Medios de Cultivo

TCNICO ALISTAMIENTO DE LABORATORIOS PARA ANLISIS Y ENSAYOS (684180)
MEDIOS DE CULTIVO
SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE (SENA)
CEDRUM

ALISTAMIENTO DE LABORATORIO ANALISIS Y ENSAYOS

MEDIOS DE CULTIVO

PRESENTADO POR:
YESICA LIZCANO ARIAS

PRESENTADO A:
HERLY LORENA RAMIREZ

CODIGO
684180
AGOSTO 2014
PAMPLONA NORTE DE SANTANDER

MEDIOS DE CULTIVO
CEDRUM

INTRODUCCION
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones
adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de
losmicroorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de
Microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin,
conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad yreproducibilidad de los
resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes
tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en
forma slida. Usualmente parapreparar un medio slido se parte de un medio
lquido al que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la
slicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a lanaturaleza
de sus constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos por
sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente
complementadas por la adicin de minerales yotras sustancias. En ellos no se
conocen todos los componentes ni las cantidades exactas presentes de cada
uno de ellos.
El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el
crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa depender de la
especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varan
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien
en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que
necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para
crecer.

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1.QUE ES UN MEDIO DE CULTIVO:

Los medios de cultivo en microbiologa
Uno de los sistemas ms importantes para la
identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el
que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es
el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares
en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base
de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a
la que se aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la
preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el
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crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que
bastantes bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc.
Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la
sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los
microorganismos menos resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en
pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como
inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-
positivas).
2.PARA QUE SIRVE UN MEDIO DE CULTIVO:

En biologa, y especficamente en microbiologa, un cultivo es un mtodo para
la multiplicacin de microorganismos, tales como bacterias, hongos yparsitos,
en el que se prepara un medio ptimo para favorecer el proceso deseado. Un
cultivo es empleado como un mtodo fundamental para el estudio de
las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades
en medicina humana y veterinaria.
1
3. CUALES SON LOS COMPONENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:
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2. Componentes De Los Medios De Cultivo
Los componentes de un medio de cultivo dependen del microorganismo que se
pretende cultivar y de la finalidad del cultivo. A continuacin se describe que es
general la necesidad de utilizar :agua, sustancias orgnicas y
sustanciasinorgnicas. Los medios de cultivo slidos llevan adems un agente
solidificante
2.1. Agua.
Suele utilizarse destilada. En ocasiones especficas puede utilizarse agua
corriente, pero debe evitarse porque ciertos cationes (como Ca
2+
o Mg
2+
)
pueden formar sales insolubles con otros componentes del medio (como los
fosfatos) sobre todo, durante la esterilizacin.
2.2. Sustancias orgnicas.
Se pueden utilizar sustancias puras o mezclas de sustancias orgnicas Como
sustancias puras ms comunes se encuentran los azcares: Frecuentemente
son utilizados como fuente de carbono y energa por los microorganismos.
Entre ellos, es comn el empleo de monosacridos como la glucosa,
disacridos como la lactosa y polisacridos como el almidn. Ciertas bacterias
no pueden utilizar los carbohidratos como nutrientes y se emplean otras
sustancias puras (aminocidos, cidos grasos) o mezclas de sustancias
orgnicas.

Cuando los requerimientos nutricionales de los microorganismos son complejos
o se pretende un crecimiento rpido se utilizan mezclas de sustancias
orgnicas. Las mezclas de sustancias orgnicas ms comunes en la
preparacin de los medios de cultivo son las peptonas, el extracto de carne y el
extracto de levadura
PEPTONAS: mezclas de aminocidos y pptidos. Resultan de la hidrlisis de
protenas o materiales proteicos (carne, vegetales, casena, o gelatina).
EXTRACTO DE CARNE: concentrado de componentes hidrosolubles de la
carne.
EXTRACTO DE LEVADURA: Se obtiene por hidrlisis cida o enzimtica de
levaduras
Las peptonas y los extractos de carne y de levadura se utilizan
preferentemente como fuente de nitrgeno, fsforo y azufre orgnicos.
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Algunos de sus componentes se pueden utilizar como factores orgnicos de
crecimiento o como fuente de carbono y energa.
2.3. Sustancias inorgnicas(sales minerales)
Sus funciones en un medio de cultivo pueden ser poco especficas,(como el
NaCl para ajustar la osmolaridad del medio) o pueden ser
requeridas especficamente en el metabolismo (como las sales de K
+
, Mg
2+
,
Ca
2+
, Fe
3+
, etc.).

