El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son
demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. Cualquier microscopio requiere de una fuente (como un haz de fotones o de electrones), una muestra sobre la que acta dicha fuente, un receptor de la informacin proporcionada por la interaccin de la fuente con la muestra, y un procesador de esta informacin (en general, un ordenador). Tipos de microscopios: Microscopio electrnico de barrido. Microscopio ptico Microscopio simple Microscopio compuesto Microscopio de luz ultravioleta Microscopio de fluorescencia Microscopio petrogrfico Microscopio en campo oscuro Microscopio de contraste de fase Microscopio de luz polarizada Microscopio con focal Microscopio electrnico Microscopio electrnico de transmisin Microscopio electrnico de barrido Microscopio de iones en campo Microscopio de sonda de barrido Microscopio de efecto tnel Microscopio de fuerza atmica Microscopio virtual Microscopio de antimateria Microscopio rectal Microscopio nuclear
Partes: OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. El TUBO PTICO: se puede acercar o alejar de la preparacin mediante un TORNILLO MACROMTRICO o de grandes movimientos que sirve para realizar un primer enfoque. BRAZO: Es una pieza metlica de forma curvada que puede girar; sostiene por su extremo superior al Tubo ptico y en el inferior lleva varias piezas importantes. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. PINZAS DE SUJECION: Parte mecnica que sirve para sujetar la preparacin. La mayora de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y transversal de la preparacin. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. El condensador de la parte de abajo tambin se llama FOCO y es el que dirige los rayos luminosos hacia el condensador. TORNILLOS DE ENFOQUE: Micromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto. BASE: Sujecin de todo el microscopio. Sobre la PLATINA se coloca la preparacin que se va a observar con un Orificio central por el que pasa la Luz procedente del Espejo. El ESPEJO con una cara plana y otra cncava, est montado sobre un eje giratorio ubicado en la zona ms inferior del brazo por debajo de la Platina.
El estudio de los organismos vivos requiere de aparatos de precisin como lo es el microscopio, en el laboratorio de biologa empleamos dos tipos: MICROSCOPIO COMPUESTO. El cual utiliza un juego de 2 lentes (ocular y objetivos) para ampliar la imagen, la cual se observa invertida. Las muestras apropiadas para su observacin sern aquellas que dejen pasar luz a travs de ellas, debern de ser monoculares. MICROSCOPIO ESTEREOSCOPICO O LUPA BINOCULAR. La visin se obtiene por reflexin de la luz que incide sobre la muestra, posee un inversor que permite observar la imagen derecha. Su observacin es generalmente de conjunto, debido a su gran campo; por ejemplo: se puede observar una mosca completa, mientras que en microscopio compuesto, slo sera posible ver las alas y stas por ser muy transparentes. La visin estereoscpica o sensacin de relieve se obtiene cuando cada ojo recibe una imagen por separado captada por cada sistema ptico prcticamente cada ocular constituye un microscopio compuesto independiente. Aunque las variaciones del microscopio son muy diversas, podemos considerar que bsicamente estn constituidos por 3 sistemas: a) Sistema mecnico; b) Sistema de iluminacin; c) Sistema ptico.
a) SISTEMA MECNICO Base o pie. Soporta las dems estructuras del microscopio y contiene a la fuerza de luz. Brazo. Une a la base con el tubo ocular, contiene a los tornillos macromtricos y micromtricos, sirve de apoyo para trasladar el microscopio. Tornillo macromtrico. Proporciona avances rpidos en la platina, en el orden de centmetros. Tornillo micromtrico. Proporciona avances en la platina en orden de milmetros. Platina. Sirve para colocar las muestras a observar y contiene al condensador y al diafragma Carro de platina. Controla los desplazamientos del portaobjetos. Revlver. Contiene a las lentes oculares. (10X, 40X, 100X)
b) SISTEMA DE ILUMINACION CONDENSADOR. Est situado por debajo de la platina de modo que puede subir o bajar, su funcin es concentrar y enfocar los rayos provenientes de la fuente luminosa situada en la base del microscopio a fin de iluminar el campo visual. Diafragma o iris. Se localiza en la parte inferior del condensador, una abertura regulable por medio de una placa lateral que va a controlar la cantidad de luz que saldr hacia el condensador. Fuente luminosa. Se localiza en el pie o base del microscopio, es generalmente una lmpara integrada a la base.
c) SISTEMA OPTICO Lente objetivo. Aumenta la imagen de la muestra a observar; se presenta en diversos aumentos: Lupa (X), Seco dbil (10 X), Seco fuerte (40 X), e Inversin (100 X). NOTA: La palabra SECO para las lentes de 10 X y 40 X, se emplea porque para su utilizacin no se requiere colocar ninguna sustancia entre el lente y la preparacin. La palabra INMERSION se emplea porque se debe sumergir la lente 100 X en aceite de inmersin, para poder observar con nitidez la muestra. Lente ocular. Amplia la imagen producida por el lente objetivo, est localizada en la parte superior del tubo del microscopio. NOTA: El smbolo X (por) que aparece despus del nmero de cada lente, significa que se deber multiplicar el aumento de la lente objetivo por el aumento de la lente ocular, para as obtener el aumento total alcanzado por el juego de lentes.
