FISIOLOGA HUMANA LA ANGIOGNESIS

1



NDICE Pg.
INTRODUCCIN.....2
ANGIOGENESIS......3
FACTORES REGULADORES DE LA ANGIOGNESIS......4
ACTIVACIN DE LA ANGIOGNESIS....5
LACASCADA DE LA ANGIOGNESIS....6
VEGF-A......8
VEGF-B..8
VEGF-C. 8
VEGF-D......8
VEGF-E......9
RECEPTORES DEL VEGF....9
VEGFR-1.....10
VEGFR-2.....10
VEGFR-3.11
NRP-1 y NRP-2..11
RUTAS INTRACELULARES ACTIVADAS POR VEGF......11
FACTOR DE CRECIMIENTO DEL FIBROBLASTO FGF......13
RECEPTOR DEL FACTOR DE CRECIMIENTO DEL FIBROBLASTO...13
FACTOR DE CRECIMIENTO DERIVADO DE LAS PLAQUETAS (PDGF)....13
ESTRUCTURA DEL RECEPTOR DE PDGF (PDGFR)........14
ACTIVACIN DE PDGFR......15
VAS DE SEALIZACIN ASOCIADAS A PDGF.........15
VA DE SEALIZACIN RAS/MAPK.......16
VA PI3-K, PLC Y PKC..17
CARACTERSTICAS GENERALES DE LASAMINOPEPTIDASAS.........19
METIONINA AMINOPEPTIDASATIPO2........20
AMINOPEPTIDASAS ZINC M1...21
AMINOPEPTIDASA N (APN).. .......21
LEUCINA AMINOPEPTIDASA DERIVADA DE LOS ADIPOCITOS (A-LAP) /
AMINOPEPTIDASA LEUCIL ESPECFICA PUROMICINA-INSENSIBLE
(PILSAP).......21
CONSIDERACIONES FINALES.....23
BIBLIOGRAFA......23







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2


ANGIOGNESIS

INTRODUCCIN

La angiognesis es un proceso complejo que involucra a di sti ntas cl ul as,
componentes sol ubl es y f actores de l a matri z extracel ul ar y ti ene gran
importancia en una gran variedad de procesos fisiolgicos y patolgicos del
organismo. La regul aci n de l a angi ognesi s se l l eva a cabo medi ante un
perf ecto equi l i bri o entre l a produccin y la liberacin de diversos factores
estimulantes e inhibidores, que varan en f unci n de l as necesi dades y el ti po
de tej i do. Un nmero el evado de enf ermedades se caracteri za por
al teraci ones del proceso angi ogni co, tanto por i nsuf i ci enci a como
por exceso de angiognesis. Normal mente, l as i nhi bi doras predomi nan,
bl oqueando el creci mi ento. Si surge l a necesidad de desarrollar nuevos vasos
sanguneos, las activadoras de la angiognesis se i ncrementan en nmero y l as
i nhi bi doras di smi nuyen. Esto provoca el creci mi ento y l a di vi si n de
cl ul as vascul ares endotel i al es y, f i nal mente, l a f ormaci n de nuevos
vasos sanguneos. Este m e c a n i s m o r e q u i e r e d e e v e n t o s
c o m p l e j o s q u e i n c l u y e n m o l c u l a s proangiogni cas y
anti angi ogni cas. Dentro de l os pri nci pal es f actores angi ogni cos
estudiados en la actualidad estn el factor de crecimiento fibroblstico (FGF) y el factor
de creci mi ento del endotel i o vascul ar (VEGF). De manera reciente se han
hecho grandes esf uer zos por apl i c ar est os f ac t or es en el
t r at ami ent o de l a c ar di opat a i squmi c a avanzada y crnica, as como en
la enfermedad arterial perifrica. (1)

Palabras claves: aminopeptidasa, la angiognesis, las clulas endoteliales, factor de
creci mi ento del endotel i o vascul ar (VEGF), factor de crecimiento fibroblstico
(FGF), factor de crecimiento derivado de las plaquetas.

Una serie de proteasas, incluyendo metaloproteinasas de la matriz y activadores del
plasmingeno, se han demostrado estar involucrados en la angiognesis.
Adems, informes recientes sugieren que las aminopeptidasas tambin juegan un
papel en la angiognesis. Estas peptidasas regular la modificacin de la porcin N
terminal de las protenas y pptidos necesarios en los procesos tales como la
maduracin, activacin o la degradacin, y por lo tanto estn relacionados con una
variedad de procesos fisiolgicos y patolgicos.
Al menos tres aminopeptidasas se inform estar implicados en la angiognesis, es
decir, aminopeptidasa metionina de tipo 2, N aminopeptidasa, y leucil-aminopeptidasa
especfica insensible-puromicina/ leucina aminopeptidasa derivada de los adipocitos.
(3)



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ANGIOGENESIS

L o s v a s o s s a n g u n e o s s e
o r i g i n a n me d i a n t e d o s
p r o c e s o s , d e n o mi n a d o s
vasculognesis y angiognesis.
Vasculognesis: formacin de
vasos sanguneos provenientes de
las cl ulas e n d o t e l i a l e s
d i f e r e n c i a d a s , q u e p r o l i f e r a n
a l a p a r d e l c r e c i mi e n t o d e l
c u e r p o y e s usualmente negable
despus que se establece la estructura
vascular adulta.
Angiognesis: dada por la formacin de
nuevos vasos que parten de capilares ya
existentes y es un mecanismo que puede
ocurrir durante toda la vida.
La vascul ognesi s comi enza con
l a f or maci n de l os i sl ot es
sangu neos en el mesodermo
extra embri onario del saco vitel ino,
corion y pedculo de fij acin, durante
la tercera semana del desarrollo.
Alrededor del da 18, los vasos
sanguneos comienzan su desarrollo
en el mesodermo esplacnoplutico
(deri vado del mesodermo visceral).
La accin i nductora de sustancias
secretadas por el endodermo subyacente,
causa que algunas clulas del mesodermo
se diferencien en angioblastos, de los
cuales se desarrollan las clulas
endoteliales planas que se unen para
formar largos tubos o vasos
llamados cordones angioblsticos, que
coalescen para formar una red penetrante
de plexos angioblsticos que establecen
la configuracin inicial del sistema
circulatorio. La angiognesis ocurre como
un proceso fisiolgico en el endometrio,
durante el ciclo r epr oduct i vo de l a
muj er f r t i l , en l os ovar i os,
dur ant e el cr eci mi ent o de l a r ed
capi l ar folicular y en la formacin de la
placenta. Es fundamental para la actividad
reproductiva y la reparacin de los tejidos.
La formacin y el crecimiento de los
vasos es un fenmeno estrictamente
regulado. Cuando se ha completado el
crecimiento vascular; la angiognesis se
convierte en un proceso patolgico que
acompaa a la aparicin de enfermedades
neoplsicas.


