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CLNICAS VETERINARIAS
PEQUEOS ANIMALES
Radicales libres y antioxidantes
en el proceso inflamatorio
y en las lesiones por isquemia-reperfusin
Peter Vajdovich, PhD
Department of Internal Medicine and Clinics, Szent Istvn University,
H-1078, Istvn u. 2., P.O. Box 1400, Budapest, Hungary
RADICALES LIBRES Y ANTIOXIDANTES EN EL PROCESO
INFLAMATORIO
Generalidades sobre la inflamacin
La inflamacin es uno de los mecanismos de defensa del husped ms tiles e impor-
tantes. Sin una respuesta inflamatoria adecuada la vida no sera posible [1]. Tambin
es una de las formas ms comunes de lesionar los tejidos. La palabra inflamacin
significa literalmente quemazn. El romano Cornelio Celso formul sus famosos
signos cardinales de la inflamacin: calor, rubor, tumor y dolor. A esta lista clsica de
cuatro signos debe aadirse functio laesa o prdida de funcin. Este quinto signo sue-
le atribuirse a Galeno (130200 d. C.), pero en realidad se debe a Rudolf Wirchow
(18211902), el padre de la patologa moderna.
La inflamacin es un proceso en el que intervienen mltiples participantes celula-
res, humorales y tisulares. Comienza o est precedida por una lesin celular o tisular
que provoca ajustes hemodinmicos y de la permeabilidad. Rpidamente, los vasos
afectados exudan lquidos, protenas plasmticas y leucocitos. La maquinaria que acti-
va estos procesos incluye mediadores bioqumicos. Los distintos tipos de leucocitos
contribuyen a la reaccin de defensa debido a su capacidad para migrar, liberar enzi-
mas y, muchas veces, mediadores inflamatorios, e inducir la fagocitosis. En las reac-
ciones inflamatorias que provocan respuestas sistmicas suele producirse un aumento
de leucocitos circulantes en el torrente sanguneo (leucocitosis) y, por supuesto, en los
tejidos.
Aunque la inflamacin es una parte de la defensa del husped, puede provocar una
lesin tisular en el husped mayor que la que podra haber causado el estmulo inicial
si no se hubiera producido la respuesta inflamatoria (p. ej., las reacciones anafilcticas,
que son devastadoras para el organismo y la neutropenia inducida experimentalmente,
que previene la aparicin de neumona e hipoxia graves en los terneros infectados por
Mannheimia haemolytica). Muchas enfermedades, especialmente las enfermedades
inmunomediadas (p. ej., anemia hemoltica inmunomediada, dermatopatas autoinmu-
nitarias similares y peritonitis infecciosa felina), se asocian a reacciones inflamatorias
que no suponen un beneficio evidente para el husped, sino que le perjudican.
Direccin electrnica: vajdovich.peter@aotk.szie.hu
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La inflamacin es un proceso orientado a la supervivencia. Sin el proceso infla-
matorio, sera difcil contener las infecciones bacterianas, las heridas no cicatrizaran
bien y los tejidos lesionados no se repararan. Como ejemplos pueden citarse las
enfermedades granulomatosas que se desarrollan en los seres humanos que tienen
infecciones recurrentes graves. En estos pacientes se produce un profundo deterioro
del metabolismo exudativo de los leucocitos (es decir, en la generacin de radicales
libres reactivos de oxgeno) que da lugar a defectos de la funcin microbicida. El
sndrome de Chediak-Higashi (SCH) se ha descrito en los seres humanos, los visones
aleucianos, los ratones de color beige, el ganado Hereford parcialmente albino y los
gatos. El SCH es una enfermedad autosmica recesiva determinada genticamente
que se caracteriza por neutropenia, infecciones pigenas recurrentes asociadas gr-
nulos lisosomales fagocticos gigantes anormales y defectos de la actividad microbi-
cida. La deficiencia de la adherencia leucoctica (DAL) es una enfermedad rara que
se ha descrito en los seres humanos, el ganado vacuno (DAL bovina, DALB) y en los
perros, en la que los leucocitos carecen de un grupo relacionado de molculas de
adherencia funcionales en su superficie, las integrinas CD11/CD18. En la DAL algu-
nos leucocitos, en especial los neutrfilos, son incapaces de abandonar el torrente
sanguneo y entrar en los tejidos. La DAL se extendi mucho en Estados Unidos
entre las vacas frisonas Holstein porque el gen defectuoso se disemin debido a la
inseminacin artificial [2]. En los seres humanos tambin se ha descrito otra defi-
ciencia de las molculas de adhesin, la DAL 2.
Manifestaciones de la inflamacin aguda
Los tres componentes principales de la respuesta inflamatoria son [1]:
Cambios hemodinmicos. 1.
Cambios de la permeabilidad. 2.
Las clulas implicadas. 3.
Cambios hemodinmicos
Tras la primera seal de la respuesta inflamatoria se producen rpidamente alteraciones
de la permeabilidad de los vasos afectados y reacciones que afectan a los leucocitos. Las
alteraciones hemodinmicas son una cadena integrada de sucesos activada por mediado-
res bioqumicos, aunque en algunos casos se inician de forma transitoria debido a meca-
nismos neurognicos. Los cambios hemodinmicos siguen la siguiente secuencia:
Vasoconstriccin transitoria que dura algunos segundos (mecanismo neurognico). 1.
Vasodilatacin, que tarda unos minutos en aparecer y dura horas o ms. La 2.
liberacin de histamina hace que se formen mastocitos y se produzcan xido
ntrico (NO) y prostaglandinas (PGD
2
, PGE
2
), lo que causa hiperemia activa local
aguda.
El volumen del flujo sanguneo aumenta en la zona debido a la vasodilatacin. 3.
El aumento de la permeabilidad vascular (histamina, leucotrienos LTC 4.
4
, -D
4
, y -E
4
,
bradicinina y factor activador plaquetario [PAF]) produce contraccin de las clu-
las endoteliales, por lo que se producen fisuras en los vasos pequeos. Los facto-
res del complemento (C5a y C3a) participan indirectamente induciendo la libe-
racin de histamina en los mastocitos.
El caudal del flujo disminuye debido a la vasodilatacin que existe en la zona I. 5.
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Se produce marginacin de los leucocitos a lo largo de las paredes vasculares: 6.
la disminucin del caudal del flujo produce una disminucin de la fuerza de
resistencia de los leucocitos cuando entran en contacto con la pared de los vasos,
por lo que las molculas de adhesin que se encuentran sobre los leucocitos y
las clulas endoteliales pueden permanecer unidas. Tambin aumentan el nmero
y la avidez de las molculas de adhesin. Cuando la permeabilidad vascular
aumenta mucho, se filtran ms protenas en los tejidos.
Se produce exudacin: los leucocitos migran hacia los tejidos, igual que el suero. 7.
Cambios de la permeabilidad
Tras la lesin local puede producirse directamente filtracin vascular, causada por
cualquier clase de lesin estructural de la microvasculatura que afecta a todos los tipos
de vasos, o indirectamente, como un efecto de las sustancias bioqumicas que aparecen
en, y alrededor, de la zona y afectan principalmente a las vnulas.
La permeabilidad puede ser un proceso pasivo que afecta al paso de lquido entre
las clulas endoteliales o un proceso activo en el que las clulas endoteliales crean
vesculas endocitticas y descargan el contenido al otro lado de la barrera mediante
transporte activo dentro de la propia clula.
El edema puede desarrollarse mediante dos mecanismos principales: hidrosttico o
debido a mediadores bioqumicos que estn almacenados y se liberan desde las clulas
(es decir, histamina y serotonina de los mastocitos, granulocitos basfilos y plaquetas)
o que se sintetizan rpidamente. Los mediadores bioqumicos incluyen:
Cininas plasmticas, como bradicinina, que se activan o se adhieren enzimti- 1.
camente por la accin de proteinasas plasmtica, como el factor de Hageman
(XIIa).
Factores del complemento, como C5a y C3a, que inducen la liberacin de 2.
mediadores desde los leucocitos.
Leucotrienos que se producen a travs de la cascada del cido araquidnico 3.
(AA) y que actan independientemente de los granulocitos de los neutrfilos
(LTC
4
, LTD
4
, LTE
4
) o actan a travs de cambios de la permeabilidad dependien-
tes de los neutrfilos (LTB
4
).
Prostaglandinas, como PGE 4.
2
y PGI
2
, que producen vasodilatacin y filtracin
vascular, y tromboxano A
2
que causa filtrado vascular solamente.
Citocinas, como interleucina (IL)-1 y el factor de necrosis tumoral (TNF)- 5. que se
sintetizan en los leucocitos e inducen la segunda fase de la filtracin vascular
PAF, que afecta tanto al endotelio como a los leucocitos. 6.
Los siguientes mediadores producen contraccin de las clulas endoteliales, que da
lugar a fisuras en los vasos pequeos:
La histamina (de los mastocitos) causa un efecto transitorio y a corto plazo que 1.
puede eliminarse con antihistamnicos. (Otros mediadores son LTC
4
, LTD
4
, LTE
4
y
bradicinina.)
PAF. 2.
La serotonina (slo en los mastocitos de los roedores) tiene un efecto prolongado 3.
(34 horas). (Los antihistamnicos no invierten los cambios.)
El complemento, como C5a y C3a, participa indirectamente induciendo la libe- 4.
racin de histamina por los mastocitos.
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Los mediadores bioqumicos de la permeabilidad vascular pueden ejercer sus efec-
tos actuando directamente sobre la microvasculatura (p. ej., histamina y LTC
4
, LTD
4
y
LTE
4
) o utilizando los leucocitos como intermediarios (p. ej., citocinas).
Citocinas. Las citocinas inflamatorias pueden dividirse en dos grupos: las que partici-
pan en la inflamacin aguda y las responsables de la inflamacin crnica. IL-1, TNF-,
IL-6, IL-8, IL-11 y otras quimiocinas desempean una funcin en la inflamacin agu-
da. Las citocinas que participan en la inflamacin crnica pueden dividirse en dos
grupos. IL-4, IL-5, IL-6, IL-7 y IL-13 son las citocinas que median las respuestas
humorales. IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, los interferones (IFN), el
factor de crecimiento transformante (TGF)- y TNF- median las respuestas celulares.
Algunas citocinas, como IL-1, participan de forma significativa tanto en la inflamacin
aguda como crnica [3,4].
IL-8 y otras quimiocinas de bajo peso molecular (p. ej., protena inflamatoria de
macrfago-1) pertenecen a la familia de citocinas quimiotcticas y son responsables
de la migracin quimiotctica y de la activacin de los neutrfilos y otros tipos celulares
(p. ej., monocitos, linfocitos, basfilos y eosinfilos) en el sitio de la inflamacin [5].
La formacin de citocinas como IL-8 puede estar inducida por metabolitos reactivos
de oxgeno (MRO) como el perxido de hidrgeno (H
2
O
2
). El tratamiento con 1 mM de
H
2
O
2
produce la mxima expresin de IL-8 en clulas Caco-2 adultas sin filtrar
24 horas despus del tratamiento. Adems, puede inducir necrosis tisular. Se observ
que 1 mM de H
2
O
2
tena un efecto necrosante tardo en las clulas Caco-2 adultas sin
filtrar [6].
Tras un estmulo que induce inflamacin, se activa el factor nuclear kappa B
(NF-B), un activador de la transcripcin de varios genes inflamatorios [7]. Simult-
neamente, tambin puede activarse la ruta de la protena cinasa activada por mitogn
(MAPK) [8].
Los radicales libres de oxgeno regulan la activacin de los factores de transcrip-
cin, como NFB y la protena activadora 1, en varias clulas diferentes. Esta acti-
vacin da lugar a la expresin de muchas citocinas proinflamatorias, incluyendo
IL-1 [9].
Clulas implicadas
Los grupos bsicos de leucocitos que participan en las reacciones inflamatorias son los
granulocitos neutrfilos, eosinfilos y basfilos, mastocitos, monocitos y macrfagos,
linfocitos, y plasmocitos. Todos, excepto los mastocitos y los plasmocitos, son habi-
tantes normales de la sangre circulante. Cada uno de estos tipos celulares desempea
una funcin diferente y entra en el proceso inflamatorio en respuesta a un estmulo
especfico [1]. La produccin de clulas mieloides, como neutrfilos, eosinfilos,
basfilos y monocitos, est regulada principalmente por las siguientes citocinas: IL-3,
factor estimulante de colonias de granulocitos y macrfagos (GM-CSF), factor estimu-
lante de colonias de granulocitos (G-CSF) y factor estimulante de colonias de mono-
citos (M-CSF) [10].
Granulocitos neutrfilos o leucocitos polimorfonucleares. Generalmente, la madura-
cin de los granulocitos neutrfilos polimorfonucleares (PMN) en la mdula sea dura
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2 semanas, pero puede acelerarse si existe una gran demanda de neutrfilos circulan-
tes. En algunos casos, la maduracin se produce en el bazo y/o el hgado, a veces en
respuesta a un aumento de la demanda de estas clulas y a veces por razones eviden-
tes [1]. Los neutrfilos maduros permanecen en la circulacin menos de 1 da
(7-14 horas) y despus migran a los tejidos, donde pueden sobrevivir hasta 1-2 das;
no regresan a la circulacin. Sin embargo, los neutrfilos leucmicos pueden volver
a circular [10]. Normalmente, existen dos compartimentos funcionales de PMN en
la sangre: un compartimento marginal, formado por las clulas que se encuentran
en la luz de los vasos sanguneos, y un compartimento circulante, formado por las
clulas que fluyen libremente y que se encuentran en las muestras cuando se hacen
frotis sanguneos [1]. En los perros normales, el ganado bovino y los caballos, slo
la mitad de los neutrfilos circulan libremente y aproximadamente la mitad se
encuentran en el compartimento marginal, pero en los gatos, aproximadamente dos
tercios de los neutrfilos se encuentran en el compartimento marginal [10]. Cual-
quier mediador farmacolgico o bioqumico que afecte al nivel de los leucocitos o a
la funcin de las clulas endoteliales puede modificar el equilibrio entre los compar-
timentos marginal y circulante [1]. El compartimento marginal puede movilizarse
rpidamente bajo la influencia de la adrenalina y los corticoesteroides liberados a la
circulacin en respuesta a estmulos fisiolgicos y patolgicos. La adrenalina dismi-
nuye la adherencia aumentando la produccin de AMP cclico. Los frmacos antiin-
flamatorios no esteroideos (AINE) pueden inhibir la agregacin y la adherencia
inducidas por el complemento (C5a) in vitro [10].
La funcin principal de los neutrfilos en la respuesta inflamatoria implica su par-
ticipacin en la fagocitosis, la liberacin de sus enzimas lisosomales lticas y la forma-
cin de factores quimiotcticos [1].
Durante la fagocitosis, las clulas absorben las partculas extraas y luego las des-
truyen mediante sus enzimas y otros componentes que se encuentran principalmente
en los grnulos. Existen numerosas enzimas y otras sustancias en los grnulos neutr-
filos (lisosomas), y muchas de estas enzimas son proteolticas y digestivas. Cuando los
neutrfilos ingieren las partculas, las envuelven en una membrana celular, formando
fagosomas, que se fusionan con los lisosomas para formar fagolisosomas. La sntesis
de factores quimiotcticos tambin es una funcin esencial, ya que ciertos componen-
tes del complemento pueden activarse por enzimas de los neutrfilos, produciendo
quimioatractores (como C5a) para ms neutrfilos y PMN que producen LTB
4
, que da
lugar a la atraccin y activacin cclicas de los neutrfilos [1].
En los PMN de varias especies se han identificado varias clases y subclases de
grnulos (o compartimentos). Cada uno de los tipos principales de grnulos tiene un
perfil enzimtico distinto, que adems puede variar entre las especies. Los diferentes
grnulos aparecen en diferentes fases del desarrollo de los neutrfilos en la mdula
sea. Los grnulos azurfilos, o primarios, son los primeros en aparecer. Estos grnulos
son grandes, ovalados y electrodensos. Los grnulos especficos, o secundarios, son
ms pequeos, menos densos y ms numerosos [1].
En los neutrfilos maduros no puede demostrarse la presencia de grnulos azur-
filos con los mtodos que suelen utilizarse para teir los frotis de sangre debido a la
disminucin del contenido de glucosaminoglicanos (mucopolisacridos) en los gr-
nulos. Generalmente, la formacin de grnulos primarios se limita a la fase promie-
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locito. Se dividen en dos grupos: un grupo contiene grandes cantidades de pptidos
antibacterianos denominados defensinas o beta-defensinas (en el ganado bovi-
no) y el otro grupo no contiene estos pptidos, pero su perfil enzimtico es muy
parecido [1].
Se cree que los grnulos secundarios slo se producen en la fase de mielocito. Los
grnulos secundarios especficos no contienen mieloperoxidasa (MPO). En los neutr-
filos de muchas especies se han identificado otros tipos de grnulos, y se han denomi-
nado grnulos terciarios o grnulos de gelatinasa. La gelatinasa, una enzima que
disuelve la matriz extracelular es, cuantitativamente, su mayor componente, aunque
tambin contienen citocromo b especfico de los grnulos [1].
Las vesculas secretoras son ricas en receptores y tambin contienen algunas enzi-
mas. Los neutrfilos contienen otros componentes de localizacin incierta.
Las protenas que se encuentran en los neutrfilos son esenciales. Pueden clasificar-
se segn su naturaleza bioqumica o segn sus sitios de actividad en serina, metalo-,
cistena y asprtico proteinasas. Las dos primeras clases de proteinasas degradan las
protenas de la matriz extracelular. Las serina proteinasas tienen un residuo serina
catalticamente esencial en su sitio activo. Las cistena y asprtico proteinasas, que se
denominan as porque requieren un aminocido en particular para su actividad catal-
tica, incluyen las catepsinas B, D, H, L y S, que se encuentran en los lisosomas de la
mayora de los leucocitos [1].
Granulocitos eosinoflicos. Los granulocitos eosinoflicos se encuentran abundante-
mente en los sitios donde existe un trastorno inflamatorio alrgico, parasitario o fn-
gico de tipo determinado, pero pueden formar parte de cualquier exudado. Tienen una
funcin nica como clulas efectoras para daar o eliminar helmintos y otros patge-
nos. Tambin tienen una predisposicin tanto para causar trastornos de hipersensibi-
lidad como para colaborar en su regulacin, especialmente reacciones de hipersensi-
bilidad de tipo I. Los eosinfilos son fagocitos, pero menos activos que los neutrfilos.
Se forman en la mdula sea, y su diferenciacin y maduracin dependen especial-
mente de tres citocinas: IL-3, IL-5 (factor de diferenciacin de eosinfilos) y GM-CSF.
En los tejidos, se encuentran principalmente en la pared intestinal, los pulmones, la
piel y las mucosas. Los glucocorticoesteroides afectan a los eosinfilos, y un aumento
de la liberacin o la administracin de estas sustancias puede producir eosinopenia,
que puede atribuirse en parte a la inhibicin transitoria de la liberacin de eosinfilos
desde la mdula sea [1].
Los eosinfilos pueden adherirse a los helmintos y perder los grnulos. General-
mente, son atrados a zonas de degranulacin de los mastocitos. Los eosinfilos tienen
el potencial bioqumico para ayudar a neutralizar algunos de estos mediadores deriva-
dos de los mastocitos. Debido a la degranulacin de los mastocitos, tambin aparece
una quimiotaxina eosinfila especfica, la eotaxina. Aparentemente, varios tipos de
clulas, incluyendo fibroblastos y algunas clulas epiteliales, sintetizan las protenas
eotaxina pequeas en los tejidos, como respuesta, al menos en parte, a la liberacin del
contenido de los mastocitos estimulados, como la histamina [1].
Los eosinfilos responden a los mismos estmulos y quimiotaxinas que los neutr-
filos (p. ej., factores bacterianos solubles y componentes activados del sistema del
complemento). En condiciones normales, la llegada de los eosinfilos ayuda a destruir
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los antgenos o los patgenos ofensivos y puede ayudar a neutralizar el exceso de
mediadores de los mastocitos, que podra causar una inflamacin excesiva. Si el est-
mulo antignico o inflamatorio es persistente, o si el sistema inmunitario del husped
es demasiado sensible, llegarn al tejido demasiados eosinfilos y permanecern dema-
siado tiempo en l, contribuyendo a las reacciones tisulares adversas y a la lesin
tisular [1].
