INSTITUTO FEDERAL DE ENSINO, CINCIA E TECNOLOGIA DO PIAU

DEPARTAMENTO DE FORMAO DE PROFESSORES, LETRAS E CINCIAS

CURSO SUPERIOR DE LICENCIATURA EM QUMICA
MDULO: VII
DISCIPLINA: BIOQUMICA
PROFESSOR: DR. JOAQUIM SOARES DA COSTA JNIOR








TESTE COM ENZIMA, PROPRIEDADES DA UREASE




VALTER OLIVEIRA SOUSA






TERESINA, MAIO DE 2014
RESUMO

Nesse experimento foi realizado 5 testes, sendo que os mesmos mostraram as
propriedades da Urease, que hidrolisa a uria em CO
2
e 2NH
3
.

1. INTRODUO

As enzimas so um grupo de substncias orgnicas de natureza normalmente
protica (existem tambm enzimas constitudas de RNA, as ribozimas), com atividade
intra ou extracelular que tm funes catalisadoras, catalisando reaes qumicas que,
sem a sua presena, dificilmente aconteceriam. Isso conseguido atravs do
abaixamento da energia de ativao necessria para que se d uma reao qumica,
resultando no aumento da velocidade da reao e possibilitando o metabolismo dos
seres vivos. A capacidade cataltica das enzimas torna-as adequadas para aplicaes
industriais, como na indstria farmacutica ou na alimentar. Praticamente todas as
reaes no organismo so mediadas por enzimas sem sofrerem alteraes no processo
global. Dentre as muitas reaes biolgicas energeticamente possveis, de forma
seletiva, as enzimas canalizam reagentes (os substratos) para rotas teis. Logo as
enzimas comandam todos os eventos metablicos (CHAMPE, 2006).
Em sistemas vivos, a maioria das reaes bioqumicas d-se em vias metablicas,
que so sequncias de reaes em que o produto de uma reao utilizado como
reagente na reao seguinte. Diferentes enzimas catalisam diferentes passos de vias
metablicas, agindo de forma concertada de modo a no interromper o fluxo nessas
vias. Cada enzima pode sofrer regulao da sua atividade, aumentando-a, diminuindo-a
ou mesmo interrompendo-a, de modo a modular o fluxo da via metablica em que se
insere. O ramo da Bioqumica que trata do estudo das reaes enzimticas a
Enzimologia. (VOET, 2006).
As enzimas convertem uma substncia, chamada de substrato, em outra
denominada produto, e so extremamente especficas para a reao que catalisam. Isso
significa que, em geral, uma enzima catalisa um e s um tipo de reao qumica.
Consequentemente, o tipo de enzimas encontradas numa clula determina o tipo de
metabolismo que a clula efetua. O aceleramento da reao pode ser da ordem dos
milhes de vezes: por exemplo, a enzima orotidina-5-fosfato descarboxilase diminui o
tempo da reao por ela catalisada de 78 milhes de anos para 25 milissegundos. Como
so catalisadores, as enzimas no so consumidas na reao e no alteram o equilbrio
qumico dela. A atividade enzimtica pode depender da presena de determinadas
molculas, genericamente chamadas cofatores. A natureza qumica dos cofatores
muito varivel, podendo ser, por exemplo, um ou mais ons metlicos (Fe), ou uma
molcula orgnica (como a vitamina B12). Estes cofatores podem participar ou no
diretamente na reao enzimtica (DIAS DE SOUZA)
A urase uma enzima que catalisa a hidrlise da uria em dixido de carbono e
amnia. A reao a seguinte:
(NH
2
)
2
CO + H
2
O CO
2
+ 2NH
3

Em 1926 James Summer mostrou que a urase era uma protena. A urase pode
ser encontrada em bactrias, leveduras e vrias plantas superiores. At 1926, James
Summer cristalizou a urease de feijo-soja, a qual catalisa a hidrlise de uria e forma
NH
3
e CO
2,
e demonstrou que tais cristais eram constitudos de protenas. Desde ento,
os estudos em Enzimologia tm amplamente demonstrado que as enzimas em sua
maioria so protenas. (VOET, 2006).
Objetivo: Reconhecer as propriedades da urase e confirmar como a mesma atua
sobre a uria, sua identificao com o biureto, desnaturao e especificidade.