Est os mecani smos son
cont r ol ados por di ver sos
f act or es pr ot ei cos que se unen a
receptores de la membrana de las clulas
endoteliales, y en menor grado al de las
clulas tumorales originando una
cascada de fosforilaciones que
acti van la expresi n de genes
especficos invol ucrados en la
proliferacin del endotelio. El f act or
angi ogni co de mayor r el evanci a
es el VEGF (factor de crecimiento
del endotel io vascular)pr omovi endo
l a pr ol i f er aci n y di f er enci aci n
de l as cl ul as endoteliales.
Otros factores participan tambin en
la angiognesis. El los incl uyen a la
familia de molculas activadoras
incluyen al FGF (factor de crecimiento del
fibroblasto), las angiopoyetinas, las
integrinas avb3 y avb5, diversas
metaloproteinasas, etc. Contrariamente,
factores como angiostatina, endostatina,
trombospondina, interfern a y b,
inhibidores de metaloproteinasas, y otros,
son eficaces inhibidores de la
angiognesis y del crecimiento tumoral.
(2)








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FACTORES REGULADORES DE LA
ANGIOGNESIS

En general, la angiognesis es un proceso
complejo controlado por el equilibrio entre
factores proangiognicos y
antiangiognicos, que pueden coexistir en
el mismo tejido. Estos factores pueden ser
circulantes o actuar localmente como
factores paracrinos.
Hay 2 tipos de factores estimuladores de
la angiognesis:
a) factores especficos, liberados por
numerosos tipos celulares, que se unen
de forma especfica a los receptores de
las clulas endoteliales, y
b) factores inespecficos, que se unen a
las clulas endoteliales pero tambin a
otras clulas. Entre los factores
especficos destacan el factor de
crecimiento del endotelio vascular (VEGF)
y las angiopoyetinas.
Los factores proangiognicos
inespecficos son numerosos y afectan al
crecimiento de la clula endotelial y de
otras muchas. Algunos de los ms
importantes son los factores de
crecimiento de fibroblastos (FGF: cido y
bsico), factor de crecimiento
transformante (TGF), factor de
crecimiento epidrmico (EGF), factor de
crecimiento derivado de plaquetas
(PDGF), angiogenina, etc.
El VEGF es la molcula mejor
caracterizada y ms importante del
proceso angiognico. Se han descrito 6
isoformas del VEGF que difieren en sus
propiedades y funciones. Asimismo, se
conocen tres receptores del VEGF: VEGF-
R1 (Flt-1), VEGF-R2 (KDR/Flk-1) y
VEGFR3(KDR/Flt-1). Los 2 principales
receptores, Flt-1 y KDR, son expresados
en las clulas endoteliales cuando se
encuentran en fase de proliferacin. La
unin del VEGF con sus receptores, de
tipo tirosincinasa, activa diversas vas de
seal que intervienen en diferentes pasos
en la angiognesis. As, el VEGF
contribuye a la vasodilatacin inicial
mediada por xido ntrico y aumenta la
permeabilidad de las clulas endoteliales,
estimula la proliferacin y migracin de las
clulas endoteliales y disminuye la
apoptosis. Adems, a travs del estmulo
de la sntesis de los activadores del
plasmingeno, interviene en el
remodelado de la matriz perivascular. Las
angiopoyetinas representan otra familia
importante de factores proangiognicos.
Las ms decisivas son la Ang-1 y Ang-2,
que se unen al receptor de tipo
tirosincinasa presente en las clulas
endoteliales y favorecen la estabilizacin y
maduracin de los vasos neoformados. En
presencia del VEGF, la Ang-2 antagoniza
los efectos estabilizadores o
antiapoptticos de la Ang-1 sobre las
clulas endoteliales y promueve la
proliferacin y migracin de las clulas
endoteliales
Sin embargo, el proceso angiognico no
est producido por una sola molcula o
familia de molculas, sino que depende de
la cooperacin e integracin de varios
factores que contribuyen a la proliferacin,
migracin, invasin y diferenciacin de la
clula endotelial.
En el proceso de cambio angiognico
intervienen factores inhibidores
endgenos, como la endostatina, la
angiostatina, la trombospondina, los
inhibidores titulares de las
metaloproteasas, etc. La endostatina,
fragmento de 20 kDa obtenido tras la
escisin del colgeno XVIII, es una
potente molcula antiangiognica que
inhibe la migracin de la clula endotelial
e induce su apoptosis. Se une al receptor
KDR/Flk-1 e interfiere en el mecanismo de
seal del VEGF. La angiostatina,
fragmento de 38 kDa del plasmingeno,
es otro factor antiangiognico circulante
que inhibe la neovascularizacin y el
crecimiento de las metstasis. La
trombospondina 1 (TSP-1) inhibe la
angiognesis y promueve la apoptosis de
la clula endotelial a travs de un
aumento de la expresin de Bax y una
disminucin de Bcl-2 y de la va de las
caspasas. (5)
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5



ACTIVACIN DE LA ANGIOGNESIS

En 1996, Hanahan y Folkman propusieron
que esta activacin era el resultado de un
desequilibrio entre los factores
estimuladores de la angiognesis y los
inhibidores, con un predominio de los
primeros de forma sostenida.
El encendido o activacin angiognica
puede estar influido por situaciones
ambientales, fundamentalmente la hipoxia, y
otros factores del microambiente tumoral,
tales como la acidosis y la inflamacin.
Tambin es importante la base gentica del
husped, puesto que pueden ocurrir
mutaciones genticas con activacin de
protooncogenes (bcl-2, K-ras, H-ras, c-myc,
etc.) e inhibicin de genes supresores de
tumor (p53), que amplifican la expresin de
factores proangiognicos15.
Los tumores de gran tamao durante su
crecimiento pueden experimentar
fenmenos de hipoxia y necrosis por
compresin de los vasos. La presencia de
un pH y una concentracin de glucosa bajos
en el seno tumoral puede estimular la
produccin de los factores angiognicos,
especialmente el VEGF12. Si bien la
mayora de los trabajos apuntan en este
sentido, algunos datos preclnicos muestran
que la hipoxia y la angiognesis en el tumor
no siempre progresan paralelamente.
Aunque la falta de oxigenacin es un fuerte
estmulo para la angiognesis del tumor, la
patogenia de la hipoxia del tumor es mucho
ms complicada y puede que no sea
necesaria para que se produzca la
neovascularizacin (5)
La serina/treonina protena cinasa Akt o
protena cinasa B (PKB) es un regulador
intracelular multifuncional de la
supervivencia, crecimiento y metabolismo
celular. En relacin a sus funciones
cardiovasculares, Akt/PKB acta en la va
intracelular estimulada por el factor de
crecimiento endotelial vascular (VEGF) y la
angiopoyetina, promoviendo la
supervivencia celular y asegurando un
desarrollo vascular adecuado
19
. La
activacin constitutiva de la sealizacin Akt
protege a los cardiomiocitos de la apoptosis
en la lesin por isquemia-reperfusin
20
.
Adems de su papel citoprotector, Akt
funciona como un activador de la produccin
de NO por el endotelio en respuesta al
VEGF y al estrs de cizallamiento a travs
de su capacidad para fosforilar la sintasa de
xido ntrico endotelial (eNOS) en las
serinas 1179 o 1177, controlando de esta
manera el tono vasomotor. Por otra parte,
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6

Akt es esencial en la migracin de las
clulas endoteliales hacia el foco productor
de VEGF
24
. As pues, la capacidad de Akt
para mediar la supervivencia celular, la
produccin de NO y la migracin inducida
por VEGF sugieren que la protena
cinasaAkt puede mediar la respuesta del
endotelio a los estmulos angiognicos.(4)

Sealizacin Akt y angiognesis/vasculognesis.
La angiopoyetina 1 (Ang-1), el VEGF y el factor
de crecimiento de fibroblastos (FGF), al unirse a
sus receptores de membrana, inducen la
conversin de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato
(PIP2) a fosfatidilinositol 3,4,5-trifosfato (PIP3)
por la fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K). La
formacin de PIP3 es necesaria para la
fosforilacin de la protena cinasa Akt por la
cinasa PDK-1. El tratamiento con estatinas
aumenta la fosforilacin de Akt, mientras la
wortmanina (un inhibidor de PI3K) la previene. El
mevalonato, el producto de la HMG-CoA
reductasa, tambin inhibe la PI3K y la
consiguiente fosforilacin de Akt.

