Tema 5.

ENZIMAS
1. Dencn y estructura.
2. Mecansmo de accn de as reaccones enzmtcas
3. Cntca enzmtca
4. Reguacn de a actvdad enzmtca
1. ENZIMAS. DEFINICIN Y ESTRUCTURA
Los enzmas son protenas que actan como catazadores en
as rutas metabcas, aumentando a veocdad de as reaccones.
Son, por tanto, bocatazadores, catazadores de as reaccones
bogcas que, a reba|ar a energa de actvacn, aumentan a
veocdad de as reaccones y no se consumen durante a reaccn,
sendo a cantdad de enzmas a msma a prncpo y a na de a
reaccn.
Las prncpaes caracterstcas de as enzmas son:
a) Tener un peso moecuar muy eevado (13.000- 1.000.000
datones).
b) Ser protenas gobuares.
c) Ser soubes en agua, o que es permte dfundr en os qudos
nternos y poder actuar tanto a nve ntra como extraceuar.
d) Actar a pHs y temperaturas muy suaves y con unas
concentracones de sustrato muy ba|as, pero ser, sn embargo,
muy ecaces, ncrementando a veocdad de reaccn hasta
ms de un mn de veces.
e) Ser muy especcos: actan excusvamente sobre un sustrato o
sobre varos muy reaconados entre s. Lo norma es que acten
en una soa reaccn.
f) Su actvdad puede ser reguada por factores: se aman
activadores a aqueos factores que actan aumentando a
veocdad de reaccn, os inhiidores son os que dsmnuyen
a veocdad de reaccn o mpden que se produzca.
Estr!ct!ra de "os en#imas
Segn su composcn moecuar, hay dos tpos de enzmas:
1) En#imas estrictamente $roteicas. So contenen cadenas
popptdcas.
2) %o"oen#imas. Consttudas por una fraccn popptdca
denomnada a$oen#ima y por una fraccn no popeptdca,
denomnada co&actor. Los cofactores, segn su composcn,
pueden ser:
a. Co&actores inor'(nicos. Son ones metcos, como e
Mg
2+
, e Mn
2+
, e Fe
3+
, e Fe
2+
o e Zn
2+
.
b. Co&actores or'(nicos o coen#imas. Son mocuas
orgncas, como e ATP, e NAD
+
, e NADP
+
, o a coenzma
A (Co-A). Muchas vtamnas son precursoras de
coenzmas.
Cuando os cofactores se encuentran undos fuertemente,
medante enaces covaentes a apoenzma, se denomnan
'r!$os $rost)ticos (por e|empo, e grupo hemo de as
ctocromo-oxdasas)
-1-
A*+ENZIMA , C+FACT+R -
%+.+ENZIMA
(parte proteca) (eemento metco (enzma
competo)
o mocua orgnca)
La unn de coenzma a apoenzma da ugar a a mocua
actva u hooenzma. Los cofactores no sueen ser especcos de un
soo apoenzma. Durante a reaccn enzmtca sueen aterarse,
pero, una vez acabada esta se regeneran rpdamente vovendo a
ser funconaes.
La cadenas popeptdcas de as enzmas estn formadas por
tres tpos de amnocdos: 1) Amnocdos estructuraes, son
necesaros para mantener a estructura de a enzma; 2) Amnocdos
de |acn, que estabecen enaces dbes con e sustrato y se unen a
; y 3) Amnocdos catazadores que estabecen enaces, dbes o
fuertes (covaentes) con e sustrato y provocan a ruptura de aguno
de sus enaces. Son , por tanto, os responsabes de su
transformacn.
Los amnocdos catatcos, |unto con os de |acn, consttuyen e
centro activo de a enzma que es a regn de enzma a a que se
une e sustrato. Los centros actvos tenen as sguentes
caracterstcas: 1) Consttuyen una parte muy pequea de voumen
tota de a enzma; 2)Tenen una estructura trdmensona en forma
de hueco que facta e enca|e de sustrato, de ah su especcdad,
ya que e sustrato tene una estructura espaca compementara a a
de centro actvo; 3) Estn formados por amnocdos que, aunque
dstantes en a secuenca popeptdca, debdo a a estructura
tercara de sta, quedan prxmos entre s; y 4)Los radcaes de
agunos de estos amnocdos presentan andad qumca por e
sustrato, por o que o atraen y estabecen puentes dbes con .