Monocitos y macrfagos. Los monocitos y los macrfagos se originan en la mdula
sea y migran a los tejidos desde la sangre circulante. Pueden destacar en las reac-
ciones inflamatorias. Algunos macrfagos, los histiocitos, residen en los tejidos y
experimentan la divisin celular, pero tambin se originan en la mdula sea. Los
macrfagos son los leucocitos ms dinmicos, su semivida en la circulacin es de
24 a 72 horas. Los monocitos de la sangre tienen que activarse antes de adquirir su
mxima competencia funcional como macrfagos. As, la diferencia principal entre
los monocitos y los macrfagos se relaciona con el sitio de activacin. En los rumian-
tes (vacas, ovejas y cabras), los gatos y los cerdos se encuentran macrfagos espec-
ficos de rgano, clulas de Kupffer hepticas y macrfagos intravasculares pulmona-
res. Estas clulas son muy sensibles a las endotoxinas bacterianas y a otros estmulos
que inducen la liberacin de una gran cantidad de citocinas y otros mediadores des-
de los macrfagos. En esta situacin especial, los macrfagos fijados a los tejidos
pueden provocar respuestas inmunoinflamatorias especficas de rgano [1]. Tienen
importantes funciones secretoras, ya que son capaces de sintetizar un gran nmero
de mediadores.
El proceso de fagocitosis y de eliminacin de los microorganismos es parecido en
los macrfagos y en los neutrfilos. Los macrfagos absorben y destruyen los patge-
nos que los neutrfilos no pueden controlar de forma eficaz, especialmente los micro-
organismos intracelulares y los que causan una respuesta inflamatoria granulomatosa
(p. ej., hongos, protozoos, virus, el bacilo tuberculoso, Listeria y Brucella spp.) [11].
Su funcin se asocia a la formacin de radicales libres de oxgeno, intermediarios
reactivos de nitrgeno (radicales de oxgeno, NO) y pptidos antimicrobianos (como
las defensinas) en los grnulos celulares. Los macrfagos de las vacas resistentes a
Brucella abortus producen significativamente ms explosiones oxidativas y tienen ms
actividad bacteriosttica que los macrfagos de las vacas susceptibles [12].
Los macrfagos limpian los deshechos de los tejidos mediante fagocitosis y des-
componiendo la fibrina (activadores del plasmingeno). Los macrfagos especficos
de tejidos pueden recoger los deshechos tisulares e incluso participar en el reciclado de
las sustancias que el organismo prefiere conservar, como el hierro procedente de los
productos de la degradacin de los grupos hemo. Ingieren los restos celulares, las
clulas afectadas, las clulas recubiertas de anticuerpos y otros materiales extraos.
Como ejemplos pueden citarse la destruccin fagoctica de los ncleos expulsados de
los metarubricitos en la mdula sea, la eliminacin de los cuerpos de Howell-Jolly
de las clulas circulantes en el bazo y la fagocitosis de los eritrocitos recubiertos de
anticuerpos por el sistema de fagocitos mononucleares en la anemia hemoltica inmu-
nomediada [11].
Los mediadores que se forman en los macrfagos reclutan otros leucocitos en la zona
e influyen en su actividad, y tambin en la de las clulas del estroma, como los fibro-
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blastos. Esta funcin est mediada por la sntesis de quimiocinas (IL-8, oncogn-
relacionado con el crecimiento/actividad estimuladora del crecimiento de melanomas,
protena-1 quimioatractora de monocitos, protena-10 IFN-inducible, y otras) y la sn-
tesis de otros mediadores que incrementan la expresin de los leucocitos y la molculas
de adhesin endoteliales, como los interferones (IFN- e IFN-) y las citocinas (IL-1,
IL1-1, IL-1ra, IL-4, y otras, y TNF-) [1]. Las citocinas de los macrfagos pueden
causar cambios dramticos en las clulas. Por ejemplo, IL-1 disminuye la expresin
de la protena de la Na
+
-K
+
-ATPase. Esta accin se consigue estimulando la MAP y la
protena cinasa regulada por la seal extracelular (MEK)/ruta de la protena cinasa regu-
lada por la seal extracelular (ERK), NF-B, y ciclooxigenasa [COX]) [13].
Las citocinas sintetizadas por los macrfagos, IL-1, TNF- e IL-6, tienen efectos
estimulantes autocrinos y paracrinos locales, que incluyen la induccin de una respues-
ta de fase aguda a la inflamacin, la infeccin u otra enfermedad [1].
Los macrfagos estimulan y modulan otra actividad celular en los tejidos por sus
actividades antimicrobianas, antivricas (formacin de radicales libres de oxgeno,
mediadores nitrito, proteasas) y antitumorales (oncostatina M, factor inhibidor de la
leucemia). Estimulan las respuestas inmunitarias linfocitarias producidas por citocinas
(IL-1, IL-1, IL-1ra, IL-4 y otras, y TNF-). Afectan a las reacciones vasculares
mediante la sntesis de mediadores lipdicos de la inflamacin (PAF, prostaglandinas,
leucotrienos) e intermediarios reactivos de nitrgeno (NO). Tambin actan en la cica-
trizacin y reparacin: los macrfagos estimulados sintetizan y secretan factores de
crecimiento, como el factor de crecimiento hematopoytico (G-CSF, GM-CSF, M-CSF)
y otros factores de crecimiento como TGF-, TGF-, el factor de crecimiento derivado
de plaquetas y el factor de crecimiento de los hepatocitos, que estimulan la regenera-
cin y las respuestas de reparacin en el tejido lesionado [1].
Los macrfagos desempean una funcin en la fase aferente de la respuesta inmuni-
taria (la induccin de la inmunidad frente a un antgeno) y en la fase eferente (la expre-
sin de la inmunidad celular). En la fase aferente de la respuesta inmunitaria, los macr-
fagos recogen y procesan el antgeno antes de que est disponible para que los linfocitos
desencadenen una respuesta mediante anticuerpos o la inmunidad celular. La propiedad
de los macrfagos para unirse al antgeno se asocia a sus antgenos de superficie (Ia). Los
monocitos procesan el antgeno de una forma altamente inmunognica. Despus, el ant-
geno est disponible para los linfocitos por la secrecin de un producto de los macrfagos
soluble que se une al antgeno o por la interaccin entre las clulas. Los macrfagos secre-
tan IL-1, que estimula a los linfocitos T, que elaboran varias linfocinas que reclutan
clones especficos de las clulas T y B para que participen en la fase eferente de la res-
puesta inmunitaria [3]. En la fase eferente de la respuesta inmunitaria, el aumento de la
fagocitosis, la destruccin de los patgenos recubiertos de anticuerpos o la citotoxicidad
se consiguen mediante macrfagos activados o armados [11].
Tanto los neutrfilos como los macrfagos migran hacia los tejidos, pero los PMN
lo hacen ms deprisa y en mayor nmero; los macrfagos aparecen ms tarde en las
reacciones tisulares. Los macrfagos tienen una esperanza de vida mayor que los neu-
trfilos y pueden proliferar en zonas donde la inflamacin se prolonga; esta prolifera-
cin es responsable de que existan en gran nmero en las reacciones de larga duracin.
Los macrfagos son el origen de las clulas gigantes multinucleadas presentes en algu-
nas reacciones inflamatorias crnicas. Por ejemplo, los objetos no digeribles, como los
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cuerpos extraos o ciertos tipos de microorganismos como las micobacterias, pueden
estimular a los macrfagos para que se fundan y formen clulas gigantes. Esta fusin
puede ser el resultado de que coexistan macrfagos muy estimulados en la misma zona,
que intentan absorber los mismos objetos, chocan entre s y se fusionan bajo la influen-
cia de las citocinas [1].
Mastocitos y granulocitos basfilos. Los mastocitos se encuentran en las zonas perivas-
culares de los tejidos, mientras que los basfilos son circulantes. Estas clulas estn muy
relacionadas funcionalmente y tienen muchas similitudes (p. ej., el citoplasma lleno de
grnulos gruesos, que se tien de color azul oscuro en los basfilos y de color rojo oscu-
ro en los mastocitos cuando se utilizan tinciones de tipo Romanowsky). Son ricos en
mucopolisacridos, principalmente heparina, histamina, varias proteinasas y otros media-
dores biolgicamente activos. Estas clulas participan en la patogenia de la inflamacin
aguda porque su liberacin de histamina desencadena muchas de las manifestaciones
clnicas inmediatas. Tienen receptores que se unen con gran afinidad a la porcin Fc de
los anticuerpos IgE. La degranulacin con liberacin de histamina y otros mediadores
inflamatorios tiene lugar cuando los basfilos y los mastocitos se estimulan de forma
adecuada (p. ej., cuando un antgeno especfico se unen a los anticuerpos IgE unidos a la
clula). Los mastocitos son la fuente principal de histamina, que es importante para el
fenmeno vascular de la inflamacin aguda, y tambin producen algunas citocinas [1].
Los granulocitos basfilos se originan en la mdula sea y son miembros raros de
la poblacin de leucocitos de la sangre. Son reclutados en los tejidos por mecanismos
inmunitarios parecidos a los de los mastocitos. Parece que la liberacin de mediadores
por los basfilos tisulares ayuda a la expulsin de los parsitos, y la llegada de basfi-
los cuando se producen reacciones de hipersensibilidad aumenta el potencial anafilc-
tico de una zona tisular determinada [1].
Linfocitos y plasmocitos. Tanto los linfocitos como los plasmocitos participan en las
reacciones inmunitarias. Estas clulas aparecen ms tarde que los neutrfilos en la
mayora de las reacciones inflamatorias. Sin embargo, parece que algunos microorga-
nismos infecciosos provocan una respuesta linfoctica casi desde el principio, como las
lesiones renales de la leptospirosis aguda en los perros y las infecciones por micoplas-
mas en muchas especies. Generalmente, los infiltrados de linfocitos y plasmocitos
indican una reaccin inmunitaria local en respuesta a algn tipo de sustancia o antge-
no. Los linfocitos son importantes para la respuesta inflamatoria de varias formas espe-
cficas. Los linfocitos B y su progenie, los plasmocitos, son importantes en la produc-
cin de anticuerpos. Los anticuerpos constituyen una de las opsoninas principales y,
por tanto, interactan directamente con la rama fagoctica, celular, del mecanismo de
defensa del husped. Adems, los linfocitos T colaboradores de tipo 1 representan el
origen celular de las linfocinas potentes, IFN-, TNF- e IL-2, que pueden modular y
extender las reacciones inflamatorias locales [1].
Plaquetas. Las plaquetas casi siempre estn involucradas en las reacciones inflamato-
rias locales, porque los vasos lesionados dejan expuestas las estructuras subendoteliales
a las clulas sanguneas circulantes y las plaquetas se unen a estas zonas. Uno de los
primeros pasos es la adherencia de las plaquetas circulantes al colgeno subendotelial y
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40
a la membrana basal prxima a la superficie endotelial daada. La adhesin depende de
los enlaces entre las molculas de adhesin de la superficie de las plaquetas (glucopro-
tena Ib) y el factor de von Willebrand, que se sintetiza en las clulas endoteliales y en
los magacariocitos, se almacena en los grnulos citoplsmicos y se secreta desde las
clulas endoteliales tanto en el plasma como hacia la membrana basal subendotelial y el
colgeno. Cuando se adhiere al colgeno, el factor de von Willebrand expuesto acta
como un ancla para el receptor de glucoprotena plaquetaria Ib, y comienza la fase pla-
quetaria. Una vez que las primeras plaquetas se adhieren, liberan componentes de los
dos tipos de grnulos intracelulares, los cuerpos alfa y los cuerpos densos. El contenido
de los grnulos que tiene algn efecto sobre el proceso inflamatorio incluye ADP y ATP,
serotonina, factor plaquetario 4, PAF, fibronectina, factores de la coagulacin (fibrin-
geno, antgeno relacionado con el factor VIII, factor V), adrenalina, histamina, Ca
2+
y
productos de la unin entre la proteasa y el complemento (que produce C5a). Las enzi-
mas de la ruta del AA, especialmente tromboxano A
2
(TXA
2
) y los factores de creci-
miento (p. ej., factor de crecimiento derivado de plaquetas, factor de crecimiento fibro-
blstico, TGF), tambin participan y estimulan enzimas (catepsina, arilsulfatasa,
-glucuronidasa) y los procesos de cicatrizacin resultantes [1]. Las plaquetas pueden
tener propiedades fagocitarias y bactericidas, esta actividad se ha demostrado en plaque-
tas de pollo y humanas. Se trata de un proceso dependiente de energa. Las plaquetas se
unen a las endotoxinas para detoxificarlas. La -lisina, un componente termoestable
bactericida del suero, se ha localizado en las plaquetas, y se secreta durante la coagula-
cin sangunea, la inflamacin, las reacciones antgeno-anticuerpo y la bacteriemia.
Tiene efecto bactericida sobre Bacillus subtilis y deteriora Escherichia coli. Puede
amplificar la muerte mediada por anticuerpos y por el complemento, y la lisis de las
bacterias gramnegativas. Se ha descubierto que las protenas catinicas derivadas de
las plaquetas tienen una potente actividad bactericida contra Staphylococcus aureus [14].
Clulas endoteliales y fibroblastos. Para abandonar la corriente sangunea y entrar en las
zonas inflamadas de los tejidos, los leucocitos primero deben adherirse a la microvascu-
latura y migrar a travs de ella. El endotelio participa activamente en las interacciones
entre los leucocitos y las clulas endoteliales. Adems, las clulas endoteliales tienen un
gran potencial de proliferacin y desempean una funcin crtica en la cicatrizacin y
reparacin [1]. Los fibroblastos son clulas importantes porque sintetizan una serie de
citocinas que influyen en los leucocitos, y tambin son importantes en la cicatrizacin y
reparacin debido a su capacidad para sintetizar y fijar colgeno. Adems, muchas de las
protenas importantes de la matriz extracelular son productos de los fibroblastos, y muchas
de ellas son importantes para la activacin y desplazamiento de los leucocitos [1].
EVENTOS CELULARES
La secuencia de eventos celulares consta de: 1) marginacin, 2) pavimentacin,
3) migracin, 4) quimiotaxis, 5) fagocitosis y 6) sntesis de mediadores.
Marginacin
En el foco de la lesin o la inflamacin, las clulas como los macrfagos residentes en
los tejidos se estimulan para sintetizar y secretar quimioatractores y activadores de las
clulas, como citocinas y quimiocinas, que se difunden desde la zona, entran en contac-
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41
to con los vasos sanguneos pequeos y estimulan la adhesin entre los leucocitos y las
clulas endoteliales en las vnulas locales, atrayendo a los leucocitos hacia el tejido. La
marginacin se consigue en parte debido a la vasodilatacin y a la disminucin del
caudal del flujo sanguneo; gran parte de estos procesos pueden atribuirse a las mol-
culas de adhesin de la superficie de los leucocitos y las clulas endoteliales [1].
Pavimentacin
Cuando el estmulo inflamatorio es muy fuerte entran en juego otras molculas de
adhesin. En los leucocitos son importantes las
2
-integrinas, que son molculas hete-
rodimricas que siempre estn presentes en la superficie de los leucocitos, pero su
adhesividad aumenta rpidamente en respuesta a la estimulacin. Estas integrinas com-
prenden CD11b/CD18 (tambin conocidas como complejo de ataque de la membrana
1 [Mac-1]) y CD11a/CD18 (tambin conocidas como antgeno asociado a la funcin
linfoctica 1 [LFA-1]). Como ya se ha mencionado, la agregacin de los neutrfilos est
mediada por la
2
-integrina CD11b/CD18, que tiene una expresin limitada sobre la
membrana superficial de las clulas en reposo, pero que es reclutada desde las organe-
las intracelulares tras la activacin celular [15]. Las molculas de adhesin se almace-
nan en grnulos (lisosomas) y se desplazan a la superficie cuando se estimula la clula.
Durante el proceso inflamatorio, los mediadores bioqumicos (sobre todo citocinas
como IL-1 y el TNF-) se difunden a travs del tejido en la zona, entrando en contacto
con las clulas endoteliales. Este contacto hace que el endotelio produzca otros media-
dores, como PAF e IL-8, lo que estimula an ms a los leucocitos. Esta segunda fase de
unin entre los leucocitos y las clulas endoteliales es intensa, y los leucocitos pueden
quedarse detenidos en la zona [1]. Se ha investigado el efecto de la oxigenacin hiperb-
rica sobre varias funciones de los neutrfilos mediadas por CD11b/CD18 (Mac-1) en seres
humanos sanos. La oxigenacin hiperbrica con una presin absoluta de 3 atmsferas
durante 23 minutos reduce la adherencia al 50%. Los estudios anteriores indican que
este efecto puede estar causado por la inhibicin de la
2
-integrina [16].
Se ha asociado un trastorno hereditario al deterioro de la adherencia de los neutrfilos.
La DAL (sndrome de granulopata canina) es una inmunodeficiencia primaria que se
hereda como un rasgo autosmico recesivo. Se ha descrito en los seres humanos, los
Setters irlandeses y las vacas Holstein. Esta deficiencia es el resultado de una deficiencia
de la expresin de las glucoprotenas de la superficie de los leucocitos. Clnicamente, se
caracteriza por infecciones bacterianas graves, recurrentes, alteracin de la formacin de
pus y retraso de la cicatrizacin de las heridas. Los animales infectados suelen mostrar
pirexia intensa, anorexia y prdida de peso; generalmente, la respuesta al tratamiento con
antibiticos es escasa. Puede producirse leucocitosis persistente y extrema (>100.000 leu-
cocitos/L), en la que predominan los neutrfilos maduros. [17]. En este trastorno, la
fagocitosis y la capacidad bactericida de los neutrfilos estn deterioradas debido a la fal-
ta de protenas de adhesin, que impide que los leucocitos abandonen los vasos sangu-
neos, por lo que su nmero en los tejidos es reducido, aunque estn presentes en gran
nmero en la sangre. Por tanto, son incapaces de fagocitar las bacterias opsonizadas por
el fragmento C3b. La DALB se diagnostic en cuatro terneros Holstein de entre 1 y
4 meses de edad, que presentaban lceras graves en la mucosa oral, gingivitis, perodon-
titis grave, neumona crnica y falta de crecimiento asociado a neutrofilia intensa. Los
neutrfilos de los terneros afectados tenan un defecto funcional que se caracterizaba por
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42
una gran disminucin de la adherencia, los movimientos quimiotcticos, la fagocitosis,
la respuesta quimioluminiscente dependiente de luminol y las actividades productoras de
O
2
. Mediante el anlisis citomtrico de flujo se detect claramente la deficiencia de la
expresin de CD18 (0,11,7%) en los neutrfilos. Estos terneros afectados tenan un
antecesor comn, que se haba reconocido como portador. Las caractersticas clnicas, las
anomalas funcionales de los leucocitos, la deficiencia de la expresin de CD18 y la
forma de heredarse indicaban que los terneros tenan DALB. Las anomalas funcionales
de los leucocitos in vitro se asociaron a deficiencia de la expresin de CD11/CD18 [18].
Tambin se diagnostic DALB en dos terneros (de 5 y 9 meses de edad) que tenan neu-
mona y gingivitis. En estos terneros y en sus madres (las portadoras) se examin el gen
de la molcula de adhesin de los leucocitos CD18 mediante la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR) y digestin mediante endonucleasa de restriccin. Se observ una
diferencia evidente en el patrn de digestin de los terneros sanos, los terneros con DALB
y sus madres. Por tanto, en la DALB, la mutacin puntual observada en los pacientes
humanos era muy indicativa [19]. La estimacin de la frecuencia allica de la DALB
teniendo en cuenta los resultados de la PCR demostr que alrededor de 450 terneros
daneses nacidos en 1991 podran estar afectados por este trastorno recesivo [20].
