UNIVERSIDADE DA REGIO DE JOINVILLE UNIVILLE

TCNICA DE ENUMERAO MICROBIANA DO SOLO

ANE CAROLINE BUSE

FERNANDA CAROLINE WENDORF
NICOLE FERNANDA SOUZA
THUANE CAROLINE FERREIRA

Prof. ANDRA SCHNEIDER

Microbiologia Ambiental e sanitria

Joinville SC
2014

Objetivos

Contar o nmero de clulas viveis em 1g de solo.

Metodologia
Os meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial das bactrias. E, para efetuar a
contagem total das bactrias numa determinada suspenso da amostra faz-se diluies
decimais seriadas da amostra e inocula-se, usualmente, esses meios so substratos
adequados ao crescimento, multiplicao e desenvolvimento de microorganismos fora
de seu hbito natural. Na tcnica Spread-Plate o meio de cultura j se encontra na
placa e os microrganismos so colocados por cima do meio e so espalhados com o
auxlio da Ala de Drigalsky. Aps o perodo de incubao em condies de
temperatura e atmosfera adequadas faz-se a contagem do nmero de colnias.

1. Materias utilizados:
Ala de vidro/ Ala de Drigalsky;
Tubos de ensaio cm 9ml de gua peptonada;
Placas de petri com meio Agar nutriente meio de cultura;
Bico de bunsen;
Becker com lcool;
Pipeta eletrnica;
Estantes de tubo de ensaio;
Vortex;
2. Procedimentos:
1- Pegar 1 grama de solo do campus da Univille e usar a balana para ser mais preciso;
2 -Diluir o slo em gua peptonada;
3- Adicionar em 99 ml de soluo salina e agitamos no misturador de amostras;
4- Nomear na base e preparar as placas;
5- Pegar a pipeta e aquecer na chama para esterilizar;
6 - Aspirar da soluo 0,1 ml ;
7- Com o auxilio da pipeta eletrnica foi adicionado 1 ml da soluo concentrada ao tubo de
ensaio onde a diluio foi de 10-3.
8 -Com outra pipeta foi adicionado 1ml da outra soluo primeiramente diluda (da
concetrao de 10-3) ( no tubo de diluio 10-4).
9 -Com essa mesma pipeta retirou-se 0,1 ml da soluo diluda de e 10-3 colocou-se na placa
de petri interiormente esterilizado e repetir o processo na 10-5 10-6, 10-7.
10- Pegar a ala hause de grincaster que est no lcool para fazer o espalhamento,dever
passar na chama e ela ficar incandescente;
11- Passar na tampa para esfriar;
12- Passar rapidamente nas placas e no manter muito tempo se no poder quebrar;
13- Para plaquear as diluies usar a tcnica de espalhamento, usando Agar nutriente como
meio de cultura;
14- Incubar as placas e deixar em temperatura ambiente por cerca de 48 horas;
15- Depois das 48 horas pegar as placas para a contagem das colnias;

16- A leitura das placas dever ser feita, com ateno contando o numero de colnias e estas
devero estar perfeitamente isoladas.
Nas placas podemos observar as caractersticas das colnias:
- tamanho (mm);
- morfologia (forma, bordo ou margem e elevao);
- pigmentao (cor, solubilidade, fluorescncia, rugosidade);
- aspecto (brilho, transparncia, opacidade, rugosidade);
- consistncia (butirosa ou amanteigado, viscosa, membranosa, seca, quebradia).
3. Conte e registre o nmero de colnias em cada placa.
Uma das placas, 10-3 teve o nmero excessivo de colnias, sendo impossvel a
contagem. Em outra placa teve crescimento de doze colnias, em outra oito colnias, e
na ltima no obteve nenhuma colnia.
4. Calcule o nmero de clulas por grama de solo.
a) Agar Nutriente:
Placa 10-2
12 x 100 = 12000= 1,2x10-4 UFC/ml
0,1
5. Descreva os tipos de colnias predominantes que aparecem em cada um dos
meios.
Aps o processo, observamos as placas contendo o meio e encontramos algumas reas
circulares, esbranquiadas e elevadas, com algumas placas totalmente tomadas pelas
colnias e outras nem tanto. Na placa vivel para a contagem, analisamos a presena
de oito colnias, apresentando textura rugosa e colorao esbranquiada.
6. Que tipo de micro-organismo pode no estar crescendo em decorrncia dos
procedimentos de cultura empregados?
Em caso de no-contaminao, no crescero microorganismos antes eliminados pelo
processo de esterilizao. Tambm, no crescero microorganismos que no se
alimentem de tal substrato.

7. Referncias
HTTP://www.ebah.com.br/content/ABAAAAHq4AB/relatorio-tecnicascontagem-pour-plate-spread-plate