Esto facta que, una vez roto agunos de sus enaces, os productos
resutantes se puedan separar con facdad de centro actvo.
Las rio#imas, son ARNs que actan como enzmas, sn ser
protenas.
Las iso#imas/ son formas moecuares dferentes pero que catazan
a msma reaccn qumca. Son actvas en as msmas cuas pero en
etapas dferentes de su cco vta o ben actan en cuas smares
pero de otros rganos.
2. MECANISMO DE ACCIN DE LAS REACCIONES ENZIMTICAS
Recordemos os conceptos de reaccones endotrmcas y
exotrmcas; as prmeras necestan energa, mentras que as
segundas a desprenden. Sn embargo, en ambos casos se necesta
una ener'0a de activaci1n para acanzar e estado de transici1n2
-2-
a) Reaccn endotrmca b) Reaccn exotrmca
En e estado de transici1n as mocuas acanzan e nve ms ato
de energa, a partr de , a reaccn se da espontneamente.
A a dferenca de energa exstente entre e nve de energa basa de
os sustratos y e de estado de transcn, se e ama ener'0a de
activaci1n, sta se dene como as kocaoras necesaras para que un mo
de una sustanca acance e estado de transcn.
En as reacciones es$ont(neas, as energa de actvacn es tan
ba|a que se obtene de a propa energa cntca de as mocuas o ncuso
de a uz que ncde en e ugar de reaccn. En as reacciones no
es$ont(neas, sn embargo, a energa de actvacn es tan ata que a
reaccn no se produce a son ser que se e sumnstre caor. Como en os
seres vvos esto no es posbe, a soucn est en que ntervenga un
catazador bogco, un enzma.
La acci1n cata"i#adora de as enzmas consste en reba|ar a
energa de actvacn para egar fcmente a estado de transcn y
permtr que a reaccn se eve a cabo. Sn e catazador no sera posbe
acanzar e estado de transcn.
-3-
Los enzmas reazan su accn favorecendo a aproxmacn de
as mocuas de os reactvos, pero eos no actan como reactvos y,
por tanto, no se consumen en a reaccn.
Todas as reaccones metabcas, savo aguna excepcn, son
reaccones catazadas por enzmas.
Las reaccones catabozadas por enzmas tenen ugar en tres etapas:
1) Formacn de compe|o enzma-sustrato; 2) Reazacn de a reaccn por
parte de cofactor, y 3) Lberacn de producto.
1. F+RMACIN DE. C+M*.E3+ ENZIMA4SUSTRAT+ 5ES6, por a
unn de sustrato a a apoenzma. Esta unn es atamente
especca, para cada sustrato y para cada reaccn se necesta
una enzma concreta. La es$eci7cidad en#im(tica se debe a a
estructura de centro activo de a enzma, con una forma
espaca en a que se acopa e sustrato. Este acopamento se ha
comparado a de una ave con su cerradura.
La teor0a de "a ""ave 8 "a cerrad!ra fue propuesta en 1890 por
Em Fscher y se sgue consderando, en genera, correcta, aunque
hoy se sabe que en agunas enzmas e centro actvo es capaz de
modcar su forma para adaptarse a sustrato. Sera ago
seme|ante a a ntroduccn de una mano en un guante: a propa
mano (e sustrato) hace que e guante (apoenzma) se adpte a su
forma. Esta forma de acopamento enzma-sustrato fue propuesta
por Koshand en 1958 y se denomna teor0a de" a9!ste o
aco$"amiento ind!cido.
-4-
La unn enzma sustrato es reversbe:
.
Debdo a esa reversbdad esta etapa es a ms enta de as
tres.
La unn de os amnocdos de centro actvo a sustrato
consgue debtar os enaces de ste. Eso provoca cambos
energtcos que permten acanzar ms fcmente e estado de
transcn, dsmnuyendo a energa de actvacn.
2. E. C+FACT+R ..E:A A CA;+ .A REACCIN y se obtene
e producto na P. Esta etapa es muy rpda e rreversbe:
En caso de no exstr cofactores, a accn catatca a reazan
agunos amnocdos de propo centro actvo.
3. E. *R+DUCT+ SE .I;ERA DE. CENTR+ ACTI:+ y a
apoenzma queda bre para vover a unrse a nuevas
mocuas de sustrato.
