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ANTECEDENTES
3.1 Importancia toxicolgica de los metales
Los metales son un grupo de elementos que presentan propiedades fsicas y qumicas muy
particulares. Estas caractersticas han sido aprovechadas en la fabricacin de numerosos
utensilios de uso cotidiano por el hombre y tambin los hace esenciales en la dieta de todos
los seres vivos. Por esta razn, algunos metales son de gran importancia para los sistemas
biolgicos ya que pueden ser componentes enzimticos o estructurales. Entre ellos
tenemos a los llamados oligoelementos o micronutrientes, que son requeridos en pequeas
cantidades por plantas y animales y son necesarios para que los organismos completen su
ciclo vital, aunque a concentraciones elevadas se vuelven txicos (Cu, Co, Mn, Zn, Ca).
Tambin pueden llegar a encontrarse metales pesados sin funcin biolgica conocida pero
a determinadas concentraciones en los seres vivos pueden provocar disfunciones en su
organismo, ya que son altamente txicos debido a que poseen la propiedad de acumularse
en los tejidos (Pb, Cd, As, Al, Hg, Cr) [Palacios-Hernndez, 2005].
Generalmente los metales actan en el organismo distribuyndose en el cuerpo por medio
del torrente sanguneo y dependiendo de su habilidad para pasar a travs de las membranas
celulares, compiten con otras molculas por sitios de unin a los que son afines. Los
metales frecuentemente se concentran en un tejido u rgano especfico y al ser
metabolizados por lo regular se unen a enzimas, cambiando as la conformacin molecular
de stas. Tambin pueden unirse a otros sustratos y alterar la biodisponibilidad de
componentes celulares importantes [Donkin et al, 2000].
Algunos metales de inters desde el punto de vista biolgico que pueden formar parte de
sistemas vivos y en algunos casos son importantes como contaminantes ambientales, se
presentan a continuacin:
3.1.1 Cobalto (Co)
El cobalto es un elemento que se encuentra de manera natural en el ambiente, que tiene
propiedades similares a las del hierro y el nquel. El principal uso del cobalto metlico es en
aleaciones para turbinas de aviones. Los compuestos de cobalto son usados como
pigmentos en vidrio, cermica y pinturas, como catalizadores en la industria del petrleo,
como secadores de pintura, y como elementos traza usados como aditivos en la agricultura
y la medicina. El cobalto puede ser liberado al ambiente por actividades humanas, as como
por la erosin de rocas y suelo. Las fuentes antropognicas primarias de cobalto en el
ambiente se generan a partir de la quema de combustibles fsiles, del uso de lodos que
contengan cobalto o fertilizantes de cobalto, y de las industrias que usen o procesen
compuestos del mismo. El cobalto liberado a la atmsfera termina sobre el suelo o en el
agua por deposicin hmeda o seca [ATSDR, 2003].
La exposicin de la poblacin al cobalto ocurre a travs de la inhalacin o la ingestin de
alimentos y agua contaminados. Se ha estimado que su ingesta en alimentos se encuentra
en el rango de entre 5 a 40 g/da. La exposicin ocupacional al cobalto se presenta en
trabajadores de la industria metalrgica y en industrias tales como las minas de carbn,
minas de metales, fundidoras y refineras, en la fabricacin de tintes y en la industria
qumica. Las concentraciones de cobalto en el ambiente de la industria metalrgica,
soldadoras y trituradoras de metales oscila en un rango desde 1 a 300 g/m
3
, rango que
puede ser comparado con los niveles atmosfricos normales de 0.42.0 ng/m
3
. Este metal es
esencial en el organismo al formar parte de la vitamina B
12
(cianocobalamina) ; la dosis
recomendada en la dieta es de 2.4 g/da, la cual debe contener 0.1 g de cobalto.
Concentraciones traza de cobalto han sido determinadas en muchos tejidos del cuerpo,
siendo ms altas en el hgado [Baran, 1995].
Durante la exposicin por inhalacin a partculas que contienen cobalto, el primer blanco
expuesto es el tracto respiratorio. La exposicin ocupacional de seres humanos a cobalto
metlico o aleaciones del mismo, ha reportado efectos respiratorios primarios, que
incluyen disminucin en la funcin pulmonar, asma, jadeo y disnea a niveles de exposicin
en un rango de 0.015 a 0.130 mg de Co/m
3
. Se cree que muchos de los efectos en tracto
respiratorio pueden darse como resultado de la generacin de oxidantes y radicales libres
por el in cobalto. Sin embargo, diversos estudios han mostrado que algunos de los efectos
respiratorios, tales como el asma inducida por cobalto, son resultado de la
inmunosensibilizacin al mismo [Donkin et al, 2000]. El efecto ms notorio durante la
exposicin oral a cobalto en humanos parece ser un incremento en el nmero de eritrocitos
(policitemia). Durante la exposicin drmica, el efecto ms comnmente observado es la
dermatitis, que ha sido demostrada en un gran nmero de estudios en humanos, y
probablemente es causada por una reaccin alrgica al cobalto, que funciona como
hapteno. Los estudios disponibles de los efectos carcinognicos en sujetos expuestos por
trabajo han reportado resultados positivos y negativos. La IARC ha clasificado al cobalto y
a los compuestos de cobalto como posibles carcingenos para humanos (Grupo 2B)
[ATSDR, 2003].
Durante la exposicin por inhalacin, la absorcin de compuestos de cobalto depositados
en los pulmones parece estar relacionada con su solubilidad. Las partculas insolubles de
cobalto generalmente son eliminadas por fagocitosis y/o transporte mucociliar, y as,
presentan una baja absorcin sistmica, ya que pueden ser disueltas dentro de los
macrfagos alveolares [Kreyling et al, 1990]. Un mecanismo propuesto por el cual un
metal pesado puede ejercer sus efectos, establece que el carburo de tungsteno, que es un
buen conductor de electrones, facilita la oxidacin del cobalto metlico a cobalto inico
(probablemente Co(II), transfiriendo electrones del tomo de cobalto al oxgeno molecular
adyacente a la molcula de carburo de tungsteno) [Lasfargues et al, 1995; Lison et al,
1996]. El resultado es un incremento en la solubilidad del cobalto y la generacin de
especies reactivas de oxgeno (ROS). Tambin ha sido demostrado que las partculas de
aleacin pueden incrementar las concentraciones de la enzima xido ntrico sintasa
inducible (iNOS), en respuesta al estrs oxidativo [Rengasamy et al, 1999]. Ha sido
demostrado que el cobalto genera ROS, incluyendo al radical anin superxido in vitro e in
vivo [Kawanishi, Inoue y Yamamoto 1994], probablemente por medio de reacciones
similares a la de Fenton [Lloyd, Phillips y Carmichael, 1997].
Tambin ha sido demostrado que el cobalto soluble altera la entrada de calcio a las clulas,
funcionando como bloqueador de los canales de calcio inorgnico [Yamatani et al, 1998].
De esta forma, el cobalto puede afectar la transmisin neuromuscular debido a que se
comporta como un antagonista del calcio [Weakly, 1973]. Adems, los iones cobalto
pueden incrementar las probabilidades de dao a DNA cuando son coexpuestos con
oxidantes in vitro, tales como la radiacin UV o H
2
O
2
[De Boeck et al, 1998]. Se piensa
que el cobalto acta al inhibir la reparacin del DNA, particularmente en las etapas de
incisin y polimerizacin [Asmu, Mullenders y Hartwig, 2000], logrando esto a travs de
la interaccin con las protenas reparadoras de DNA y sus dedos de zinc [Sarkar, 1995].
Otro mecanismo potencial importante por el cual puede ejercer sus efectos es a travs de su
accin sobre el grupo hemo o enzimas que contengan dicho grupo. Se piensa que inhibe la
sntesis de hemo in vivo actuando en al menos dos sitios diferentes en la ruta biosinttica:
en la sntesis de -aminolevulinato y la conversin de -aminolevulinato en hemo [De
Matteis y Gibbs, 1977]. Esta actividad inhibitoria podra resultar en la formacin de la
protoporfirina de cobalto en lugar del hemo [Sinclair et al, 1979]. El tratamiento con
cobalto tambin estimula la oxidacin del hemo en muchos rganos, debido a la induccin
de la hemooxigenasa [Sunderman 1987].
3.1.2 Zinc (Zn)
El zinc (Zn) se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza y constituye
aproximadamente un 0,02 % de la corteza terrestre. Adopta la forma de sulfuro (esfalerita),
carbonato, xido o silicato (calamina) de zinc, combinado con muchos minerales. La
esfalerita, el principal mineral de zinc y fuente de al menos el 90 % del zinc metlico,
contiene hierro y cadmio como impurezas. Casi siempre aparece acompaado de galena, el
sulfuro de plomo, y ocasionalmente se encuentra asociado con minerales que contienen
cobre u otros sulfuros metlicos bsicos. Tambin tiene aplicacin en la fabricacin de
cosmticos, cementos de fraguado rpido, en la industria farmacutica y como pesticida
[ATSDR, 2005b].