CUIDADO 1. Traslado. Se toma con la mano derecha el brazo del microscopio y con la mano izquierda la base. 2. El cordn se deber enrollar sobre s mismo, no alrededor del cuerpo del microscopio. 3. El microscopio se encender hasta que comience la observacin. 4. Ya encendido, no se apagar constantemente, sino hasta finalizar la observacin de todas las muestras que se indiquen en la prctica, mientras no se observe, se disminuir la intensidad luminosa. 5. Mientras permanezca encendido se evitar realizar cualquier movimiento brusco. 6. Se evitar manejarlo con las manos hmedas o mojadas. 7. Cuando no se est observando, deber eliminarse la lente ocular con el objeto de menor aumento. 8. El sistema ptico y de iluminacin nunca deber ser tocado con los dedos. 9. No se debern colocar los portaobjetos mojados sobre la platina. 10. Despus de usar el lente de inmersin se deber limpiar con un pao suave o con un papel higinico. 11. En las preparaciones en fresco siempre deber cubrirse con cubreobjetos. MANTENIMIENTO GENERAL DEL MICROSCOPIO El mantenimiento del microscopio implica mucho cuidado, paciencia y dedicacin. Procedimientos de limpieza. La limpieza del microscopio es una de las rutinas ms importantes y debe considerarse un procedimiento rutinario. Para realizar la rutina de limpieza se requiere lo siguiente: Materiales: 1. Una pieza de tela limpia, de textura similar a la de los pauelos. 2. Una botella de lquido para limpieza de lentes. Se consigue en las pticas. Normalmente no afecta los recubrimientos de los lentes y tampoco afecta los pegantes o cementos utilizados para el montaje de los mismos. Entre los lquidos de limpieza ms utilizados se encuentran el etil ter, el xileno y la gasolina blanca. 3. Papel para limpieza de lentes. Se consigue normalmente en las pticas. Si no es posible conseguir este material, se puede sustituir con papel absorbente suave o con algodn tipo medicinal. Tambin puede utilizarse un trozo de seda suave. 4. Una pieza de gamuza muy fina. Se puede conseguir en peleteras. 5. Una pera de caucho para soplar aire. Se puede fabricar en el laboratorio un dispositivo con este propsito, acoplando una pipeta tipo Pasteur, con la pera de caucho. 6. Una cubierta plstica. Se utiliza para proteger el microscopio del ambiente externo cuando no est en uso. Tambin podra utilizarse una bolsa de tela de textura similar a la de los pauelos. 7. Un pincel suave de pelo de camello o un pincel fino para pintura. Lo importante es que el pelo del pincel sea natural, de longitud uniforme, textura muy suave, est seco y libre de grasa. En los almacenes que distribuyen artculos de fotografa, es posible conseguir este accesorio. Tambin es posible encontrar un equivalente en tiendas especializadas en suministro de cosmticos. 8. Un paquete 250 g de material desecante (silica gel). Este material se utiliza para mantener controlada la humedad en la caja de almacenamiento del microscopio, si la misma es hermtica. Este material cambia de color cuando se encuentra saturado de humedad, aspecto que permite detectar si requiere ser sustituido o renovado. Cuando est en buen estado, por lo general, es de color azul; cuando se encuentra saturado de humedad, es de color rosado. 9. Bombillos y fusibles de repuesto. De la clase instalada por el fabricante o un equivalente de las mismas caractersticas del original. Precaucin: Algunos fabricantes recomiendan no utilizar alcoholes o acetonas, debido a que pueden afectar disolver los cementos o pegantes utilizados para fijar los lentes.