Los enzmas so aceeran as reaccones, no ateran e
equbro de as msmas, n modcan su baance energtco. No
aparecen en e producto, n sufren una ateracn permanente.
Adems son muy ecaces. Por e|empo, un mocua de cataasa
desdoba un mn de mocuas de agua oxgenada en un segundo,
s esta reaccn se produ|era sn a actuacn de a cataasa tardaran
4 MESES en desdobarse para dar agua y oxgeno.
3. CIN<TICA ENZIM=TICA
La cntca enzmtca estuda a veocdad a a que se producen
as reaccones catazadas por enzmas. Esta veocdad depende de
varos factores:
-5-
>?. C+NCENTRACIN DE. SUSTRAT+. La veocdad de una
reaccn enzmtca aumenta proporconamente con e aumento de
a concentracn de sustrato. Pero este aumento no es mtado, ega
un momento en que a veocdad se hace constante.
Esto ocurre porque, a prncpo, exste enzma bre y, a mayor
nmero de mocuas de sustrato ms producto aparecer, pero,
cuando todas as mocuas de enzma dsponbes estn ocupadas
por mocuas de sustrato (formando compe|os ES) ya no es posbe
ncrementar a veocdad. En estas condcones por ms que se
aumente a cantdad de sustrato, a veocdad de reaccn se
mantene gua. En este punto consderamos que se ha acanzado a
veocdad mxma y que e enzma est saturado. En estas
condcones, segn se forman as mocuas de producto, as enzmas
van berndose y pueden aceptar nuevas mocuas de sustrato.
S conocemos a concentracn de sustrato presente, podemos
cacuar a veocdad de reaccn para esa concentracn medante a
ecuacn de MICHAELIS-MENTEN:
K
M
= CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN, se dene como a
concentracn de sustrato a a cua a veocdad de reaccn es a
mtad de a veocdad mxma. K
M
es una
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constante para cada enzma que acta sobre un sustrato. E vaor de
esta constante depende de a andad de enzma en cuestn por e
sustrato: a menor K
M
, mayor andad de enzma por e sustrato, y
mayor K
M,
menor andad. Los vaores de K
M
son prxmos a os de a
concentracn sogca de sus sustratos, de forma que pequeas
varacones en a |S| pueden suponer grandes cambos en a
veocdad de toda ruta metabca.
@?. C+NCENTRACIN DE. ENZIMA. La veocdad de una
reaccn es drectamente proporcona a a concentracn de enzma.
En este caso sempre se mantene a proporconada: a mayor
concentracn de enzma, mayor veocdad de reaccn.
La veocdad de una reaccn enzmtca es funcn de a cantidad de
en#ima y de a concentraci1n de s!strato.
4. REAU.ACIN DE .A ACTI:IDAD ENZIM=TICA
La actvdad enzmtca se ve nuda por varos factores, como
son e pH, a temperatura y a presenca de nhbdores.
>?. E. $%. E pH de medo es e responsabe de que os grupos
funconaes de os enzmas (-COOH, -NH
2,
-OH, SH
2
) puedan estar
cargados de forma postva o negatva, o ben, posean carga neutra.
Las varacones de pH pueden ocasonar un cambo en a estructura
trdmensona de as enzmas que puede afectar a su actvdad.
Todos os enzmas tenen dos vaores de pH mte entre os
cuaes son efectvos, esos vaores corresponden a un pH mxmo y a
un pH mnmo. Traspasados esos vaores se desnaturazan y de|an de
actuar. Entre esos mtes exste un vaor de pH ptmo en e cua e
enzma posee una ecaca mxma. En a mayora de os enzmas
este pH est prxmo a 7. Exsten excepcones, por e|empo as
enzmas dgestvas pepsna, cuyo pH
ptmo
= 2, o a trpsna, cuyo
pH
ptmo
= 7,8.
-7-
@?.4 .A TEM*ERATURA. Iguamente, exsten dos vaores
extremos y una temperatura ptma a a cua e enzma es ms ecaz.
Pero en este caso a actvdad de enzma, a partr de un vaor,
aumenta proporconamente con a temperatura, pero una vez
acanzada a temperatura mxma, a cada es ms brusca que en e
caso de pH y pronto se acanza a temperatura de desnaturazacn
de a enzma.