Como componente biolgico, el zinc es un nutriente esencial en humanos y animales, ya
que es necesario para el funcionamiento de un gran nmero de metaloenzimas, tales como
la alcohol deshidrogenasa, fosfatasa alcalina, anhidrasa carbnica, leucina aminopeptidasa,
superxido dismutasa y la DNA y RNA polimerasa. El zinc es requerido para el
metabolismo normal de cidos nucleicos y protenas, as como el crecimiento y divisin
celular. Tambin juega un papel esencial en el mantenimiento de la estructura de cidos
nucleicos de los genes (mecanismo de accin de los dedos de zinc). La deficiencia de zinc
ha sido asociada con dermatitis, anorexia, retraso en el crecimiento, cicatrizacin de heridas
deficiente, hipogonadismo con disminucin en la capacidad reproductiva, disminucin en la
funcin del sistema inmunolgico y deficiencias en las funciones mentales. La dosis diaria
recomendada para zinc es de 11 mg/da en hombres y de 8 mg/da en mujeres [IOM, 2002].
Son recomendadas dosis diarias ms altas para las mujeres durante el embarazo y la
lactancia (12 mg/da para mujeres embarazadas y lactantes) [IOM, 2002; WHO, 1996].
Los mecanismos homeostticos naturales del organismo controlan la absorcin de zinc en
el tracto gastrointestinal [Davies, 1980]. Las personas con niveles nutricionales adecuados
de zinc absorben aproximadamente 2030% de todo el zinc ingerido. La absorcin de zinc
ocurre en todos los segmentos del intestino, aunque la proporcin ms grande se lleva a
cabo en el duodeno. El mecanismo de absorcin incluye la difusin pasiva y procesos
mediados por transportadores que funcionan a bajas dosis, involucrando a una protena
intestinal rica en cistena (CRIP) [Hempe y Cousins, 1992] que se une al zinc que entra a
las clulas intestinales del lumen. Al igual que muchos otros metales, puede inducir la
produccin de metalotionenas en las clulas de la mucosa intestinal, mismas que pueden
tener la funcin de evitar la absorcin en exceso de zinc por el organismo [Foulkes y
McMullen, 1987]. La absorcin por va drmica de zinc ocurre, pero su mecanismo no ha
sido claramente definido. La absorcin ha sido observada en pacientes quemados tratados
con gasas preparadas con xido de zinc. El pH de la piel, la cantidad de zinc aplicada, y el
vehculo administrado con el zinc afecta la absorcin de zinc por va drmica [Agren,
1991].
El zinc es uno de los elementos traza ms abundantes en humanos. Es encontrado de
manera natural en todos los tejidos y fluidos y es cofactor en alrededor de 300 sistemas
enzimticos. Aunado a esto, el msculo y el hueso contienen aproximadamente 90% de la
cantidad total de zinc en el organismo (aproximadamente 60% y 30%, respectivamente).
Los rganos que contienen mayor concentracin de zinc son el hgado, tracto
gastrointestinal, rin, piel, pulmones, cerebro, corazn y pncreas [Bentley y Grubb,
1991]. Tambin han sido detectadas altas concentraciones de zinc en la prstata, retina, y
semen. Las concentraciones en los riones y corazn muestran un pico elevado entre los 40
a 50 aos de edad y despus disminuyen [Forssen 1972].
El zinc est presente en el plasma sanguneo, eritrocitos, leucocitos y plaquetas, aunque
est localizado principalmente en eritrocitos (en los cuales el 87% est en la anhidrasa
carbnica, el principal sitio de unin). Ha sido demostrado que la deficiencia de zinc
disminuye la habilidad de los eritrocitos para resistir la hemlisis in vitro. En el plasma, la
albmina es el principal acarreador de zinc, junto con pocas cantidades de zinc unido a 2-
macroglobulina y aminocidos. La albmina unida a zinc representa la principal fuente
metablicamente activa de zinc. Adems, es concentrado inicialmente en el hgado despus
de la ingesta y, posteriormente, es distribuido a travs del organismo, siendo el hgado,
pncreas, hueso, rin y msculo, los principales sitios de almacenamiento [Giroux et al,
1976].
En cuanto a los mecanismos de toxicidad de zinc, la fiebre del metal por humo es el
principal efecto observado en trabajadores expuestos a humo o polvo de xido de zinc
[Blanc et al, 1991], que aparece usualmente de 3-10 horas despus de la exposicin y los
sntomas persisten durante 24-48 horas. Se desconoce la patognesis exacta de la fiebre del
metal por humo. Se piensa que es una respuesta del sistema inmune al xido de zinc
inhalado [Mueller y Seger 1985]. Ha sido sugerido que el xido de zinc causa la
inflamacin del tracto respiratorio y la liberacin de histamina o sus derivados. La
exposicin oral a cantidades elevadas de zinc ha causado anemia, disminucin en las
concentraciones de lipoprotenas de alta densidad (HDL) y colesterol, y dao pancretico
en humanos y animales [Allen et al, 1983].
3.1.3 Cadmio (Cd)
El cadmio no se encuentra en el ambiente como un metal puro, sino como un mineral en
forma de xido de cadmio, cloruro de cadmio, sulfato de cadmio o en asociacin con zinc.
Estos slidos pueden disolverse en agua y se pueden encontrar pequeas partculas de Cd
en el aire. Los alimentos y el humo de cigarrillos pueden ser fuentes significativas de
exposicin a Cd para el pblico en general. La exposicin por inhalacin de altos niveles de
xido de cadmio por fumar o por polvo puede causar irritacin severa al tejido respiratorio.
Los sntomas son semejantes a los de la traqueobronquitis, neumonitis y edema pulmonar,
pudiendo aparecer despus de muchas horas de exposicin; sin embargo, estos sntomas no
aparecen despus de la inhalacin de pequeas cantidades. El rin es el principal rgano
afectado por la exposicin txica a Cd por medio de inhalacin, la afeccin se caracteriza
por la presencia de protenas de bajo peso molecular en la orina (proteinuria), irritacin del
epitelio gastrointestinal, nusea, vmito y diarrea. Cuando el Cd es ingerido en agua o
alimentos, entra a la sangre despus de su absorcin por el estmago o intestino en forma
de in, siendo retenido por un gran nmero de rganos y eliminado lentamente (10-30
aos) [Donkin et al, 2000]. Ha sido demostrado que el cadmio altera la composicin de
lpidos e incrementa su peroxidacin [Gill et al, 1989] y que altera el metabolismo del
cobre, zinc y hierro as como de selenio [Jamall y Smith, 1985].
Xu et al [1995] propusieron que en una etapa inicial en la toxicidad inducida por cadmio en
testculos, ocurre la interferencia del in cadmio con complejos proteicos de zinc que
controlan la transcripcin del DNA y como consecuencia las clulas son conducidas a la
apoptosis. El atrapamiento del in cadmio por las metalotionenas (MT) (o un quelante)
evita que el cadmio destruya a las protenas transcripcionales dependientes de zinc. Muchos
trabajos han indicado que las metalotionenas complejadas con cadmio reducen su
toxicidad y la capacidad del hgado para sintetizar metalotionenas parece ser adecuada para
unirse a todo el cadmio acumulado [Goyer et al, 1989]. Se ha sugerido que el dao renal
ocurre por una concentracin excesiva de cadmio, provocando que no se una
eficientemente a las metalotionenas para su eliminacin [Sendelbach y Klaassen 1988].
Dorian, Gattone y Klaasen [1992a] evaluaron la distribucin intrarrenal de metalotionenas
de cadmio radiomarcadas (
109
CdMT) e inyectadas por va intravenosa en machos de ratones
Swiss a una dosis no txica para la nefrona (0.1 mg Cd/kg) y concluyeron que la
nefrotoxicidad inducida por cadmio podra estar dada, en parte, por la toma preferencial de
CdMT en los segmentos S1 y S2 de los tbulos proximales, que es el sitio en el que se ha
reportado la nefrotoxicidad inducida por CdMT. En otro estudio, Dorian, Gattone y
Klaasen [1992b] reportaron que esta toma preferencial de Cd por el rin tambin fue
observada despus de la administracin de diferentes dosis de [
35
S]CdMT a ratas. Los
estudios de autorradiografa por microscopa luminosa indicaron que el cadmio de CdMT
se distribuye de manera preferente en los segmentos enroscados (S1 y S2) de los tbulos
proximales, mientras que el cadmio presente en el CdCl
2
se distribuy de la misma forma
en diferentes segmentos (enroscados y rectos) de los tbulos proximales. Sin embargo, la
concentracin de cadmio en el sitio de nefrotoxicidad en los tbulos proximales
enroscados, fue mayor despus de la administracin de CdCl
2
que despus de la
administracin de CdMT. Se encontr una concentracin mayor de cadmio en las zonas
apicales y basales de las clulas proximales despus de la administracin de CdCl
2
que
despus de la administracin de CdMT. Dorian y Klaassen [1995] evaluaron los efectos de
ZnMT sobre la toma renal y nefrotoxicidad de
l09
CdMT y concluyeron que la ZnMT no
solamente no es txica para rin a una dosis tan elevada como 5 moles de MT/kg, sino
tambin puede proteger contra los efectos nefrotxicos de CdMT sin disminuir la
concentracin renal de cadmio.