LACASCADA DE LA ANGIOGNESIS

La angiognesis se produce como una
cascada ordenada de eventos celulares en
el lecho de la herida:
1. Los factores angiognicos de crecimiento
se unen a sus receptores sobre la superficie
de las clulas endoteliales en las pre-
existentes vnulas (vasos padres).
2. Crecimiento del receptor del factor de
unin se activa de sealizacin caminos
dentro de las clulas endoteliales.
3. Las clulas endoteliales activadas liberan
proteoltica enzimas que disuelven la
membrana basal que rodean los vasos
principales.
4. Las clulas endoteliales proliferan y
brotan hacia afuera a travs de la membrana
basal.
5. Las clulas endoteliales migran hacia el
lecho de la herida utilizando molculas de
adhesin de clulas superficiales conocidas
como integrinas (V3, V5, y51).
6. En el frente de avance de los vasos
germinacin, las enzimas conocidas como
metaloproteinasas de la matriz (MMP)
disolver la matriz del tejido circundante.
7. Brotes vasculares formar canales
tubulares que conectan para formar bucles
vasculares.
8. Bucles vasculares se diferencian en
aferente (arterial) y eferente (venoso)
miembros.
9. Los nuevos vasos sanguneos madurar el
mural de la contratacin Las clulas (clulas
musculares lisas y pericitos) para estabilizar
la arquitectura vascular.
10. El flujo de sangre comienza en el
recipiente estable maduro.
Estos crecimiento complejo receptor del
factor de, clula-clula, y las interacciones
clula-matriz caracterizar la angiognesis
proceso, independientemente de los
estmulos que incitan o de sus
ubicacin en el cuerpo. (6)



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7


Fig. Cascada de la angiognesis:
(1)tejido enfermo o daado
producen y liberan factores de
crecimiento que (2)se unen a sus
receptores en las clulas
endoteliales,(3) vas de transduccin
de seales activadoras y
estimulantes (4) proliferacin
endotelial, la migracin (5),y(6)la
formacin del tubo vascular.(7) de la
mdula sea derivados de las clulas
progenitoras endoteliales se
movilizan y se incorporan en la
nueva vasos sanguneos.(8)La
estabilizacin de los vasos se
produce a travs de la activacin de
clulas musculares lisas y pericitos.


VEGF (Factor de crecimiento del
endotelio vascular)

Actualmente se reconoce al sistema que
incluye al VEGF y sus receptores como el
principal regulador de las ECs vasculares y
de la formacin de vasos sanguneos. El
VEGF es un factor de crecimiento con
actividad mitognica altamente especfica
para las ECs; es miembro de la sper familia
de genes VEGF-PDGF que incluye al VEGF-
A, -B, -C, -D y E, as como al factor de
crecimiento de placenta (PIGF). El VEGF fue
identificado en los anos 80s como un factor
de permeabilidad vascular (VPF) y como un
factor de crecimiento especfico de ECs
vasculares codificado por el gen VEGF, por
lo que ha sido referido como VEGF,
VEGF/VPF o simplemente VPF.
El VEGF activo est compuesto por dos
subunidades idnticas. La unin a su
receptor es mediada por el homodmero a
travs de la unin del ncleo de la protena;
la modulacin de la actividad del VEGF est
dada por la unin a heparina, que resulta en
una mayor eficiencia de la actividad de
cinasa y a carbohidratos en la superficie
celular, con los dominios que se extienden a
partir del ncleo del VEGF, los cuales son
de distintos tamaos dependiendo de la
isoformas de esta protena.
El VEGF responde a varios estmulos tales
como hipoxia/ isquemia principalmente
mediante el factor inducible de hipoxia 1
(HIF-1), a distintos factores de crecimiento
(EGF, TGF y KGF o factor de crecimiento
derivado de queratinocitos, IGF-1 o factor de
crecimiento insulnico tipo 1, FGF y PDGF),
a oncogenes activados (por ejemplo Ras)
as como a distintas citosinas (IL-1 y IL-6),
p53 mutado, estrgeno y oxido ntrico (NO).
Mediante estos estmulos se aumenta la
expresin del VEGF resultando en la
induccin de proliferacin de ECs derivadas
de las arterias, venas y vasos linfticos as
como en la proliferacin de algunos tipos
celulares no endoteliales; adems, el VEGF
promueve la migracin celular e inhibe la
apoptosis, incrementa la conductividad
hidrulica de microvasos aislados y
vasodilatacin, como resultado del NO
derivado de ECs, promueve la angiognesis
y la permeabilizacin de los vasos
sanguneos y participa en la vasculognesis
y en la linfangiognesis.
Cuando su regulacin es normal, el VEGF
contribuye al remodelamiento vascular
durante el ciclo ovrico y la implantacin
embrionica, a la cicatrizacin y reparacin,
mientras que cuando es inadecuada, este
factor contribuye al desarrollo de tumores
slidos al promover la angiognesis,
adems de participar en distintas
condiciones como la psoriasis, artritis
reumatoide, retinopata diabtica y diabetes
mellitus. (1)


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VEGF-A.
Es el miembro principal y ms estudiado de
esta familia de genes, el cual es codificado
por un solo gen organizado en ocho exones
separados por siete intrones, siendo una
glicoprotena homodimrica de 45 KDa. El
VEGF-A emplea sitios de unin simtricos
en cada polo del dmero para unirse tanto al
VEGFR-1 como al VEGFR- 2 y puede
inducir heterodmeros entre estos dos
receptores. Hasta el momento se han
reportado seis isoformas del VEGF en seres
humanos las cuales contienen 121, 145,
165, 183, 189 y 206 residuos de
aminocidos, generados como resultado del
procesamiento alternativo del RNAm, que
difieren tanto en su masa molecular como en
sus propiedades biolgicas.
Las distintas isoformas del VEGF-A
incrementan la permeabilidad vascular,
estimulan la proliferacin y migracin de
ECs, proveen a dichas clulas de
supervivencia y anti-senescencia, adems
de promover neuroproteccin en desrdenes
isqumicos. El VEGF-A165 es la isoforma
predominante del VEGF-A, es una molcula
cargada positivamente que se une a la
heparina, por otro lado, el VEGF-A145 y el
VEGF-A183 son las variantes menos
frecuentes. Las propiedades de las distintas
isoformas del VEGF-A difieren entre s. El
VEGF-A165 es la isoforma ms comn y
estudiada, adems de ser el transductor de
seales ms fuerte entre los distintos tipos
del VEGF; fue originalmente descubierto
como un potente factor de permeabilizacin
vascular, esta isoforma es principalmente
secretada; sin embargo, una fraccin
significativa permanece unida a la superficie
celular y a la matriz extracelular. Adems de
unirse al VEGFR-2, esta protena puede
unirse a la neuropilina 1 (NRP-1),
incrementando su afinidad al receptor
VEGFR-2 hasta 10 veces aproximadamente.
El VEGF-A121 es una protena soluble que
no se une a la heparina y que difunde
libremente en los tejidos, sirviendo como
una seal gua de larga distancia para la
migracin direccional. El VEGF-A189 es una
protena unida a la matriz extracelular que
se une a la heparina con mayor fuerza que
el VEGF-A165y funciona en la atraccin
celular en un rango de accin corta.
Finalmente, la isoforma 206 se encuentra
casi completamente secuestrada en la
matriz extracelular y su funcin se
desconoce hasta el momento.

VEGF-B.
Se conocen dos isoformas, el VEGF-B167y
el VEGF-B186, cada una con 167 y 186
residuos de aminocidos, respectivamente.
La expresin del VEGF-B no es regulada por
hipoxia y estimula la proliferacin celular
ligeramente; es un ligando tanto para el
VEGFR-1 como para la NRP-1 y se expresa
en distintos tejidos humanos normales,
principalmente en el miocardio en desarrollo,
adems de expresarse en tumores humanos
benignos y malignos.

VEGF-C.
Es un potente factor de permeabilidad,
aunque 4-5 veces menor que el VEGF-A, y
se sintetiza como un dmero pre-pptido
(protenas que requieren procesamiento
post-traduccional) con un tamao de 61 KDa
por subunidad, que mediante la maduracin
proteoltica forma un homodmero de 21
KDa. Tanto las formas maduras del VEGF-C
como las parcialmente procesadas se unen
al VEGFR-3 con gran afinidad, mientras que
slo las formas completamente procesadas
se unen al VEGFR-2. Este factor estimula la
migracin y proliferacin de ECs; su unin al
VEGFR-3 regula la sealizacin del VEGFR-
2 actuando de manera sinrgica con el
VEGF-A. Adems, est asociado a las
clulas neuroendocrinas (NE) aunque sin
participacin aparente en el desarrollo de la
vasculatura del sistema neuroendocrino.