Migracin
La migracin es el proceso por el que los leucocitos abandonan su localizacin en la
sangre para alcanzar los tejidos perivasculares. Los neutrfilos entran enseguida en
contacto con las uniones celulares interendoteliales, y aparece otra molcula de adhe-
sin, CD31, sobre las clulas endoteliales de esa zona. Los neutrfilos tienen las mismas
molculas de adhesin, y estas molculas reconocen y se unen a sus parejas sobre las
uniones celulares endoteliales, creando una seal de salida para los neutrfilos. Las
irritaciones relativamente menores de las cavidades peritoneal y pleural, as como las
abrasiones cutneas menores, provocan una acumulacin de neutrfilos que alcanza su
valor mximo a las 4 a 6 horas y disminuye rpidamente, mientras que el nmero total
de clulas mononucleares comienza a aumentar a las 4 horas y alcanza un valor mximo
sostenido a las 18 a 24 horas. Cuando el proceso est causado por microorganismos
vivos, se va acumulando progresivamente un gran nmero de neutrfilos durante las
24 horas de observacin, pero no puede detectarse ninguna respuesta mononuclear [1].
Quimiotaxis
La quimiotaxis es una migracin direccional en respuesta a un gradiente de quimioatrac-
tores. Los leucocitos pueden percibir las pequeas diferencias direccionales de las concen-
traciones de mediadores quimiotcticos (quimiotaxinas) debido a que se ocupan ms de
sus receptores de quimiotaxinas en el lado de la clula ms prximo al sitio de la inflama-
cin, donde la concentracin de mediadores inflamatorios y quimiotaxinas es mayor. Los
leucocitos activados son muy mviles y parece que poseen un sentido de la direccin, es
decir, sus desplazamientos en el tejido estn dirigidos, no son aleatorios. Adems de los
leucocitos, las bacterias, los mohos deslizantes celulares, las clulas tumorales, los fibro-
blastos, las clulas endoteliales y otras clulas muestran varios niveles de sensibilidad
quimiotctica. Los neutrfilos responden rpidamente a las seales quimiotcticas, en
aproximadamente 90 minutos, mientras que los monocitos tardan varias horas en respon-
der. La velocidad de respuesta de los eosinfilos se encuentra en un punto intermedio [1].
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
43
Quimiotaxinas
Compuestos quimiotcticos. Las quimiotaxinas que derivan del plasma son C5a, C5a-
des Arg y los fibrinopptidos (productos de la degradacin de la fibrina) [1].
Las quimiotaxinas que derivan de las clulas inflamatorias son derivados del AA:
LTB
4
, cido hidroxieicosatetraenoico (HETE), PAF y quimiocinas.
Las quimiotaxinas derivadas de otros factores son:
Quimiotaxinas bacterianas, que incluyen los pptidos de tipo 1. N-Formil-Met-Leu-Fe.
Necrotaxinas (derivadas de clulas muertas). 2.
Endotoxinas. 3.
El radical anin superxido (O
2
y de
radicales aninicos hidroxilo (HO
) y de la formacin de H
2
O
2
, y un aumento de la cap-
tacin de oxgeno independiente de cianuro y de la cantidad de glucosa metabolizada por
la desviacin de hexosa monofosfato (HMPS) [26]. Esta actividad, que se demostr hace
ms de 50 aos, es la base de los radicales libres de oxgeno y de los cambios antioxidan-
tes en los procesos inflamatorios. En la figura 1 se muestra cmo se midi hace muchas
dcadas y de forma fiable el uso de oxgeno por los leucocitos [26].
El sistema de radicales libres de oxgeno. Adems de formarse MRO, aumenta la acti-
vidad de la glutatin reductasa (GSSG-R) debido a la induccin de los mecanismos de
defensa contra las especies reactivas de oxgeno (ERO) que se forman intracelularmente
en los leucocitos. Este proceso regulado se ha denominado explosin respiratoria de la
Figura 1. Tasas relativas de captacin de oxgeno en suspensiones de leucocitos ricas en
PMN procedentes de exudados peritoneales de cobayas normales (controles) y de cobayas
infectados con diferentes cepas de mycobacterium. Las tasas de captacin de oxgeno se cal-
cularon en L/100 L fsforo celular/h. El valor absoluto para los leucocitos obtenidos del
exudado peritoneal de los animales normales es de 36,5 1,9 g O
2
/100 L fsforo celular/h.
El nmero de animales de cada grupo es: control, 31; infectados con el bacilo Calmette-Gurin
(BCG), 15; infectados con R1Rv, 8; infectados con Valle, 6. (Tomado de Stahelin H, Karnovs-
ky ML, Farnham AE, Suter E. Studies on the interaction between phagocytes and tubercle bacilli.
III. Some metabolic effects in guinea pigs associated with infection with tubercle bacilli. J Exp
Med 1957;105(3):26577; con autorizacin. Copyright 1957, The Rockefeller University
Press.)
CEPA UTILIZADA PARA LA INFECCIN
T
A
S
A
R
E
L
A
T
I
V
A
D
E
C
A
P
T
A
C
I
N
D
E
O
X
G
E
N
O
1
1,163
0,05 > P > 0,02
1,293
P < 0,01
1,064
P > 0,1
CONTROL BCG R
1
R
V
VALLE
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46
fagocitosis. La figura 1 incluye una parte importante de esta actividad bioqumica de
los fagocitos. Gran parte de esta actividad bioqumica de los fagocitos puede atribuirse a
la NADPH oxidasa ligada a la membrana; el citocromo b tambin forma parte de este
sistema y est presente en los grnulos especficos y terciarios (gelatinasa) de los neutr-
filos. Estos grnulos se fusionan con la partcula absorbida, que tambin est unida a la
membrana, haciendo que el citocromo b y otros muchos componentes de los grnulos
estn disponibles para la actividad microbicida [1]. La activacin de la protena C cinasa
y el aumento del Ca
2+
intracelular activan la NADPH oxidasa [27].
La NADPH oxidasa activada reduce el oxgeno molecular mediante transferencia
de electrones desde NADPH, formando as O
2
se convierte en H
2
O
2
de forma espont-
nea o mediante SOD. La partcula fagocitada est en la vacuola, que ms tarde se
fusiona con los grnulos azurfilos que contienen MPO (primarios) [30].
El sistema mieloperoxidasa-haluro. La produccin de O
2
y H
2
O
2
durante la explosin
respiratoria proporciona un enlace directo entre el radical libre de oxgeno y los siste-
mas basados en MPO de las actividades microbicidas y citotxicas de los fagocitos
[31]. Ni el O
2
ni el H
2
O
2
son molculas microbicidas potentes por s mismas. O
2
contribuye a la formacin de HO
con H
2
O
2
, ambos producidos y disponibles
debido a la reduccin del oxgeno. Esta combinacin tambin da lugar a la produccin
de HO
+ H
2
O
2
O
2
+
HO
+ HO
[35]. Esta reaccin es muy lenta, pero la catlisis de iones metlicos tran-
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
47
sitorios, especialmente hierro, la potencia en gran medida. El hierro que participa en
estas reacciones puede proceder de muchas fuentes, tanto del interior como del exterior
de los leucocitos; este ltimo est disponible en las protenas hemo y en las protenas
transportadoras de hierro, como la transferrina.
El hierro se cataliza en la reaccin de Haber-Weiss mediante la reaccin de Fenton:
O
2
+ Fe
3+
r Fe
2+
+ O
2
Fe
2+
+ H
2
O
2
rFe
3+
+ HO
+ HO
+ HO
[36].
El H
2
O
2
que se produce en estas reacciones tambin puede combinarse con la enzi-
ma MPO de los grnulos azurfilos dentro de los fagolisosomas y, junto con un in
haluro, como yoduro, bromuro o cloruro (este ltimo es el haluro fisiolgicamente
importante habitual), puede formar una mezcla bactericida potente que se conoce como
sistema H
2
O
2
-MPO-haluro. La combinacin molecular de estos componentes produce
una actividad bactericida mucho ms fuerte que la que podra tener cualquiera de estas
molculas si actuara de forma individual. La molcula asesina que se produce en la
reaccin H
2
O
2
+ Cl
r HOCl + H
2
O es el cido hipocloroso (HOCl), una sustancia
oxidante y antimicrobiana potente. Esta actividad tiene lugar dentro del fagolisosoma
para que no se destruya el propio fagocito [1].
Enzimas fundamentales para la fagocitosis
NADPH oxidasa. En condiciones de reposo, los componentes citoslicos de la NADPH
oxidasa (E.C. 1.23.45.3) existen como oligmeros de 240 a 300 kd [37,38]. Para que
se forme un complejo oxidasa activo se requieren al menos cinco protenas: el citocro-
mo b
558
ligado a la membrana, las protenas citoslicas, p47
phox
, p67
phox
, y una prote-
na ligada a GTP pequea, Rac-1 o Rac2 [39,40]. Recientemente se han identificado
otros dos componentes [37], un complejo enzimtico asociado a la membrana plasm-
tica que cataliza la reduccin de electrn nico del O
2
molecular a O
2
, una sustancia
oxidante y reductora muy potente [41]. El O
2
[52].
Mieloperoxidasa. MPO (EC 1.11.1.7) tiene un pigmento hemo, que es el responsable
del color verde que tienen las secreciones ricas en neutrfilos, como el pus y algunas
formas de moco. La protena MPO de 150 kd es un tetrmero que consta de dos cade-
nas ligeras de 15 kd y dos cadenas pesadas glucosiladas de peso variable unidas a un
grupo hemo protsico. Se han identificado tres isoformas, que slo se diferencian en el
tamao de las cadenas pesadas [53]. En la figura 3 se muestra la estructura cristalina
de MPO [54].
MPO produce cido hipocloroso a partir de H
2
O
2
y del anin cloruro (Cl
) durante
la explosin respiratoria de los neutrfilos. Requiere hemo como cofactor [54]. Ade-
ms, oxida la tiroxina de su radical tirosilo utilizando H
2
O
2
como agente oxidante [55].
El cido hipocloroso y el radical tirosilo son citotxicos. Su efecto antibacteriano pue-
de reducirse mucho precalentndola a 80 C o durante ms de 10 minutos o aadiendo
algunos inhibidores; es ms activa cunto ms cido es el pH utilizado (5). La lactope-
roxidasa es menos eficaz que la MPO cuando el cloruro es el haluro utilizado. Si no se
aade un haluro junto con MPO, a altas concentraciones tiene un efecto antibacteriano
sobre Lactobacillus acidophilus, que tambin es sensible a la temperatura y a la cata-
lasa (CAT). Los haluros y el H
2
O
2
aumentan el efecto antibacteriano, y la CAT lo
disminuye, as como el cianuro, acida, metimazol y tiosulfato. [56]. Los PMN pueden
Figura 2. Estructura del complejo NADPH oxidasa activo. Se cree que el dominio de unin a
NADPH est a un lado de la membrana y que el O
2
, H
2
O
2
,
HO
convirtindo-
lo en H
2
O
2
a una velocidad rpida. El sistema redox glutatin (glutatin reducido,
GSH; glutatin oxidado o bisulfuro de glutatin, GSSG; glutatin peroxidasa, GSH-
Px; GSSG-R y CAT) regula la cantidad de H
2
O
2
intracelular convirtindola en agua.
Las bacterias CAT positivas son resistentes a los efectos destructores del complejo
MPO-H
2
O
2
-haluro, pero los microorganismos CAT negativos se destruyen [10]. El
Figura 4. Mecanismo de destruccin dependiente de oxgeno y defensa antioxidante enzim-
tica. GSH, glutatin reducido; GSH-Px, glutatin peroxidasa; GSH-Red, glutatin reductasa;
GSSG, bisulfuro de glutatin; HMPS, desviacin de hexosa monofosfato; MPO, mieloperoxida-
sa; SOD, superxido dismutasa.
Peroxidacin en la
membrana lipdica
Fagosoma
Partcula
fagocitada
de forma espontnea
o
Citocromo b Ncleo
NADPH
oxidasa
RCHO
Aldehdo
activo
Canal
de protones Desyodacin
de la protena
Peroxisoma
Citoplasma
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
51
sistema antioxidante tiene una ontognesis, pero la mayora de los mamferos nacen
con un sistema bien organizado de defensa contra el entorno extrauterino, que es muy
oxigenado comparado con la vida uterina [62]. Varias vitaminas tienen efectos antioxi-
dantes, pero tambin pueden incrementar la explosin oxidativa. Los estudios han
demostrado que los suplementos multivitaminas aumentan el nmero y la actividad
productora de ERO de los macrfagos. Este efecto persiste 2 semanas despus de in-
terrumpir la administracin de altas dosis de suplementos [63].
Algunos factores que impiden la funcin destructora de los neutrfilos y los macrfagos
Se investig si en los pacientes que tenan infecciones piognicas recurrentes exis-
tan anomalas de las funciones de los neutrfilos como la adherencia, la quimio-
taxis, la fagocitosis, la produccin de MRO, la degranulacin y la eliminacin de
bacterias [10].
Cambios relacionados con la edad. En los caballos [64] y en los terneros [65] se pro-
duce un cambio de la funcin de los neutrfilos relacionado con la edad. La fagocitosis
de S. aureus por los neutrfilos de los potros es inferior a la que se observa en los
neutrfilos de los adultos. Se utiliz suero autlogo como fuente de opsoninas. El
deterioro de la funcin no se asoci a la falta de ningn factor plasmtico, y el uso de
suero adulto no mejor la capacidad de los neutrfilos para adherirse a las bacterias.
La actividad de la explosin oxidativa de los neutrfilos de los potros era equivalente
a la de las clulas adultas [64]. La capacidad fagoctica era dbil desde el nacimiento
hasta las tres semanas de edad. La capacidad de destruccin tambin era baja al prin-
cipio, pero a partir de los 3 meses los valores de la quimioluminiscencia eran iguales o
superiores a los de los caballos maduros [66]. En el ganado vacuno, los valores de la
yodacin en los terneros de 4 a 11 semanas de edad fueron aproximadamente del 52%
de los valores de las vacas de 14 meses. Esta diferencia no pudo atribuirse a la canti-
dad de MPO en los grnulos neutrfilos. La citotoxicidad celulomediada dependiente
de anticuerpos tambin tenda a ser inferior en los neutrfilos de los grupos de edad de
4 a 19 semanas. La reduccin de nitroazul de tetrazolio, una medida del O
2
generado
por los neutrfilos, slo era inferior en el grupo de edad de 4 a 5 semanas [65].
Defectos hereditarios. Tambin se han observado algunos defectos hereditarios. Los
defectos funcionales pueden asociarse a anomalas morfolgicas, como en el sndrome
de Chdiak-Higashi, o no estar asociados a cambios morfolgicos de los neutrfilos,
como en la enfermedad granulomatosa crnica y en el sndrome de granulocitopata.
Este ltimo sndrome se ha mencionado anteriormente.
El SCH se ha descrito en los seres humanos, los visones, los ratones, los zorros, los
gatos persa, las vacas Hereford y Brangus [67], y las orcas [68,69]. Se produce un
aumento de la sensibilidad a las infecciones bacterianas debido al deterioro de la funcio-
nalidad de los leucocitos, un aumento de la tendencia a las hemorragias debido a los
defectos de los grnulos plaquetarios y albinismo oculocutneo parcial debido a la dis-
tribucin anormal de la melanina. Los sntomas se asocian a la disfuncin leucocitaria
secundaria a las anomalas de los lisosomas. En los seres humanos y los ratones (el ratn
beige) con SCH existe una deficiencia de las clulas asesinas naturales. Existen infor-
mes de un trastorno parecido en una lnea de gatos persas [70]. Los individuos afectados
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52
tienen el pelo de color humo o humo azulado y los iris de color amarillo verdoso
plido. En los gatos persas, la capa se vuelve ms clara, los iris cambian de color de
cobrizo o dorado a amarillo/verde claro y la retina pierde la pigmentacin. Pueden tener
cataratas congnitas [71]. Los neutrfilos contienen grnulos peroxidasa positivos, suda-
nfilos y eosinfilos anormalmente grandes. Los grnulos de los eosinfilos y los bas-
filos tambin estn dilatados, como los grnulos de melanina de la piel y el pelo. Tambin
se han observado grnulos citoplsmicos eosinfilos grandes, cido perydico-Schiff-
positivos, en las clulas de los tbulos renales. En el SCH los neutrfilos no pueden
metabolizar y digerir los microbios de forma adecuada debido a las inclusiones anorma-
les. Se ha observado que el cido ascrbico mejora la funcin de los neutrfilos [72]. Se
han encontrado mutaciones en el gen CHS1. El gen LYST del cromosoma 1q42, que
codifica una protena de 429 kd con funcin desconocida, tambin es responsable del
SCH clsico [73]. La nica opcin de tratamiento parece ser la transfusin, la adminis-
tracin de antibiticos y glucocorticoesteroides, y el trasplante de mdula sea [74].
La enfermedad granulomatosa crnica (EGC) es un trastorno recesivo que se caracte-
riza por un defecto de una oxidasa de la explosin respiratoria de los fagocitos. Est cau-
sada por mutaciones de alguno de los cuatro genes que codifican las subunidades de la
NADPH oxidasa de los fagocitos que generan O
2
en
los neutrfilos cuando comienza la fagocitosis. Estas dos protenas se asocian al complejo
NADPH oxidasa durante la activacin. El ELISA es ms sensible que el anlisis bsico
basado en el uso del sistema libre de clulas de la activacin de la oxidas y la produccin
de O
2
y de
H
2
O
2
por las clulas PMN fue significativamente inferior en un grupo de perros infectados
con Leishmania que en los perros sanos o en los perros infectados tratados con antimonia-
to de meglumina que no tenan sntomas de leishmaniosis [85]. La inflamacin sptica
tambin disminuye la actividad de la explosin oxidativa de los neutrfilos. La explosin
oxidativa de los neutrfilos procedentes de potros con sepsis tenda a ser inferior que la de
los neutrfilos procedentes de potros sanos en todas las muestras recogidas en cualquier
momento. Las concentraciones sricas de IgG no se relacionaron con la fagocitosis de los
neutrfilos, pero s con la actividad de la explosin oxidativa. La actividad de la explosin
oxidativa de los neutrfilos procedentes de los potros con sepsis aument significativa-
mente 5 das despus de realizar transfusiones de plasma [86]. La explosin respiratoria
oxidativa, medida por el mtodo de la quimioluminiscencia, de los neutrfilos procedentes
de gatos con viremia persistente infectados con el virus de la leucemia felina era inferior
que en los gatos afectados slo de forma subclnica [87]. Los PMN procedentes del tero
de yeguas que se consideraban susceptibles a las infecciones uterinas crnicas tenan una
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54
funcionalidad deficiente en cuanto a las actividades fagoctica y bactericida, comparados
con los procedentes de yeguas resistentes a estas infecciones [88].
Frmacos. Existen varios frmacos que pueden influir en la propiedad fagoctica de los
PMN. Algunos AINE, como cido acetilsaliclico y centrofenoxina, aumentan la fagoci-
tosis, mientras que otros, como bencidamina, idometacina, fenilbutazona, ibuprofeno y
paracetamol, disminuyen esta funcin, que se examin mediante fagocitosis de S. aureus
32P-marcados por neutrfilos aislados de la leche de vaca. Adems, se descubri que los
siguientes frmacos disminuan la fagocitosis: los peptlidos novobiocina y pristinami-
cina; los aminoglucsidos tobramicina, amicacina y gentamicina; las tetraciclinas; el
cido fusdico; minociclina y doxiciclina; y los antibiticos betalactmicos carfecilina,
cefapirina sdica y cefacetrilo sdico. Sin embargo, bromexina, un frmaco secretoltico,
aument la fagocitosis en el mismo estudio [89]. Los glucocorticoesteroides inhiben la
fagocitosis interfiriendo con la unin de la bacteria opsonizada y C3b y/o los receptores
Fc [90]. La supresin de la explosin oxidativa inducida por dexametasona en los neu-
trfilos de los terneros puede detectarse mediante la tcnica citomtrica de flujo [91].
