UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

ESCUELA DE NUTRICIN Y DIETTICA

MICROGIOLOGA

PRCTICA 2. COLORACIONES MICROBIOLGICAS

OBJETIVO
Identificar las diferencias morfolgicas de los microorganismos a travs del estudio
microscpico.
Aprender las tcnicas de preparacin de frotis y coloraciones microbiolgicas ms importantes.

INTRODUCCIN
La mayora de los microorganismos son incoloros, por esto es necesario recurrir al uso de
colorantes para observar a travs del microscopio ptico caractersticas morfolgicas. Las
tinciones aumentan artificialmente el contraste entre las clulas y el medio.
El primer paso para la observacin microscpica de microorganismos teidos es la preparacin del
frotis, que debe asegurar una distribucin de los microorganismos sobre el portaobjetos de tal
manera que estos queden lo ms separado posibles y puedan apreciarse caractersticas
particulares. Para evitar la prdida de la muestra en el proceso de tincin, este frotis debe ser
fijado al portaobjetos por calor para inactivar las clulas y adherirlas al vidrio sin alterar la
morfologa microbiana.

Las tinciones en microbiologa se pueden clasifican de la siguiente manera:

SIMPLE
Observar tamao, distribucin, forma
Un solo colorante
Tincin del microorganismo o del fondo de la muestra
Azul de metileno
Azul de lactofenol
Safranina
DIFERENCIAL
Clasificar microorganismos de acuerdo a caractersticas
morfolgicas
Varios colorantes
GRAM
Ziehl Nielsen
ESPECFICA
Identificacin de estructuras microbianas: Flagelos, capsula,
esporas
Nigrosina
Verde de malaquita
Rosalina




MATERIALES Y REACTIVOS
Portaobjetos
Asas de ojo
Solucin salina
Azul de lactofenol
Cristal violeta
Lugol
Alcohol acetona
Safranina
Aceite de inmersin
Mechero
Microscopio


PROCEDIMIENTO

1. Preparar el frotis a partir de un cultivo solido de microorganismos. Tomar una
gota de solucin salina y depositarla en el centro del portaobjetos,
resuspender en esta gota la porcin de la colonia que se ha tomado del
cultivo solido teniendo en cuenta todas las normas de asepsia para evitar la
contaminacin. Permitir la desecacin completa de la muestra y fijarla
sometindola por 2 segundos a la llama del mechero 3 veces.

2. Coloracin simple. Cubrir el frotis con 2 gotas de azul de lactofenol durante 1
minuto. Eliminar el exceso de colorante con agua usando un frasco lavador.
Dejar secar al aire.

3. Coloracin diferencial. Cubrir el frotis con dos gotas de cristal violeta por 1
minuto. Eliminar el exceso de colorante con la ayuda de agua y adicionar 2
gotas de lugol, mantener por 1 minuto. Eliminar el lugol y realizar la
decoloracin con alcohol acetona por 15 segundos, lavar rpidamente el
frotis y adicionar 2 gotas de safranina, mantener por 1 minuto. Lavar
completamente la muestra y dejar secar al aire.



4. Observacin al microscopio ptico en el objetivo de 100X. Microorganismos Gram positivos se
observan morados y los microorganismos gram negativos se observan rosados.



5. Descripcin microscopica y macroscopica de los microorganismos observados.

CONSULTA
1. Cul es la funcin de cada uno de los colorantes usados en la tincin de GRAM
2. Explique brevemente en que consiste la tincin de endosporas bacterianas

BIBLIOGRAFIA
Brock M, Martinko M, Parker J. Biologa de los microorganismos. 10 ed. Madrid: Pearson; 2004.
Montoya H. Microbiologa bsica para el rea de la salud y afines. Medelln : Editorial
Universidad de Antioquia, 2008.
Pelczar, J, Reid R, Chan Ch. Microbiologa. 4 ed.Mxico: Mc Graw Hill; 1996.
Jawetz E.,Brooks,G., Butel J., Morse S., Carroll K., Melnick J., Adelberg E., Mietzner T.
Microbiologa Mdica. 25 ed. Mxico: McGraw-Hill Interamericana; 2011.
Botero D., Restrepo Marcos. Parasitosis humanas. 5 ed. Medelln: CIB; 2012.
Mossel D., Moreno B., StruijkC. Microbiologa de los alimentos: fundamentos ecolgicos para
garantizar y comprobar la integridad (inocuidad y calidad) microbiolgica de los alimentos. - 2.
Ed Espaa ; Editorial Acribia, 2003.