VEGF-D
Es un mitgeno para las ECs y un ligando
tanto para el VEGFR-2 como para el
VEGFR-3. Este factor es un compuesto
linfangiognico de menor potencia que el
VEGF-C, que parece estar sub-expresado
durante el desarrollo, as como despus de
La organognesis. Al igual que el VEGF-C,
esta protena se encuentra asociada con las
clulas NE. Tanto el VEGF-C como el -D,
son elementos esenciales para el desarrollo
del sistema linftico y pueden inducir la
angiognesis y aumentarla permeabilidad
vascular; ambas molculas son sintetizadas
como pre-protenas que requieren de
procesamiento post-traduccional.


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VEGF-E
Fue descubierto en el genoma del
parapoxivirus Orf (cepa NZ-7), que es un
virus de cadena lineal doble de DNA que
causa dermatitis pustular contagiosa en
ovejas, cabras y ocasionalmente en seres
humanos, histolgicamente caracterizada
por lesiones vasculares y edematosas. Este
miembro de la familia del VEGF tambin
referido como VEGF orf que carece del
dominio de unin a heparina encontrado en
el VEGF-A, se une y activa especficamente
al VEGFR-2, resultando en un efecto
mitognico y en actividad e permeabilidad
vascular similar al producido por el VEGF-
A165, aunque hasta el momento se
desconocen los residuos de aminocidos
que median esta unin. Adems, induce la
expresin del factor tisular (TF) y la
angiognesis. Interesantemente, el VEGF-E
contiene un dominio carboxi-terminal rico en
treonina y prolina cuya funcin se
desconoce y el cual no se encuentra en
ninguna otra forma del VEGF de mamferos.
Por otro lado, la cepa NZ2 expresa otra
protena tipo VEGF llamada ORFV2-VEGF o
VEGForf2, con una potencia mitognica
entre 4-5 veces menor que la del VEGF-A.
(1)


Fig. Estructura y funciones de los receptores del factor de crecimiento
vascular endotelial (VEGF). Las distintas isoformas del VEGF se unen a sus receptores especficos. Los
receptores del VEGF constan principalmente de 7 dominios de inmunoglobulina
(Ig) extracelulares, un dominio transmembrana, uno yuxtamembrana,
2 dominios tirosincinasa y, finalmente, la cola carboxi terminal.

RECEPTORES DEL VEGF

El proceso de sealizacin que resulta en la
angiognesis se encuentra mediado por
uniones de alta afinidad de los VEGFs con
receptores especficos de actividad tirosina
cinasa (RTKs), localizados tanto en la
superficie de las ECs vasculares y en
clulas derivadas de la medula sea, como
en forma soluble en circulacin.
Todas las isoformas del VEGF son capaces
de unirse a alguno de estos tres receptores:
VEGFR-1(tambin conocido como Flt-1),
VEGFR-2 (KDR o Flk-1) y/o VEGFR-3 (Flt-
4); estos receptores contienen siete
dominios homlogos a inmunoglobulina (Ig)
en su parte extracelular, una regin
transmembranal, un dominio
yuxtamembranal y un dominio intracelular de
sealizacin tirosina cinasa interrumpido por
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10

un inserto de cinasa de 69 aminocidos y la
regin carboxi-terminal. El segundo y tercer
dominio de Ig representa la regin de unin
al ligando, mientras que las regiones del
cuarto al sptimo dominio de Ig son
esenciales para la dimerizacin del receptor.
Adems, algunos VEGFs que se unen al
VEGFR-1 y/o VEGFR-2 tambin pueden
unirse a co-receptores como las neuropilinas
(NRPs), mediante secuencias especficas en
el extremo carboxilo y, a otros receptores de
la superficie celular, por vas distintas a las
de los dominios de unin a la heparina. Al
igual que otros RTKs, los VEGFRs se
dimerizan y experimentan autofosforilacin
con la unin al ligando, desencadenando
una cascada de sealizacin fosforilando
distintas protenas, como la proteincinasa-C
(PKC), fosfolipasa C-gamma (PLC),
fosfatidil inositol 3-cinasa (PI3K), sintasa de
oxido ntrico endotelial (eNOS)y el blanco de
rapamicina en mamferos (mTOR),regulando
mecanismos involucrados en angiognesis,
activados por el VEGF.

VEGFR-1
Fue el primer receptor identificado de alta
afinidad para el VEGF pero su funcin
precisa continua bajo debate, principalmente
debido a las distintas propiedades que
pueden encontrarse, dependiendo de la
etapa del desarrollo y el tipo celular, por
ejemplo inhibiendo y promoviendo
quimiotaxis, actuando como un receptor
dual: positivamente, como el Flt-1 en la
superficie celular, y/o negativamente, como
el Flt-1 soluble (sFlt). El VEGFR-1 es una
glicoprotena transmembranal de 180 KDa
cuyo RNAm puede ser cortado y
empalmado, produciendo una protena ms
corta (sFlt) con nicamente seis dominios
extracelulares de Ig, la cual se encuentra
presente en el suero y mantiene la actividad
de unin al VEGF-A y PlGF, funcionando as
como un regulador negativo de estas
protenas, al secuestrar y suprimir sus
niveles fisiolgicos. En contraste, el VEGFR-
1 de la superficie celular se une al VEGF-A,
VEGF-B y PlGF-1 y -2 resultando en la
activacin de la PI3K y otras protenas de
transduccin de seales; sin embargo,
tambin se ha reportado que por la va
selectiva del Flt, el VEGF es incapaz de
generar una seal mitognica. El VEGFR-1
se encuentra expresado principalmente en
las ECs, aunque tambin se encuentra en
clulas trofoblsticas, monocitos, clulas
renales mesangiales, clulas del musculo
liso uterino y en distintos tipos celulares
tumorales. La transcripcin del VEGFR-1 es
aumentada por la hipoxia y, aunque
probablemente no induce proliferacin
celular debido a que las protenas cinasas
activadas por mitgeno (MAPKs) no son
activadas por este receptor, s promueve la
generacin de proteasas como la
metaloproteasa de matriz extracelular 9
(MMP-9), las cuales son requeridas para la
degradacin de la membrana basal de los
vasos sanguneos en las etapas iniciales de
la angiognesis.

VEGFR-2
Fue el segundo receptor del VEGF en ser
identificado. Es una protena de 230 Kda de
la cual se conocen dos variantes funcionales
producto del procesamiento del RNAm. Este
receptor se une a VEGF-A y a formas
maduras del VEGF-C y D. nicamente la
forma glicosilada final del VEGFR-2 es
capaz de autofosforilarse en respuesta al
VEGF y participa de manera crucial en la
angiognesis en el desarrollo y la
hematopoyesis, siendo el mayor mediador
de los efectos mitognicos, angiognicos y
de aumento de la permeabilidad del VEGF;
adems, cuando es activado por el VEGF,
resulta en una respuesta migratoria celular.
El VEGFR-2 se encuentra expresado
principalmente en las ECs, adems de
clulas madre hematopoyticas,
megacariocitos y clulas progenitoras
retinales. Aunque la produccin de este
receptor aumenta bajo condiciones de
hipoxia, esta no es su principal inductora, se
propone que un mecanismo post-
transcripcional pudiera ser el responsable de
su sobre-expresin. Su activacin por
fosforilacin va el VEGF, resulta en la
activacin de las MAPKs por la fosforilacin
de las tirosinas de la va del PI3K-PLC-PKC,
sin emplear la activacin de la va de Ras.
Interesantemente, la activacin del VEGFR-
2 aumenta y activa la sintetasa endotelial de
oxido ntrico (eNOS), un mecanismo
importante a considerar, tomando en cuenta
que el NO juega un papel crucial en la
proliferacin de ECs, migracin celular,
formacin de tubo, aumento de la
permeabilidad vascular, hipotensin y
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11

angiognesis inducidas por el VEGF. La
activacin de este receptor es suficiente
para la activacin de transductores de
seales involucrados en la mitognesis y
migracin celular, as como en la maquinaria
angiognica y la permeabilidad vascular.