Efectos perjudiciales de la explosin oxidativa
Los efectos perjudiciales de los radicales libres que se originan de las clulas fagocita-
rias son evidentes y se han descrito en otro lugar. Un resumen completo se saldra del
propsito de este captulo, pero merece la pena mencionar algunos conceptos, dirigidos
principalmente a los trastornos de los animales.
Peroxidacin lipdica. Se ha descubierto que los leucocitos PMN fomentan la peroxi-
dacin en los micelios de cido linoleico. La POL promovida por los leucocitos es
parecida al proceso bien conocido promovido por la NADPH citocromo P450 reduc-
tasa microsomal. Este mecanismo implica la reaccin del oxgeno molecular o los
radicales reactivos de oxgeno y los cidos grasos poliinsaturados, en los cuales el
grupo carbnico de metileno- (CH), que se localiza junto al enlace doble, es relati-
vamente inestable y por tanto puede activarse por la prdida de un tomo de hidrgeno
(RH r R + H). La molcula de oxgeno puede yacer en este lecho, y se forma un radi-
cal lipoperxido (ROO). Este proceso inicia ciertas reacciones en cadena, la lesin de
lpidos, protenas y cidos nucleicos, y la formacin de muchos productos finales esta-
bles y metaestables [92]. La peroxidacin de los lpidos es un mecanismo importante
por medio del cual los granulocitos expresan la lesin tisular debido a que la lesin de
las membranas produce cambios de la permeabilidad [93].
Lesiones oxidativas del ADN, los lpidos y las protenas. A altas concentraciones, las
ERO pueden ser mediadores importantes de la lesin de las estructuras celulares, los ci-
dos nucleicos, los lpidos y las protenas. Se sabe que HO
) pueden
reestructurarse mediante una reaccin de ciclacin para formar endoperoxidasas (precur-
sores de MDA), siendo MDA el producto final del proceso de peroxidacin. El producto
aldehdo principal de la POL diferente de MDA es 4-hidroxi-2-nonenal. MDA es mutag-
nico en las clulas bacterianas y de los mamferos y es carcinognico en las ratas. Hidroxi-
nonenal es dbilmente mutagnico, pero parece que es el producto txico principal de la
LPO. Los mecanismos que participan en la oxidacin de las protenas por las ERO se
esclarecieron gracias a los estudios en los que aminocidos, pptidos simples y protenas
se expusieron a las radiaciones ionizantes en condiciones en las que se formaba HO
o una
mezcla de radicales HO
/O
2
[106].
El hallazgo de Sarban et al. [107] de que la capacidad antioxidante total y los nive-
les de POL se relacionan con los reactivos de la fase aguda como la tasa de sedimen-
tacin de los eritrocitos aport datos muy importantes sobre la actividad patolgica en
la artritis reumatoide.
Tambin se midi la actividad de algunas enzimas antioxidantes en pacientes con
estas enfermedades. Por ejemplo, los investigadores descubrieron que en la espondilitis
anquilosante la actividad de la enzima CAT tena una relacin positiva significativa con
las concentraciones de protena C reactiva y la tasa de sedimentacin de los eritrocitos en
los pacientes activos [108]. Tambin se descubri que en los nios que tenan artritis
reumatoide juvenil las concentraciones de enzimas antioxidantes (CAT, GSH-Px) haban
disminuido en el momento del diagnstico, junto con un aumento de MDA, SOD y las
pruebas inflamatorias [109]. Los condrocitos sufren apoptosis como una consecuencia
de la formacin de ERO, que es un factor fundamental en el desarrollo de esta enferme-
dad. Se descubri que la adicin de H
2
O
2
a los condrocitos da lugar a la formacin de
ERO y produce disfuncin lisosomal, que se aprecia por la inflamacin y la ruptura, antes
de la disfuncin del potencial de la membrana mitocondrial. Los investigadores indican
que los antioxidantes pueden tener una aplicacin teraputica para prevenir la disfuncin
lisosomal inhibiendo la apoptosis de los condrocitos y la degradacin de la matriz carti-
laginosa [110]. Los condrocitos son componentes importantes de las articulaciones, y
producen radicales libres por s mismos; su formacin de ERO tiene una participacin
fundamental en el proceso de envejecimiento, ms que en la osteoartritis [111].
In vivo, el O
2
de las articulaciones puede derivar de los leucocitos PMN activados
o de un ciclo de isquemia/reperfusin. En presencia de hierro ferroso puede generar
OH
1
-proteinasa, los inhibidores del activador de plasmingeno, anti-trombina III y otros.
Los inhibidores tisulares de metaloproteinasas, que son sintetizados por los leucocitos
y en las clulas del tejido conjuntivo, inhiben las metaloproteinasas de la matriz [1].
MEDIADORES BIOQUMICOS DE LA INFLAMACIN
Un mediador bioqumico puede ser cualquier mensajero que acta sobre los vasos
sanguneos, las clulas inflamatorias u otras clulas, colaborando con la respuesta
inflamatoria [1,126,127]. En la tabla 1 se enumeran algunas caractersticas de los
mediadores bioqumicos de la inflamacin.
Las lesiones precipitan la respuesta inflamatoria, en gran parte debido a la estimu-
lacin de la liberacin de mediadores bioqumicos. La importancia relativa de los dis-
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62
tintos mediadores en el desarrollo de una reaccin inflamatoria vara dependiendo de
la especie animal, la localizacin en el organismo y la naturaleza de la sustancia lesiva.
Los mediadores pueden distribuirse por todo el organismo, o pueden sintetizarse en la
mayora de las localizaciones, por lo que pueden liberarse o activarse localmente en
casi todos los focos inflamatorios. Para proteger al organismo de los efectos potencial-
mente nocivos de muchos mediadores, algunas de las molculas de la inflamacin
tienen semividas ms cortas en los tejidos y pueden desactivarse rpidamente. Ninguna
Tabla 1
Algunas caractersticas de los mediadores bioqumicos de la inflamacin
Caracterstica Tipo Ejemplos
Localizacin Exgena
Endgena
Plasma
Leucocitos
Clulas endoteliales
Fibroblastos
Lipopolisacridos bacterianos
Histamina
Bradicinina
Leucotrieno B4, interleucina 1
xido ntrico,
prostaglandina I
2
Prostaglandina E
2
,
Interleucina 1, factor de
crecimiento transformante
Sntesis Se realiza en la clula,
requiere slo la liberacin
de los almacenes
celulares
Se sintetiza de novo por
las clulas estimuladas
Se genera como una
consecuencia de los
pasos enzimticos
mltiples que implican la
actividad secuencial de
diferentes molculas
mediante protelisis
limitada
Histamina
Prostaglandinas, factor
activador plaquetario
Sistema del complemento,
sistemas de coagulacin
Tamao Pequeo
Intermedio
Grande
Histamina (111 d),
bradicinina (9 aminocidos,
peso molecular: 1059,6 d)
Factor de necrosis tumoral
(17 kd)
Fosfolipasa citoslica A
2
(85 kd)
Tipo de molcula Aminas
Lpidos
Glucoprotenas
Polipptidos
Histamina, serotonina
Leucotrienos, factor activador
plaquetario
Interfern
C5a
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
63
parte de la respuesta inflamatoria depende de un nico mediador; la mayora de los
mediadores tienen mltiples funciones, y la mayora de las funciones pueden ser rea-
lizadas por varios mediadores [1].
Aminas vasoactivas
Las aminas vasoactivas, histamina y serotonina, tienen una funcin fundamental en los
procesos inflamatorios (v. tabla 2), pero una descripcin detallada de sus funciones
sobrepasara el mbito de este artculo.
Cininas
Las cininas son un grupo de polipptidos relacionados que proceden de la descompo-
sicin de unos precursores proteicos del plasma (ciningenos) por unas enzimas deno-
minadas calicrenas. La bradicinina prototipo (de peso molecular 1059,6 d) es un
nonapptido, y su metabolito biolgicamente activo es des-Arg bradicinina, con
un peso molecular de 904 d, lo que significa que se ha desprendido enzimticamente un
residuo arginina terminal (v. figura 5) [1].
La bradicinina es un polipptido que consta de nueve aminocidos y deriva de un
ciningeno circulante de alto peso molecular. Esta molcula es un sustrato de la enzima
calicrena (su precursor es la precalicrena) que separa la bradicinina de este cininge-
no de alto peso molecular. La activacin de esta ruta se produce en lo que se denomina
sistema de contacto, y tambin participan factores de la coagulacin, como el factor
XII (factor de Hageman), el factor XI (antecedente tromboplastnico plasmtico), pre-
calicrena y plasmingeno. El plasmingeno es un miembro bsico de la ruta fribino-
ltica. El sistema de contacto es responsable de la coagulacin intrnseca y de la fribi-
nlisis. El trmino bradi- indica que es lento produciendo una contraccin completa
del msculo liso si se compara con la histamina. Otras cininas tambin derivan de los
ciningenos tisulares mediante la accin de las calicrenas tisulares. Las leucocininas
son cininas derivadas de los leucocitos. Otra cinina (C-cinina) deriva de uno de los
componentes del complemento que actan en primer lugar. La bradicinina y la des-Arg
bradicinina son mediadores potentes que tienen diversos efectos sobre los vasos san-
guneos y varios tipos de clulas. Se unen a sus receptores respectivos B
2
y B
1
, que se
expresan de forma constitutiva (B
2
), o por la regulacin hacia arriba durante la infla-
macin (B
1
). Las cininas actan sobre los vasos perifricos produciendo vasodilatacin
o vasoconstriccin, dependiendo de las condiciones locales, y producen broncocons-
triccin. Pueden disminuir el tono del msculo liso arterial y pueden aumentar la per-
meabilidad vascular por los mismos mecanismos que la histamina: contraccin y sepa-
racin de las clulas endoteliales. Las cininas tambin pueden estimular la liberacin
de histamina en los mastocitos y activar la cascada araquidnica para la sntesis de
prostaglandinas y leucotrienos. Junto con las prostaglandinas, se cree que la bradicini-
na es un mediador principal del dolor de la inflamacin aguda debido a sus efectos
sobre las fibras nerviosas aferentes. Las cininas pueden aumentar el flujo sanguneo
perifrico, afectan a la permeabilidad vascular y producen dolor por mecanismos direc-
tos o indirectos. Tambin inducen rubor, calor, tumor y dolor, cuatro de los signos
cardinales de la inflamacin. Despus de sintetizarse, las cininas se inactivan rpida-
mente (en minutos) debido a la accin de las cininasas, enzimas que separan los ami-
nocidos del terminal carboxilo de estos polipptidos [1].
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64
Tabla 2
Aminas vasoactivas
Caractersticas
Tamao 111 Da 176,2 Da
Formacin Mediador preformado, formado por la
descarboxilacin del aminocido
L-histidina
Mediador preformado, formado a
partir del triptfano de la dieta,
oxidacin y descarboxilacin
Localizacin En los grnulos de los mastocitos, los
neutrlos baslos y, en algunas
especies, en las plaquetas
En algunas clulas (p. ej., clulas
neurales) del aparato
gastrointestinal, el cerebro, el
pulmn, las plaquetas; en los
roedores: mastocitos y baslos
Inactivacin Por la histaminasa o la desaminacin
oxidativa
Mediante monoaminooxidasas
Liberacin En respuesta a procesos inmunolgicos
(p. ej., desafo antignico de clulas
sensibilizadas a anticuerpos IgE,
exposicin a los componentes del
complemento C3a y C5a), lesiones
fsicas, traumatismos mecnicos,
radiacin, calor, varias sustancias
qumicas (p. ej., toxinas, venenos de
serpiente, melitina del veneno de abeja,
tripsina, sales biliares, ATP)
A partir de las plaquetas durante la
reaccin de liberacin
plaquetaria desencadenada por
estmulos como trombina, tripsina,
colgeno, complejos antgeno-
anticuerpo, supercies cubiertas
de globulina, venenos de
serpiente, adrenalina, PAF y ADP
A partir de las neuronas en
respuesta a varios estmulos
Funcin Desempea una funcin en la fase activa,
inmediata y aguda del aumento de la
permeabilidad vascular
Produce un aumento de la permeabilidad
vascular y tiene efectos de contraccin
intensos sobre los msculos lisos
vasculares y bronquiales
Dilatacin de las arteriolas
Aumento de la permeabilidad vascular
por la formacin de grietas entre los
mrgenes de las clulas endoteliales
adyacentes de las vnulas que
contactan con ellas
Probablemente estimula las clulas
estromales para que sinteticen y liberen
eotaxinas, que son quimiocinas potentes
para la quimiotaxis de los eosinlos
Tiene efectos sobre el msculo liso,
los vasos sanguneos y los
nervios en diferentes regiones del
organismo, y puede mediar la
sensacin de dolor
Como un neurotransmisor
monoamina, afecta a muchos
centros sensitivos y superiores
En el cerebro, incluyendo la
memoria, el apetito, el sueo y el
aprendizaje
Conocida por muchos como la
hormona del bienestar
La serotonina, junto con las
endornas, GABA y dopamina,
constituyen el proceso biolgico
que se conoce como la cascada
graticante
Datos tomados de Bochsler PN, Slauson DO. Inammation and repair of tissue. In: Slauson DO, Cooper BJ,
editors. Mechanisms of disease. A textbook of comparative general pathology. 3rd edition. St. Louis (MO):
Mosby; 2002. p. 141245.
Histamina
N
N
H
NH
2
Serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT)
NH
2
N
H
HO
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
65
Metabolitos del cido araquidnico
Los metabolitos del AA de la inflamacin se descubrieron en los aos 70, cuando se
explic parcialmente el modo de accin del cido acetilsaliclico (aspirina). John Vane
recibi el premio Nobel por su trabajo en este campo [1]. Los metabolitos del AA
actan en varios procesos biolgicos, entre los cuales tiene importancia la inflamacin.
Tienen una funcin en la vasodilatacin, el filtrado vascular, la coagulacin, la trom-
bosis y el dolor, y en los trastornos cardiovasculares, endocrinos y otros. Estos meta-
bolitos, que a veces se denominan autacoides, son hormonas a corto plazo que se
forman rpidamente y se descomponen espontneamente o son destruidas rpidamen-
te por enzimas.
El AA es un cido graso poliinsaturado C
20
con enlaces intercalados de metileno
(5,8,11,14-cido eicosatetraenoico), que deriva de los alimentos o de la conversin de
cido grasos esenciales como el cido linoleico (linoleato) o el cido -linolnico
(linolenato) [1].
Hay una relacin notable entre la actividad fundamental de varios cidos grasos y su
capacidad para convertirse en prostaglandinas o leucotrienos; no parece que los cidos
grasos esenciales ejerzan todos sus efectos fisiolgicos a travs de las sntesis de prosta-
glandinas o leucotrienos. La funcin de los cidos grasos esenciales en la formacin de
membranas no tiene relacin con la produccin de metabolitos del AA. Las prostaglandi-
nas y los leucotrienos no alivian los sntomas de la deficiencia de cidos grasos esenciales,
y el sndrome por deficiencia de cidos grasos esenciales no est causado por la inhibicin
crnica de la sntesis de metabolitos del AA [128]. Se esterifican para formar fosfolpidos
de membrana como fosfatidilcolina en muchos tipos de clulas del organismo, incluyendo
las clulas inflamatorias. Para que se lleve a cabo el metabolismo celular del AA, primero
debe liberarse desde su posicin esterificada en estos fosfolpidos de membrana para
alimentar la cascada del AA. La liberacin desde la membrana se consigue principal-
mente debido a la actividad de las fosfolipasas celulares ligadas a la membrana [1].
Fosfolipasa A
2
Las fosfolipasas son enzimas que transforman los fosfolpidos en cidos grasos y otras
sustancias lipoflicas. Existen cuatro clases principales, denominadas A, B, C y D, que
se diferencian por el tipo de reaccin que catalizan. El AA se separa de las membranas
celulares principalmente por la actividad de isoformas de la fosfolipasa A
2
(PLA
2
, o
Figura 5. Bradicinina.
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66
2-acilhidrolasa fosfatada, EC 3.1.1.4), que tienen actividad sobre varios sustratos fos-
folpidos de la membrana. Su peso molecular es de alrededor de 13.900 d. Otras fosfo-
lipasas (C y D) tienen una especificidad de sustrato limitada. PLA
2
y sus isoformas
participan en varias funciones corporales, no slo en la cascada del AA. Las fosfolipa-
sas A
2
incluyen varias familias de protenas no relacionadas, con una actividad enzi-
mtica comn. Dos de las familias ms importantes son las fosfolipasas A
2
secretadas
y citoslicas. Otras familias incluyen la PLA
2
independiente de Ca
2+
y la PLA
2
asocia-
da a la lipoprotena, la acetilhidrolasa del factor activador plaquetario [1,128].
Las fosfolipasas A
2
secretadas son las formas extracelulares de las fosfolipasas A
2
.
Se han aislado en distintos venenos (de serpiente, de abeja y de avispa), en prctica-
mente todos los tejidos de todos los mamferos estudiados (incluyendo el pncreas y el
rin) y en las bacterias. Necesitan Ca
2+
para activarse. Las PLA
2
pancreticas actan
en la digestin inicial de los componentes fofolipdicos de la grasa de la dieta. Las
fosfolipasas de los venenos ayudan a inmovilizar a las vctimas fomentando la lisis
celular [129].
Las PLA
2
citoslicas son las PLA
2
intracelulares, tambin dependen del calcio,
tienen una estructura tridimensional completamente diferente y son significativamente
ms grandes que las PLA
2
secretadas (ms de 700 residuos). Incluyen un dominio C2
y un dominio cataltico grande [129].
Estas fosfolipasas participan en los procesos de sealizacin celulares, como los
de la respuesta inflamatoria. El AA producido es tanto una molcula de sealizacin
como el precursor de otras molculas de sealizacin denominadas eicosanoides.
Estas molculas incluyen leucotrienos y prostaglandinas. Algunos eicosanoides se
sintetizan a partir del diacilglicerol liberado de la bicapa lipdica mediante la fosfo-
lipasa C [1].
Las fosfolipasas pueden activarse cuando los receptores de membrana adecuados
que se encuentran en la superficie celular se unen a estmulos proinflamatorios como
las citocinas, factores de crecimiento, pptidos quimiotcticos u otras molculas de
sealizacin importantes para una clula en particular. El AA liberado puede movili-
zarse por dos rutas principales, la ruta COX y la de la lipooxigenesa (LOX). Las rutas
del metabolismo son divergentes. La sntesis de los prostanoides prostaglandina (PG
2
)
y tromboxano (TX
2
) por la ruta COX compite con la sntesis de leucotrienos (es decir,
LT
4
), y las lipoxinas (es decir, LX
4
) por la ruta LOX para el sustrato araquidonato
(v. figura 6) [128].
La regulacin de las PLA
2
est mediada a travs de las rutas de sealizacin
MAPK y NFB. Los investigadores demostraron que la expresin de las PLA
2
cito-
slicas se relacionan con la liberacin de PGE
2
por las clulas estimuladas por endo-
toxinas (LPS), mediada al menos en parte por las rutas de sealizacin MAPK y
NFB [130]. Recientemente se ha demostrado que las PLA
2
tienen una funcin
importante en la muerte celular que se produce por necrosis o por apoptosis. En la
necrosis, la muerte celular se caracteriza por la inflamacin de la clula y las orga-
nelas, la deplecin de ATP, el aumento de la permeabilidad de la membrana plasm-
tica y la liberacin de macromolculas. Se ha propuesto que durante la necrosis
aumenta la actividad de las PLA
2
, lo que produce la hidrlisis acelerada de los fos-
folpidos de la membrana que, a su vez, aumenta la permeabilidad de la membrana
plasmtica y la lisis celular [131].
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
67
La ruta de la ciclooxigenasa
Las prostaglandinas de la ruta COX se denominan prostanoides. La sntesis de prosta-
noides implica el consumo de dos molculas O
2
catalizado por la prostaglandina H sin-
tasa (PGHS), que tiene dos actividades enzimticas distintas, COX y peroxidasa. PGHS
se presenta como dos isoenzimas, PGHS-1 (peso molecular de 67 kd) y PGHS-2 (peso
molecular de 72 kd), o como ciclooxigenasa 1 (COX1) y ciclooxigenasa 2 (COX2), cada
una de las cuales tiene actividades COX y peroxidasa. El producto de la ruta COX,
y endoperxido (PGH), se convierte en prostaglandinas D, E y F, as como en TXA
2
y
prostaciclina (PGI
2
) [128].
