campinas, So Paulo, que incluiu a construo de salas limpas e
adoo de um sistema de gesto da qualidade nos moldes da ISO 9001:2000. Nossa experincia
tem mostrado que possvel desenvolver as atividades de reproduo assistida com elevados
padres de qualidade e ef icincia (Esteves e Couto 2005, Esteves et al. 2004, 2006b).
Entre as caractersticas que nortearam o projeto da ANDROFERT, destacam-se (Figura 1):
Instalao de um sistema com trs estgios de f iltrao, utilizando pr-f iltros, f iltros f inos e
file:///C:/BKP/Sandro/Documents/Sandro/CV_Bios_Papers/Papers/papers/Sala Limpa na RA - Arquivos H Ellis/ARQUIVOS H_ELLIS - Sala limpa - Este 10/15
Instalao de um sistema com trs estgios de f iltrao, utilizando pr-f iltros, f iltros f inos e
f iltros absolutos do tipo HEPA. As salas limpas (laboratrio de f ertilizao in vitro, centro
cirrgico, sala para transf erncia de pr-embries e laboratrio de andrologia) f oram construdas
com materiais apropriados, e o sistema de f iltrao mantm presso dif erencial entre as salas.
Todas so classif icadas, respectivamente, como ISO 5, ISO 6
4
, ISO 7
5
, e ISO 8
6
.
O ar nas salas limpas renovado constantemente, no somente por recirculao, mas tambm
por substituio com ar externo f iltrado.
O sistema de f iltrao do ar inclui um mdulo para adsoro de COV, composto por f iltros de
carvo ativado, permanganato e slica, pela qual passa todo o ar que circula pelas Salas Limpas.
Estabeleceram-se rotinas apropriadas de trabalho e uso de equipamentos de proteo
individual.
Implantou-se um sistema de validao semestral das salas limpas, incluindo: (1) a verif icao
da integridade do sistema de f iltros, e identif icao daqueles que necessitam ser trocados; (2)
verif icao da ef icincia do sistema de f iltrao das reas tcnicas, pela avaliao de mltiplos
parmetros, durante o processo produtivo (em operao).

Fi gura 1. Diagrama ilustrativo das Salas Limpas e do Sistema de Controle da Contaminao
Ambiental da ANDROFERT (Classe 100 = ISO 5; classe 1.000 = ISO 6; classe 10.000 = ISO 7)
Na Tabela 5 encontram-se alguns parmetros avaliados no processo de validao das Salas
Limpas da ANDROFERT. Estes resultados garantem que os ambientes estejam concordncia com
o projeto, e principalmente, que of eream as condies ideais de trabalho para o processo
produtivo a que f oram destinados. Nos Grf icos 1 e 2, demonstra-se a elevada ef icincia dos
sistemas de f iltrao de particulados e de remoo de gases volteis no laboratrio de FIV.
Neste ltimo, todo o ar do ambiente renovado a cada 2 minutos.
Tabel a 5. Caractersticas de Vazo e Parmetros Avaliados para Validao das Salas Limpas
da ANDROFERT (vide Figura 1)
Salas Classificao
Contagem
de
partculas
0,5m/m
3
*
Umidade
relativa
do ar
(%)
Temperatura
(
o
.C)
Nvel
de
rudo
(dBA)
Vazo
total
de ar
(m
3
/h)
Trocas
de
ar/h
#
Ante-cmara
Laboratrio de
FIV
ISO 5 0,00,0 42,70,5 23,40,2 -- 1.559 523,0
Laboratrio de
FIV
ISO 5 242172 60,00,2 23,710,2 64,8 3.955 158,2
Centro
Cirrgico
ISO 6 18.9022.335 58,90,1 24,20,8 64,4 840 19,5
Sala
Transf erncia
de
Prembries
ISO 7 34.4806.371 51,01,9 25,00,1 60,2 -- --
Normas da ISO (International Standards Organization) 14.644-1. Validao realizada semestralmente, e
certif icao realizada anualmente, pela CCL-Central de Controle e Validao, Campinas, SP.
*Contagens realizadas em operao (nas condies de trabalho). Valores obtidos durante v alidao realizada em
maro de 2007.
# No. de v ezes em que todo o v olume de ar da sala completamente renov ado

Grfi co 1. Eficincia do sistema de filtrao no Laboratrio de FIV, medido pelo nmero de
partculas de 0,5m e 5,0m em suspenso no ar (mdia de 8 pontos de medio) antes e
depois de acionada a unidade de ventilao.
Grfi co 2. Eficincia do sistema de eliminao de gases volteis txicos (COV) no
Laboratrio de FIV, antes e depois de acionada a unidade de filtrao do ar.
Desde que passamos a trabalhar com reproduo assistida em um contexto que envolveu a
adoo de um sistema de gesto de qualidade e a implantao do controle da contaminao
ambiental, observamos aumento da ef icincia dos processos, verif icado pela melhora na
qualidade embrionria e nas taxas de gestao, alm da diminuio nas taxas de aborto
espontneo, em comparao ao perodo anterior implantao do sistema (Grf ico 3) (Esteves
et al. 2004, 2006b).
Grfi co3. Parmetros de eficincia do Programa de Reproduo Assistida (FIV-ICSI)
ANDROFERT, num perodo de 7 anos. O sistema de controle da contaminao ambiental foi
implantado em 2002. Observa-se aumento significativo dos parmetros de eficincia a partir da
implantao do modelo.