La concentracin crtica de cadmio que puede producir algn tipo de disfuncin en la
corteza renal an sigue siendo investigada. Si la concentracin crtica de cadmio en la orina
es de aproximadamente 5 g Cd/g de creatinina o de 10 g Cd/g de creatinina, corresponde
a alrededor de 100 y 200 g de cadmio/g de masa renal respectivamente y de esta forma
dichas cantidades son discutidas. En un anlisis, la concentracin crtica que produce
disfunciones en un 10% de la poblacin susceptible podra ser de aproximadamente 200 g
de cadmio/g de masa renal; el 50% de la poblacin susceptible podra experimentar
disfunciones con una concentracin en rin de 300 g/g de masa renal [Ellis, Cohn y
Smith, 1985].
En su forma catinica normal, como Cd(II), este elemento presenta fuertes analogas con
dos elementos esenciales, el Zn(II) y el Ca(II). De alguna manera, estas analogas dan
cuenta de sus principales efectos txicos. Por un lado, puede desplazar al zinc de algunos
de sus sitios activos en metaloenzimas y por el otro, compite con el calcio en ciertos
sistemas biolgicos y tambin puede ser incorporado al hueso, ocupando los sitios de calcio
en las hidroxiapatitas biolgicas. La dosis oral normal de Cd es de 5 X 10
-4
mg/kg para
fuentes de agua, en comparacin a la dosis diaria en alimentos que es de 1 X 10
-3
mg/kg. La
United States Environmental Protection Agency (USEPA) lo ha clasificado como un
carcingeno clase B1 (posible carcingeno humano) slo por inhalacin [Donkin et al,
2000].
3.1.4 Plomo (Pb)
Es un metal encontrado en la corteza terrestre de manera natural. El Pb puede mezclarse
con otros aniones para formar las conocidas sales de Pb. Estos compuestos son solubles en
agua, mientras que el Pb elemental no lo es. Es usado en la produccin de bateras,
municiones, productos de metal y equipo mdico y cientfico. La mayora del Pb es
movilizado en el ambiente como resultado de actividades humanas. La presencia de Pb en
los seres humanos se debe a la inhalacin o exposicin por va oral a partculas de Pb
inorgnico. En nios, la dosis oral es absorbida en 50%, mientras que en adultos slo en
15%. La muerte de nios por envenenamiento con Pb ocurre con niveles mayores de 125
g/dL en sangre, quienes adems exhiben encefalopata severa. Muy bajos niveles de Pb
(25-30 g/dL) han sido asociados con efectos negativos en la capacidad de aprendizaje;
adems, se ha encontrado que un nivel de Pb en sangre de 50 g/dL est muy prximo al
necesario para generar efectos txicos en obreros adultos expuestos al metal, por lo que la
recomendacin de exposicin laboral mxima es de 30 g/dL.
El plomo afecta al sistema nervioso y endocrino, que contribuyen con la regulacin de la
resistencia vascular perifrica y la produccin de pulsaciones cardiacas [Vaziri y Sica
2004]. El plomo en las clulas se une a una gran variedad de protenas, algunas de las
cuales se encuentran implicadas en su toxicidad. Un rasgo histolgico caracterstico de la
nefrotoxicidad de plomo es la formacin de cuerpos intranucleares de inclusin en el tbulo
proximal renal. Los cuerpos de inclusin contienen complejos de plomo con protenas que
pueden provocar un efecto intenso sobre la disposicin intracelular de plomo en el rin. El
atrapamiento de plomo en los cuerpos intranucleares de inclusin puede limitar o prevenir
interacciones txicas con otros blancos moleculares del plomo. Sin embargo, la identidad
exacta de los complejos proteicos de plomo en los cuerpos de inclusin sigue siendo
desconocida, as como el mecanismo de formacin de los cuerpos de inclusin por s
mismo [Shelton y Egle, 1982].
El plomo tambin se une a las metalotionenas pero no parece ser un inductor significativo
de la protena en comparacin con cadmio y zinc [Waalkes y Klaassen, 1985]. In vivo, slo
una pequea fraccin del plomo en el rin est unida a metalotionenas y parece tener una
afinidad de unin que es menor que la de Cd(II), pero mayor que la de Zn(II), [Nelson,
Atkin y Winge, 1985]. El plomo inhibe la captacin de calcio en las mitocondrias aisladas
de clulas renales y puede entrar a la mitocondria como sustrato por medio de un
transportador de calcio [Kapoor et al, 1985]. Los deterioros del metabolismo oxidativo
podran contribuir con deficiencias en el transporte y con la degeneracin celular; sin
embargo, el papel exacto del plomo en la induccin de la nefrotoxicidad no ha sido
totalmente esclarecido.
El plomo interfiere con la biosntesis del hemo alterando la actividad de tres enzimas: cido
-aminolevulnico sintasa (ALAS), cido -aminolevulnico deshidratasa (ALAD) y
ferroquelatasa. El plomo estimula de manera indirecta a la enzima mitocondrial ALAS que
cataliza la condensacin de glicina y succinil CoA para formar ALA. La actividad de
ALAS cataliza la etapa limitante en la biosntesis de hemo; el incremento en la actividad de
ALAS ocurre a travs de la inhibicin de la represin por retroalimentacin. El plomo
inhibe a la metaloenzima citoslica coordinada con zinc ALAD que cataliza la
condensacin de dos unidades de ALA para formar porfobilingeno. Esta inhibicin es no-
competitiva y ocurre por medio de la unin del plomo a los sulfhidrilos vecinos en el sitio
activo de ALAD. El plomo puentea a los sulfhidrilos vecinos, mientras que el zinc,
normalmente encontrado en el sitio activo, se une solo a uno de esos sulfhidrilos. La
inhibicin de ALAD y la inactivacin de la represin por retroalimentacin de ALAS
resulta en la acumulacin de ALA. Disminuye, de una manera no-competitiva, la actividad
de la enzima mitocondrial coordinada con zinc ferroquelatasa, que cataliza la insercin de
hierro (II) en el anillo de protoporfirina para formar el hemo. La inhibicin de la
ferroquelatasa puede ocurrir a travs de la unin del plomo a los grupos sulfhidrilos vecinos
del sitio activo. Otro mecanismo posible es por medio del deterioro en el transporte de
hierro en la mitocondria, dado por ruptura de la estructura mitocondrial. Algunas otras
enzimas de la ruta de biosntesis de hemo contienen grupos sulfhidrilo simples dentro de
sus sitios activos y no son tan sensibles a la inhibicin, como lo son ALAD y
ferroquelatasa [Goering, 1993]. El proceso de biosntesis de hemo es ilustrado en la
figura 1.
Figura 1. Efectos del plomo sobre la biosntesis de Hemo [ATSDR, 2005a].
La inhibicin de la ferroquelatasa por plomo resulta en la acumulacin de protoporfirina
IX, que est presente en los eritrocitos circulantes como protoporfirina complejada con zinc
(ZPP), debido a la colocacin de zinc, ms rpida que la del hierro, en el anillo de porfirina.
La ZPP es encontrada en las hendiduras del hemo de la hemoglobina y permanece ah
durante el tiempo de vida del eritrocito. Debido a que la acumulacin de ZPP ocurre slo en
eritrocitos formados durante la presencia de plomo en mdula sea, este efecto es
detectable en los eritrocitos circulantes aproximadamente durante 120 das. La interferencia
tan marcada con la sntesis de hemo resulta en una reduccin de la concentracin de
hemoglobina en sangre [EPA, 1986]. Adems, el plomo puede afectar al sistema nervioso
por mltiples mecanismos, y uno de los ms importantes es su actividad biomimtica de
calcio y/o la ruptura de la homeostasis de calcio.
La vulnerabilidad particular del feto y los nios a la neurotoxicidad del plomo puede estar
dada en parte por la inmadurez de la barrera hematoenceflica y por la prdida de la
afinidad del plomo para unirse a las protenas en la astrogla, la cual lo secuestra. Otra
enzima alterada por el plomo es la calmodulina, el principal receptor intracelular de calcio
en eucariontes. Normalmente, el calcio induce un cambio conformacional en la
calmodulina y convierte a la protena a su forma activa; el plomo activa de manera
inadecuada a la enzima.
