LABORATORIO BIOQUIMICA

DETERMINACIN DE NIVELES DE COLESTEROL TOTAL EN SANGRE

OBJETIVO:
Aprender a realizar una buena determinacin de los niveles de colesterol en sangre,
apoyndonos en la teora ya revisada previamente a la prctica y haciendo uso correcto
del material necesario para esta.

FUNDAMENTO:
El colesterol se encuentra en el suero o en plasma en forma libre o esterificada con
cidos grasos, para la determinacin del colesterol en sangre se utiliza un aserie de
reacciones enzimticas.
- En la primera reaccin, los esteres se hidrolizan dejando libre al grupo 3 OH
-En la segunda reaccin este grupo se oxida y se obtiene como un producto el perxido
de hidrgeno, el cual, por efecto de la peroxidasa, transfiere uno de sus oxgenos a un
aceptor cromognico, la absorbancia de este cromognico se mide a 500 nm de longitud
de onda
MATERIAL:
*
* 1 gradilla metlica
* 3 tubos para espectofotmetro
* 1 micropipeta 10-100 ul
* 1 micropipeta 100-1000 ul
* Tubo vacutainer tapn rojo
* 1 aguja vacutainer
* Base holder
* Brazalete
* 5 torundas con alcohol
* 1 kit de reactivo para colesterol

PROCEDIMIENTO:
-Tomar muestra por sistema vacutainer
-Centrifugar 5 minutos a 2500 rpm
-Rotular los 3 tubos
-Aadir soluciones:
1. Reactivo para colesterol 200 ul en cada tubo
2. Agua destilada tubo 1: 20 ul
3. Patrn de colesterol: 200 mg/dl tubo 2: 20 ul
4. Muestra tubo 3 : 20 ul
-Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente
-Leer en espectofotmetro a 500 nm de longitud de onda
-Leer en un perodo no mayor a 60 minutos
-Obtener absorbancia del patrn y muestra
-Realizar ecuacin.
PRCTICA
DETERMINACIN DEL COLESTEROL TOTAL

OBJETIVOS:
* Determinacin en suero de colesterol total.

MARCO TEORICO:
El colesterol es un lpido (grasa). Se forma en el hgado a partir de alimentos grasos y es
necesario para el funcionamiento normal del organismo. El colesterol est presente en la
membrana plasmtica (capa exterior) de todas las clulas del organismo.
El colesterol se desplaza por la sangre mediante unas molculas denominadas
lipoprotenas. Los tres tipos principales son:
Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) o colesterol malo; se cree que causan
enfermedades arteriales. Las LDL transportan el colesterol desde el hgado a las clulas y
pueden causar una acumulacin nociva si hay ms de lo que las clulas pueden usar.
Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) o colesterol bueno; se cree que previenen las
enfermedades arteriales. Las HDL se llevan el colesterol de las clulas y lo devuelven al
hgado donde se descompone y se elimina como residuo corporal.
Los triglicridos se forman en el hgado y estn presentes en productos lcteos, carne y
aceites culinarios. La obesidad y la alimentacin rica en grasas aumentan el riesgo de
tener niveles altos de triglicridos.


FUNDAMENTO DEL METODO PARA LA DETERMINACION DEL COLESTEROL TOTAL
Para la determinacin de colesterol total se utilizan reactivos que incluyen las enzimas y
sustratos necesarios para la cuantificacin de todas las formas de colesterol presentes en
el suero. Las reacciones que tienen lugar son:
CHE
Esteres de colesterol + H2O Colesterol + Ac. Grasos

CHOD
Colesterol + O2 + H2O Colestenona + H2O2

POD
H2O2 + Fenol + 4-AP Quinona + H2O

1. Una colesterol estearasa (CHE) hidroliza los steres de colesterol a colesterol ms
cidos grasos libre.
2. A continuacin una colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a
colestenona y perxido de hidrgeno.
3. El perxido de hidrgeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto con 4-amino
fenazona (4-AP) da lugar a la formacin de una quinona roja. La quinona formada es
proporcional a la concentracin de colesterol en la muestra.
PARTE EXPERIMENTAL
MATERIALES:

* Tubos de Ensayo

* Pipetas de 1, 2,
5 ml.