VEGFR-3
Es un receptor tirosina cinasa de superficie
celular altamente glicosilado y relativamente
estable de 180 KDa aproximadamente.
Actualmente se conocen dos formas
transcritas que difieren entre s por sus
extremos carboxilo; la forma predominante
en los tejidos, corresponde a un transcrito de
5.8 Kb, mientras que la variante alternativa
consta de 4.5 Kb. Despus de la biosntesis,
la forma glicosilada del VEGFR-3 de 195
KDa, es cortada proteolticamente en el
quinto dominio de Ig, aunque las cadenas
resultantes de 120 KDa y 75 KDa,
permanecen unidas por un enlace disulfuro.
El VEGFR-3 y sus ligandos (las formas no
procesadas del VEGF-C y D), estn
involucrados en la linfangiognesis, al igual
que en la angiognesis y en la migracin
celular, a pesar de que el VEGF-A no se une
a este receptor. El VEGFR-3 se expresa en
las ECs vasculares en las etapas tempranas
del desarrollo, mientras que despus de la
organognesis permanece restringido a las
Ecs linfticas; adems, se puede
sobreexpresar tanto en tumores vasculares
benignos como malignos de nios y adultos.
Este receptor se encuentra activado en los
capilares sanguneos de reciente formacin
que rodean a los tumores slidos, siendo
importante tanto para la gnesis de la
neovascularizacin inducida por el tumor,
como para el mantenimiento del
recubrimiento de las ECs durante la
angiognesis tumoral.


NRP-1 y NRP-2
Las neuropilinas son receptores
glicoproteicos sin actividad de cinasa
ubicados en la superficie celular, que se
unen a las colapsinas/semaforinas
(protenas implicadas en la sealizacin
para la gua neuronal), PlGF-2, VEGF-A165,
VEGF-B y VEGF-E. La Nrp-1 de 130-
135KDa contiene slo una cola
intracitoplsmica corta y se sugiere que
aumenta la unin del VEGFA 165 con el
VEGFR-2, actuando a manera de
coreceptor; sin embargo, no existe evidencia
de que las NRPs sealen despus de unirse
al VEGF. Por si misma, la Nrp-1 puede
mediar la sealizacin que resulta en
migracin celular, aunque no en
proliferacin. Al igual que el VEGFR-2, la
Nrp-1 se encuentra particularmente
expresada en algunas clulas tumorales,
adems de ECs, probablemente
estimulando el crecimiento y la migracin de
la clula tumoral. Interesantemente, la unin
tanto de la NRP1 como de la NRP2 con las
semaforinas, activa la seal de repulsin del
axn. (1)

RUTAS INTRACELULARES ACTIVADAS
POR VEGF
La unin de VEGF a las clulas promueve
la fosforilacin de su receptor Flt-1. Como
consecuencia de esta fosforilacin, se
activan varias rutas intracelulares:
a) una cascada PI3K dependiente de la
protena cinasa C alfa, que media la
migracin de clulas MM en la fibronectina;
b) la ruta MEK/ERK, que media la
proliferacin de clulas MM17, y
c) una ruta que media la supervivencia de
las clulas MM mediante la induccin del
incremento de Mcl-1 y survivina de modo
dependiente de la dosis27.
En clulas leucmicas, la estimulacin
autocrina de KDR por VEGF activa su
proliferacin y migracin, y promueve el
desarrollo de un fenotipo tumoral ms
invasivo. Es ms, el VEGF induce la
expresin de la protena Hsp90 y su unin a
Bcl-2 y Apaf-1, y de este modo se
incrementa la resistencia de las clulas
leucmicas a la apoptosis.

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12


Fig. Rutas intracelulares activadas por el factor de crecimiento vascular
endotelial (VEGF). La unin del VEGF a las clulas promueve la fosforilacin de su receptor
VEGFR1 (Flt-1). Como consecuencia de esta fosforilacin, se activan varias rutas intracelulares:
la ruta cinasa activada por seales extracelulares (MEK/ERK).





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13

FACTOR DE CRECIMIENTO DEL
FIBROBLASTO: FGF
El FGF forma parte de una familia de ms
de 20 protenas diferentes que se
distribuyen en varios tejidos. El FGF-2,
tambin denominado FGFb (bsico)
interviene en gran nmero de efectos
biolgicos, como por ejemplo en el
desarrollo embrionario, la tumorignesis y la
angiognesis. La accin biolgica del FGF
es mediada por cuatro receptores tirosina
quinasa denominados FGFR-1, 2, 3 y 4, los
cuales pueden generar diversas variantes
por "splicing alternativo" exhibiendo un
amplio espectro de expresin tisular que
posibilita un extenso rango de interacciones
receptor-ligando. Dicha unin induce la
dimerizacin del receptor y su
autofosforilacin en tirosina, activando la
transcripcin y traduccin de nuevas
molculas.
El FGF-2 se encuentra normalmente unido
al heparan-sulfato o a proteoglicanos de la
matriz extracelular. Su liberacin se regula a
travs de heparanasas o de proteasas de
proteoglicanos. Asimismo, el heparan-sulfato
acta como co-receptor del FGF-2,
promoviendo su dimerizacin y favoreciendo
su unin al receptor, con la consecuente
activacin del mismo. El FGF-2 tambin
puede ser movilizado de la matriz
extracelular por el VEGF165 o por la accin
de una protena "chaperona", conocida
como "protena de unin a FGF" (FGF-BP),
que favorece la interaccin con el receptor.
Tanto FGF-2 como FGF-1 (cido) son
potentes inductores del proceso angiognico
y suelen encontrarse incrementados en
diversos modelos de cncer humano y
experimental. (7)




Receptor del factor de crecimiento del
Fibroblasto: FGFR
Es un receptor con actividad tirosina quinasa
intrinseca.3 partes:
Parte extracelular: lugar de unin con FGF
Dominio intermembrana
Parte intracelular: tiene dominios conactividad
tirosina quinasa. Se activa mediante su
dimerizacin.

Efectos de la cascada de sealizacin

Efectos principales:
Proliferacin y diferenciacin de los fibroblastos
Efectos en la clula.
Inhibicin de la apoptosis
Diferenciacin celular
Transcripcin de nuevas protenas
Crecimiento celular
Migracin celular
Inflamacin (8)


FACTOR DE CRECIMIENTO DERIVADO
DE LAS PLAQUETAS (PDGF)

El factor de crecimiento derivado de las
plaquetas (PDGF) es un factor de
crecimiento dimrico, La forma
biolgicamente activa de PDGF es un
dmero formado por dos cadenas
polipeptdicas, unidas por puentes disulfuro.
Puede estar presente como homodmero o
como heterodmero y dependiendo del tipo
de dmero formado muestra actividad
diferencial. PDGF es el producto de cuatro
diferentes genes que son ensamblados en
cinco isoformas distintas conocidas como:
AA, AB, BB, CC y DD, siendo las cadenas C
y D las ms recientemente identificadas. Las
isoformas de PDGF ms conocidas son el
producto de asociaciones de las cadenas A
y B con aproximadamente 100 residuos de
aminocidos, cada una, de los cuales el
60% son conservados entre s. A la fecha
slo se conoce la estructura de la isoforma
AB humana.

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14


Ruta de sealizacin del FGF

Estructura del receptor de PDGF (PDGFR)

PDGFR es tambin un dmero que puede
formarse de la combinacin de las cadenas
llamadas alfa y beta en cualquier orden
, o . El receptor dimrico se forma
solamente luego de la unin del ligando y se
une con distinta afinidad a las diferentes
isoformas de PDGF. Se sabe que el receptor
se une con alta especificidad a las
cadenas A y B, mientras que el receptor
se une slo a cadenas A. PDGFR muestran
que es una protena con tres dominios:
extracelular, transmembrana y citoslico. El
dominio extracelular posee cinco sitios
especficos, tres de ellos estn involucrados
con la unin al ligando, otro tiene que ver
con la estabilizacin de la interaccin entre
receptores y el ltimo cuya funcin se
desconoce. En secuencias especficas del
dominio citoslico recae la actividad tirosina
kinasa del receptor. En esta porcin
intracelular se une mediante puentes de
hidrgeno al sitio cataltico y que es
desplazado causando un cambio
conformacional en la protena como evento
posterior de la unin del ligando al receptor.

