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PERFIL LIPDICO

La cuantificacin de colesterol y triglicridos en suero es un procedimiento analtico


bsico en el diagnstico y seguimiento de enfermedades metablicas, primarias o
secundarias. Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades
cardiovasculares.
INTRODUCCIN Y OBJETIVOS

El perfil lipdico lo constituye la cuantificacin analtica de una serie de lpidos que
son transportados en la sangre por los diferentes tipos de lipoprotenas plasmticas.
Entre estos parmetros analticos que se pueden determinar estn: el colesterol
total, el colesterol transportado por las LDL, el colesterol transportado por las HDL, los
triglicridos totales, ciertas apoprotenas particulares.

Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades
cardiovasculares, en especial aquel unido a las LDL (colesterol malo). El colesterol de
las HDL (colesterol bueno), puesto que representa aquella fraccin de colesterol que se
transporta al hgado para su metabolizacin y excrecin por va biliar, no se asocia con
riesgo de enfermedad.
Los objetivos de la prctica son la determinacin en suero de colesterol total, HDL-
Colesterol, LDL-Colesterol y triglicridos, para lo que se utilizarn kits comerciales.

Listado De Material Necesario
Tubos de ensayo
Pipetas automticas
Espectrofotmetro
Suero Estndar de colesterol (200 mg/dl)
Reactivo de trabajo para el colesterol
Reactivos precipitantes
Estndar de triglicridos (200 mg/dl)
Reactivo de trabajo para triglicridos

Material Biolgico: Suero, estable 6 das a 2-8C.
Nota: no se debe utilizar, muestras envejecidas ni hemolizadas, la presencia de
bilirrubinas en concentraciones superiores a 9 mg/dl interfiere en la reaccin de
precipitacin.

1.- COLESTEROL TOTAL

Para la determinacin de colesterol total se utilizan reactivos comerciales que incluyen
las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificacin de todas las formas de
colesterol presentes en el suero.

Las reacciones que tienen lugar son:

Esteres de colesterol + H
2
O CHE Colesterol + Ac. Grasos

Colesterol + O
2
+ H
2
O CHOD Colestenona + H
2
O
2


H
2
O
2
+ Fenol + 4-AP POD Quinona + H
2
O

1. Un colesterol estearasa (CHE) hidroliza los steres de colesterol a colesterol mas
cidos grasos libre.
2. A continuacin una colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a
colestenona y perxido de hidrgeno.
3. El perxido de hidrgeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto con 4-
amino fenazona (4-AP) da lugar a la formacin de una quinona roja.
La quinona formada es proporcional a la concentracin de colesterol en la
muestra.
Procedimiento: Longitud de onda 505 nm/ T
0
: 37
0
C PUNTO FINAL






Incubar 5 minutos a 37
0
C O 10 minutos a T
0
ambiente

Calculo de los resultados:

Colesterol total mg/dl= Standard x [ ] 200
Desconocido
Valores Referenciales: menor de 200 mg/dl

2.- TRIGLICRIDOS

Para la determinacin de triglicridos en suero se utilizan reactivos comerciales, que
incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificacin por
espectrofotometra visible.
Las reacciones que tienen lugar son:
Lipasa
Triglicridos + H
2
O Glicerol + Ac. Grasos

GK
Glicerol + ATP Glicerol-3-P + ADP

GPOD
Glicerol-3-P + O
2
Dihidroxiacetona + H
2
O
2

POD
H
2
O
2
+ p-clorofenol + 4-AP Quinona + H
2
O

1. Una lipasa hidroliza los triglicridos dando glicerol mas cidos grasos libre.
2. El glicerol formado es sustrato de una glicerol quinasa que en presencia de ATP
lo fosforila a glicerol 3P.
3. El glicerol 3P es oxidado a dihidroxiacetona por una glicerol fosfato oxidasa
dando tambin perxido de hidrgeno.
4. El perxido de hidrgeno junto con los cromgenos p-clorofenol y 4-AP son
sustrato de una peroxidasa para formar una quinona roja cuantificable a 505 nm.
La quinona formada es proporcional a la concentracin de triglicridos
presente en la muestra.