La ruta COX se nombra por las enzimas responsables de la conversin del AA en
la prostaglandina inestable endoperxido PGG
2
, que se reduce a un segundo endope-
rxido, PGH
2
, que puede utilizarse como sustrato para sintetizar varias prostaglandi-
nas diferentes: PGE
2
, un vasodilatador, inductor de edema y estimulador de los ner-
vios sensitivos que causan el dolor; PGD
2
, un vasodilatador; y prostaglandina F
2
(PGF
2
), un vasoconstrictor y broncoconstrictor. Se producen ERO e hidroxiheptade-
catrienoato como productos finales de la reduccin de PGG
2
catalizada por la funcin
peroxidasa. Las ERO inducen la POL y, como consecuencia, la formacin de MDA
(v. figura 7) [1].
Figura 6. Conversin del cido araquidnico en prostaglandinas y tromboxano a travs de la
ruta de la ciclooxigenasa, y en leucotrienos y lipoxinas a travs de la ruta de la lipooxigenasa.
(Adaptado de Mayes PA. Metabolism of unsaturated fatty acids and eicosanoids. In: Murray RK,
Granner DK, Mayes PA, et al, editors. Harpers biochemistry. 25th edition. Appleton and Lange;
2000. p. 250; con autorizacin).
Varios estmulos,
por ejemplo
angiotensina II,
bradicinina,
adrenalina, trombina
cido araquidnico
Fosfolpidos de membrana
FOSFOLIPASA A
2
CICLOOXIGENASA LIPOOXIGENASA
Leucotrienos
Lipoxinas
Prostaglandinas
Tromboxanos
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68
Los prostanoides se han asociado al dolor que se experimenta durante la inflama-
cin. Pueden producir vasodilatacin y pueden colaborar con otros mediadores para
producir un aumento de la permeabilidad vascular y edema. PGH
2
tambin puede
convertirse en PGI
2
mediante la accin de la prostaglandina I
2
sintasa, principalmente
en las clulas endoteliales, o en TXA
2
por la accin de la tromboxano A
2
sintasa, prin-
cipalmente en las plaquetas, y el cido acetilsaliclico a bajas dosis inhibe su sntesis
especficamente. PGI
2
y TXA
2
son molculas inestables, de vida corta, con propieda-
des biolgicas importantes en la inflamacin y la coagulacin sangunea. PGI
2
se pro-
duce en las paredes de los vasos sanguneos y es un potente vasodilatador e inhibidor
de la agregacin plaquetaria. Los tromboxanos son vasoconstrictores importantes y
agregadores plaquetarios potentes. Aunque utilicen la misma ruta (COX), las prostaci-
clinas y los tromboxanos son antagnicos. El sistema equilibra su sntesis segn las
necesidades de cada actividad. Cada tipo celular produce slo un tipo de prostanoide
[128]. A una concentracin tan pequea como 1 ng/mL las prostaglandinas causan
contraccin de los msculos lisos en los animales. Los usos teraputicos potenciales
incluyen la prevencin de la concepcin, la finalizacin de la gestacin, la prevencin
o el alivio de las lceras gstricas, el control de la inflamacin y de la presin arterial,
Figura 7. Conversin de cido araquidnico en prostaglandinas y tromboxanos de la serie 2.
Ambas actividades protagonistas pueden atribuirse a una enzima, la prostaglandina H sintasa.
En las prostaglandinas y tromboxano de las series 1 y 3 se producen conversiones similares.
HHT, hidroxiheptadecatrienoato; PG, prostaglandina; PGI, prostaciclina; Tx, tromboxano.
(Adaptado de Mayes PA. Metabolism of unsaturated fatty acids and eicosanoids. In: Murray
RK, Granner DK, Mayes PA, et al, editors. Harpers biochemistry. 25th edition. Appleton and
Lange; 2000. p. 250; con autorizacin.)
Araquidonato
CICLOOXIGENASA
cido acetilsaliclico
Indometacina
Ibuprofeno
PROSTACICLINA
SINTASA
PEROXIDASA
Malondialdehdo + HHT
TROMBOXANO
SINTASA
ISOMERASA
Imidazol
6-ceto PGF
REDUCTASA
ISOMERASA
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
69
y el alivio del asma y la congestin nasal. Las prostaglandinas aumentan la formacin
de AMPc en las plaquetas, las glndula tiroidea, el cuerpo lteo, los huesos fetales, la
adenohipfisis y el pulmn, pero disminuyen la sntesis de AMPc en las clulas tubu-
lares renales y el tejido adiposo [128]. Las prostaglandinas tienen muchas otras funcio-
nes; incluso median la movilidad del esperma en las aves y en los mamferos. Los
investigadores han observado que las prostaglandinas estn presentes en el plasma
seminal y en el esperma de los pavos, y que los inhibidores de COX disminuyen la
movilidad del esperma en los pavos [132]. Aunque una descripcin detallada de las
funciones de las prostaglandinas sobrepasara el mbito de este artculo.
La formacin de prostaglandinas desactivadas se consigue parcialmente por una
propiedad destacable de la COX: la destruccin autocataltica; es decir, COX es
una enzima suicida. La inactivacin de las prostaglandinas, una vez formadas,
es pida. Probablemente la causa principal sea la presencia de la enzima 15-hidroxi-
prostaglandina deshidrogenasa en la mayora de los tejidos de los mamferos [128]. En
este mecanismo participan dos enzimas COX: COX1 y COX2, que tambin se conocen
como PGHS-1 y PGHS-2. COX1 es responsable de fomentar la produccin de los
metabolitos del AA constitutivos para satisfacer las necesidades diarias de las clulas,
que incluyen la necesidad de prostaglandinas para ayudar a regular el flujo sanguneo
en los tejidos produciendo variaciones fisiolgicas normales, moderadas, de la vasodi-
latacin, para la estimulacin normal de las clulas de la mucosa gstrica para producir
moco y otras funciones. COX1 es una enzima que debe estar disponible y ser funcional
para las actividades domsticas diarias [1]. La transcripcin de COX2 est regulada
por NFB y est presente en circunstancias inusuales, como durante la inflamacin.
Tpicamente, MAPK estimula el gen COX2 y la expresin de la protena, y libera
prostaglandina, pero tiene poco efecto sobre COX1 [133].
Algunas clulas del organismo (p. ej., las clulas de Kupffer del hgado) normal-
mente tienen una cantidad pequea de COX2, que permite la generacin de cantidades
mayores de prostaglandinas y de tromboxano de las que normalmente se produciran
en un tejido en particular, y por tanto contribuye al proceso inflamatorio [1]. Se sabe
que los AINE habituales, incluyendo cido acetilsaliclico, ibuprofeno, fenilbutazona,
flunixina y otros, inhiben COX1 slo, o tanto COX1 como COX2, a niveles variables.
El cido acetilsaliclico, un AINE, inhibe tanto PGHS-1 (COX1) como PGHS-2
(COX2) mediante acetilacin (v. figura 8) [128,134].
La mayora de los dems AINE, como indometacina e ibuprofeno, inhiben COX
compitiendo con el araquidonato. Los corticoesteroides antiinflamatorios inhiben com-
pletamente la transcripcin de PGHS-2 (COX2), pero no la de PGHS-1 (COX1) [128].
Generalmente, estos frmacos mejoran algunos de los efectos adversos de la inflamacin,
pero su actividad conlleva un riesgo de que se produzcan lceras gstricas y otros efectos
secundarios indeseables. Los AINE ms nuevos COX2-selectivos pueden controlar en
parte esta ruta de la inflamacin, conservando algunas o todas las actividades domsticas
de COX2, y por tanto evitando los efectos secundarios clsicos, como las lceras [1].
Los glucocorticoesteroides tambin son inhibidores poderosos de la inflamacin.
Inhiben las enzimas PLA
2
y tambin inhiben la expresin o actividad de la enzima
COX2. Los corticoesteroides inhiben las enzimas PLA
2
induciendo lipocortina, una
protena inhibidora de las enzimas PLA
2
. Estos efectos dependen de la dosis. Los cor-
ticoesteroides suprimen tanto COX1 (que no est disponible para el AA) como COX2
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VAJDOVICH
70
(que est inhibido). Tambin suprimen la transcripcin de algunos genes de citocinas
proinflamatorias, y por tanto suprimen las concentraciones de algunas citocinas as
como de NO sintasa inducible (iNOS). Los corticoesteroides tambin inhiben la fun-
cin de algunas clulas del sistema inmunitario; por ejemplo, son linfolticos e inhiben
la emigracin de los eosinfilos desde la mdula sea. Los corticoesteroides, como los
AINE, pueden causar efectos secundarios si se utilizan durante perodos prolongados
[1]. Las enzimas COX son esenciales en algunos trastornos neoplsicos, as como en
los trastornos inflamatorios. La isoforma inducible de la enzima, COX2, se sobreex-
presa en algunas lesiones malignas y premalignas. En los estudios se ha observado que
la inhibicin de COX2 es una estrategia eficaz para la quimioprevencin. Los AINE
como celecoxib son inhibidores de COX2 muy conocidos. Se ha descubierto que los
trisulfuros trialil liposolubles inhiben la expresin del gen COX2 y son eficaces contra
los tumores caninos y humanos [135].
Regulacin de la ruta de la ciclooxigenasa por radicales libres y antioxidantes. Existen
varios factores de transcripcin y molculas de sealizacin que activan los genes COX.
Las funciones de algunos de ellos dependen de los radicales libres y los antioxidantes.
Los ejemplos siguientes muestran que las molculas con propiedades antioxidantes, ade-
ms de otros factores, pueden influir en la expresin de los genes COX.
La pirrolidina ditiocarbamato (PDTC) es un antioxidante. Los investigadores han
demostrado que el factor de transcripcin NFB es un regulador clave de la expresin
de COX2 en la produccin de PGE
2
inducida por TNF, que est mediado por una ruta
tirosina cinasa. Si est regulado, NFB forma complejos con COX2 que codifican
Figura 8. El cido acetilsaliclico inactiva la ciclooxigenasa por acetilacin de una serina,
probablemente en o cerca del sitio activo. (Tomado de Zubay GL, Parson WW, Vance DE.
Principles of biochemistry. Part 5. Metabolism of lipids. Dubuque (IA): Wm C. Brown Commu-
nications, Inc.; 1995. p. 454; con autorizacin.)
(Serina)
(Serina)
Ciclooxigenasa
(Activa)
Ciclooxigenasa
(Inactiva)
cido saliclico
cido acetilsaliclico
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
71
ADN. El complejo COX2-NFB ADN-protena desaparece tras el tratamiento con
PDTC o herbimicina A (un inhibidor de tirosina cinasa). PDTC y herbimicina A ate-
nan la liberacin de PGE
2
estimulada por TNF- [136].
GSH intracelular modula la expresin del gen COX2 estimulada por LPS y la snte-
sis de prostaglandinas en las clulas mediante la activacin temprana de MAPK
[133].
Las fracciones celulares pequeas de las clulas aisladas de la mucosa gstrica
canina son productores principales de la PGE
2
, y los macrfagos son el origen celular
predominante. Las fracciones celulares principales y parietales producen muy poca
PGE
2
. La actividad de PGHS depende de la presencia continua de hidroperoxidasas.
Se ha demostrado que H
2
O
2
estimula la produccin de PGE
2
dependiente de la concen-
tracin [137].
GSH-Px dependiente de selenio, modulando las concentraciones celulares de cidos
grasos hidroperoxidasas, puede influir en las enzimas clave de la cascada AA/ruta
COX. Se ha sugerido que la ruta COX modulada es responsable de la disfuncin vas-
cular en la deficiencia de selenio, probablemente debido a la disminucin de la activi-
dad de GSH-Px dependiente de selenio [138].
Los radicales de oxgeno producidos por el sistema hipoxantina-XO producen una
constriccin potente de la circulacin pulmonar en el cerdo. Se cree que D-penicilami-
na es un limpiador de radicales libres. D- penicilamina inhibi el aumento de la con-
centracin plasmtica de tromboxano B
2
(TXB
2
), 6-ceto-PGF
1
, cisteinil leucotrienos
inducida por XO [139].
Ruta de la lipooxigenasa
La va alternativa de la cascada del AA es la ruta de la LOX. En este proceso participan
varias enzimas LOX (p. ej., 5-LOX, 12-LOX y 15-LOX) que producen lipoxinas. Exis-
ten tres LOX diferentes (dioxigenasas) que insertan oxgeno en las posiciones 5, 12 y
15 del AA, respectivamente, dando lugar a la forma hidroperoxidada del cido hidro-
peroxieicosatetraenoico (HPETE). El primer paso del metabolismo del AA por esta
ruta implica la activacin de la enzima 5-LOX (una enzima de 78 kd dependiente del
ATP y del Ca
2+
) por la protena activadora de 5-LOX, lo que produce la sntesis de
5-cido hidroperoxieicosatetraenoico (5-HPETE), que es el precursor de leucotrienos
potentes [1].
5-LOX, una vez activada, se transloca desde el citosol al compartimento de la mem-
brana nuclear o plasmtica [131]. Los leucotrienos se denominan as debido a la estructu-
ra de la cadena trieno y porque se aislaron por primera vez en los leucocitos, pero tambin
se sintetizan en las clulas del mastocitoma y las plaquetas. Los leucotrienos se producen
en respuesta a estmulos inmunolgicos y no inmunolgicos (v. figura 9) [128].
Un metabolito que deriva de 5-HPETE es 5-HETE, que es quimiotctico para los
leucocitos, pero la mayora de los 5-HPETE generalmente se convierten en el leuco-
trieno intermedio LTA
4
, que despus se metaboliza para dar origen al resto de los leu-
cotrienos. LTB
4
es un mediador inflamatorio potente e induce la quimiotaxis de los
leucocitos (especialmente los neutrfilos), la agregacin, el aumento de la adherencia,
la liberacin de enzimas lisosomales y la produccin de O
2
. Alternativamente, LTA
4
puede procesarse para producir LTC
4
, que despus se convierte en LTD
4
y LTE
4
[1].
LTC
4
se forma mediante la adicin del pptido GSH a travs de un enlace tioter. La
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VAJDOVICH
72
siguiente eliminacin de glutamato y glicina produce LTD
4
y LTE
4
, secuencialmente
[128]. Al final de esta ruta se forma LTF
4
, un producto de la degradacin inactivo. La
combinacin de LTC
4
, LTD
4
y LTE
4
es responsable de la actividad biolgica, y antes
se conoca como la sustancia de reaccin lenta de la anafilaxia. A concentracin
suficiente, estos leucotrienos pueden producir una vasoconstriccin intensa. Junto con
LTB
4
son ms potentes que la histamina aumentando la permeabilidad vascular y atra-
yendo a los leucocitos, y parece que son reguladores importantes en muchas enferme-
dades que implican reacciones inflamatorias o de hipersensibilidad inmediata, como el
asma. Es ms, son de 100 a 1000 veces ms potentes que la histamina o las prostaglan-
Figura 9. Conversin del cido araquidnico en leucotrienos y lipoxinas de la serie 4 a travs
de la ruta de la lipooxigenasa. Los nmeros rodeados con un crculo indican 1, peroxidasa; 2,
leucotrieno A
4
epxido hidrolasa; 3, glutatin S transferrasa; 4, -glutamiltranspeptidasa; 5,
cisteinil-glicina dipeptidasa. En las series 3 y 5 de los leucotrienos se producen conversiones
similares. HETE, hidroxieicosatetraenoato; HPETE, cido hidroperoxieicosatetraenoico. (Tomado
de Mayes PA. Metabolism of unsaturated fatty acids and eicosanoids. In: Murray RK, Granner
DK, Mayes PA, et al, editors. Harpers biochemistry. 25th edition. Appleton and Lange; 2000.
p. 250; con autorizacin.)
12-LIPOOXIGENASA
5-LIPOOXIGENASA
5-LIPOOXIGENASA
15-LIPOOXIGENASA
15-LIPOOXIGENASA
Araquidonato
Leucotrieno B
4 Leucotrieno A
4
Lipoxinas, p. ej. LXA
4
Glutatin
Leucotrieno C
4
Leucotrieno D
4a Leucotrieno E
4
cido glutmico
Cistena Cistena Cistena
Glicina Glicina
Glicina
cido glutmico
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
73
dinas contrayendo la musculatura de las vas respiratorias bronquiales. Los leucotrie-
nos son vasoactivos, y se ha encontrado 5-LOX en las paredes arteriales [128]. Los
leucotrienos son objetivos de los frmacos antiinflamatorios. La mayora de los tipos
celulares que predominan crean uno o slo algunos de los productos de la ruta del AA,
y su actividad depende de qu enzimas o sintasas activas tenga un tipo en especial de
clula y de que puedan activarse [1].
LTB
4
y, en menor medida, otros productos de la LOX son capaces de inducir la
agregacin y la degranulacin de los neutrfilos, y la secrecin de grnulos azurfilos
en los leucocitos PMN humanos est mediada en gran medida por un efecto autocrino
de LTB
4
. En algunos estudios, aunque no en todos, se ha observado que se producen
ERO debido al desafo de LTB
4
, lo que indica que los metabolitos de la LOX son malos
activadores del mecanismo de explosin respiratoria. En los neutrfilos humanos se
observ un aumento del efecto de LTB
4
a travs del metabolismo oxidativo estimulado
por pptidos quimiotcticos. Se ha observado que LTB
4
es un potente activador de
PPAR-, un factor de transcripcin que desempea un papel fundamental en la homeos-
tasis lipdica mediante la regulacin de la degradacin oxidativa de los cidos grasos y
sus derivados, como el propio LTB
4
. Esta observacin dio lugar a la hiptesis de que
la activacin de su propio metabolismo a travs de omega-oxidacin puede actuar
como una retroalimentacin negativa, ayudando a limitar el efecto proinflamatorio de
LTB
4
. Esta hiptesis tambin proporciona nuevas bases para la interpretacin de los
efectos beneficiosos de la manipulacin diettica de los lpidos en las patologas aso-
ciadas a la sntesis de mediadores inflamatorios lipdicos [140].
In vitro, la flunixina y el inhibidor de 5-LOX cido nordihidroguaiartico (NDGA)
fueron los inhibidores ms potentes de la migracin dirigida por LTB
4
de los neutrfilos
caninos. La fenilbutazona inhibi la migracin en menor medida, y la indometacina no
lleg al 50% de inhibicin. Ex vivo, la flunixina casi inhibi completamente la respuesta de
LTB
4
en una hora, y segua teniendo una actividad inhibidora significativa 24 horas despus
de administrar una dosis intravenosa de 1 mg/kg. La fenilbutazona fue menos activa ex vivo,
pero suprimi la quimiotaxis una hora despus de la administracin de una dosis intrave-
nosa de 20 mg/kg. Se ha sugerido que parte de la accin antiinflamatoria de la flunixina en
los perros puede atribuirse a la inhibicin del reclutamiento de neutrfilos [141].
Las lipoxinas son una familia de tetraenos conjugados que tambin se originan en
los leucocitos. Estn formados por la accin combinada de ms de una LOX, introdu-
ciendo ms oxgeno en la molcula. Se han formado varias lipoxinas (LXA
4
a LXE
4
)
de forma similar a la que se ha descrito para los leucotrienos [128].
Regulacin de la ruta de la lipooxigenasa por radicales libres y antioxidantes. Como
en la ruta de la COX, varios factores de transcripcin y molculas de sealizacin
activan los genes LOX. Entre estos agentes reguladores se encuentran los radicales
libres y los antioxidantes. A continuacin se ofrecen algunos ejemplos que demuestran
que las molculas con propiedades antioxidantes, adems de otros factores, pueden
influir en la expresin del gen LOX.