* Espectrofotmetro

* Pipeta Pasteur con dispensador.

REACTIVOS
*
* Standard: Soluciond e Colesterol 200mg/dl.
* Enzimas: Suspensin contenido lipasa fangal (300 U/ml), colesterol oxidasa (3U/ml) y
peroxidasa (20 U/l).
* Reactivo 4 AF: Solucin de 4 aminofenazona (25 mmol/l).
* Reactivo Fenol: Solucin de fenol (55mmol/l).
PROCEDIMIENTO
* Preparar 3 tubos y agregar en ellos:

| BLANCO | STANDARD | MUESTRA |
STANDARD | ------- | 10 ul | ------- |
SUERO | ------- | ------- | 10 ul |
REACTIVO | 1 ml | 1 ml | 1 ml |

* Mezclar suavemente.
* Incubar por 5 minutos a 37C.
* Leer la absorbancia a 505 nm. Contra el blanco.

Colesterol mgdl= A sueroA standard x 200
CALCULOS:

A = Valor de absorbancia obtenido
MEDICIONES:
Blanco: no se mide ya que no tiene reactivo.
Standard: 81 mg/dl
Muestra Problema I: 224 mg/dl
Muestra Problema II: 241 mg/dl

VALORES NORMALES
Los valores de colesterol en sangre fluctan segn edad, sexo y hbitos de dieta y
ejercicio. Sin embargo, es preferible no hacer referencia a valores normales, pues la
norma promedio de una poblacin no necesariamente refleja ausencia de riesgo
patolgico en el caso de colesterol.
Menos de 200 mg/dl: Valor deseable
200 a 239 mg/dl: Valor frontera
Mayor de 240 mg/dl: Valor alto












Concepto: perfil lipidico
Por medio de un anlisis denominado "perfil lipdico", el mdico podr ver los diferentes
tipos de
grasas presentes en la sangre.
El perfil lipdico mide lo siguiente:
El colesterol total, que es la suma de los diferentes tipos de colesterol.
Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) colesterol, que suelen recibir el nombre de
colesterol "bueno". Las lipoprotenas pueden considerarse el sistema de transporte de la
sangre de su hijo. Las lipoprotenas de alta densidad transportan colesterol al hgado para
su eliminacin.
Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) colesterol, generalmente conocidas como
colesterol "malo". Las lipoprotenas LDL que se acumulan en el torrente sanguneo
pueden tapar los vasos sanguneos e incrementar el riesgo de afecciones cardacas.
Los triglicridos, que almacenan energa hasta que el organismo la necesita. Si el cuerpo
acumula demasiados triglicridos, los vasos sanguneos se pueden tapar y provocar
problemas de salud.
Un perfil lipdico ms extenso puede tambin incluir
* Colesterol VLDL
* Colesterol no-HDL
A veces, el informe incluye algunos clculos adicionales como el cociente entre colesterol
total y colesterol HDL, o un ndice de riesgo establecido a partir de los resultados del perfil
lipdico, la edad, el sexo y otros factors de riesgo. El mdico le informar acerca de lo que
pueden significar estos resultados.
-El perfil lipdico permite verificar los niveles de lpidos en la sangre, que pueden indicar el
riesgo de una persona de padecer enfermedades cardacas o arterosclerosis (el
endurecimiento, estrechamiento o bloqueo de las arterias).
Algunos expertos consideran que el colesterol elevado en nios es un gran problema de
salud pblica que en muchos casos pasa desapercibido. Por lo tanto, es importante estar
atento a los niveles de colesterol de su hijo, en especial si alguno de los padres sufre de
colesterol elevado.
Pruebas que se incluyen en un perfil lipdico
* Colesterol total.
* HDL-lipoprotenas de alta densidad, (denominado a menudo colesterol bueno).
* LDL-lipoprotenas de baja densidad, (denominado a menudo colesterol malo).
* VLDL-lipoprotenas de muy baja densidad.
* Triglicridos.
Algunas veces, el informe del laboratorio incluir valores adicionales calculados como la
relacin HDL/colesterol o clculos basados en los resultados del perfil lipdico, edad, sexo
y otros factores de riesgo.
Igualmente algunos lipidogramas incluyen medicin de lpidos totales, de lipoproteinas de
densidad intermedia (IDL), de las apoprotenas y de quilomicrnes
Usos
-El medico utiliza la informacin para evaluar, junto con otros signos y sntomas, el riesgo
de una dislipidemia y sus complicaciones como un infarto cardaco o una apopleja
provocados por obstruccin de los vasos sanguneos debido a ateromas o placas de
colesterol, es decir para valorar el riesgo cardiovascular de la persona e instituir as un
rgimen adecuado de prevencin y tratamiento.
El perfil lipdico se utiliza para determinar el riesgo de enfermedad cardaca y como gua
para decidir como debe ser tratada una persona en situacin de riesgo. Los resultados del
perfil lipdico se consideran conjuntamente con otros factores de riesgo conocidos de
enfermedad cardaca para proporcionar un plan de tratamiento y seguimiento. En funcin
del perfil lipdico y de otros factores de riesgo se plantean distintas alternativas
teraputicas que incluyen cambios en el estilo de vida como dieta y ejercicio fsico, o
tratamiento con frmacos como estatinas.