Quiz los requerimientos minerales mas obvios son los de fsforo (necesario
para la sntesis de cidos nucleicos y fosfolpidos), de azufre (aminocidos
cisteina y metionina) o nitrgeno (el segundo elemento tras el carbono entre
los que forman la clula). Aunque se pueden utilizar fuentes orgnicas, es
comn usar como fuente de fsforo un fosfato, la de azufre como un sulfato y la
de nitrgeno como nitrato o una sal de amonio.
Micronutrientes
Ciertos micronutrientes (los nutrientes necesarios en pequeas cantidades)
son esenciales para el funcionamiento de varias enzimas, y deben estar
incluidos en el medio de cultivo. Su requerimiento en muy baja cantidad
determina que frecuentemente no sea necesario aadirlos expresamente: es
suficiente su presencia como contaminantes de otros componentes. No
obstante si se utilizan componentes y agua de pureza muy altas los medios de
cultivo pueden ser deficientes en micronutrientes
2.4.Agentes solidificantes; Agar-agar
Se aaden para preparar medios de cultivo slidos y semislidos. El agar-agar
es el agente solidificante mas comn. Elagar-agar es un polisacarido de
galactosa y galactomanano que se obtiene de las algas rojas (Echema,
Gelidium, Gracilaria). Contiene un 70% de agarosa y un 30% de agaropectina.
El agar-agar es el agente solidificante ms utilizado. Su composicin qumica
es indefinida y solidifica con mayor dificultad a medida que desciende el pH. Es
insoluble en agua fra, pero se funde y solubiliza en agua hirviendo y solidifica a
45 oC. Forma geles transparentes muy estables y es degradado por muy pocas
bacterias.
Gel de slice
Para el cultivo de bacterias auttrofas estrictas y para la elaboracin
de medios de cultivo definidos se utiliza gel de slice o silicogel, silicato de
sodio o potasio (usado al 10%). Se utiliza poco. Sus inconvenientes mas
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importantes son la dificultad para su incorporacin a los medios de cultivo, que
solidifica a pH cido y su coste.
4. QUE CLASE DE MICROORGANISMOS SE INCUBAN:
. Recuento de microorganismos viables totales. (Muestras lquidas u
homogeneizadas).
- Se trata de conocer el nmero total de microorganismos presentes en el
alimento. Este nmero no guarda relacin con el de microorganismos
patgenos por lo que no puede usarse como ndice de su presencia y slo
debe considerarse un indicador de las caractersticas higinicas generales del
alimento.
- Dependiendo de las caractersticas del medio utilizado (medio rico, medio
limitado en nutrientes para medida de la flora no lctica de alimentos
fermentados) y de las condiciones de incubacin (mesfilos, psicrfilos) los
microorganismos analizados sern miembros de poblaciones diferentes. En
general se investiga la presencia de microorganismos aerobios o
aerotolerantes (anaerobios facultativos); aunque, en ciertas situaciones
(alimentos envasados al vaco), puede ser de inters hacer recuentos de
anaerobios totales.
- Se han desarrollado tcnicas que hacen posible la automatizacin del
proceso.
- Hay cuatro tcnicas biolgicas bsicas tcnicas de recuento de viables:.
1.- Contaje en Placa Standard (Standard Plate Count).
2.- Determinacin del nmero ms probable.
3.- Mtodos basados en la reduccin de colorantes por viables.
4.- Contaje microscpico directo.
5.CUANTAS CLASES DE AGARES HAY:
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MEDIOS DE CULTIVO COMUNES.
Son los ms corrientemente utilizados, y aunque no vamos a enumerarlos
todos, s son los ms conocidos en un laboratorio de Microbiologa.
Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de grmenes que
no presentan exigencias particulares. No es diferencial.
Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la
investigacin de los diversos tipos de hemlisis(, gamma ). Se utiliza para
el crecimiento de estreptococos. Para la preparacin del agar sangre se puede
utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sdico o un preparado
enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La
adicin de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que
estn en el interior de los hemates, pero s puede aadir factores inhibidores
del crecimiento bacteriano presentes en el suero. Este es un inconveniente que
puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que
se destruyan las sustancias inhibidoras, que son termolbiles.La sangre
utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al
5%, pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies
(caballo, conejo, humana), pues facilitan las reacciones hemolticas o contienen
determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras
del crecimiento de determinados grmenes. Agar chocolate: El agar chocolate
se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. Por esta
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razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un
importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El
agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de
Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus, pero en l pueden
crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede
convertirse quizs en uno de los medios ms enriquecidos si aadimos una
mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas,
denominadas de forma diferente segn las casas comerciales (Polivitex,
Isovitalex, etc.) contienen ms de una docena de compuestos que confieren a
este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por adicin de uno o
varios antibiticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el
crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo clsico es el
Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa
que un agar chocolate enriquecido al cual se ha aadido unamezcla de tres
antibiticos especficos que impedirn el crecimiento del resto de la flora
acompaante. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e
identificacin de enterobacterias. Es un medio inhibidor de los grmenes Gram
positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por
su contenido en sales biliares. En su composicin lleva un azcar (lactosa) y un
indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferencial. Los
grmenes que fermenten la lactosa producen una acidificacin del medio que
hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. Las colonias
lactosa negativas sern incoloras, apareciendo del mismo color que el medio
subyacente (naranja).
Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito Deficiente) est
recomendado para el recuento e identificacin presuntiva de los
microorganismos de las vas urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita la
invasin de los cultivos por Proteus.La presencia de lactosa en su composicin
le confiere el carcter de medio diferencial, aunque la interpretacin sea
diferente al anterior medio por la incorporacin de otro indicador: el azul de
bromotimol. Las colonias lactosa positivas aparecern de color amarillo y las
lactosa negativas lo harn con un color verdoso, blanco o azulado.
Agar S.S.:El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de
Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. El medio contiene sales
biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y grmenes
Gram positivos. La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten
diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo
hacen (incoloras).Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la
lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias
que no cumplan este requisito. El agar SS es doblemente diferencial, porque
adems de indicarnos el comportamiento de los grmenes con relacin a la
lactosa, nos muestra los grmenes que son capaces de producir cido
sulfhdrico, que se manifiesta como un precipitado de color negro en el centro
de la colonia. As, una colonia incolora y con un punto negro central es
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sospechosa de Salmonella, y ser exclusivamente a estas colonias a quienes
se hagan las pruebas bioqumicas confirmatorias de esta especie. El agar SS
es un medio muy inhibidor que a veces impide incluso el crecimiento de ciertas
especies de Salmonella y sobre todo de Shigella. Por esta razn debe utilizarse
siempre junto con otro medio menos inhibidor como el Hektoen.
Agar Hektoen :Es un medio ms diferencial y menos selectivo que el agar SS.
Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. La presencia de
tres azcares (lactosa, sacarosa y salicilina ) permiten ampliar el poder
diferencial de este medio. Este medio es capaz de detectar los grmenes
formadores de SH2, igual que el SS. Las cualidades del agar Hektoen se
deben a su riqueza en peptonas y azcares, que neutralizan el efecto inhibidor
de las sales biliares respecto a ciertos grmenes de cultivo delicado (Shigella
en particular).El crecimiento de Salmonella es excelente, igual que el de
Shigella, obtenindose colonias ms numerosas y voluminosas que en los
medios selectivos usuales. La inhibicin tiene lugar, esencialmente, sobre E.
coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. Hay que sealar que el
vibrin colrico crece bien en este medio.
C.P.S. ID3. :Medio cromognico desarrollado por Biomerieux, que permite la
identificacin de E. coli, P. mirabilisy E. faecalis, con la simple visualizacin del
cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos, azulo marrn). La
identificacin solo requiere la adicin de un reactivo para confirmar o descartar
la especie sospechada. Otros microorganismos diferentes requieren los
sistemas de identificacin habituales (API, p. ej) Granada, Islam o New GBS:
Medios utilizados para deteccin de Streptococcus agalactiae, mediante la
utilizacin de un sustrato cromognico especfico de este microorganismo.
Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realizacin
de los antibiogramas o pruebas de sensibilidada los antimicrobianos. A l nos
referiremos ms ampliamente en el captulo correspondiente
Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de
grmenes exigentes, como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un medio
muy enriquecido, pero no es diferencial. Caldo tioglicolato con resazurina: Es
un medio recomendado para controles de esterilidad. Permite el cultivo de
aerobios, anaerobiosy microaerfilos. Tiene un bajo potencial redox que, al
aumentar, se manifiesta por un color rosa del medio.
Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Su
elevado contenido en cloruro sdico permite la inhibicin de la mayora de los
otros grmenes. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio
en diferencial: as se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus
aureus, ya que estegrmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol
(colonias amarillas).
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Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa
positivos, a la vez que los diferencia del resto.
Medio de Loeffler: Es un medio especfico para el cultivo de Corynebacterium
difteriae.
Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS):Similar al agar SS. Es
un medio diferencial e inhibidor a la vez.
Agar Kligler: Medio especfico para pruebas de identificacin de
enterobacterias. Aunque de l hablaremos conms detenimiento en el captulo
de pruebas de identificacin bacteriana, podemos ir adelantando que se tratade
un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del
microorganismo ante dos azcares (glucosa y lactosa), investigar la formacin
de gas y comprobar si el microorganismo puede producir sulfatoferroso a partir
del tiosulfato sdico.
Agar Levine EMB (Eosina azul de metileno):Se utiliza para aislamiento de
enterobacterias, pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy
bien a E. coli, cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo
metlico caracterstico. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para
enriquecimiento de Salmonellas.
Agar Cetrimida. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas,
inhibiendo Gram positivos y la mayora de enterobacterias.El segundo pone
adems de manifiesto la pigmentacin fluorescente de Pseudomonas bajo luz
UV.
Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el
cultivo de anaerobios.
Agar Gardnerella:Agar con sangre humana ms una mezcla de antibiticos
que permiten la observacin de colonias betahemolticas caractersticas de
Gardnerella vaginalis
Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales
creciendo a 42 C en microaerofilia.
Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract):Se utiliza para el aislamiento de
bacterias del gnero Legionella
Lwenstein-Jensen:Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium
tuberculosis. Contiene verde malaquita parainhibir parcialmente el crecimiento
de otras bacterias. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento.

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