Estructura del receptor. En la izquierda se
muestra una cadena con los dominios
extracelular, transmembranal y citoslico. En
este ltimo se observan los sitios de fosforilacin
y de unin a protenas. En la derecha se
esquematiza la formacin y estabilizacin del
dmero posterior a la unin del ligando.

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15


Activacin de PDGFR
En el proceso de activacin del receptor, la
isoforma se une de manera especfica a dos
monmeros en la membrana plasmtica,
cercanos uno del otro atrayndolos y
provocando su dimerizacin.
Como consecuencia, el loop que obstruye el
sitio cataltico del dominio kinasa (Y849 en el
receptor y Y857 en el receptor ) es
desplazado a causa de la autofosforilacin
de estos residuos de tirosina causando un
cambio conformacional y la creacin de
sitios docking para protenas involucradas
con la transduccin de seales, que
conducen a la expresin de genes y a la
sntesis de protenas.

Vas de sealizacin asociadas a PDGF
Debido a las diferencias en cantidad de
expresin de PDGFR y a la variabilidad en
isoformas de PDGF que se pueden unir a
los receptores, los diferentes tipos celulares
pueden mostrar un rango amplio de
posibilidades para desencadenar respuestas
biolgicas diversas. Esto se refleja en al
menos cuatro sistemas experimentales en
donde las diferentes isoformas de PDGF
producen diferentes resultados.


Activacin del Receptor. El receptor activado
deja expuestos sitios de acoplamiento a
protenas con dominios de reconocimiento a
fosfotirosinas que llevan al desencadenamiento
de cascadas de sealizacin intracelular.



Se sabe que las clulas musculares lisas
(CML) y los fibroblastos expresan ambos
tipos de receptor, y . Sobre CML, PDGF-
AA inicia hipertrofia celular (sntesis proteica
incrementada), mientras que PDGFBB
induce hiperplasia (mitosis). Sobre
fibroblastos, la isoforma PDGFBB inicia
quimiotaxis, mientras que PDGFAA la
inhibe. Sobre neuronas dopaminrgicas,
PDGFAA promueve el desarrollo de la fibra
neuronal embrionaria, mientras que la
isoforma BB sirve slo como un factor de
mantenimiento de la supervivencia.
Finalmente, dentro del desarrollo pulmonar,
PDGFBB regula el crecimiento y nmero de
clulas epiteliales del tbulo respiratorio,
mientras que la isoforma AA dirige la
formacin de las ramificaciones que crecen
a partir de los tbulos respiratorios. Es as
que, claramente se ve que la interpretacin
de cualquier estudio experimental depende
del tipo celular empleado y de la isoforma de
PDGF aplicada. En la tabla 1 se resume los
tipos celulares que expresan los receptores
para PDGF.
En general se puede decir que las isoformas
de PDGF son mitgenos potentes para las
clulas del tejido conectivo, incluyendo
fibroblastos cutneos, clulas arteriales del
msculo liso, condrocitos y algunas clulas
epiteliales y endoteliales. Adems de su
actividad mitognica, PDGF es quimiotctico
para fibroblastos y clulas musculares lisas.
Hay evidencia considerable que indica que
PDGF derivado de macrfagos, acta como
un agente mito-gnico y quimiotctico para
clulas musculares lisas y contribuye al
engrosamiento de las paredes arteriales
caracterstico de arterioesclerosis. Otras
actividades reportadas para PDGF incluyen
la estimulacin de la liberacin de
granulocitos por neutrfilos y monocitos, la
modulacin de la expresin y secrecin de
trombospodina, una sobrerregulacin de
ICAM-1 en clulas musculares lisas, as
como la induccin transitoria de secrecin
de IL-2 por clulas T acompaada de una
disminucin de la produccin de IL-4 e IFN-
que lleva a la expansin clonal de linfocitos
T helper y linfocitos B activados por
antgeno, previo a la diferenciacin. Tambin
se ha demostrado que PDGF juega un papel
en el sistema nervioso central,
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16

particularmente en la supervivencia y
regeneracin neuronal yen la mediacin de
la proliferacin de clulas gliales,
diferenciacin y migracin. Estas respuestas
son el producto de la amplificacin de
seales a travs de cascadas intracelulares
en las cuales intervienen protenas con
dominios SH2-SH3 as como protenas con
dominios de unin a fosfotirosina (PTB) y
aquellas con dominios de unin a protenas
adaptadoras tales como Grb2, Shc y Crk.
Los dominios SH2 son secuencias
conservadas de aproximadamente 100
residuos de aminocidos los cuales se unen
a residuos de tirosina fosforilados. El
dominio PTB fue encontrado entre los
residuos150-160 en la protena adaptadora
Shc y se demostr que discrimina entre
diferentes fosfotirosinas. El dominio SH3 es
una secuencia de 50 a 70 residuos de
aminocidos que se une a secuencias ricas
en prolina.

Va de sealizacin Ras/MAPK
Los miembros de la familia Ras son
pequeas GTPasas, identificadas
inicialmente como potentes oncogenes
virales que en el30% de los cnceres se
encuentran constitutivamente activas. Son
protenas asociadas a lpidos de membrana
plasmtica mediante su extremo C-terminal.
Estas protenas funcionan como un switch
en dos conformaciones: una activa cuando
est unida a GTP (Ras-GTP) y otra inactiva
cuando GTP es hidrolizado a GDP (Ras-
GDP). La transicin de forma inactiva a
activa es controlada por el Factor
Intercambiador de Nucletidos de
Guanosina (GEFs).Los receptores PDGF
activan Ras mediante el reclutamiento de
pequeas protenas adaptadoras citoslicas
como Grb-2. Esta protena adaptadora tiene
un dominio SH2y dos dominios SH3;
mediante su dominioSH2 puede unirse
directamente con el receptor fosforilado o
mediante substratos intermediarios como
SHP-2. De manera constitutiva, Grb2 se
asocia con Sos (factor intercambiador de
nucletidos guanina-Ras) mediante sus
dominios SH3 y convierte Ras-GDP
inactivo a Ras-GTP activo. La actividad de
Ras es regulada por enzimas que
promueven la hidrlisis de GTP (protenas
activadoras de GTPasas o GAPs) y por
enzimas que estn involucradas en el
intercambio de GDP por GTP, como el
Factor Intercambiador de Guanosina (GEF);
el balance entre GAPs y GEF en la clula
determina la actividad de la clula.
Una vez activada Ras es iniciada una
cascada de sealizacin mediante la
fosforilacin de residuos de serina y treonina
en diferentes protenas como Raf-1. Aunque
no se ha podido dilucidar muy bien el
mecanismo por el cual Raf-1 es activada, se
ha sugerido que la defosforilacin del
residuo de Ser-259 es esencial para su
activacin. Raf-1 al ser activada es
traslocada a la membrana plasmtica y
puede fosforilar quinasas especficas Mek1 y
Mek2. Las protenas quinasas activadas por
mitgenos (MAPK) Erk 1 y Erk 2 son
serina/treonina quinasas que son activadas
por fosforilacin por Mek1 y Mek2.
Las MAPK son las quinasas ms
importantes en la respuesta mitognica
generada por el estmulo de PDGF. Esta
cascada de sealizacin serina/treonina
culmina con la fosforilacin de Erk, la cual se
trasloca a ncleo e induce a la transcripcin
de genes relacionados con crecimiento tales
como c-fos y c-jun. Estos dos factores de
transcripcin forman heterodmeros dando
lugar a un complejo llamado AP1 que se une
al DNA mediante secuencias consenso. AP1
controla la proliferacin regulando la
expresin de ciclinas comoD1 y de
reguladores como p53 e inhibidores tales
como p21, p19 y p16.
La cascada que involucra Ras/Erk lleva al
incremento del mRNA de ciclina D1, que se
une a Cdk 2,4 6 y forma complejos que
llevan a la fosforilacin del complejo Retino
blastoma (Rb) asociado al Factor de
Transcripcin E2F, expresado
constitutivamente y localizado en el ncleo.
Posterior a la fosforilacin del complejo Rb-
E2F, se produce la disociacin de E2F. Este
evento conduce a la formacin de ciclina E,
formando complejos con Cdk 2 fosforilando
Rb y liberando ms E2F lo que lleva a la
transcripcin de genes que inician la
transicin hacia la fase S, permitiendo la
proliferacin celular.