Tambin llamado HDL-colesterol y colesterol bueno
Que es el colesterol HDL.- Son lipoprotenas d alta densidad y alta proporcin de
protenas. El HDL es el encargado de eliminar el exceso de colesterol e los tejidos, clulas
y pared arterial para llevarlo al hgado.
Valores normales de colesterol HDL.- Los niveles de HDL se relacionan con el riesgo de
padecer enfermedades cardiovasculares.
< 40 mg/dl Hombres< 50 mg/dl Mujeres | Riesgo aumentado de enfermedad cardaca |
40-59 mg/dl | Riesgo normal de enfermedad cardiaca |
> 60 mg/dl | Proteccion contra enfermedades cardiacas |

Niveles bajos de colesterol HDL (aumentan a 40 mg/dL) aumentan el riesgo de padecer
enfermedades cardiovasculares. Niveles superiores de 60mg/dL disminuye el riesgo de
enfermedad vascular
Como subir el colesterol HDL
La causa ms comn para un HDL bajo es la obesidad y la vida sedentaria, por lo que
para aumentar sus cifras podemos hacer varia cosas:
Baj
Realizar actividad fisica.
Dejar de fumar. El tabaco tambien reduce los niveles de HDL
Tambien llamado LDL colesterol o "colesterol malo".
Que es el LDL colesterol
Las siglas se corresponden a su nombre en ingles Low Density Lipoprotein. Son
lipoproteinas de baja densidad y su exceso en sangre tiende a formar ateromas (placas
formadas en las paredes de las arterias, que producen estrechamiento y rigidez, la
arterioesclerosis) favoreciendo la fomacion de trombos.
Valores normales de LDL colesterol
Los valores adecuados de LDL serian
LDL-colesterol inferior a 100 mg/dL si se padece enfermedad cardiaca o diabetes.
LDL-colesterol inferior a 130 mg/dL si se tienen 2 o ms factores de riesgo.
LDL-colesterol inferior a 160 mg/dL si se tienen 1 o ningun factor de riesgo.
Los factores de riesgo cardiovascular son
Tabaquismo
HDL bajo (Inferiores a 40 mg/dl).
Tension arterial alta.
Antecedentes familiares de enfermedad cardiovascular prematura.
Valores de colesterol HDL por encima de 60 mg/dl se considera factor de riesgo negativo,
contrarrestando otro factor de riesgo.

El colesterol es un esterol (lpido) que se encuentra en los tejidos corporales y en el
plasma sanguneo de los vertebrados. Se presenta en altas concentraciones en el hgado,
mdula espinal, pncreas y cerebro. El nombre de colesterol procede del griego ,
kole (bilis) y , stereos (slido), por haberse identificado por primera vez en los
clculos de la vescula biliar por Michel Eugne Chevreul quien le dio el nombre de
colesterina, trmino que solamente se conserv en el alemn (Cholesterin). Abundan
en las grasas de origen animal