.os camiios de $% 8 de tem$erat!ra nuyen en a
veocdad de as reaccones enzmtcas, pero, habtuamente, no se
utzan como medo de reguacn en un organsmo, ya que deben
mantenerse constantes. En medos sogcos, se utzan os
actvadores y os nhbdores como mecansmos de reguacn para
que so permanezcan actvas as enzmas que se precsen en cada
momento, evtando a acumuacn nnecesara de productos que
podra tener efectos negatvos.
B?. *RESENCIA DE ACTI:AD+RES. Los actvadores permten
que certas enzmas que se mantenan nactvas even a cabo su
accn, es decr, se actven. Normamente, a unn de enzma con e
actvador hace que e centro actvo adquera a estructura adecuada
para su acopamento con e sustrato.
Agunos catones como e Mg
2+
o e Ca
2+
, desempean un pape
mportante como actvadores enzmtcos.
Tambn pueden actuar como actvadores dversas mocuas
orgncas, ncuso e propo sustrato. En este caso, a enzma
permanece nactva hasta que aparece e sustrato; es decr, s no hay
sustrato, no es necesara a actvdad de a enzma correspondente,
pero s o hay, se produce a actvacn para que se eve a cabo a
reaccn.
C? *RESENCIA DE IN%I;ID+RES. Los nhbdores son
sustancas que dsmnuyen o anuan a actvdad de una enzma. Los
nhbdores pueden ser agn n o, tambn, aguna mocua
orgnca y, muy frecuentemente, e producto na de a reaccn. En
este tmo caso, en e que a enzma se nhbe cuando ya no se
necesta obtener ms cantdad de producto y a sea para eo es e
propo producto, se haba de inhiici1n &eed4acD o
retroinhiici1n.
-8-
La nhbcn puede ser:
1. IRRE:ERSI;.E. E nhbdor se une permanentemente a
enzma y ste ya no puede recuperar a actvdad. Este tpo de
nhbcn no se suee dar en medos sogcos, es decr, estos
nhbdores no se sueen dar en a naturaeza. Son os denomnados
"venenos metabcos" que se unen covaentemente a a enzma. Los
nhbdores rreversbes son productos de aboratoro, por e|empo o
son os gases nervosos (como e uorofosfato de dsopropo (DFP))
utzados en a fabrcacn de nsectcdas y pestcdas. Otro e|empo
es e canuro que boquea a enzma respratora ctocromo-oxdasa.
2. RE:ERSI;.E. E nhbdor acta so durante un tempo y
cuando de|an de actuar e enzma recupera su actvdad. En este caso
a unn de nhbdor con a enzma se reaza por enaces no
covaentes (ncos o puentes de hdrgeno). Este es e tpo de
nhbcn que se da en medos sogcos.
Segn e ugr de unn a a enzma se dferencas dos tpos de
nhbcn reversbe:
a6 Inhiici1n com$etitiva. E nhbdor se une a centro actvo
de a enzma, mpdendo que e sustrato pueda hacero. En este
caso se forma un compe|o enzma-nhbdor que no cataza a
reaccn. Exste una competenca entre e nhbdor y e sustrato
por ocupar e centro actvo. S ste es ocupado por e sustrato,
a reaccn se da y s es ocupado por e nhbdor no se da. E
grado de nhbcn depende de a proporcn reatva entre
sustrato e nhbdor.
En este caso, como e nhbdor tene que acoparse a centro
actvo, su forma espaca debe tener gran seme|anza con a
forma de sustrato. Por eso a estos nhbdores se es ama
an("o'os meta1"icos.
En a actuadad se sntetzan frmacos cuya estructura espaca
es smar a sustrato de aguna enzma que se desea nhbr. De
esta forma, e frmaco acta como nhbdor compettvo y se
pueden corregr patoogas causadas por a accn de certas
enzmas. Por e|empo, as s!"&amidas, que se empean en e
tratamento de certas nfeccones bacteranas compten con e
(cido $4aminoen#oico.
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6 Inhiici1n no com$etitiva. E nhbdor no boquea e centro
actvo sno que se une a otro punto dferente de a enzma. A
unrse modca a estructura de a enzma a tempo que
dcuta e acopamento con e sustrato, de manera que e
sustrato ya no puede unrse a centro actvo.
En este caso, e nhbdor puede unrse tambn a compe|o ES,
no permtendo que se produzca a reaccn.