El plomo tambin puede sustituir al zinc en algunas enzimas y en protenas con dedos de
zinc, las cuales coordinan uno o ms cationes de zinc como cofactores. La sustitucin de
zinc por plomo en protenas con dedos de zinc puede tener efectos significativos sobre la
expresin de novo de las protenas unidas y en algunos genes regulados
transcripcionalmente para una protena en particular. Ha sido sugerido que las mltiples
respuestas a la exposicin a plomo son ocasionadas por el plomo actuando sobre las
protenas de dedos de zinc encontradas en enzimas, canales y receptores [ATSDR, 2005a].
3.1.5 Cromo (Cr)
De acuerdo con la ATSDR [2000], el cromo es un elemento encontrado de manera natural
en animales, plantas, rocas, suelo, cenizas volcnicas y gases. El cromo tiene estados de
oxidacin en un rango comprendido desde cromo (II) hasta cromo (VI). El cromo elemental
[cromo(0)] no se encuentra de manera natural. Los compuestos de cromo son estables en
estado trivalente en minerales como el ferrocromito. La forma hexavalente (VI) es el
segundo estado ms estable. Sin embargo, el cromo (VI) raramente aparece de manera
natural, aunque usualmente es producido a partir de fuentes antropognicas. Los
compuestos de cromo trivalente, con excepcin de las sales de acetato, nitrato y cloruro de
cromo (III) hexahidratado, son generalmente insolubles en agua. Algunos compuestos
hexavalentes, tales como el trixido de cromo (o cido crmico), y las sales metlicas de
amonio y lcalis (p.e., sodio, potasio) de cido crmico son rpidamente solubles en agua.
Las sales metlicas alcalinas (p.e., calcio, estroncio) de cido crmico son menos solubles
en agua. Las sales de zinc y plomo de cido crmico son prcticamente insolubles en agua
fra. Los compuestos de cromo (VI) son reducidos a cromo (III) en presencia de materia
orgnica reductora. Sin embargo, en afluentes naturales donde hay una baja concentracin
de materiales reductores, los compuestos de cromo (VI) son ms estables [EPA, 1984]. En
humanos y animales, el cromo (III) es un nutriente esencial que desempea una funcin
importante en el metabolismo de la glucosa, cidos grasos y protenas incrementando la
actividad de la insulina [Anderson, 1981]. La forma biolgicamente activa de cromo,
denominada factor de tolerancia a la glucosa (GTF), es un complejo de cromo, cido
nicotnico y posiblemente aminocidos (glicina, cistena y cido glutmico). Los humanos
y animales son capaces de convertir los compuestos inactivos de cromo (III) inorgnico a
formas fisiolgicamente activas.
Aunque el cromo (III) ha sido reportado como un nutriente esencial, la exposicin a niveles
elevados por inhalacin, ingestin o contacto drmico puede causar algunos efectos
perjudiciales a la salud. Es muy difcil distinguir entre los efectos causados por cromo (VI)
y aqullos causados por cromo (III), ya que cromo (VI) es rpidamente reducido a cromo
(III) despus de la penetracin de membranas biolgicas y en el ambiente gstrico. Sin
embargo, mientras que cromo (VI) puede ser fcilmente transportado dentro de las clulas,
cromo (III) es mucho menos capaz de cruzar membranas celulares. La reduccin de cromo
(VI) a cromo (III) dentro de las clulas puede ser un mecanismo importante para la
toxicidad de compuestos de cromo, mientras que la reduccin de cromo (VI) a cromo (III)
fuera de las clulas es un mecanismo de proteccin mayor [Petrilli et al, 1986]. Dado que el
punto de ebullicin del cromo es extremadamente alto, es extrao encontrar cromo gaseoso.
Ms bien, el cromo en el ambiente se encuentra en forma de micropartculas suspendidas o
disuelto en microgotas. El trixido de cromo (VI) (cido crmico) y los aerosoles de sales
de cromo (VI) soluble pueden producir diferentes efectos en la salud a diferencia de los
compuestos insolubles en forma de partculas. Por ejemplo, la exposicin a trixido de
cromo (VI) resulta en un dao notorio a la mucosa nasal y en la perforacin del septo nasal,
mientras que la exposicin a compuestos insolubles de cromo (VI) resulta en daos al tracto
respiratorio inferior. [ATSDR, 2000].
No hay estudios que reporten la muerte en humanos despus de la inhalacin aguda de
cromo o alguno de sus compuestos. Los valores de inhalacin aguda de concentracin letal
al 50% (LC
50
) en ratas para diferentes compuestos de cromo (VI) (cromato de sodio,
dicromato de sodio, dicromato de potasio y dicromato de amonio) se encontraron en un
rango de 29 a 45 mg de cromo (VI)/m
3
para hembras y de 33 a 82 mg de cromo(VI)/m
3
para machos. Los valores LC
50
para inhalacin aguda de trixido de cromo fueron de 87 y
137 mg de cromo (VI)/m
3
para ratas hembras y machos, respectivamente [American
Chrome and Chemicals, 1989]. La genotoxicidad de cromo est dada por la reduccin
intracelular de cromo (VI) a cromo (III), la cual puede ser la forma genotxica esencial de
cromo. Paradjicamente, el cromo (III) no induce dao a DNA, aunque se una a ste in
vitro e in vivo.
A diferencia de muchos carcingenos qumicos, la mayora de la informacin sobre la
carcinognesis inducida por cromo se ha obtenido a partir de estudios epidemiolgicos en
seres humanos sobre trabajadores expuestos ms que de estudios en animales. El cncer de
pulmn es considerado como un riesgo profesional para trabajadores expuestos a cromo
(VI) en el sector industrial y comercial. Los estudios indican que los trabajadores en las
industrias que usan cromo pueden estar expuestos a concentraciones de cromo dos veces
mayores que la poblacin en general. Existe una correlacin positiva entre la dosis de
cromo, expresada en funcin de la concentracin y tiempo de exposicin, y el riesgo
relativo de desarrollar cncer de pulmn, la cual ha sido calculada por ser mucho ms de 30
veces mayor que la de los controles adecuados. Las formas principales de cncer inducido
por cromo son carcinomas de pulmn y en una menor proporcin, carcinomas nasales y
farngeos. Tambin hay algunas evidencias de incremento en el riesgo de desarrollar cncer
gastrointestinal [ATSDR, 2000].
La dosis de referencia diaria de cromo (III) por va oral es de 1.0 mg/kg. La dosis de
referencia diaria de cromo (VI) por va oral es de 5 x 10
-3
mg/kg. Cromo (VI) est
clasificado como carcingeno clase A (carcingeno humano confirmado) slo por la
exposicin por inhalacin. Cromo (III) no est clasificado como carcingeno por ninguna
va de exposicin.
3.1.6 Cobre (Cu)
Es el tercer metal de transicin ms abundante en el cuerpo humano, despus del hierro y
del zinc, y se ha identificado un nmero relativamente grande de metaloprotenas que lo
contienen. Tambin est asociado a sistemas y procesos que involucran la utilizacin del
oxgeno por parte de sistemas biolgicos, apareciendo en el transportador de oxgeno
hemocianina, en diversas oxidasas y oxigenasas y en la superxido dismutasa, adems de
estar presente en sistemas transportadores de electrones [ATSDR, 2004; Baran, 1995].
El cobre se encuentra presente en el organismo en cantidades que van de los 100 a 150 mg,
ubicndose el 90% de esta cantidad en hgado, cerebro, pulmn, rin y ovario. Participa en
la formacin de la hemoglobina y es fundamental para el desarrollo y mantenimiento de
huesos, tendones, tejido conectivo y el sistema vascular [Donkin et al, 2000]. La absorcin
del cobre ocurre en el estmago y en el intestino delgado. Esta absorcin aparece facilitada
por la presencia de ciertos aminocidos y protenas como las metalotionenas especficas
para cobre. El hgado es el centro del metabolismo del cobre y all se genera la
ceruloplasmina, que es la cuproprotena ms abundante en el plasma y es la principal
responsable del transporte de Cu en el organismo, adems de algunos pptidos de bajo peso
molecular. La alta labilidad del in Cu(I) sugiere una etapa de reduccin durante el proceso
de liberacin de cobre. Esto significa que el Cu(II) ligado a la ceruloplasmina sera
reducido a Cu(I) e inmediatamente captado por un aceptor intracelular del in cuproso.
Posteriormente el cobre es incorporado en su forma reducida a alguna apoenzima, siendo
fijado en la holoenzima en su estado cprico, como consecuencia de su inmediata oxidacin
por oxgeno [Baran, 1995].