Se ha sugerido que los eicosanoides desempean una funcin dual regulando la
supervivencia y la apoptosis celular en varios tipos de clulas, probablemente de forma
independiente del estrs oxidativo. NDGA, un inhibidor de LOX, produjo apoptosis en
lneas celulares, mientras que el cido acetilsaliclico, un inhibidor de COX, no tuvo
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74
efecto. Se descubri que la caspasa (la cinasa dependiente de ciclina que regula la
apoptosis) y los metabolitos poli (ADP-ribosa) participaban en la ruta de transduccin
de la seal de la apoptosis inducida por NDGA en las clulas, pero NDGA no afectaba
a la apoptosis inducida por H
2
O
2
[142].
El antioxidante GSH-Px tiene un efecto inhibidor sobre la produccin de la mayora
de los mediadores de la ruta del AA. GSH-Px dependiente de selenio acta modulando
los niveles celulares de cidos grasos hidroperoxidasas y puede influir en enzimas
fundamentales de la cascada del AA, las rutas COX y LOX. Aunque se observ que la
oxidacin enzimtica del AA era relativamente inferior en la ruta LOX que en la ruta
COX, en los cultivos deficientes de selenio se produjo significativamente ms 15-HPE-
TE que en las clulas a las que se les haba administrado suplementos de selenio [138].
El ebselen es un componente seleno-orgnico que ejerce una actividad de tipo GSH-Px
e inhibe la actividad LOX del AA [143].
Se dise molecularmente y se sintetiz una serie nueva de derivados (3-piridilme-
til) benzoquinona con el propsito doble de inhibir TXA
2
y las enzimas de la biosnte-
sis de leucotrienos. Se demostr que adems actuaban eliminando las especies reacti-
vas de oxgeno [144].
La D-penicilamina inhibe la sntesis tanto de los productos de LOX como de COX,
probablemente por su accin como limpiador de radicales de oxgeno [139].
La vitamina E tiene una funcin importante en el sistema antioxidante del cerebro,
pero su concentracin es variable en zonas diferentes, como se observ tanto en espe-
cies de mamferos (ratas) como de aves (pollos) [145,146]. Por tanto, los signos clni-
cos causados por esta deficiencia son especficos del sitio.
Se ha sugerido que el cerebelo tiene menos proteccin antioxidante que el cerebro,
y que la actividad superior de PLA
2
y la mayor propensin a oxigenar el AA a travs
de la ruta LOX a expensas de la ruta PGHS puede hacer que esta regin del cerebro sea
especialmente vulnerable a la lesin oxidativa en la encefalomalacia nutricional. Se
compararon las actividades de PGHS y LOX en el cerebelo y en el cerebro de pollitos
con suficiente vitamina E y en pollitos en los que se provoc encefalomalacia nutricio-
nal mediante una dieta deficiente en vitamina E. La produccin de prostaglandinas fue
del 50 al 60% inferior en el cerebelo de los pollitos atxicos que en el cerebelo de los
pollitos de control, mientras que en la ruta LOX cerebelar se observ la tendencia
opuesta, utilizando radioinmunoanlisis de 15-HETE [147].
Factores nutricionales que influyen en la produccin de metabolitos del cido
araquidnico
Algunos alimentos contienen AA, y muchos alimentos (p. ej., aceite de girasol, aceite de
maz) contienen cidos grasos comunes, como el cido linoleico (cido graso -6), que
producen AA en el metabolismo. Este AA puede incorporarse a los fosfolpidos de la
membrana celular para utilizarse ms adelante en la cascada del AA. Por el contrario,
otros alimentos (aceite de camo, aceite de semillas de lino y hortalizas de hojas verdes)
contienen cido -linoleico (cido graso -3), y este cido graso se metaboliza a cido
eicosapentaenoico (EPA), que se encuentra en el aceite de pescado procedente de peces
marinos y que se metaboliza para formar cido docosahexaenoico (DHA). Cuando en la
dieta hay cantidades suficientes de EPA y DHA, se incorporan a los fosfolpidos de
la membrana celular, desplazando parte del AA. Cuando la cascada del AA est activada,
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
75
EPA y DHA compiten con el AA para entrar en la cascada; es decir, compiten por los
sitios de unin de las enzimas COX y 5-LOX. Como resultado, se metaboliza menos AA
y se producen menos prostaglandinas proinflamatorias y leucotrienos. Los distintos pro-
ductos del metabolismo de EPA y DHA no son tan activos biolgicamente, y por tanto
disminuye el mecanismo inflamatorio relacionado con AA (v. figura 10) [1,148].
Los cambios de la ingestin diettica de cidos grasos esenciales, adems de modifi-
car los procesos inflamatorios, tambin modifican la homeostasis y muchos otros meca-
nismos. En los esquimales de Groenlandia se ha observado una incidencia baja de car-
diopatas, disminucin de la agregacin plaquetaria y tiempos de coagulacin
prolongados, lo que se ha atribuido a su alta ingestin de aceite de pescado que contiene
20:5 3 (EPA), que da lugar a series de prostaglandina 3 (PG
3
) y tromboxano (TX
3
). PG
3
y TX
3
inhiben la liberacin de araquidonato desde los fosfolpidos y la formacin de
PG
2
y TX
2
. PG
3
es un antiagregador plaquetario tan potente como PGI
2
, pero TXA
3
es
un agregador ms dbil que TXA
2
; as el equilibrio de la actividad se desplaza hacia la
no agregacin. Adems, las concentraciones plasmticas de colesterol, triacilglicerol y
lipoprotenas de baja densidad y de muy baja densidad tambin son bajas en los esqui-
males, mientras que las concentraciones de lipoprotenas de alta densidad son altas (todos
estos factores actan contra la aterosclerosis y el infarto de miocardio) [128].
Factores nutricionales de los metabolitos del cido araquidnico y dermatitis atpica
canina. Los estudios clnicos ms recientes han proporcionado pruebas de que los
suplementos de cidos grasos -3 solo o combinado con cido gamma-linoleico, que
es un producto metablico de la familia de los cidos grasos -6, son beneficiosos
clnicamente para el tratamiento de las dermatitis alrgicas caninas. El mecanismo de
accin de estos beneficios clnicos todava no est claro, porque en ninguno de los
estudios se ha demostrado que exista una relacin entre los cambios de los cidos
grasos cutneos o plasmticos, o las concentraciones de eicosanoides, y la mejora
clnica. Debido a que los rangos de dosificacin son amplios, no puede determinarse
la importancia de las concentraciones totales de cidos grasos -3 u -6, la concentra-
cin de cidos grasos individuales y la proporcin optima entre -6 y -3. Los estudios
in vitro con mastocitos proporcionan otra forma de examinar los efectos de los cidos
grasos poliinsaturados en las dermatitis atpicas caninas. Al aadir varios cidos gra-
sos -3 se produjo una disminucin significativa de los mediadores inflamatorios pro-
ducidos por los mastocitos cultivados (v. figura 11) [148].
Factores nutricionales de los metabolitos del cido araquidnico y la produccin de
radicales libres. Tanto los procesos inflamatorios como la formacin de radicales
libres de oxgeno y/o nitrgeno disminuyen cuando se administran suplementos de
cidos grasos -3 derivados del aceite de pescado. Por tanto, los suplementos dietti-
cos de cidos grasos -3 podran proteger los tejidos de las lesiones provocadas por los
radicales libres de oxgeno en varias enfermedades en las que estn alterados los meca-
nismos de defensa oxidantes/antioxidantes. Se ha demostrado que los suplementos de
cidos grasos -3 ayudan a prevenir la POL y a proteger a los eritrocitos de las lesiones
oxidativas en las ratas macho albinas Wistar despus de administrar suplementos de
aceite de pescado en la dieta (0,4 g/kg/da) durante 30 das [149]. El proceso inflama-
torio puede determinarse por la produccin de radicales libres en las clulas que estn
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VAJDOVICH
76
Figura 10. Metabolismo de los cidos grasos omega-3 y omega-6. (Tomado de Logas D. Are
fatty acids effective in canine atopic dermatitis: an evidence-based medicine update. In: Procee-
dings of the 2006 Hills Symposium on Dermatology. Supported by an educational grant from Hills
Pet Nutrition, Inc., Topeka (KN): Educational Concepts, LLC; 2006. p. 18; con autorizacin.)
cidos grasos omega 6 Enzimas cidos grasos omega 3
Linoleico 18:2
6-desaturasa
Alfa linolnico (ALA) 18:3
Gamma linolnico (GLA) 18:3
Elongasa
Octadecatetraenoico 18:4
Dihomogamma-linolnico
(DGLA)
20:3
5-desaturasa
Eicosatetraenoico 20:4
Araquidnico (AA) 20:4
Elongasa
Eicosapentaenoico (EPA) 20:5
Adrnico 22:4
Elongasa
Docasapentaenoico 22:5
Tetracosatetraenoico 24:4
4-desaturasa
Tetracosapentaenoico 24:5
Tretacospentaenoico 24:5
-oxidacin
Tetrahexaenoico 24:6
Docosapentaenoico 22:5 Docosahexaenoico (DHA) 22:6
Aceite de girasol
Aceite de maz
Aceite de crtamo
Aceite de camo
Aceite de semillas del lino
Hortalizas verdes
OMEGA 6 OMEGA 3
cido linoleico (LA) cido alfa-linolnico (ALA) 18:2 18:3
18:3 18:4
20:3 20:4
20:4 20:5
22:4 22:5 24:5 24:4
24:5 24:6
22:5 22:6
-6-desaturasa
Elongasa
-5-desaturasa
Elongasa
-4-desaturasa
cido gamma-linolnco (GLA)
Aceite de primavera nocturna
Aceite de borraja
Aceite de grosellas negras
cido dihomogamma linolnico
(DGLA)
cido araquidnico (AA) cido eicosapentaenoico (EPA)
Aceite de pescado marino
cido docosahexaenoico (DHA)
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realizando la fagocitosis. La produccin de O
2
en los macrfagos y/o monocitos
humanos estimulados y la quimioluminiscencia de los monocitos, dos indicadores de
la actividad inflamatoria de los monocitos, se redujeron significativamente tras la
ingestin de 6 g de cidos grasos -3 al da durante 6 semanas [150]. Las concentra-
ciones elevadas de DHA etil ster redujeron la formacin de O
2
inducida por PMA sin
afectar a la actividad celular de la protena cinasa C [151]. La sntesis de NO es un
factor importante en los procesos nocivos de los radicales libres. Los derivados del
aceite de pescado tambin suprimen el NO. Se observ supresin de la produccin de
NO con los cidos grasos -3, DHA, EPA y cido alfa-linoleico de forma dependiente
de la dosis. En contraste, se observ inhibicin de NO con cidos grasos libres poliin-
saturados -6 (cido linoleico), cidos grasos libres poliinsaturados -9 (cido oleico)
y un cido graso saturado (cido esterico) [152]. Con los cidos grasos -3, la pro-
duccin de O
2
catalizada por la NADPH oxidasa en los neutrfilos se redujo cuando
se comparaba con el efecto del AA (un cido graso -6). Los efectos son ms pronun-
ciados cuando aumenta la longitud de la cadena de carbono y el nmero de dobles
enlaces [153]. Una duda importante es si la disminucin de la funcin de las clulas
inflamatorias har que disminuyan los efectos bactericidas. Se ha demostrado que la
alimentacin entrica a corto plazo con una dieta enriquecida en EPA o enriquecida en
EPA y cido -linolnico regula rpidamente la composicin de cidos grasos de los
fosfolpidos de los macrfagos alveolares y fomenta un cambio hacia la formacin de
menos eicosanoides inflamatorios por los macrfagos estimulados, pero no altera la
Figura 11. Ecosanoides omega-3 y omega-6. (Tomado de Logas D. Are fatty acids effective in
canine atopic dermatitis: an evidence-based medicine update. In: Proceedings of the 2006 Hills
Symposium on Dermatology. Supported by an educational grant from Hills Pet Nutrition, Inc.,
Topeka (KN): Educational Concepts, LLC; 2006. p. 19; con autorizacin.)
-6-desaturasa -6-desaturasa
Elongasa Elongasa
Elongasa
-5-desaturasa -5-desaturasa
-4-desaturasa
Ciclooxigenasa
Ciclooxigenasa Ciclooxigenasa Lipooxigenasa Lipooxigenasa
cido
docasahexaenoico
(DHA)
FAMILIA OMEGA-6 FAMILIA OMEGA-3
cido linoleico cido alfa linoleico
cido gamma-linolnico (GLA)
cido araquidnico cido eicosapentaenoico (EPA)
cido dihomogamma-linolnico (DGLA)
Prostaglandinas
y tromboxanos
(serie 1)
Leucotrienos
y lipoxinas
(serie 4)
Leucotrienos
y lipoxinas
(serie 4)
Prostaglandinas
y tromboxanos
(serie 2)
Prostaglandinas
y tromboxanos
(serie 3)
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funcin bactericida de los macrfagos alveolares con respecto a las respuestas obser-
vadas tras la alimentacin con una dieta que contenga cido linoleico [154].
Estos conocimientos sobre los suplementos de cidos grasos y -3 tienen implica-
ciones prcticas. Estos cidos grasos pueden mejorar la funcin de produccin de leu-
cotrienos de los granulocitos neutrfilos. Los niveles basales de los cidos grasos libres
en el plasma se elevaron varias veces, incluyendo altas concentraciones de AA precursor
de lpidos -6. Los neutrfilos aislados en pacientes con sepsis mostraron una sensibi-
lidad notablemente reducida a la estimulacin ex vivo, incluyendo la generacin de
mediadores lipdicos (p. ej., leucotrienos y PAF), la explosin respiratoria y la sealiza-
cin de la hidrlisis de fosfoinositida. Bajo un rgimen de infusin de lpidos -6, las
anomalas de los cidos grasos libres en el plasma y el deterioro de las funciones de los
neutrfilos persistieron o empeoraron. En contraste, se produjo un cambio rpido de la
fraccin de los cidos grasos libres del plasma a una predominancia de los cidos -3
EPA y DHA sobre AA en respuesta de la infusin de lpidos -3. LTB
5
, adems de
LTB
4
, pareci estimular ms los neutrfilos originados en estos pacientes, y la funcin
de los neutrfilos mejor significativamente en el grupo de lpidos -3 [155].
La ruta alternativa del cido araquidnico
El metabolismo del AA libre se inicia no slo por la accin de la fosfolipasa A
2
, sino
tambin por el citocromo P450, que da lugar a la formacin de productos de la AA
epooxigenasa, productos de la AA N/N-1 hidroxilasa, productos tipo LOX y productos
de la oxidacin de radicales libres. Las rutas principales del metabolismo del AA cata-
lizadas por el citocromo P450 generan metabolitos que se subdividen en dos grupos:
1) los cidos epoxieicosatrienoicos formados por las citocromo P450 epooxigenasas y
2) los HETE que estn hidroxilados en o cerca del terminal N por las citocromo P450
N-oxidasas [156]. Adems, la autooxidacin del AA por las ERO derivadas del cito-
cromo P450 produce hidroperoxidasas lipdicas como productos primarios de la oxi-
dacin [157]. Durante el ciclo del citocromo P450, se producen H
2
O
2
y O
2
por la
descomposicin de los complejos dioxgeno ferrosos (P450 oxigenado) o por la libe-
racin desde el intermediario peroxifrrico (P450 peroxi). El aumento de la produccin
de O
2
y H
2
O
2
, en presencia de hierro quelado, puede producir HO reactivo [158]. La
actividad del citocromo P450 exacerba las lesiones dependientes de PLA
2
y de AA,
principalmente mediante la produccin de radicales de oxgeno que fomentan la POL
o la produccin de metabolitos que alteran la homeostasis del Ca
2+
. Por el contrario,
en otras situaciones el metabolismo del AA por el citocromo P450 es protector, prin-
cipalmente porque disminuye las concentraciones de AA no esterificado y porque se
producen metabolitos que activan las rutas antiapoptsicas, como la fosfoinositido 3
cinasa/AKT y p42/p44 MAPK [131].
Rutas dependientes del factor de Hageman
El factor de Hageman (factor XII) de la cascada intrnseca de la coagulacin tambin
activa otras cascadas enzimticas como resultado de la actividad de la serina proteasa.
La activacin del factor XII causada por el contacto con el colgeno, las plaquetas
activadas o varias superficies cargadas negativamente (incluyendo el cristal) da lugar
a: 1) la coagulacin de la sangre, 2) la participacin del sistema fibrinoltico, 3) la
produccin de cininas y 4) la activacin de la cascada del complemento. Las dos lti-
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mas son partes importantes de la respuesta inflamatoria. El factor de Hageman tambin
puede activarse, y estas cascadas pueden empezar a activarse por proteasas de los neu-
trfilos/leucocitos, que estn presentes en todos los procesos inflamatorios. En estas
cascadas se producen tanto plasmina como calicrena, que pueden retroalimentar el
sistema unindose a ms factor de Hageman o activndolo, proporcionando as un
mecanismo de activacin cclica [1].
Los radicales libres que producen los granulocitos neutrfilos pueden actuar como
anticoagulantes. Se descubri que algunos factores de la coagulacin sangunea y los
trombocitos son sensibles a los oxidantes no radicales de los fagocitos activados. A travs
de la generacin de
1
O
2
(oxgeno singlete), los leucocitos PMN pueden producir una
zona pericelular local de anticoagulacin. El
1
O
2
de sealizacin celular en cantidades
fisiolgicas es una sustancia antitrombtica, como se demostr por el hallazgo de que los
factores de la coagulacin plasmticos fibringeno, factor V, factor VIII y factor X res-
ponden a la oxidacin con una dosis eficaz del 50% de 2 a 3 mmol/l de hipoclorito
sdico o taurina-cloramina. Las cloraminas o las sustancias de tipo cloramina (p. ej., clo-
ramina T
R
o vancomicina) tambin inactivan la agregacin plaquetaria (en sangre com-
pleta o plasma rico en plaquetas) a una dosis eficaz del 50% de aproximadamente 1 mmol.
Esta oxidacin irreversible de los componentes de la homeostasis se inhibe aadiendo
metionina, cistena, cido ascrbico o acida antes de la oxidacin [159].
Sistema del complemento
El sistema del complemento es un sistema multicomponente. Se descubri a finales del
siglo XIX en el suero de los cobayas como un componente termolbil necesario para la
actividad bactericida. Los complementos son componentes de la accin de los anticuer-
pos en la destruccin de las bacterias. Los componentes del complemento tambin pue-
den activarse mediante rutas que no requieren anticuerpos, como en la ruta alternativa,
que se inicia por los componentes de la pared celular bacteriana [1]. El sistema del com-
plemento es una serie compleja de componentes proteicos que interactan, que se deno-
minan de C1 a C9 en la ruta clsica y como factores B, D, H, I y properdina (P) en la ruta
alternativa de la activacin y en varias molculas proteicas reguladoras. Las protenas del
complemento circulan como protenas solubles precursoras (cimgenos) que estn inac-
tivas o son poco activas. Los componentes del complemento activados son enzimas que
interactan secuencialmente de forma ordenada en la ruta clsica de la lisis celular diri-
gida por anticuerpos [1]. Diversas enzimas que tienen otro origen, como plasmina, cali-
crena y las enzimas lisosomales de los leucocitos, pueden activar algunos componentes
del complemento. Los objetivos principales de la mayora de las reacciones mediadas por
el complemento son las membranas biolgicas, y el resultado final es la perforacin de
la membrana que da lugar a la citlisis. Los subproductos de la cascada, como C5a y C3a,
pueden activar las funciones celulares que dan lugar a un aumento de la permeabilidad
vascular, contraccin del msculo liso, atraccin quimiotctica de los leucocitos, libera-
cin de mediadores de los mastocitos, adherencia inmunitaria, degranulacin y liberacin
de enzimas lisosomales de los neutrfilos, y aumento de la fagocitosis [1].
La ruta clsica
La ruta clsica se activa cuando los componentes del complemento se unen a los anti-
cuerpos; como consecuencia, si los anticuerpos no se unen, la ruta clsica no puede
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activarse. Los componentes que son factores conocidos de la ruta clsica se designan
como C1 a C9 [1].