2. MATERIAIS E MTODOS

MATERIAIS

Tubos de ensaio;
Pipetas graduadas;
Banho-maria;
gua destilada;
Soluo de Urase;
Soluo de Biureto;
Soluo de Uria 0.4 M pH 7.0;
Soluo de Tiouria 0.4 M pH 7.0;
Soluo de HgCl
2
5%.
MTODO

Reao da urease com o Biureto
Prepararam-se os tubos seguintes:
Tubo A: 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de soluo de urease
Tubo B: 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de gua destilada

Teste da atividade
Prepararam-se os seguinte tubos:
Tubo A: 1 mL do substrato (soluo de uria 0,4 M pH 7,0 contendo o indicador
vermelho de fenol) + 3 gotas da soluo de urease
Tubo B: 1 mL do substrato + 3 gotas de gua destilada. Misturou-se Aguardou-se cerca
de 2 min.

Teste da especificidade
Colocou-se em um tubo de ensaio, 1 mL da soluo de tiouria 0,4 M pH 7,0
(contendo vermelho de fenol como indicador) + 3 gotas da soluo de urease. Misturou-
se e aguardou-se 2 min.

Desnaturao pelo calor
Colocou-se num tubo de ensaio 1 mL de gua destilada + 3 gotas da soluo de
urease. Ferver usando a chama do bico de Bunsen, durante 2 minutos. Adicionou-se em
outro tubo de ensaio 1 mL da soluo do substrato (soluo de uria 0,4 M pH 7,0
contendo o indicador vermelho de fenol) e acrescentar 0,5 mL da soluo de urease
fervida. Misturou-se e aguardou-se 2 min.

Inibio por sais de mercrio
Prepararam-se os seguintes tubos:
Tubo A: 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de gua destilada
Tubo B: 3 gotas de soluo de urease + 1 mL de gua destilada + 5 gotas da soluo de
cloreto de mercrio 5 %. Misturou-se e adicionou-se 1 mL do substrato (sol. de uria
0,4 M pH 7,0 contendo o indicador vermelho de fenol) a cada um dos tubos.

3. RESULTADOS E DISCUSSO

Reao da urease com o Biureto
No presente teste foi possvel se verificar que no tubo A aconteceu uma reao,
onde se pde notar a presena de uma colorao violeta. Isso aconteceu porque a urease
constituda de aminocidos, que formam protenas. Sendo assim, aconteceu a
formao de complexos de Cu2+ pois as mesmas reagiram com o sulfato de cobre.


Teste da atividade
Nesse teste foi possvel observar uma colorao amarelada, isso aconteceu porque
houve hidrlise da uria catalisada pela urease em pH 7.0. A reao que aconteceu
apresentada a seguir:
(NH
2
)
2
CO + H
2
O CO
2
+ 2NH
3


Teste da especificidade
Em relao ao teste de especificidade, observou-se que o tubo que tinha a tiouria
apresentou uma cor rsea. Notou-se que no aconteceu reao porque a urease
especifica para a uria e, dessa forma, no houve a quebra das ligaes de enxofre,
conforme se pode verificar abaixo com a reao:
C(NH
2
)
2
S + H
2
O No aconteceu

Desnaturao pelo calor
Atravs desse teste, foi possvel observar que quando a urase aquecida em
banho-maria, a mesma tem suas cadeias de peptdeos desnaturadas.

Inibio por sais de mercrio
Nesse teste, verificou-se que a inibio da atividade de enzimas ocasionada por
sais de mercrio ocorreu na forma de complexo. Isso porque o mercrio ligou-se aos
grupos sulfidrilicos, que so como o centro ativo da enzima urase. Dessa forma,
tornou-a inativa. O tubo com gotas de HgCl
2
ficou turvo com suspenso possivelmente
contendo HgS
2
.A equao que se segue procura mostrar a reao que aconteceu:
2 SH
-
+ HgCl
2
HgS
2
+ HCl

4. CONCLUSO
Nesta prtica, os cinco testes realizados, mostraram que a urease apresenta
algumas propriedades, e uma dessas propriedades hidrolisar a uria em CO
2
e 2NH
3
.
Tendo em vista que toda enzima tem sua especificidade, testou-se a urase com
derivados de uria (tiouria). Pode-se concluir que enzimas possuem ao completa na
presena do substrato especifico. Neste experimento, a urease (Enzima) e a uria
(substrato). Pde-se notar que a enzima em considerao constituda de cadeias de
peptdeos (protenas) e que esta sofreu desnaturao quando foi aquecida, bem como se
tornou inativa na reao com HgCl
2
.
5. REFERNCIAS
CHAMPE, P. C., HARVEY, R. A. Bioqumica Ilustrada. 2. Ed. Porto Alegre: Artes
Mdicas, 2006.

DIAS DE SOUZA, Karina A. Freitas, NEVES, Valdir A. Experimentos de Bioqumica,
um guia eletrnico. Disponvel em:
<http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/enzimas/testes.htm>. So Paulo:
UNESP, 2009.

VOET, D., VOET, J. G. Fundamentos de Bioqumica. 3. Ed. Porto Alegre: Artmed,
2006.