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17


Va Ras/MAPK. Esta ruta est involucrada en diferenciacin, mitognesis y proliferacin celular.


Va PI3-K, PLC y PKC
PI3-K (fosfatidilinositol-3-kinasa) es un
complejo compuesto de una subunidad
reguladora (p85) y una subunidad cataltica
(p110). La subunidad p85 contiene un
dominioSH2 mediante el cual interacta con
el receptor activado, y un dominio SH3 a
travs del cual interacta con protenas del
citoesqueleto. Al unirse la subunidad p85al
receptor activado permite que la subunidad
p110 sea reclutada quedando activadaPI3-
K. Esta kinasa se trasloca a la membrana
citoplasmtica y cataliza la fosforilacin del
grupo hidroxilo de la posicin 3 de los
fosfatidil-inositoles 3,4 y 5, resultando en la
formacin de: fosfatidilinositol3 fosfato PI3P,
fosfatidil inositol 3,4bifosfato PI3,4BP e
inositol 3 fosfato IP3.
Por el contrario, IP3,4B y IP3 estn
generalmente ausentes en clulas en
reposo, pero aumentan significativamente
despus de la activacin del receptor
actuando como segundos mensajeros.
IP3,4B es hidrolizado por la isoenzima
fosfolipasa C gamma (PLC) generando
Diacilglicerol (DAG) y IP3; ste ltimo se une
a receptores especficos en el retculo
endoplasmtico provocando la liberacin de
calcio. El calcio, en asociacin con
Diacilglicerol (DAG) el cual se encuentra
anclado a membrana plasmtica, activa a la
protena kinasa C (PKC). PLC, contiene un
dominio de unin, el cual se une al residuo
de tirosina fosforilada en posicin 1021
sobre el receptor de PDGF; se ha sugerido
que este sitio de unin sobre el receptor
para PLC positivo de
quimiotaxis y se han postulado mecanismos
que explican esta regulacin positiva, tales
como: nucleacin de actina por efecto del
DAG; asociacin de PI2 con protenas de
unin a actina que llevan a reorganizacin
de actina y motilidad; la simple activacin de
PLC, es suficiente para generar una
respuesta mitognica pero no para mediar
por s misma la respuesta quimiotctica a
PDGF. La va de sealizacin mediada por
PI3-Ky PKC converge con la cascada de las
MAPK, a travs de Ras, lo que en ltimas
conduce a una respuesta mitognica. la
quinasa serina/treonina Akt/PKB lleva a
efectos antiapoptticos. En resumen, las
asociaciones con PI3-K son importantes
para generar respuestas como migracin
celular, reorganizacin de actina,
mitognesis y antiapoptosis. (9)
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18



Va PI3-K, PLCg y PKC. Esta va lleva a la fosforilacin de derivados de inositol y en consecuencia a
movilizacin de calcio.





Va Ras/Erk. Ruta convergente con PI3-K /PKC; conduce a la activacin de la transcripcin de ciclinas.

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19



Esquema simplificado de las principales vas de sealizacin mediadas por PDGF. Se muestra la
asociacin de factores de transcripcin de la familia STAT que interaccionan directamente con el receptor
fosforilado y se traslocan al ncleo.

CARACTERSTICAS GENERALES DE
LASAMINOPEPTIDASAS
Las aminopeptidasas son metaloproteinasas
que eliminan desbloqueando los
aminocidos del N-terminal de pptidos o
protenas. Esta modificacin de pptidos o
protenas se produce ya sea co-traduccin o
despus de la traduccin. Las
aminopeptidasas participar en una amplia
gama de procesos biolgicos. Algunos ellos
pueden regular el metabolismo de las
molculas reguladoras secretadas,
incluyendo las hormonas y los
neurotransmisores, mientras que otros
pueden participar en la degradacin de las
matrices extracelulares. Adicionalmente,
algunos de ellos pueden tener un papel de
"limpieza" en la transformacin de las
protenas y / o regulando los niveles de
protena. Las aminopeptidasas utilizan y
conservan los residuos de aminocidos para
generar una unin a uno o dos iones
metlicos divalentes tales como Zn + +, Co
+ +, y Mn + +.
Los centros de metal pueden describir
comoM1 yM2, que se utilizan para indicar el
tipo de in metlico divalente en el
sitio1ysitio2paraunaenzima en particular.
Los anlisis espectroscpicos y cinticos
indican que algunas aminopeptidasas
requieren dos iones metlicos para su plena
actividad. En otros casos, unin metlicos o
lo es esencial para
la actividad enzimtica, mientras que el in
metlico segundo modula enzimticamente
la actividad, ya sea positiva o
negativamente. Los anlisis estructurales
de los representantes de las diferentes
clases de aminopeptidasa
indican que el sitio1ion metlico est cerca
del sitio activo de la
enzima, mientras que el sitio 2del iones
FISIOLOGA HUMANA LA ANGIOGNESIS

20

relativamente tapado yal lado est la unin
para la cadena lateralP1
Las aminopeptidasas se distribuyen
ampliamente en las clulas animales as
como en las clulas vegetales, bacterias, y
hongos. Con respecto a su localizacin,
algunos son secretadas, pero la mayora son
de clulas asociada (ya sea
citoslica, microsomal, o de membrana). Las
aminopeptidasas
se pueden clasificar en funcin de su
especificidad de sustrato. La escisin
del enlace peptdico escindible depende de
la estructura qumica y composicin de los
residuos de aminocidos que flanquean el
sitio de escisin. Los residuos de las
enzimas, como la metionina aminopeptidasa
(METAP), procesa restringiendo a sustratos
en especial N-terminal y residuos
penltimos. En contraste, el amplio alcance
de enzimas, tales como leucina
aminopeptidasa, son capaces de escindir
aminocidos hidrofbicos de la N-terminal,
sin requisito estricto para que el residuo
penltimo. (3)

METIONINA AMINOPEPTIDASATIPO2
(METAP 2)

METAPs son Co+ + dependiente, expresa
enzimas frente al citoplasma, y exhiben
relativamente estrecha especificidad al
sustrato en comparacin con las otras
aminopeptidasas.
La eliminacin de la Met N-terminal de las
protenas o pptidos por METAPs, que se
produce principalmente cotransporte, es una
crtico paso en la maduracin de muchas
protenas. El anlisis de la secuencias N-
terminal del endgeno y sustituido de forma
sistemtica protenas recombinantes
mostraron que METAPs elimina el Met N-
terminal solamente cuando el segundo
residuo es pequeo y no cargada (es decir,
Gly, Ala, Ser, Thr, Val, Pro, Cys). Los
organismos eucariotas expresan dos formas
de METAP, es decir, de tipo
1METAP(METAP1) y tipo 2
METAP(METAP2).
La clasificacin de los METAPs se basa en
la comparacin de sus secuencias. La
enzima de tipo 2, encontraste con el tipo1,
tienen un dominio -helicoidal de
aproximadamente 60 residuos de longitud
inserta dentro de una superficie de bucle de
la mitad C-terminal de la molcula. La razn
de queMETAP2ha atrado mucha atencin
en el campo de la investigacin de la
angiognesisesporqueMetAP2,
peronoMetAP1, ha demostrado ser como un
objetivo de antiangiognica fumagilina y
ovalicin. Una variedad de anlisis
bioqumicos y estructurales han demostrado
que estos contienen epxido-sustancias
antiangiognicos inhiben la actividad
deMETAP2mediante la unin covalente. La
modificacin deMETAP2porfumagilinafue
identificado inicialmente por el uso de la
especie bovina y humana de clulas
endoteliales (CE) La experimentacin con
cepas isognicas que contienen levadura ya
sea METAP1 levadura o levadura METAP2
tambin mostr que slo METAP2 fue
modificada y se inhibe. La
secuencia N-terminal y el anlisis
espectroscpicos de masas de fragmentos
proteoltica del complejo fumagilina-humano
METAP2 mostr la unin de la fumagilina
para His231. La estructura cristalina del
complejo fumagilina-humano MetAP2
adems revel que la fumagilina abarc el
sitio activo de la His231 al centro metlico y
His339, impidiendo as la unin de sustratos
A pesar de los anlisis detallados, la
evidencia directa de que METAP2 regula la
angiognesis sigue desaparecido. La
inhibicin de la proliferacin celular por
fumagilina y 470-TNP es ms bien selectiva
para ECS (clulas endoteliales), pero la
expresin de METAP2 no se limita a estas
clulas. Por otra parte, el estudio en
levadura mostr nulas mutaciones
de dos METAPs eran redundantes y exhibi
sustrato similar especificidad. Por lo tanto,
todava no est claro si la fumagilina y
ovalicin exhibir actividades antiangiognica
FISIOLOGA HUMANA LA ANGIOGNESIS