La carencia de cobre en el organismo es poco frecuente en personas que llevan una dieta
balanceada. Se puede manifestar la ausencia de cobre en el organismo con anemias que
van de moderadas a severas, edemas, desmineralizacin sea, retardo en el crecimiento,
anorexia y vulnerabilidad a infecciones. La habilidad del cobre para mantenerse en ciclo
reversible entre un estado oxidado, Cu(II) y un estado reducido, Cu(I), es usada por
cuproenzimas involucradas en reacciones redox. Sin embargo, es por esta propiedad del
cobre que tambin es potencialmente txico ya que las transiciones entre Cu(II) y Cu(I)
pueden resultar en la generacin de radicales superxido e hidroxilo [Camakaris et al,
1999]. Turnlund [1989] demostr que la absorcin de cobre en el tracto gastrointestinal es
inversamente proporcional a su ingesta en la dieta; cuando el cobre de la dieta se
incrementa, la eficiencia en su absorcin disminuye. A concentraciones en la dieta de
0.785, 1.68, y 7.53 mg/da (la ingesta permitida de cobre en la dieta es de 0.900 mg/da), el
56, 36, y 12%, respectivamente, del cobre radiomarcado fue absorbido.
No ha sido comprendido completamente cmo es regulada la absorcin del cobre. Los
estudios in vitro proveen la evidencia de que la toma de cobre por las clulas intestinales
parece ser saturable [Arredondo, Uauy y Gonzlez, 2000]. Hay evidencia de que el cobre se
difunde a travs de la membrana de las clulas intestinales; sin embargo, es poco probable
que este sea el nico mecanismo de absorcin. Es posible que transportadores de cobre
recin identificados (hCtr1 y hCtr2) jueguen un papel en la regulacin en la toma de cobre.
La protena Menkes (MNK), una protena transmembranal a base de cobre tipo ATPasa,
puede estar involucrada en el transporte de cobre a travs de la membrana basolateral de las
clulas intestinales [Pena, Lee y Thiele, 1999]. Cuando el cobre es liberado de las clulas
intestinales, es transportado unido a albmina e histidina al hgado por medio del sistema
porta. El hgado juega un papel crtico tanto en la homeostasis de cobre como de sitio de
almacenamiento para este metal, adems de tomar parte en la ruta fisiolgica para la
excrecin a travs del sistema biliar [Tao et al, 2003].
En ratas saturadas de cobre, los lisosomas se vuelven alargados y ms frgiles con
disminucin de la fluidez de la membrana [Myers et al, 1993]. Es especulado que la
saturacin de los lisosomas resulta en una acumulacin de cobre en el ncleo con un
posterior dao nuclear [Fuentealba, Haywood y Foster, 1989]. Ha sido sugerido que el
exceso de cobre resulta en un dao oxidativo, incluyendo la peroxidacin de lpidos. Sokol
et al [1990] sugirieron que el dao oxidativo a la mitocondrias de los hepatocitos puede ser
uno de los factores que inician el dao hepatocelular. Numerosos estudios han demostrado
que las ratas pueden desarrollar tolerancia a altos niveles de cobre. Despus de 3-5 semanas
de saturacin con cobre ocurre dao tisular y posteriormente los niveles de cobre
comienzan a declinar y los tejidos comienzan a regenerarse. Se ha pensado que el
mecanismo involucrado en el desarrollo de la tolerancia es el incremento en la sntesis de
metalotionenas [Evering et al, 1991].
Los estudios en monos, perros y hurones proveen fuertes evidencias de que el vmito
inducido por cobre result de la estimulacin del nervio vago. La vagotoma abdominal
result en una disminucin dramtica en la aparicin de vmito en perros y hurones
expuestos por va oral a sulfato de cobre y en monos que reciban va oral o por inyeccin
intravenosa sulfato de cobre [Fukui et al, 1994]. En monos, la administracin de
compuestos que bloquean a los receptores 5-HT3 tambin result en una disminucin de
vmito despus de la administracin oral o intravenosa de sulfato de cobre (Fukui et al,
1993). En contraste, los represores de 5-HT3 inhibieron la aparicin de vmito en perros o
hurones [Bhandari y Andrews, 1991] que recibieron una dosis oral de sulfato de cobre, pero
los compuestos que bloquean a los receptores 5-HT4 inhibieron el vmito inducido por
cobre. Fukui et al. [1994] sugirieron que el sulfato de cobre caus irritacin gastrointestinal
que result en la liberacin de 5-HT y provoc vmito por activacin de las vsceras
abdominales aferentes a travs de los receptores 5-HT4.
3.2 Complejos de coordinacin: Qumica Bioinorgnica
La Qumica Bioinorgnica es una rama interdisciplinaria de la Qumica que se ocupa tanto
del estudio de los compuestos inorgnicos presentes en tejidos y fluidos biolgicos como
de sistemas inorgnicos (modelos) mediante los cuales se puede simular o reproducir en
forma parcial o total el comportamiento qumico de los sistemas naturales. Y, en ltima
instancia, se trata de correlacionar la actividad biolgica de un sistema inorgnico con las
caractersticas estructurales, electrnicas y qumicas del mismo. Si bien a travs de estudios
in vitro por lo general no se pueden reproducir exactamente el funcionamiento y las
caractersticas de los complicados sistemas naturales, el anlisis de modelos ha aportado, en
muchos casos, informacin clave para dilucidar los mecanismos a travs de los cuales
ocurren muchos procesos biolgicos fundamentales o acerca de la estructura de diversos
sistemas metlicos presentes en los seres vivos [Baran, 1995].
Una parte importante de los modelos de estudio en la Qumica Bioinorgnica, lo
constituyen los denominados complejos de coordinacin. Un complejo de coordinacin
consta de una o ms molculas, denominadas ligantes (L), que rodean a un in o tomo
central metlico M
n+
, a travs de la formacin de un enlace covalente coordinado, as como
de un contrain (anin o catin) que mantiene la neutralidad del compuesto, cuando esto es
necesario. El nmero de ligantes alrededor del metal determina el nmero de coordinacin
(siendo los valores ms comunes 4 y 6). La geometra del complejo depende de dicho
nmero de coordinacin y del estado de oxidacin del metal. Estos parmetros definen, por
tanto, la esfera de coordinacin. A los ligantes que interactan directamente con el in
metlico se les ubica en la esfera de coordinacin interna, mientras que a los contraiones se
les sita dentro de la esfera de coordinacin externa. Una tercera esfera, constituye aquella
donde interactan las molculas del solvente, conocida como esfera de solvatacin. Casi la
totalidad de los elementos metlicos tienen la capacidad de formar compuestos de
coordinacin, en una gran variedad de estados de oxidacin y nmeros de coordinacin
[Cotton y Wilkinson, 2005].
En la prctica mdica, los complejos de coordinacin utilizados como frmacos han
recibido atencin limitada en comparacin con los compuestos orgnicos, debido a que
pueden llegar a ser txicos a elevadas concentraciones. Por ejemplo, la observacin
accidental de la inhibicin en el crecimiento de tumores en presencia de ciertos complejos
de Pt(II) tales como el cis-diclorodiaminoplatino o cisplatino, cis-[Pt(NH
3
)
2
Cl
2
], permiti
desarrollar una serie de pruebas clnicas que condujeron a su eventual autorizacin para uso
mdico. Se cree que la accin anticancergena del cisplatino resulta de la unin del Pt(II) al
DNA al coordinarse con diferentes sitios posibles: los tomos de oxgeno de los grupos
polifosfato, cargados negativamente, y/o los tomos de N y O de las bases nitrogenadas.
Los estudios realizados in vitro con el cisplatino sugieren que el platino puede interactuar
con el N1 y N7 de la adenina, el N3 de la citosina y el N7 de la guanina. Este ltimo parece
generar una unin especialmente fuerte e, incluso, esta base podra actuar como ligante
bidentado del Pt(II) a travs de N7 y O6 (Figura 2). Por otra parte, los complejos de hierro
han sido y son utilizados en el tratamiento de anemia hipocrmica provocada por la
deficiencia de hierro [Baran, 1995].
Figura 2. Representacin esquemtica de la interaccin del cisplatino con el DNA: unin monofuncional (A); unin entre
cadenas (B); unin DNA/protena (C); unin a N7 y O6 de una guanina (D); unin a N7 de dos guaninas separadas por
una tercera base (E); unin a dos bases diferentes (F) [Baran, 1995].