Nota: Todos los materiales requeridos para efectuar la limpieza deben mantenerse limpios y guardados en recipientes que los protejan del entorno externo. Limpieza de los elementos pticos. En un microscopio se encuentran dos tipos de elementos pticos: los externos, que estn en contacto con el ambiente que rodea el equipo, y los internos, que se encuentran dentro del cuerpo del microscopio las partes internas de los objetivos, oculares, espejos, prismas, condensador, iluminador, etc. y que no tienen un contacto directo con el ambiente que rodea el equipo. Los procedimientos de limpieza, aunque similares, difieren en cuanto al cuidado y precauciones que deben preverse. 1. Los elementos pticos externos de los oculares, los objetivos, el condensador y el iluminador se limpian frotando suavemente la superficie de los mismos, con el pincel de pelo de camello. Esto remueve las partculas de polvo que hayan podido encontrarse depositadas sobre la superficie de los mismos. A continuacin, se utiliza la pera para soplar chorros de aire sobre la superficie de los lentes y asegurar que los mismos quedan libres de polvo. Si el polvo se encuentra adherido a la superficie ptica, se utiliza la pieza de tela limpia y de forma muy suave se efecta un pequeo movimiento circular, sin ejercer mayor presin sobre la superficie del lente. Con la pera se sopla nuevamente la superficie del lente. Esto retira las partculas adheridas. Podra tambin utilizarse una pieza de gamuza fina. En este caso se instala la pieza de gamuza en la punta de un pequeo cilindro de dimetro ligeramente inferior al del lente y, sin ejercer mayor presin, se efecta una rotacin de la misma sobre la superficie del lente. Finalmente, con la pera, se sopla aire sobre la superficie del lente. Esto basta para limpiar las superficies externas. La pieza de gamuza puede humedecerse con agua destilada. 2. En condiciones adecuadas de instalacin, las superficies interiores de los elementos pticos no deben resultar afectadas por la presencia de polvo o partculas. Si por alguna circunstancia aparecen partculas sobre la superficie interior de los lentes, se necesita abrirlos para efectuar la limpieza. Nunca debe abrirse un ocular u objetivo, si no se cuenta con un ambiente limpio en el cual realizar el procedimiento de limpieza. Las superficies pticas interiores se limpian con el pincel de pelo de camello y con la pera para soplar aire, siguiendo un procedimiento anlogo al anteriormente explicado; se recomienda no desmontar por ningn motivo los elementos pticos para no alterar las tolerancias de ensamble del fabricante. Si se desmontan, sera necesario alinear nuevamente los elementos y esto solo es factible siguiendo instrucciones precisas del fabricante. La limpieza de los objetivos se limitar a conservar limpios los lentes frontal y posterior. 3. Si se detectan residuos de aceite de inmersin en la superficie de los lentes, este debe removerse utilizando papel especial para limpieza de lentes o algodn tipo medicinal. A continuacin, la superficie del lente debe limpiarse con una solucin compuesta de 80 % ter petroleum y 20 % 2-Propanol2. Limpieza del cuerpo del microscopio 1. El cuerpo del microscopio puede ser limpiado con una solucin jabonosa que resulta til para remover la suciedad externa. La solucin jabonosa corta la grasa y el aceite. La misma puede aplicarse con un cepillo pequeo. Despus de que la grasa y la suciedad hayan sido removidas, debe limpiarse el cuerpo del microscopio con una solucin 50/50 de agua destilada y etanol al 95 %. 2. Las partes mecnicas, integradas por los mecanismos de ajuste macro/micromtrico ajuste grueso y fino, el mecanismo de ajuste del condensador y los mecanismos del carro portamuestras o plataforma, deben ser lubricados de forma peridica con aceite fino de mquina, para permitir su desplazamiento suave. Mantenimiento del microscopio. Entre las rutinas ms importantes para mantener un microscopio en condiciones adecuadas de operacin, se encuentran las siguientes: 1. Verificar el ajuste de la plataforma mecnica. La misma debe desplazarse suavemente, en todas las direcciones (X-Y) y debe mantener la posicin que selecciona o define el microscopista. 2. Comprobar el ajuste del mecanismo de enfoque. El enfoque que selecciona el microscopista debe mantenerse. No debe variar la altura asignada por el microscopista. 3. Verificar el funcionamiento del diafragma. 4. Limpiar todos los componentes mecnicos. 5. Lubricar el microscopio de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. 6. Confirmar el ajuste de la ua fijalminas. 7. Verificar el alineamiento ptico. Remocin de la pelcula de hongos. 1. Revisar y limpiar con frecuencia el microscopio, utilizando los procedimientos mencionados en el presente captulo. Controlar las condiciones de humedad donde se usa y almacena el microscopio. Si se mantiene una ventilacin adecuada, disminuye la posibilidad de que se inicie la formacin de hongos en el microscopio. 2. Si se detecta un crecimiento de hongos, utilizar una mota de algodn humedecida en una solucin limpiadora de hongos que normalmente es ter o xilol. Frotar suavemente siguiendo un movimiento circular, a lo largo de toda la superficie del lente. Tambin puede realizar un movimiento oscilatorio, hacia adelante y hacia atrs o izquierda-derecha-izquierda, ejerciendo sobre la superficie del lente una presin muy moderada. Si es necesario, repetir el procedimiento con una nueva mota de algodn. 3. Cuando se termine la remocin de la pelcula de hongos, limpiar con una mota de algodn limpio. Nota: Los hongos solo pueden ser removidos cuando su crecimiento se limita a la superficie de los lentes. Si dicho crecimiento no se atiende a tiempo, el hongo puede penetrar el cuerpo del lente. Si este es el caso, el lente se pierde, all ya es imposible removerlo. Atencin: Si el microscopio se utiliza con elementos potencialmente contaminados, debe ser limpiado con mayor frecuencia.