La ruta alternativa
La ruta alternativa no utiliza o no necesita anticuerpos para activarse; puede hacerlo
entrando en contacto con productos microbianos, como endotoxinas. Los componentes
proteicos que interactan en la ruta alternativa del sistema del complemento se desig-
nan como factores B, D, H, I y properdina (P) [1].
Funciones del complemento en la inflamacin y la defensa del husped
Neutralizacin de virus. La neutralizacin de los virus por los anticuerpos puede mejo-
rarse, especialmente por C1 y C4, y a concentraciones bajas de anticuerpos, por la fija-
cin de C3b. El angioedema hereditario es una enfermedad humana mediada por un
fragmento de bajo peso molecular derivado de la descomposicin de C2 que tiene activi-
dad de tipo cinina (C-cinina). En ausencia del inhibidor de la glucoprotena plasmtica
controladora C1, tiene lugar la produccin incontrolada de la cinina C2, que es respon-
sable de los ataques episdicos de edema cutneo, respiratorio y gastrointestinal [1].
Adherencia inmunitaria. La adherencia inmunitaria es el fenmeno por el cual las clu-
las o partculas se unen a sitios receptores especficos en los neutrfilos, los monocitos,
los macrfagos y las plaquetas, aumentando as la fagocitosis (opsonizacin). Esta fun-
cin puede atribuirse a la unin de C3b a la superficie de las clulas o las partculas. La
unin de C3b a los linfocitos tambin puede facilitar la produccin de anticuerpos por
las clulas B y aumentar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos [1].
Produccin de anafilotoxinas. La produccin de anafilotoxinas se refiere a las acti-
vidades de los pptidos de la degradacin del complemento C3a y C5a. La C3 conver-
tasa junto con otras enzimas proteolticas que no son del complemento, como plasmi-
na, tripsina, enzimas lisosomales de los leucocitos y ciertas proteinasas bacterianas,
pueden liberar C3a por descomposicin de C3 nativo. Este fragmento es una anafilo-
toxina que puede aumentar la permeabilidad vascular y produce contraccin del
msculo liso y liberacin de mediadores, como histamina en los mastocitos. C5a pue-
de tener una actividad parecida. Las funciones biolgicas de C5a son parecidas a las de
C3a, aunque este ltimo es menos potente, y parece que cada pptido reacciona con
diferentes receptores de membrana. C5a puede fomentar la quimiotaxis y mediar la
liberacin de enzimas lisosomales de los leucocitos neutrfilos [1].
Sistema del complemento, radicales libres y antioxidantes. Se ha sugerido que el aumento
de radicales libres que tiene lugar cuando se activa el complemento se debe a la funcin de
las clulas fagocitarias. En los animales a los que se les inyect el factor del veneno de cobra
y se trataron con intervenciones protectoras contra la lesin pulmonar (deplecin de neu-
trfilos, CAT, descomposicin de HO o quelantes del hierro), se redujeron notablemente
las concentraciones plasmticas de dienos conjugados, hidroperoxidasas y productos fluo-
rocrmicos [160]. Esto indica que la actividad de C5a podra estar relacionada con los
productos de oxgeno procedentes de XO. Es ms, la produccin de C5a es sensible a CAT
dependiente de hierro. Los descubrimientos mencionados antes se sugirieron cuando los
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complementos se activaban debido a una lesin local por quemadura en la piel y al conte-
nido del pptido quimiotctico relacionado con C5a, y se examin la relacin de los pro-
ductos de oxgeno con la aparicin de este pptido. Los inhibidores de XO, los limpiadores
de HO y la deplecin del complemento disminuyeron la actividad de C5a en el sitio de la
quemadura, mientras que la deplecin de los neutrfilos no tuvo efecto [161].
La activacin del complemento tambin es un factor importante en la isquemia-
reperfusin. Este proceso activa el complemento, y los OH
(v. figu-
ra 12) [191,193].
Segn Roy et al. [194], la velocidad de conversin de D a O es rpida en el intestino
y ms lenta en otros rganos (p. ej., corazn, rin, bazo, hgado), pero Parks et al.
[195] observaron una velocidad de conversin ms lenta en el intestino. El mecanismo
ms probable de la conversin de D a O es la protelisis limitada y la oxidacin de los
grupos sulfhidrilo unidos a la enzima para formar disulfuros que se activan por la
afluencia de calcio [194]. Durante la hipoxia no funciona la bomba de calcio que con-
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90
sume energa, lo que da lugar a un aumento de la concentracin de calcio en las clulas
[185]. Segn la hiptesis de Roy et al. [194], la afluencia de calcio activa las proteasas
intracelulares reguladas por calmodulina, lo que da lugar a la conversin de D a O.
Observaron que la inhibicin de las proteasas intracelulares por un inhibidor de serina
proteasa (inhibidor de tripsina de soja) impide la conversin. Otros inhibidores de pro-
teasa, como la aprotinina, tambin protegen el intestino contra las lesiones isqumicas
y postisqumicas del tejido [189].
Los inhibidores de proteasas tambin pueden bloquear los efectos nocivos de las
proteasas liberadas por los neutrfilos activados, que se acumulan tras la isquemia y la
reperfusin intestinales. El tratamiento previo de ratas con trifluoperacina, un inhibidor
de calcio-calmodulina, redujo significativamente la velocidad de conversin de D a O
durante la isquemia [194]. XO es una fuente principal (y posiblemente la primera) de
la produccin de radicales libres en el intestino con isquemia y reperfusin, como
demuestra la inhibicin de esta enzima por el inhibidor competitivo, alopurinol, que es
tan eficaz como SOD para prevenir el aumento de la permeabilidad vascular y la lesin
de la mucosa tras la reperfusin [196]. La inactivacin de XO por el cido flico y
pterina aldehdo tambin reduce el aumento de la permeabilidad vascular que se obser-
va tras la reperfusin del intestino [197]. Otro mtodo para disminuir la actividad de
XO es alimentar a las ratas con dietas deficientes en molibdeno y suplementadas con
tungsteno. Este tratamiento produjo la incorporacin de tungsteno, en vez de molibde-
no, en XO, reduciendo su actividad en un 75% [198].
Acumulacin de radicales libres
A los 10-30 segundos de iniciarse la reperfusin se produce la explosin de la forma-
cin de O
2
causada por la accin de XO, que inicia una cadena de reacciones que
Figura 12. Lesiones por isquemia y reperfusin.
Normal Isquemia Reperfusin
Adenosina
Hipoxantina
Xantina
deshidrogenasa
(XDH)
cido rico
Hipoxia, prdida de energa
Aumento de la degradacin del ATP
Bombas Na
+
+ Ca
2+
Disminucin de la funcin de la bomba
de calcio que consume energa
Aumento de la concentracin de calcio
en las clulas
Se produce carencia de XDH debido a la protelisis
limitada causada por las proteasas intracelulares
reguladas por calmodulina y la oxidacin de los grupos
SH unidos a enzimas AS
Conversin de XDH
Se forma xantina oxidasa (XO)
Adenosina
Inosina
cido rico
Hipoxantina
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91
genera otros radicales. El sitio principal donde se producen radicales es el endotelio
vascular. El O
2
y H
2
O
2
se descomponen por la accin de las enzimas en agua y
oxgeno molecular. SOD dismuta el O
2
para formar H
2
O
2
, que es menos activo, y no
es un radical libre. GSH-Px y CAT convierten el H
2
O
2
en oxgeno molecular y agua al
final del proceso. Las lneas no enzimticas de defensa tambin eliminan los radicales
libres residuales que escapan a estos sistemas enzimticos. Estos limpiadores incluyen
la vitamina E, que reduce varias especies de radicales; y ascorbato, vitamina A y
-carotenos, que son limpiadores de radicales. Cuando se producen radicales libres
durante la reperfusin, todas estas defensas naturales se superan rpidamente [191].
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92
Las lesiones por hipoxia-reperfusin son un proceso enzimtico combinado
El aparato gastrointestinal est especialmente bien abastecido de la maquinaria enzi-
mtica necesaria para formar grandes cantidades de ERO. Los orgenes de las ERO en
el aparato gastrointestinal incluyen las oxidasas de la mucosa como XO, aminooxidasa
(AO) y aldehdo oxidasa, as como la NADPH oxidasa que se encuentra en los leuco-
citos fagocitarios residentes (macrfagos, neutrfilos, eosinfilos) de la lmina propia
[201,99]. La reoxigenacin tisular que se produce tras la hipoxia se asocia a lesiones
por isquemia-reperfusin y puede sealar el desarrollo del precondicionamiento isqu-
mico, un estado adaptativo que protege contra las lesiones por isquemia-reperfusin
consecuentes. Los investigadores han realizado anlisis con chip de ARN de modelos
in vivo e in vitro de lesiones por isquemia-reperfusin para definir los mecanismos
moleculares subyacentes. Los anlisis con chip del tejido renal tras la isquemia y la
reperfusin revelaron cierta cantidad de genes antioxidantes regulados hacia arriba,
incluyendo aldehdo deshidrogenasas (ALDH, ALDH1A1 y ALDH1A7), glutatin
S-transferasas (GSTM5, GSTA2, y GSTP1), y NAD(P)H quinona oxidorreductasa
(NQO1). El factor de transcripcin, factor 2 relacionado con NF-E2 (Nrf2), un regula-
dor principal de esta respuesta antioxidante, tambin aument en las lesiones por
isquemia-reperfusin. Es ms, los anlisis con chip de las clulas epiteliales renales
expuestas a la hipoxia y la reoxigenacin demostraron que Nrf2 est regulado hacia
arriba durante la reoxigenacin. Leonard et al. [202] tambin observaron una acumu-
lacin nuclear de la protena Nrf2 especfica durante la reoxigenacin y la activacin
consecuente de una reestructura recopiladora promotora de NQO1. La atenuacin de
las ERO en la reoxigenacin utilizando el antioxidante N-acetilcistena inhibi la acti-
vacin de Nrf-2. En las biopsias hepticas humanas realizadas una hora despus del
trasplante se detectaron concentraciones de ARNm para los genes dependientes de
Nrf2. Estos resultados indican que la actividad de Nrf-2 dependiente de la reoxigena-
cin facilita el precondicionamiento isqumico mediante la induccin de la expresin
de los genes antioxidantes, y que las ERO pueden ser crticas en la sealizacin de este
proceso.
Activacin de los metabolitos del cido araquidnico en la hipoxia y reperfusin
Tras la aparicin de la isquemia, las concentraciones extracelulares de calcio disminu-
yen y las concentraciones de calcio intracelular aumentan debido a la alteracin del
mantenimiento del gradiente de la membrana celular mediada por la isquemia. El
aumento del calcio intracelular tambin contribuye a la lesin de la membrana celular
mediante la activacin de fosfolipasas, que a su vez liberan cidos grasos libres de las
membranas. En presencia de O
2
y el H
2
O
2
eficazmente en los pacientes, deben alcanzar
concentraciones elevadas (10 g/mL) y deben administrarse de forma continuada, ya que
su semivida es de slo 6 minutos [239]. Ambas enzimas son impermeables a la membra-
na, por lo que no pueden alcanzar y eliminar los radicales de oxgeno que se producen
intracelularmente [185]. ltimamente se ha demostrado que SOD se internaliza por
endocitosis mediada por receptor [240]. El O
2
. El tratamiento
con transferrina o deferoxamina cargada de hierro no protege contra las lesiones isqu-
micas [197]. El efecto beneficioso de los quelantes del hierro se debe a la inhibicin de
los radicales ferril o perferril muy reactivos, que se generan por la reaccin del hierro
ferroso con oxgeno, O
2
l, o H
2
O
2
[199]. En uno de los experimentos sobre la isquemia
y la reperfusin realizado en ratas, los investigadores demostraron claramente que el
tratamiento con deferoxamina previene el aumento de las concentraciones de los pro-
ductos de la POL en el tejido intestinal [257].
Inhibicin de xantina oxidasa
Los estudios indican que la enzima XO, que reacciona con hipoxantina, es la fuente
principal de la produccin de radicales oxgeno tras la isquemia intestinal. Los inhibi-
dores de XO (alopurinol, pterina aldehdo y otros) son sustancias poderosas que ate-
nan el aumento de la permeabilidad vascular intestinal inducido por la isquemia. Los
estudios morfomtricos de biopsias obtenidas tras la reperfusin del intestino indicaron
que el pretratamiento con alopurinol prevena en gran medida la necrosis epitelial
intestinal tpica inducida por la isquemia y la reperfusin. La inactivacin de XO por
el cido flico y pterina aldehdo tambin reduce el aumento de la permeabilidad vas-
cular que se observa tras la reperfusin del intestino [196]. Los resultados experimen-
tales requieren una investigacin clnica ms profunda.
Inhibicin de proteasas
La conversin de XDH a XO tambin se ha impedido experimentalmente con inhibi-
dores de proteasa y bloqueadores del calcio. Los inhibidores de proteasas, como apro-
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103
tinina, protegen el intestino contra las lesiones tisulares isqumicas y postisqumicas
[189]. Los inhibidores de proteasas tambin pueden bloquear los efectos lesivos de las
proteasas liberadas por los neutrfilos activados que se acumulan tras la isquemia y la
reperfusin intestinal.
Frmacos diversos
Tiazolidinedionas
Los PPAR son receptores nucleares que participan en la regulacin del metabolismo
del substrato energtico y en las respuestas inflamatorias. Los activadores de PPAR-
de tiazolidinediona se han utilizado clnicamente para mejorar la sensibilidad a la insu-
lina y para el control de la glucemia en pacientes con diabetes de tipo 2 [258]. PPAR-
se expresa predominantemente en el tejido adiposo, pero tambin se expresa en el
miocardio [259]. Su funcin en el corazn todava no se conoce; sin embargo, algunas
pruebas indican que la activacin de los PPAR- del miocardio por la tiazolidinediona
puede tener efectos metablicos y antiinflamatorios [260]. Los efectos cardacos,
metablicos y antiinflamatorios del PPAR- se han demostrado en modelos con ratas
y ratones. Se ha observado que la activacin del PPAR- aumenta la expresin de los
transportadores de glucosa en el miocardio para fomentar el uso de los carbohidratos
como sustrato en los miocardiocitos y el corazn intacto [261], y para atenuar la expre-
sin de las citocinas proinflamatorias en los miocardiocitos activados [262], la miocar-
ditis experimental [263] o la insuficiencia ventricular izquierda crnica causada por
infarto de miocardio [264].
Es ms, en la mayora de los estudios (pero no en todos) se ha demostrado que los
activadores del PPAR- de tiazolidinediona reducen el tamao del infarto de miocardio
y mejoran la recuperacin de la funcin contrctil en los corazones de ratas intactas
tras la isquemia y la reperfusin [265267]. Estos hallazgos derivan de los estudios
realizados en modelos normales y resistentes a insulina. La forma de activacin se
dedujo porque las tiazolidinedionas inhiben la inflamacin mediada por neutrfilos.
Los estudios experimentales demostraron que las tiazolidinedionas (es decir, rosiglita-
zona) protegen contra las lesiones cardacas, gastrointestinales y pulmonares tras la
isquemia y la reperfusin, adems de producir una disminucin significativa de la
infiltracin de neutrfilos. Estos informes han dado lugar a la hiptesis de que la inhi-
bicin de la inflamacin mediada por neutrfilos por las tiazolidinedionas participa en
la disminucin de la lesin tisular inducida por la isquemia y la reperfusin [268]. Sin
embargo, otros investigadores observaron que la activacin crnica de PPAR- no tena
efectos protectores en un modelo de isquemia y reperfusin miocrdica en cerdos nor-
males, no diabticos. En este modelo se produjo disfuncin contrctil grave del mio-
cardio, aumento de la expresin de las citocinas proinflamatorios (ARNm y protena)
y deterioro metablico. Todas la anomalas mejoraron tras un pretratamiento con tro-
glitazona (una tiazolidinediona que contiene una mitad de -tocoferol) o con el propio
-tocoferol. Por el contrario, el pretratamiento con rosiglitazona, una tiazolidinediona
que carece de una mitad -tocoferol, no tuvo efectos beneficiosos sobre ninguna varia-
ble medida, incluso aunque rosiglitazona aument la expresin de PPAR- en el mio-
cardio. El anlisis de variables mltiples indic que la presencia de una mitad de
-tocoferol, pero no de una tiazolidinediona, en las sustancia de prueba protegi contra
las lesiones por isquemia-reperfusin [260].
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104
Prostaglandina J
2
Un ligando del PPAR-, 15-desoxi-Delta12,14-prostaglandina J
2
(15d-PGJ
2
), inhibi
las lesiones de la mucosa gstrica inducidas por isquemia y reperfusin en las ratas. El
aumento del ndice de erosin fue significativamente inhibido por el pretratamiento
con 15d-PGJ
2
de forma dependiente de la dosis. En este modelo de isquemia y reper-
fusin, el pretratamiento con 15d-PGJ
2
inhibi significativamente el aumento de la
concentracin de MDA, la actividad de MPO y el contenido de TNF- en la mucosa
gstrica [269].
Agonistas del adrenorreceptor 2 y del receptor de DA-1
En un experimento con un modelo canino del shock hemorrgico en el cual se reinfun-
di la sangre que se haba perdido, el hidrocloruro de dopexamina (DPX) previno el
deterioro del flujo sanguneo renal actuando sobre los receptores 2 y DA-1. Esta
capacidad para conservar la funcin tubular fue, principalmente, el resultado de sus
efectos antagnicos sobre los receptores de DA-1. Ms tarde se demostr en un expe-
rimento con ratas que el pretratamiento con DPX mejoraba significativamente la super-
vivencia de forma dependiente de la dosis en aproximadamente un 70%. Ni la dobuta-
mina ni el prenalterol, que son agonistas del adrenorreceptor 1 y, como DPX,
sustancias cronotrpicas e inotrpicas potentes, fueron eficaces para prevenir la toxi-
cidad letal inducida por radicales libres de oxgeno. En una serie independiente, un
agonista selectivo del receptor de DA-1, felodopam, no tuvo efectos protectores, y
un antagonista del receptor de DA-1, SCH-23,390, no antagoniz los efectos ventajo-
sos de DPX. Por el contrario, salbutamol, un agonista selectivo del adrenorreceptor 2,
aument significativamente la supervivencia facilitada por DPX, y un antagonista
selectivo del adrenorreceptor 2, ICI-558,551, atenu significativamente la supervi-
vencia. Estos estudios indican que, a diferencia de lo que ocurre en el shock hemorr-
gico, las propiedades antagonistas del adrenorreceptor 2 son fundamentales para la
capacidad de DPX de atenuar la toxicidad letal, y estos efectos podran estar relacio-
nados con la prevencin de la POL inducida por los radicales libres de oxgeno [270].
Precondicionamiento isqumico
El precondicionamiento isqumico es un mecanismo endgeno que protege los tejidos
mediante el cual episodios cortos de isquemia y reperfusin protegen a los tejidos y las
clulas de la lesin inducida por un perodo sostenido posterior de isquemia. En este
proceso, los tejidos estn preparados para poder afrontar un desafo posterior que
podra causar una lesin por isquemia-reperfusin ms grave. Este proceso puede ver-
se como un entrenamiento antes de una competicin. Quin ganar? Los tejidos o los
mediadores nocivos que se generan durante la isquemia y la reperfusin?
En uno de los primeros estudios que se realizaron sobre el precondicionamiento,
Shiki y Hearse [271] observaron que el corazn de las ratas que se sometieron a
5 minutos de isquemia regional y que mostraron taquicardia ventricular, fibrilacin
ventricular y numerosos complejos ventriculares prematuros durante la reperfusin
mostraron muy pocas arritmias tras un perodo de recuperacin y un segundo episodio
de isquemia y reperfusin. Se observ que la vulnerabilidad a las arritmias durante el
segundo perodo de reperfusin se relacionaba inversamente con la incidencia de arrit-
mias que se haban observado en el primer episodio de reperfusin. Los investigadores
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RADICALES LIBRES EN INFLAMACIN E ISQUEMIA-REPERFUSIN
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propusieron que un perodo muy corto de isquemia y reperfusin precondiciona al
miocardio y, por tanto, influye en la vulnerabilidad del corazn a las arritmias produ-
cidas por un reperfusin posterior.