3.2.1 Actividad peroxidasa de complejos de coordinacin
Con el objeto de establecer las definiciones precisas de velocidad de reaccin y la accin de
los catalizadores, es necesario considerar, como ejemplo clsico, la conversin del
compuesto A en el compuesto B
A B
Se puede definir la velocidad de reaccin (V), en un momento dado, como la velocidad de
formacin del producto, en este caso B, o de la velocidad de consumo del sustrato A:
o (1)
Las unidades de V son moles por litro por segundo (mol/L)s
-1
, si [B] o [A] indican la
concentracin molar de B o A. La transformacin de cada molcula de A en B es un
fenmeno independiente. As pues, a medida que se consumen las molculas de A, se
reduce el nmero de molculas que quedan para transformarse y la velocidad disminuye a
medida que la reaccin se va produciendo. Matemticamente, expresamos este hecho
afirmando que la velocidad de reaccin es proporcional a [A]:
(2)
La constante k
1
se denomina constante de velocidad y para esta reaccin tiene unidades de
(segundos
-1
). La constante de velocidad proporciona una medida directa de la rapidez con la
que se produce la reaccin. Una k
1
elevada indica que la reaccin es rpida y una k
1
pequea indica una reaccin lenta. Esta reaccin se denomina reaccin de primer orden, ya
que su velocidad depende de la primera potencia de la concentracin del reactante. Si se
desea demostrar que una reaccin es de primer orden o se desea determinar la constante de
velocidad, resulta ms cmodo disponer de una ecuacin que describa la forma en la que se
modifica la concentracin de A con el tiempo durante la reaccin. Esta descripcin puede
obtenerse mediante la integracin de la ecuacin 2:
(3)
(3a)
Una reaccin de segundo orden se da siempre que dos molculas entran en contacto para
formar productos. Un ejemplo sencillo es:
2A A
2
k
2
La velocidad de esta reaccin es proporcional a la segunda potencia de la concentracin del
reactante, ya que la reaccin slo puede producirse cuando colisionan dos molculas. En
esta ecuacin, k
2
es la constante de velocidad de segundo orden. Tiene dimensiones de
(mol/L)
-1
s
-1
.
(4)
Un catalizador reduce la barrera de energa para una reaccin, con lo que aumenta la
fraccin de molculas que tiene la energa suficiente para alcanzar el estado de transicin y
de esta forma se logra que la reaccin vaya ms rpida en ambas direcciones. La presencia
de un catalizador no tiene efecto alguno sobre la posicin de equilibrio, puesto que la
diferencia en las magnitudes de la barrera en las dos direcciones es exactamente la misma
en presencia o no del catalizador [Mathews, Van Holde y Ahern, 2002]. Los catalizadores
no son alterados durante el proceso de la reaccin ya que se encuentran presentes al final de
la reaccin en idntica cantidad y en las mismas condiciones fsicas y qumicas en las que
se encontraban al comienzo de la misma.
Figura 3. Efecto de un catalizador sobre la energa de activacin. El catalizador reduce la energa libre estndar de
activacin, G
, con lo que hay ms molculas de reactante que poseen la energa necesaria para alcanzar el estado de
transicin disminuido [Mathews, Van Holde y Ahern, 2002].
Las enzimas son protenas que catalizan una gran cantidad de reacciones biolgicas. Como
cualquier catalizador, las enzimas aumentan la velocidad de la reaccin que facilitan, pero
no afectan la constante de equilibrio de sta. Su accin se produce por una disminucin en
la energa de activacin de las sustancias reaccionantes. Las enzimas no son alteradas por la
reaccin, pero por ser protenas, resultan termolbiles y sensibles a los cambios y
variaciones del medio ambiente fsico en que se hallen.
Figura 4. Importancia de los estados intermediarios. Es frecuente que una enzima se una al sustrato en una conformacin
intermediaria que asemeja al estado de transicin pero con menor energa. Las energas de activacin de la formacin del
estado intermediario y de la conversin del intermediario en el producto (G
1
y G
2
(compuestos de coordinacin
del tipo [Cu(N-N)(O-O)]NO
3
, donde (N-N) = 4,7-dimetil-1,10-fenantrolina y (N-O) = -
amino cidos), a los que se les atribuye actividad anticancergena. En el ensayo in vitro de
inhibicin del crecimiento celular se encontr que los compuestos ternarios de cobre
sintetizados fueron activos en todas las lneas celulares probadas; mostrando una mayor
actividad en la lnea celular HeLa de acuerdo al anlisis con sulforrodamina B. Igualmente
se concluy que los compuestos exhibieron una actividad mayor al cisplatino, que fue
usado como control negativo para comparar la efectividad en la inhibicin del crecimiento
celular. Por otro lado se encontr que la actividad biolgica de los compuestos se
incrementa al aumentar la cadena lineal principal del -aminoacidato coordinado en las
lneas celulares PC-3 y HCT-15.
En otro estudio realizado por Marn-Hernndez et al [2003], para elucidar algunos de los
mecanismos subcelulares y bioqumicos de toxicidad de las Casiopenas, fueron
expuestas a ellas mitocondrias y clulas. Se midi en mitocondrias aisladas de clulas de
hgado, rin y corazn de rata, y en clulas de hepatoma AS-30D, la tasa de respiracin, el
gradiente de protones y las actividades de las enzimas succinato (SDH) y 2-oxoglutarato
deshidrogenasas (OGDH) y de la ATPasa. Tambin fue determinada la tasa de respiracin
sensible a oligomicina y el contenido de ATP en las clulas de hepatoma AS-30D. Las
Casiopenas (CS) II-gly y III-i (Figura 10) inhibieron las tasas de respiracin estimulada
por ADP y respiracin no acoplada en mitocondria. La CS-II fue mucho ms potente que la
CS-III. La sensibilidad a la CS-II fue de 4-5 veces mayor en las mitocondrias incubadas con
2-oxoglutarato que con succinato. As, a bajas concentraciones [10 nmol (mg de protena]
-
1
; 10 mol) la CS-II alter las funciones mitocondriales slo cuando el 2-oxoglutarato
estuvo presente, debido a una inhibicin especfica de la 2-OGDH. A altas concentraciones
[ 15 nmol (mg de protena)
-1
], la CS-II indujo la estimulacin de la respiracin basal,
seguida de una fuerte inhibicin, la cual se correlacion con un aumento de la dependencia
de K
+
y la liberacin del citocromo C, respectivamente; el canal de K
+
abierto induce una
respuesta mitocondrial similar. Las mitocondrias de hgado, rin y hepatoma mostraron
una sensibilidad similar hacia la CS-II, mientras que las mitocondrias del corazn fueron
ms resistentes. La fosforilacin oxidativa y el contenido de ATP tambin disminuyeron en
las clulas tumorales en presencia de CS-II. De esta manera, los datos obtenidos mostraron
que la CS-II puede interactuar directamente con las mitocondrias, ya sea de manera aislada
o junto con las clulas intactas, induciendo una gran variedad de efectos en diferentes sitios,
los cuales causan la inhibicin de la fosforilacin oxidativa y, eventualmente, la inhibicin
de la sntesis de ATP, lo cual podra comprometer los procesos dependientes de energa
tales como la divisin celular.
Figura 10. Estructura qumica de las Casiopenas (Marn-Hernndez et al, 2003)
Gracias a la evaluacin de la toxicidad de complejos de coordinacin sobre modelos
animales se ha logrado obtener una perspectiva real de los efectos que dichos compuestos
podran tener sobre la salud humana, y adems de lo anterior, se puede decidir el uso de
tratamientos en pacientes con problemas tales como infecciones bacterianas y virales,
problemas gastrointestinales y cncer, entre otros casos. De Vizcaya-Ruiz et al [2003]
evalu la respuesta hematotxica en ratas adultas causada por la administracin de
Casiopena II (CII), que es un complejo de coordinacin a base de Cu(II), al que se le
atribuye actividad anticancergena por inhibir el crecimiento de clulas HeLa (carcinoma
cervical humano), CaLo (cncer de colon) y de leucemia de roedores cepa L210. Se
aplicaron 1, 3 y 5 mg/kg de CII a los animales por va intravenosa y posteriormente se
aplicaron 5 mg/kg de CII durante 5 y15 das despus de la primera dosis. Adems de lo
anterior, se hizo una citometra hemtica y un anlisis histopatolgico del bazo para
corroborar trastornos en el sistema hematopoytico. El principal efecto txico que fue
atribuido a la administracin de CII (dosis de 5 mg/kg) en las ratas fue una anemia
hemoltica (concentracin de hemoglobina reducida, glbulos rojos y paquete celular total,
acompaada por una leucocitosis neutroflica muy evidente) a las 12 horas y 5 das despus
de la administracin, atribuida a un dao directo sobre los eritrocitos. Tambin se observ
un incremento en el nivel de reticulocitos y la presencia de normoblastos en sangre
perifrica 5 das despus de la administracin indicando una respuesta eritropoytica
efectiva con recuperacin a los 15 das. Adems de lo anterior, se observ un incremento en
el tamao del bazo y una congestin de la pulpa roja con eritrocitos, que fue consistente
con un aumento en la toma de eritrocitos daados por el sistema reticuloendotelial
observado por histopatologa y microscopa electrnica. Tambin se observ un incremento
en la hemopoyesis extramedular a los 5 das como consecuencia de una respuesta
eritropoytica regenerativa con una recuperacin efectiva a los 15 das. Los cambios
morfolgicos en la celularidad del bazo fueron consistentes con la hematotoxicidad,
principalmente dados por una reduccin de la proporcin pulpa roja/pulpa blanca, un
incremento en el contenido de eritrocitos a las 12 horas y una infiltracin de clulas
nucleadas en la pulpa roja a los 5 das, con una tendencia hacia la recuperacin a los 15 das
despus de la administracin. El dao a los eritrocitos fue atribuido a la generacin de
radicales libres y al dao oxidativo en la membrana celular como resultado de la reduccin
de Cu(II) a Cu(I) y la posible disociacin del complejo CII.