7 - CONCLUSES
A reproduo humana assistida est entre as disciplinas abrangidas pela nova regulamentao
brasileira que normaliza o f uncionamento e a prtica nos estabelecimentos destinados s
atividades que envolvem clulas e tecidos germinativos.
Embora adotadas largamente por disciplinas af ins, as normas de boa prtica de manuf atura e
sistemas de gesto de qualidade, aqui includos aspectos relativos qualidade do ar nos
laboratrios, ainda so incipientes no campo da reproduo assistida no Brasil. Muito se tem
discutido acerca das exigncias da norma brasileira, principalmente no que se ref ere
necessidade do controle da qualidade do ar nos laboratrios que manipulam material biolgico. A
necessidade de padronizao dos processos, cujo objetivo f inal assegurar a segurana
sanitria do material biolgico e das pessoas envolvidas, uma tendncia mundial e tem carter
irreversvel. A adequao dos estabelecimentos s novas normas da ANVISA, especif icamente
tratando-se do controle da contaminao ambiental, ir acarretar melhora na qualidade dos
servios e ir minimizar os riscos envolvidos nos processos. Tal argumento baseia-se em 3
pontos principais: 1) a utilizao de medidas de controle da contaminao ambiental e de boas
prticas laboratoriais diminui o risco de contaminao direta e cruzada; 2) existem algumas
evidncias demonstrando que a qualidade do ar ambiente inf lui na qualidade dos gametas e pr-
embries humanos cultivados in vitro; e 3) tecnicamente vivel trabalhar com reproduo
assistida em ambientes com controle da contaminao ambiental e, alm disto, aqueles que
adotam estes sistemas no tem observado queda nos parmetros de ef icincia dos processos
realizados. A nossa experincia comprova que possvel executar atividades ligadas
reproduo assistida em salas limpas e utilizar os conceitos de gesto de qualidade, com
ef icincia. Entretanto, f undamental que se entenda o conceito de validao, f erramenta
essencial para a adequao dos processos nova realidade, para que no haja perda de
ef icincia ou queda nos resultados. Na reproduo assistida, o f oco principal deve ser a criao
de pr-embries que possam gerar crianas saudveis, e com segurana para a sade dos
indivduos envolvidos, sejam os pacientes e os prof issionais de sade. Medidas propostas por
agncias reguladoras, que visam melhorar a qualidade dos processos e diminuir o risco de
contaminao, e que sejam exeqveis, so bem-vindas, e alm disto, abrem caminho para a
participao mais ef etiva de todos os segmentos envolvidos num processo de discusso,
podendo inclusive resultar no aprimoramento das normas, uma vez que est previsto que as
mesmas devem ser revisadas a cada dois anos.

NOTAS
1
ISO 5: At 3.520 partculas de 0,5m e 29 partculas de 5m por metro cbico (padro internacional ISO
14.644-1). Equiv alente Classe 100 (Federal Standard 209e).
2
HEPA: do ingls High Ef f iciency Particulate Air. So f iltros que possuem ef icincia mnima de 99,97% para
reter partculas de 0,3m. Os f iltros so manuf aturados com f ibras de papel tranado com diminutos poros, que
retm as partculas de f orma mecnica, podendo tambm reter partculas menores do que 0,3m, uma v ez que
estas possuem mov imento do tipo browniano e no conseguem passar pelos poros dos f iltros.
3
ULPA: do ingls Ultra Low Penetration Air. So f iltros que retm partculas menores do que 0,3m
4
ISO 6: At 35.200 partculas de 0,5m e 293 partculas de 5m por metro cbico (padro internacional ISO
14.644-1).
Equiv alente Classe 1.000 (Federal Standard 209e).
5
ISO 7: At 352.000 partculas de 0,5m e 2.930 partculas de 5m por metro cbico (padro internacional ISO
14.644-1).
6
ISO 8: At 3.520.000 partculas de 0,5m e 29.300 partculas de 5m por metro cbico (padro internacional
ISO 14.644-1).
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Para quem se interessar em conhecer a lei completa, abaixo so apresentados os sites da ANVISA e da ABNT
ABNT- Associao Brasileira de Normas Tcnicas. Salas limpas e ambientes controlados associados.
NBRISO14644-1: Classif icao da limpeza do ar. http://www.abntnet.com.br/f idetail.aspx?FonteID=24169,
30/03/2005.
ANVISA - Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Regulamento tcnico para o f uncionamento dos bancos de
clulas e tecidos germinativ os. Resoluo RDC n 33, 17/02/2006. http://e-
legis.anv isa.gov .br/leisref /public/showAct.php?id=20954&word
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