Otros investigadores administraron SOD a corazones de conejos precondicionados
que haban sufrido un episodio nico de isquemia de 5 minutos y 5 minutos de reperfu-
sin una hora antes de la isquemia y la reperfusin. Los resultados demostraron que
aunque SOD atenu la liberacin de enzimas y la prdida funcional en los corazones de
control, no tuvo efectos sobre los corazones precondicionados, lo que sugiere que es
poco probable que el precondicionamiento est mediado por O
2
en los corazones de
conejo aislados [272]. Investigaron si el efecto protector del precondicionamiento podra
estar relacionado con un aumento de las defensas antioxidantes de los corazones de los
conejos. Las actividades antioxidantes de CAT, GSH-Px, manganeso SOD, cobre/cinc
SOD, glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, GSSG-R y GSH se midieron en regiones
isqumicas y normales tanto de corazones de conejo precondicionados como de control.
Todos los corazones sufrieron 30 minutos de isquemia regional y 5 minutos de reperfu-
sin. No cambi la actividad de ninguna de las enzimas antioxidantes cuando se com-
pararon las zonas no isqumicas y postisqumicas en los corazones no precondiciona-
dos y precondicionados. Por tanto, los investigadores concluyeron que el aumento de las
defensas antioxidantes no es el mecanismo del precondicionamiento [273].
Sin embargo, a pesar de estos hallazgos, otros autores han observado que precondi-
cionar un corazn mediante aturdimientos sucesivos puede dar lugar a un fortalecimien-
to del sistema de defensa oxidativo del corazn, y es probable que este fortalecimiento
desempee una funcin en el mantenimiento del miocardio durante las lesiones poste-
riores por isquemia y reperfusin. En este experimento, el corazn de un cerdo se
someti a cuatro episodios de 5 minutos de aturdimiento ocluyendo la arteria coronaria
descendente anterior izquierda, y a minutos de reperfusin despus de cada aturdi-
miento. Despus se someti el corazn a una isquemia regional durante 60 minutos
mediante oclusin de la arteria descendente izquierda, seguida de 6 horas de reperfu-
sin. El corazn de control se perfundi durante 60 minutos, despus se produjo isque-
mia de 60 minutos y despus 6 horas de reperfusin. Los resultados de los estudios
indicaron estimulacin de un nmero de enzimas antioxidantes, incluyendo mangane-
so SOD, CAT, GSH-Px y GSSG-R, tras el aturdimiento repetido y la reperfusin.
Adems, se expresaron varias protenas nuevas despus de que el corazn fuera pre-
condicionado, incluyendo algunas protenas relacionadas con el estrs oxidativo y la
protena del shock cardaco de 72 kd [274].
Sin embargo, Fu et al. [275] no observaron ningn cambio de las defensas antioxidan-
tes en el miocardio precondicionado. En su experimento, se precondicion un corazn
porcino mediante 2 oclusiones de la arteria coronaria descendente anterior izquierda
media durante 10 minutos, con un intervalo de reperfusin de 30 minutos. Se realizaron
biopsias del ventrculo izquierdo de regiones de control y precondicionadas 30 minutos
despus de la ltima oclusin. Estos hallazgos no apoyan la hiptesis de que el aumento
de las defensas antioxidantes podra contribuir a la cardioproteccin del precondiciona-
miento. Adems, en el miocardio precondicionado se descubri un sistema de sealiza-
cin de receptor mediado por protena G intacto para los receptores -adrenrgicos,
muscarnicos y de endotelina. Los hallazgos pueden continuar debatindose debido a los
diferentes perodos de precondicionamiento y de toma de muestras.
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Yamashita et al. [276] sugirieron que la induccin de manganeso SOD en los miocitos
mediante precondicionamiento desempea un papel fundamental en la adquisicin de
tolerancia a la isquemia en una fase posterior (24 horas) del precondicionamiento isqu-
mico. Descubrieron que la actividad y el contenido de manganeso SOD en los miocitos
cardacos aumentaban 24 horas despus del precondicionamiento hipxico coincidiendo
con la adquisicin de la tolerancia a la hipoxia. El contenido de manganeso SOD ARNm
tambin aument 20 a 40 minutos despus del precondicionamiento.
Los radicales libres estn entre los diversos desencadenantes y mediadores identifi-
cados del precondicionamiento isqumico. Las ltimas investigaciones han demostra-
do que los radicales libres se generan por mecanismos XO porque el alopurinol blo-
quea totalmente los efectos protectores miocrdicos que se observan en los miocitos
precondicionados. Los investigadores afirman que, como en los hallazgos anteriores,
los radicales de oxgeno que se producen durante el perodo de precondicionamiento
inicial activaron las defensas antioxidantes endgenas (aument la actividad de man-
ganeso SOD) 24 horas despus, contribuyendo a la cardioproteccin posterior al pre-
condicionamiento [277]. Los estudios en animales de experimentacin (ratas y cone-
jos) han demostrado la participacin de los oxirradicales libres en la transduccin de
la seal del precondicionamiento isqumico [278].
LESIONES POR HIPOXIA-REPERFUSIN EN LOS TRASTORNOS
ANIMALES
Dilatacin gstrica-vlvulo en los perros
La dilatacin gstrica-vlvulo (DVG) es una enfermedad tpica de los perros, y con fre-
cuencia es letal. La DVG se caracteriza por shock cardiognico, con hipoperfusin resul-
tante. Los objetivos del tratamiento incluyen la reperfusin de los tejidos que han sufrido
isquemia transitoria, lo que indica que la lesin por reperfusin puede ser un factor de la
fisiopatogenia de la DVG [243]. Tras un estado hipxico considerablemente largo, pueden
producirse lesiones por reperfusin durante o despus de la intervencin. Segn los estu-
dios, los efectos evidentes de las lesiones por reperfusin aparecen 3 horas despus de la
descompresin. Se analizaron la concentracin tisular de ATP, la conductancia de la muco-
sa y los cambios microscpicos. La concentracin de ATP en el fundus no fue muy dife-
rente de la concentracin basal cuando se indujo DVG experimentalmente durante
120 minutos, seguido por descompresin, derrotacin y reperfusin durante 90 minutos,
pero disminuy significativamente por debajo de los valores basales cuando la descompre-
sin dur 210 minutos. La concentracin de ATP en el yeyuno disminuy significativamen-
te por debajo del nivel basal cuando la descompresin dur de 120 a 210 minutos [279].
Se intentaron algunas opciones de tratamiento en los perros que haban sido tratados
con alopurinol (un inhibidor de XO), U74006F (un 21-aminoesteroide, inhibidor expe-
rimental de la POL) o una solucin salina (cloruro sdico al 0,85%). Tres de los ocho
perros del grupo tratado con alopurinol murieron, ninguno de los cinco perros del
grupo tratado con U74006F muri y cuatro de los ocho perros del grupo tratado con la
solucin salina murieron. La concentracin tisular de MDA, un indicador inespecfico
de la POL, fue significativamente mayor que los valores basales en el duodeno, el
yeyuno, el colon, el hgado y el pncreas en los perros tratados con la solucin salina
o alopurinol que en los mismos tejidos de los perros tratados con U74006F tras la
correccin quirrgica de la DVG (es decir, durante la reperfusin) [243]. Los resulta-
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dos de otro estudio indican que la mortalidad asociada a la DVG inducida experimen-
talmente disminuye si se realiza una intervencin farmacolgica adecuada y en el
momento preciso para prevenir o atenuar las lesiones por reperfusin, y que parece que
deferoxamina es ms eficaz que el limpiador de radicales libres DMSO. De los seis
perros tratados con deferoxamina, sobrevivieron los seis; de los tratados con DMSO,
tres; de los tratados con suero salino, dos [244]. Debido a estos hallazgos, se recomien-
da utilizar medidas protectoras contra las lesiones por los radicales libres en el trata-
miento de la DVG en los perros. El frmaco ms potente parece ser la deferoxamina.
Isquemia intestinal en los caballos
Como ya demostraron Vatistas et al. [253] en el colon grueso equino, las lesiones pro-
gresaron durante la reperfusin del colon delgado tras 60 minutos de isquemia arterio-
venosa completa. A pesar de estos hallazgos no se ha demostrado una modificacin
significativa de los procesos de los radicales libres como consecuencia de la reperfusin.
En este estudio, se obtuvieron muestras de biopsia tisulares de todo el espesor del colon
antes, durante y tras la isquemia, para medir la concentracin de MDA y la actividad de
MPO y para realizar una evaluacin morfolgica del tejido del colon. La concentracin
de MDA y la actividad de MPO aumentaron durante la isquemia y la reperfusin, aun-
que estos aumentos no fueron significativos. En este experimento, los autores distribu-
yeron aleatoriamente 16 caballos en tres grupos: slo vehculo, dosis baja (vehculo y
3 mg de U-74389 G/kg de peso corporal) y dosis alta (vehculo y 10 mg de U-74389 G/kg).
La administracin de 21-aminoesteroide (U-74,389G) no afect la concentracin de
MDA y la actividad de MPO de forma significativa. Sin embargo, con la dosis ms baja
la actividad de MPO tendi a disminuir a los 30 y 60 minutos de la reperfusin. La
administracin de 3 y 10 mg/kg de U-74389G previno la disminucin de la superficie
de la mucosa inducida por la reperfusin, que fue significativa a los 60 y 90 minutos.
Tras la reduccin inicial en los caballos de todos los grupos, el volumen de la mucosa
aument durante los primeros 60 minutos de reperfusin [253]. Este hallazgo se corres-
ponde con un informe anterior (uno de los primeros artculos importantes sobre los
efectos de los radicales libres en el intestino equino en las lesiones por hipoxia-reperfu-
sin) que indica que la administracin sistemtica de DMSO parece ser protectora.
Estos investigadores observaron los efectos fisiolgicos sobre el yeyuno equino de
1 hora de isquemia y 1 hora de reperfusin, y los efectos protectores de la administra-
cin sistemtica de DMSO (1 g/kg de peso corporal) en 18 ponis, utilizando segmentos
neuralmente intactos de yeyuno perfundido con sangre heparinizada a flujo constante.
La administracin de DMSO previno la disminucin de la resistencia vascular intestinal
(R, mmHg/mL/min/100 g) durante la reperfusin [280].
Otros investigadores no observaron lesiones por reperfusin importantes cuando uti-
lizaron modelos de isquemia arteriovenosa [281,282]. Al contrario que Arden et al. [280],
Reeves et al. [281] observaron que los cambios histopatolgicos del colon equino eran
mnimos tras una hora de isquemia. Los cambios progresivos durante el perodo postis-
qumico tambin fueron mnimos tras la obstruccin por estrangulacin isqumica, y
moderados tras la obstruccin por estrangulacin hemorrgica. El tratamiento con DMSO
no tuvo efectos beneficiosos demostrables cuando se evalu mediante histologa, inmu-
nohistoqumica o conservacin de los niveles de GSH en la mucosa. En resumen, en este
estudio no pudo detectarse ninguna lesin por reperfusin tras 60 minutos de isquemia.
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Wilkins et al. [282] descubrieron que la saturacin media de oxgeno venoso y la PO
2
venosa media en los ponis de experimentacin fueron significativamente inferiores al
final de 2 horas de isquemia y aumentaron significativamente durante la fase de reperfu-
sin del colon equino. La concentracin venosa media de potasio fue significativamente
superior (p < 0,01) durante las fases de isquemia y reperfusin. Las concentraciones de
vitamina E y GSH-Px estaban dentro de los lmites normales en todos los ponis.
Sin embargo, Moore et al. [283], utilizando un modelo isqumico con un flujo arte-
rial bajo, verificaron que algunos parmetros, como el ndice de desechos celulares y
el porcentaje estimado de prdida de la mucosa, fueron significativamente superiores
en los segmentos de colon reperfundidos. Ellos pensaron que era una prueba de lesin
por hipoxia-reperfusin en los caballos con hipoxia intestinal. El porcentaje de altera-
cin de la superficie de la mucosa y de edema de la mucosa tenda a ser mayor duran-
te las primeras fases de la reperfusin (de 3 a 4 horas) y la hemorragia de la mucosa,
medida por el porcentaje de la profundidad de la prdida de la mucosa, y la proporcin
entre las criptas y la mucosa intersticial durante la ltima fase (de 4 a 6 horas) de la
reperfusin en los caballos. El restablecimiento del flujo sanguneo arterial del colon
tras la isquemia con flujo bajo produjo mayor lesin en la mucosa que un perodo
comparable de isquemia continuada. Se detect lesin por reperfusin en el colon
grueso de los caballos tras la isquemia arterial de bajo flujo.
Adems, en 1991, Prichard et al. [284] descubrieron que XO interviene en las lesiones
por isquemia-reperfusin en los caballos. El nivel de actividad de XO se expres como
un porcentaje segn la proporcin XO/(XDH + XO). Los investigadores observaron un
aumento de casi 3 veces en el nivel de actividad combinada de XDH y XO desde el leon
al duodeno. Sin embargo, el valor preisqumico del porcentaje de la actividad de XO no
vari significativamente entre los segmentos del yeyuno y el leon. De la misma forma,
no se observaron diferencias significativas entre los segmentos intestinales despus de la
isquemia. Por tanto, se combinaron los datos procedentes de todos los segmentos intes-
tinales para cada momento y se analizaron. Comparado con el nivel preisqumico (media,
27%), el porcentaje de la actividad de XO aument tras una hora de isquemia (media, 37%)
y alcanz importancia estadstica. No hubo diferencias estadsticas significativas entre el
porcentaje de actividad preisqumica de XO y el porcentaje de actividad de XO en el
intestino no isqumico al final del perodo de anestesia. Durante la isquemia, el porcen-
taje de actividad de XO aument, dando credibilidad a la importancia documentada ante-
riormente de XO en las lesiones por reperfusin en el intestino delgado equino [284].
A pesar de los hallazgos contradictorios, parece que los procesos de los radicales libres
tienen importancia en la isquemia intestinal equina, pero el beneficio de utilizar cualquier
frmaco contra estos procesos todava es cuestionable. Anteriormente se ha sugerido que
la formacin y liberacin de radicales libres en el intestino grueso no puede atribuirse
principalmente al mecanismo XO [245], sino ms bien al mecanismo AOX, porque esta
parte del intestino es rico en AOX. Esta idea no parece que sea completamente vlida,
porque los hallazgos contradictorios que se mencionaron antes se demostraron tanto en
el intestino delgado como en el intestino grueso.
Tromboembolia arterial en los gatos
La tromboembolia arterial es una complicacin comn en los gatos con miocardiopa-
tas. Existen muy pocos artculos sobre los radicales libres y los procesos antioxidantes
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en esta enfermedad. Se descubri un hallazgo importante relacionado con las concen-
traciones plasmticas de arginina y homocistena en esta enfermedad. En los seres
humanos, las concentraciones plasmticas altas de homocistena y las concentraciones
bajas de vitamina B son factores de riesgo de las enfermedades vasculares perifricas.
Adems, las concentraciones plasmticas bajas de arginina se han relacionado con
disfuncin endotelial. Entre los grupos no se observaron diferencias en cuanto a la
homocistena o el folato. La concentracin media de vitamina B
12
fue inferior en los
gatos con tromboembolia arterial y en los gatos con miocardiopata que en los contro-
les sanos. Las concentraciones plasmticas de arginina fueron ms bajas en los gatos
con tromboembolia arterial que en los gatos con miocardiopata o en los animales
sanos de control [285]. Las concentraciones plasmticas bajas de donantes de NO y
arginina pueden contribuir al aumento de la agregacin plaquetaria en la tromboembo-
lia, que podra inhibirse con NO [210].
Desplazamiento del abomaso en el ganado bovino
Un problema importante para la cra de ganado es el desplazamiento del abomaso en
las vacas lecheras. Como en los hallazgos sobre las lesiones por reperfusin en los
caballos, en el ganado tambin existen hallazgos contradictorios con respecto a este
trastorno, y tambin implican la funcin de los antioxidantes. El estado antioxidante
de los animales puede evaluarse mediante la actividad de SOD en la sangre. Tras la
ciruga, la actividad de SOD disminuye rpidamente, por lo que se ha sugerido que el
tratamiento de las vacas con desplazamiento del abomaso con ascorbato, a-tocoferol o
prednisolona antes de volver a colocar el abomaso mejora el estado antioxidativo y
metablico [286]. Tambin se ha descubierto que la concentracin de selenio en la
sangre no desempea una funcin etiolgica en el desplazamiento del abomaso en las
vacas [287]. En otro estudio sobre esta enfermedad, se realiz una intervencin quirr-
gica abdominal (omentopexia) para corregir el desplazamiento izquierdo del abomaso.
Diez horas antes de la ciruga, se administraron 10 mg de vitamina E/kg de peso cor-
poral por va intramuscular a 10 vacas. El estrs quirrgico produjo un gran aumento
de las concentraciones plasmticas de cortisol y leucocitosis neutroflica en las 5 horas
siguientes a la ciruga. La va que se utiliz para administrar vitamina E no afect a las
concentraciones plasmticas de cortisol ni al recuento de leucocitos [288].
Isquemia de miocardio en los perros
La isquemia de miocardio produce la liberacin de factores quimiotcticos, la migra-
cin de neutrfilos, la peroxidacin de lpidos y la deplecin de limpiadores de radica-
les libres. Los neutrfilos invasores pueden lesionar la vasculatura del miocardio y el
sarcolema produciendo radicales libres de oxgeno. Esta teora se comprob en un
experimento en el que el ibuprofeno limit el tamao del infarto. Se asoci a una nota-
ble disminucin de la acumulacin de leucocitos dentro del miocardio isqumico. La
deplecin de neutrfilos con antisuero produjo una disminucin similar del tamao del
infarto y se acompa de una disminucin de la infiltracin de leucocitos. Una combi-
nacin de limpiadores de radicales libres (SOD ms CAT) disminuy la lesin del
miocardio, tanto si la infusin comenz antes de la oclusin o 75 minutos despus de
la misma [289]. En otro estudio, el mismo grupo de investigacin descubri que la
SOD sola es tan eficaz como la combinacin de SOD y CAT protegiendo al miocardio
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isqumico reperfundido. El efecto beneficioso de la SOD y el efecto significativo de la
CAT indican que la lesin tisular durante la isquemia y la reperfusin puede estar
mediada en gran parte por O
2
, y no por H
2
O
2
[290].
Lesiones cerebrales
El sndrome de isquemia-reperfusin es un problema fundamental en las lesiones cere-
brales. Se ha documentado que, durante la isquemia y la reperfusin cerebral focales,
se producen algunos sucesos que afectan a la integridad microvascular, como las alte-
raciones de la reactividad de las clulas endoteliales, la activacin del sistema de coa-
gulacin y las interacciones entre los granulocitos y las clulas endoteliales. La pro-
duccin de radicales libres de oxgeno, la expresin de selectina e integrina, la
adherencia intercelular, las respuestas vasomotoras, los cambios de la permeabilidad
endotelial y del sistema de coagulacin, y la activacin de las plaquetas son algunos de
los procesos microvasculares que parece que se desencadenan durante la isquemia y la
reperfusin [291]. Los investigadores sugieren que el aumento de los procesos de LPO,
que parece que se relaciona con la gravedad de la lesin craneoenceflica, acompaa a
la contusin cerebral [292]. Se produjo una disminucin significativa de GSH una hora
despus de la lesin de la mdula espinal, junto con aumento de MDA del 123%, y un
aumento de los 4-hidroxialquenales de ms del 500%, dos productos finales metaesta-
bles de la POL. 24 horas despus de la lesin de la mdula espinal, la concentracin de
MDA volvi a la normalidad, pero la concentracin de 4-hidroxialquenales sigui
siendo elevada. Segn estos resultados, los autores sugieren que: 1) las condiciones que
se observan tras la lesin de la mdula espinal pueden favorecer determinadas vas de
la ruta de la POL, dando lugar a concentraciones diferentes de los productos de la POL
y 2) la magnitud de MDA por s misma no es una prueba adecuada para determinar la
presencia o la magnitud de la POL tras la lesin de la mdula espinal [200].
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