3.2.3 Sntesis, caracterizacin y actividad biolgica de complejos metal-
antiinflamatorio.
Debido a la posibilidad de uso como antiinflamatorios muy potentes, o para determinar su
efecto sobre sistemas biolgicos, se han elaborado diferentes estudios con complejos de
coordinacin a base de frmacos antiinflamatorios. Kovala-Demertzi et al [1998]
describieron diferentes complejos de coordinacin con diclofenaco y los siguientes iones
metlicos: Mn(II), Co(II) y Ni(II). Estos complejos fueron preparados con la reaccin de la
sal sdica del frmaco y las sales metlicas MnCl
2
, CoCl
2
y NiCl
2
6H
2
O. En este estudio se
reportaron propiedades pticas, EPR, infrarrojas y electroqumicas de los complejos
sintetizados. Se aislaron especies hepta y hexacoordinadas en estado slido para el
complejo de Co(II). Para el complejo Ni(II) se aislaron especies tetra y hexacoordinadas,
mientras que en solucin de DMF o MeOH se observa la predominancia de especies
hexacoordinadas para los complejos de Co(II) y Zn(II). Tambin se determin la capacidad
de los complejos para catalizar la oxidacin de 3,5-di-ter-butil-o-catecol a 3,5-di-ter-butil-
o-quinona monitoreando la aparicin de la quinona espectrofotomtricamente. De esta
forma, se report la correlacin de la actividad cataltica con el potencial redox de estos
complejos, que podra aplicarse, en cierta forma, como su posible potencial
antiinflamatorio.
En otro estudio realizado por Zhou et al [2000], se report la sntesis y la caracterizacin
estructural y espectroscpica de complejos con zinc e indometacina (cido 1-(4-
clorobenzoil)-5-metoxi-2-metil-1H-indol-3-actico). Se obtuvieron complejos
monomricos y dimricos, y de esta forma este estudio fue el primer ejemplo de la forma
monomrica y dimrica de la coordinacin del grupo carboxilato con el tomo de zinc. Fue
determinada la estructura cristalina de los complejos Zn-Indo con N, N-dimetilacetamida
(DMA), piridina (Pyr), 1-metil-2-pirrolidinona (NMP), EtOH y MeOH como solventes
ligantes, [Zn
2
(Indo)
4
(DMA)
2
]2DMA, 1, [Zn
2
(Indo)
4
(Pyr)
2
]2H
2
O, 2, [Zn
2
(Indo)
4
(NMP)
2
],
3, cis-[Zn(Indo)
2
(EtOH)
2
], 4, y cis-[Zn(Indo)
2
(MeOH)
2
], 5. Los complejos 1, 2 y 3
cristalizaron en un grupo espacial triclnico P. Los tres complejos exhibieron estructuras
de remo rodante. Los complejos 4 y 5 fueron isoestructurales, con un grupo espacial C2/c.
El zinc se encuentra en la estructura en un eje biplegado y ambos complejos presentaron
una estructura cis-octadrica distorsionada. Posteriormente, Dillon et al [2003], para tratar
de disminuir los problemas de irritacin gastrointestinal que ocasionan los frmacos
antiinflamatorios, sintetizaron complejos de Cu(II) y Zn(II) con indometacina y evaluaron
su actividad antiinflamatoria in vivo, su actividad superxido dismutasa (SOD) y las
propiedades ulcerognicas de los complejos sintetizados y el ligante IndoH libre. No se
observ actividad SOD del ligante libre o del complejo [Zn
2
(Indo)
4
(DMA)
2
], pero el
complejo [Cu
2
(Indo)
4
(DMF)
2
] inhibi la reduccin del nitroazul de tetrazolio (NBT) a un
valor de IC
50
de 0.23 M. Los tres compuestos exhibieron actividad antiinflamatoria en
ratas Sprague-Dawley a una dosis equivalente de IndoH de 10 mg/kg por va oral. El grado
de toxicidad (ulceraciones macroscpicas) en el estmago durante la administracin oral de
[Zn
2
(Indo)
4
(DMA)
2
] no fue significativamente distinto al de IndoH (P= 0.78). Las
ulceraciones gstricas inducidas por [Cu
2
(Indo)
4
(DMF)
2
] fueron significativamente
menores que las inducidas por IndoH o el complejo de Zn, pero significativamente mayores
que las del grupo control (P= 0.0013). Las ulceraciones intestinales inducidas por
[Cu
2
(Indo)
4
(DMF)
2
] o [Zn
2
(Indo)
4
(DMA)
2
] fueron aproximadamente 15 veces menores que
las provocadas por IndoH. El complejo [Cu
2
(Indo)
4
(DMF)
2
] exhibi los resultados ms
prometedores, ya que mostr actividad SOD y el menor dao gastrointestinal, adems de
actividad antiinflamatoria comparable con la de IndoH.
Vsquez-rciga
[2004] estudi la interaccin entre tres iones metlicos (Al(III), Cd(II) y
Pb(II)) y el frmaco analgsico y antiinflamatorio cido acetilsaliclico (asp); los complejos
evaluados se sintetizaron y caracterizaron mediante mtodos de espectroscopa de
infrarrojo, resonancia magntica nuclear de protn (
1
H) y de carbono (
13
C), y por
cristalografa de rayos X (slo en el caso de los complejos Cd-asp y Pb-asp). Se obtuvieron
monocristales incoloros de los complejos de cadmio y de plomo, y slidos amorfos, en el
caso del complejo de aluminio. Solamente se obtuvo una especie discreta en el caso del
complejo de cadmio, mientras que para plomo y (presumiblemente) para aluminio se
obtuvieron especies polimricas. La coordinacin se dio a travs del grupo carboxilato (-
COOH) del AAS. Para el complejo [Cd(asp)
2
(H
2
O)
2
] los ligantes se coordinaron de manera
que el carboxilato actuara como un ligante monodentado; en el caso del complejo
[Pb(asp)
2
(H
2
O)]
n
los ligantes se coordinaron de forma diferente, uno fue mono- y el otro
bidentado. Los resultados obtenidos por cristalografa de rayos X mostraron una geometra
tetradrica distorsionada para el complejo de cadmio, mientras que para el de plomo se
determin una geometra de tipo bipirmide trigonal, con un par electrnico inerte sobre el
metal.
Para determinar la accin farmacolgica de complejos metal-antiinflamatorio en procesos
artrticos inducidos Palacios-Hernndez [2005] inocul Mycoplasma fermentans P-140 va
intra-articular en la rodilla de la pata trasera derecha de 29 conejos y posteriormente aplic
los siguientes tratamientos: cido acetilsaliclico (asp), CdCl
2
, Pb(NO
3
)
2
, AlCl
3
, CuCl
2
,
complejo Cd-asp [Cd(C
9
H
7
O
4
)
2
(H
2
O)
2
]
, complejo Pb-asp [Pb(C
9
H
7
O
4
)
2
(H
2
O)]
n
, complejo
Al-asp [Al(C
9
H
7
O
4
)
n
(H
2
O)
n
]
n
, y complejo Cu-asp [Cu(C
9
H
7
O
4
)
2
]
n
. Cada compuesto fue
suministrado durante siete das y fueron efectuadas mediciones peridicas del permetro de
las articulaciones de ambas rodillas. Al trmino del experimento los animales fueron
sacrificados. nicamente los complejos Al-asp y Cu-asp mostraron una aparente actividad
antiinflamatoria de acuerdo con el anlisis de varianza (ANOVA) que se aplic a las
mediciones de las articulaciones de las patas traseras despus de la inoculacin y la
aplicacin de los compuestos (P<0.05), mientras que en el resto de los complejos (Pb-asp y
Cd-asp) la actividad antiinflamatoria fue nula. Todos los complejos evaluados mostraron
actividad txica en rin (Figura 11), que fue atribuida a una sobredosis de metal debida a
la administracin de las sales metlicas parentales y los complejos de coordinacin metal-
asp. Dicha actividad se manifest mediante la formacin de depsitos superficiales de los
complejos en la corteza renal.