B S D
SUERO - - 10 ul
STNDARD - 10 ul -
REACTIVO DE TRABAJO 1000 ul 1000 ul 1000 ul

Procedimiento: Longitud de onda 505 nm/ T
0
: 37
0
C PUNTO FINAL





Incubar 5 min. a 37
0
C O 10 minutos a T
0
ambiente

Calculo de los resultados:

Trigliceridos mg/dl= Standard x [ ] 200
Desconocido
Valores Referenciales: menor de 200 mg/dl

3.- HDL- COLESTEROL: Recoge el colesterol sobrante de los tejidos y lo traslada
hasta el hgado, donde ser eliminado. Por tanto, cuanto mayor sean los niveles del
colesterol HDL, mayor cantidad de colesterol ser eliminado de la sangre.

Para la determinacin del colesterol presente en las principales lipoprotenas que lo
contienen como HDL (lipoprotenas de alta densidad) y LDL (lipoprotenas de baja
densidad), es necesario:
Primero, la separacin selectiva de la lipoprotena correspondiente con agentes
precipitantes.
Segundo, la cuantificacin del colesterol presente en dicha lipoprotena como se
indic anteriormente.

Entre estos reactivos precipitantes estn el sulfato de dextrano que precipitan a las
LDL y VLDL (lipoprotenas de muy baja densidad) mientras que las HDL permanecen
en solucin.

Procedimiento: Longitud de onda 505 nm/ T
0
: 37
0
C PUNTO FINAL
DESCONOCIDO
MUESTRA 0.3ml (300ul)
REACTIVO DE PRECIPITACION 1 gota
Mesclar y dejar reposar 15 mina T
0
ambiente (20-25
0
C). Centrifugar a 10 000 rpm x 2 min




Incubar 5 min. a 37
0
C o O 10 minutos a T
0
ambiente

Calculo de los resultados:

Colesterol HDL mg/dl= Standard x [ ]200
Muestra
Valores Referenciales: mayor o igual de 35 mg/dl .




B S D
SUERO - - 10 ul
STNDARD - 10 ul -
REACTIVO DE TRABAJO 1000 ul 1000 ul 1000 ul

SOBRENADANTE 10 ul
REACTIVO DE COLESTEROL 1000 ul
4.- LDL-COLESTEROL: se encargan de transportar el colesterol a los tejidos para su
utilizacin. Este es el colesterol que, en exceso, puede quedar adherido a las paredes
de los vasos sanguneos por lo que es recomendable mantener bajos los niveles del
colesterol LDL.

PROCEDIMIENTO: Longitud de onda 500 nm/ T
0
: 37
0
C PUNTO FINAL
DESCONOCIDO
MUESTRA 0.2ml (200ul)
REACTIVO DE PRECIPITACION 0.1 ml (100 ul)
Mesclar y dejar reposar 15 mina T
0
ambiente (20-25
0
C. Centrifugar a 10 000 rpm x 2 min

SOBRENADANTE 10 ul
REACTIVO DE COLESTEROL 1000 ul
Incubar 5 min. a 37
0
C O 10 minutos a T
0
ambiente

Calculo de los resultados:

Colesterol LDL mg/dl= C .T - (1.5 x colesterol sobrenadante)

Valores Referenciales: menor o igual de 150 mg/dl .

COLESTEROL LDL (mg/dl) = CT- [(TRIG/5) + COL- HDL]
Nota: Esta formula solamente funciona cuando el valor de los triglicridos no pasa
los 400 mg/dl.
5.- VLDL- COLESTEROL: es la sigla en ingls que corresponde a lipoprotena de muy
baja densidad (LMBD en espaol). Las lipoprotenas son sustancias hechas de
colesterol, triglicridos y protenas, que llevan el colesterol, los triglicridos y otros
lpidos a diferentes partes del cuerpo.
Son partculas ricas en triglicridos. Los triglicridos de VLDL son de origen endgeno,
principalmente heptico y constituyen alrededor de la mitad de la masa de las
partculas. Las VLDL estn compuestas por 6-10% de protenas, 20-30 % de
colesterol, 45-65 % de triglicridos y 15-20 % de fosfolpidos.
PROCEDIMIENTO:
Colesterol VLDL = triglicridos
5
Valor de referencia 10,0 - 30,0 mg/dl