Figura 11. Lesiones en los riones de los animales de los subgrupos tratados con sales metlicas y complejos metal-asp
[Palacios-Hernndez, 2005]
El complejo Cd-asp mostr actividad txica en msculo, manifestndose mediante la
aparicin de abscesos en la zona de aplicacin de CdCl
2
y Cd-asp, ya que la va de
administracin de dicho compuesto fue intramuscular por su solubilidad en solucin
fisiolgica (los complejos Al-asp, Cu-asp y Pb-asp se suministraron por va oral debido a su
insolubilidad); esto pudo deberse a que el Cd es un agente txico muy agresivo, capaz de
inducir la aparicin de sarcomas en los animales a los que les es suministrado algn
compuesto a base de este metal (Figura 12). Finalmente, los animales tratados con los
complejos Pb-asp y Al-asp mostraron problemas de hemlisis.
Fig. 12. Abscesos en los animales tratados con el complejo Cd-asp [Palacios-Hernndez, 2005]
3.3 Generalidades sobre los antranilatos
3.3.1 Farmacocintica
Estos agentes son derivados N-aril sustituidos del cido antranlico (Figura 13), el cual es
por s mismo un derivado bioisostrico del cido saliclico. Estos agentes retienen las
propiedades cidas que son caractersticas de los salicilatos; sin embargo, se debe hacer
notar que mientras que el cido mefenmico y el cido meclofenmico son derivados del
cido antranlico el diclofenaco es derivado del cido 2-arilactico. Los fenamatos ms
activos tienen pequeos sustituyentes alquilo o halgenos en la posicin 2, 3 y/o 6 del
grupo funcional amino (el meclofenamato es 25 veces ms potente que el mefenato). Entre
los fenamatos N-aril bisustituidos los derivados 2, 3 son ms activos sugirindose as que
los sustituyentes en las posiciones 2, 3 sirven para forzar al anillo N-aril fuera de
coplanaridad con el cido antranlico. As su efecto estrico es propuesto por ser importante
en la efectiva interaccin de los fenamatos sobre el sitio de inhibicin en ciclooxigenasa.
X
R
OH
O
NH
2
OH
O
Estructura general de los AINES cido antranlico
OH
O
NH
R
Estructura general de los antranilatos
Figura 13. Estructura general de los antranilatos como AINEs [Boctor, 1986].
Los antranilatos poseen principalmente actividad antiinflamatoria, algunos son analgsicos
y antipirticos, y son no selectivos a ciclooxigenasa (COX). Son usados como analgsicos
suaves y ocasionalmente para tratar enfermedades inflamatorias. El meclofenamato es
usado para el tratamiento de la artritis reumatoide (AR), sin embargo su utilidad es limitada
por un gran nmero de reacciones adversas que incluyen nausea y vmitos, diarrea,
ulceraciones, dolor de cabeza, somnolencia y trastornos hematopoyticos.
OH
O
NH Cl
Cl C H
3
Figura 14. cido meclofenmico (cido (2-[(2,6-dicloro-3-metil-fenil)amino]benzoico).
Los antranilatos son perfectamente absorbidos por el tracto gastrointestinal producindose
niveles elevados en plasma a las 2-4 horas post-ingesta, aunque el meclofenamato (Figura
13) es ms lipoflico que otros antranilatos y es absorbido rpidamente. El cido
meclofenmico es metabolizado por oxidacin del grupo orto-metilo y la oxidacin del
anillo seguida por una eventual glucuronidacin. Todos los antranilatos son eliminados
muy eficientemente, de hecho, los antranilatos y sus metabolitos muestran excrecin ms
balanceada que otros AINEs, y una gran fraccin de stos es eliminada en las heces (Figura
15) [DeRuitter, 2002].
NH
O
O H
Cl
Cl
O H
3-hidroximetil (50-60%)
activo
NH
O
O H
Cl
Cl
C H
3
cido meclofenmico
NH
O
O H
Cl
Cl
C H
3
OH
4-hidroxi (5-7%)
NH
O
O H
Cl
Cl
O H OH
3-hidroximetil-4hidroxi
(35-45%)
NH
O
O H
Cl
Cl
C H
3
O H
5-hidroxi (3-6%)
Figura 15. Metabolitos de los antranilatos, tomando como ejemplo al cido meclofenmico [DeRuitter, 2002].
3.3.2 Toxicidad
No existen muchos reportes sobre efectos txicos especficamente del cido
meclofenmico. Sin embargo, y de manera general, los efectos txicos del grupo de los
antranilatos muchas veces han sido sobreenfatizados. En comn con muchos otros
frmacos, la fenilbutazona fue introducida a dosis teraputicas superiores a lo necesario,
con el inevitable flujo de reportes de reacciones txicas en la literatura mundial. En cuatro
estudios, los cidos mefenmico y flufenmico son agentes antiinflamatorios y antipirticos
relativamente suaves, usados regularmente para el tratamiento de desrdenes reumticos
donde otros frmacos pueden ser inefectivos o txicos. La dosis recomendada para el cido
mefenmico es de 500 mg inicialmente y, seis horas despus, de 250 mg por va oral. Puede
causar diarrea en alrededor del 10-20% de los pacientes y ocasionalmente en algunos de
ellos provoca anemia hemoltica; el salpullido y la dispepsia pueden ocurrir pero no son
comunes. En algunos pacientes el tiempo de coagulacin puede ser retardado. El cido
flufenmico es administrado por va oral en dosis de 100 mg. Tambin puede causar diarrea
y en algunos casos dispepsia [Mason et al, 1967].
En un estudio realizado por Franson et al [1980] las fosfolipasas A
2
dependientes de calcio
fueron purificadas y aisladas de plaquetas humanas, de macrfagos alveolares de conejo y
de leucocitos polimorfonucleares peritoneales, y se mantuvieron activas en un rango de pH
entre neutral y alcalino, y fueron inhibidas al 50% por 75 M de indometacina en presencia
de 5.0 mM de Ca(II) previamente adicionado. El meclofenamato sdico y el flufenamato
sdico tambin fueron inhibidores; la sensibilidad a la inhibicin estuvo en funcin de la
concentracin de Ca(II). La dosis que provoc el 50% de inhibicin (ID
50
) con el
meclofenamato sdico fue de 0.4 mM en presencia de 2 mM de Ca(II) adicionado. As, la
inhibicin de la actividad de la fosfolipasa A
2
por frmacos antiinflamatorios no esteroideos
por medio del antagonismo de Ca(II) puede contribuir de manera significativa con el
mecanismo de accin del frmaco.
Muchos AINEs provocan problemas en algunos pacientes debido a su toxicidad gstrica, en
hgado y medula sea, que puede resultar en sangrado gastrointestinal, ulceracin dao
heptico fulminante, hepatitis, granulocitosis o anemia aplsica. Se ha determinado que los
AINEs forman radicales pro-oxidantes cuando son metabolizados por peroxidasas presentes
en los tejidos. As el glutatin (GSH), y/o ascorbato cooxidados por cantidades catalticas
de AINEs y perxido de hidrgeno en presencia de alguna peroxidasa. Durante la
cooxidacin de GSH y NADH, ocurre tambin la toma de oxgeno y su activacin.
Adems, la formacin de los productos de oxidacin de los AINEs es prevenida durante la
cooxidacin indicando que sta involucra un ciclo redox del primer producto radical del
frmaco. El orden de efectividad cataltica prooxidante de los fenamatos y los cidos
arilacticos evaluados fue cido mefenmico/cido tolfenmico/cido flufenmico, cido
meclofenmico o diclofenaco. La difenilamina, la fraccin en comn de todos estos AINEs
fue un prooxidante ms activo para la cooxidacin de NADH y ascorbato que aquellos
AINEs en los que se sugiere que la oxidacin de la difenilamina del frmaco para un catin
y/o radical nitrxido fue responsable de la accin prooxidante del frmaco. El orden de
efectividad cataltica encontrado para los derivados de la sulfonamida fue
sulfafenazol/sulfisoxazol> dapsona> cido sulfanlico> procainamida> sulfametoxazol>
sulfadiazina> sulfadimetoxina, mientras que la sulfanilamida , sulfapiridina o nimesulida
no mostraron actividad prooxidante. Aunque la indometacina tuvo una ligera actividad
prooxidante, su principal metabolito in vivo, la N-desclorobenzoil indometacina, tuvo
actividad prooxidante significativa. La aminoantipirina, el principal metabolito in vivo de la
aminopirina o dipirona mostr tambin mayor actividad prooxidante que sus frmacos
parentales. De esta forma la hiptesis que fue planteada en este trabajo fue que los radicales
de AINEs y/o el estrs oxidativo resultante inicia el proceso citotxico que conduce a la
toxicidad observada [Galati et al, 2002].