21

travs del a inhibicin especfica
deMETAP2.(3)

AMINOPEPTIDASAS ZINC M1

Aminopeptidasas zinc M1 comprenden una
subfamilia de aminopeptidasas que contiene
el HEXXH (18X) consenso motivo E y
requiere un ion Zn + + para su actividad
enzimtica. Ocho enzimas de esta
subfamilia se han identificado hasta ahora
en mamferos y que se subdividen en unidas
a la membrana ectoenzimas y enzimas
citoplsmicas. La zinc aminopeptidasas M1
unidas a la membrana incluye
aminopeptidasa N, aminopeptidasa A,
hormona liberadora de tirotropina (TRH) que
degrada la ectoenzima y aminopeptidasa de
membrana regulado a la insulina /
aminopeptidasa leucina placenta humana /
oxitocinasa, mientras que la
aminopeptidasas zinc M1 citoplasmtica
incluyen aminopeptidasa B, leucotrieno A4
hidrolasa, y puromicina sensible-
aminopeptidasa.
Leucina aminopeptidasa derivada de los
adipocitos (A LAP-) / aminopeptidasa leucil
especfica puromicina-insensible (PILSAP)
es el miembro ms reconocido
recientemente de las aminopeptidasas zinc
M1. Aunque PILSAP fue originalmente
descrito como una protena secretada,
estudios posteriores, sugieren que es una
enzima citoplsmica. Entre aminopeptidasas
zinc M1, aminopeptidasa N y A-LAP/PILSAP
se inform a estar involucrados en la
angiognesis.(3)

AMINOPEPTIDASA N (APN)
APN es una ectoenzima de membrana tipo II
Despus de la clonacin de ADNc deCD13,
este linaje especfico marcador de la
leucemia humana se encontr que era
idntica a la APN. Se inform de que el
tratamiento de animales que llevan
xenoinjertos de carcinoma con inhibidores
de la APN funcionales deteriorado el
crecimiento del tumor. A partir de entonces,
la APN se demostr que se expresa
exclusivamente en las CE de los neovasos,
pero no en los de la vasculatura normal.
Estudios posteriores por el mismo grupo
demostr que el capilar de formacin de la
red fue cambiada por el anti-APN
monoclonal bloquea anticuerpos o
inhibidores funcionales de PNA, y el factor
de crecimiento bsico de fibroblastos y de
sus seales bajo Ras dependientes de las
seales que median la formacin de la red
capilar.
Se ha demostrado que induce la expresin
de APN en EC. Estas observaciones
sugieren quela APN sobre las CE juega un
papel en la regulacin de la angiognesis.
APN tiene slo nueve aminocidos en su
dominio intracelular.
Este hecho sugiere que APN misma no
acta como una molcula de sealizacin,
pero es ms probable que una ectoenzima.
APN ajusta aminocidos de la N-terminal de
pptidos o protenas en el espacio
extracelular y, por esta razn, su funcin se
determina por los sustratos disponibles en el
entorno inmediato. Por lo tanto, se han
propuesto que APN regula la angiognesis a
travs de la activacin de molculas
proangiognicos o inactivacin de la
angiognesis. Sin embargo, el mecanismo
preciso por el cual regula APN angiognesis
est todava por dilucidar. (3)

LEUCINA AMINOPEPTIDASA DERIVADA DE
LOS ADIPOCITOS (A-LAP) /
AMINOPEPTIDASA LEUCIL ESPECFICA
PUROMICINA-INSENSIBLE (PILSAP)

Durante su bsqueda de nuevas
aminopeptidasas zinc M1, dos
grupos independientemente se aisl el
mismo desde aminopeptidasa
las diferentes especies. Un grupo busc una
secuencia humana expresada
etiqueta (EST) base de datos, y el otro
polimerasa a cabo la reaccin en cadena
(PCR) a partir de
rata pituitaria ARNm y la deteccin
subsiguiente ADNc-biblioteca. El primer
grupo designado de la novela enzima
FISIOLOGA HUMANA LA ANGIOGNESIS

22

aminopeptidasa leucina derivada de los
adipocitos.
El ltimo grupo designado como la enzima
aminopeptidasa leucil especfica
puromicina-insensible (PILSAP), porque el
anlisis bioqumico mostraron que la
hidrlisis eficiente se observ para Leu y
quela actividad enzimtica era insensible a
puromicina.
Sin embargo, ninguno de los grupos
determina la funcin biolgica
de A-LAP/PILSAP en ese momento.
Con el fin de encontrar nuevos reguladores
angiognesis expresada en EC, se planific
para aislar genes que son expresadosen
exclusiva en el EC durante la diferenciacin.
Utilizando una estrategia de sustraccin,
tenemos aislados varios nuevos genes
cuyas expresiones fueron regulados en EC
durante la diferenciacin de la madre
embrionarias de ratones (ES) clulas in vitro.
Entre estos genes, se encuentra uno de los
candidatos de la regulacin de la
angiognesis, y result ser un ratn
contraparte a A-LAP/PILSAP. Por lo tanto,
nuestro enfoque no era especfico para
aminopeptidasas, sino ms bien era el tipo
de clula y la funcin orientada.
Nuestros anlisis funcional revel que
PILSAP fue inducida in vitro en EC por un
factor angiognico representante, factor de
crecimiento del endotelio vascular (VEGF), y
se expres en EC en el sitio de la
angiognesis in vivo. Adems, la eliminacin
especfica de la expresin de PILSAP
cambiada a estimulacin de VEGF produce
proliferacin y migracin y formacin de
redes por EC en vitro e inhibi la
angiognesis in vivo.
Estos resultados indican que PILSAP
expresado en ECs juega un
papel importante en la angiognesis.
Tambin puso de manifiesto que la
fumagilina inhiben la actividad enzimtica de
PILSAP. Como se ha indicado
anteriormente, el objetivo de la molcula de
fumagilina ha demostrado ser METAP2. Sin
embargo, la expresin de METAP2 no se
limita a EC, y la inhibicin selectiva de la
proliferacin CE por fumagilina no est
relacionada con la expresin diferencial de
METAP2. Nuestro resultado sugiere que la
fumagilina puede ejercer su actividad
antiangiognica al menos en parte mediante
la inhibicin PILSAP en EC.

Ahora estamos en caracterizar el
mecanismo por el cual PILSAP
regula la migracin y proliferacin de EC y
han obtenido evidencia de que PILSAP est
implicado en la regulacin de la funcin de la
integrina para la migracin celular en EC.
Adems, nuestros datos recientes indican
adems que uno de los sustratos PILSAP es
una molcula de sealizacin intracelular de
la fosfatidil inositol 3-quinasa (PI3-quinasa)
Recientemente, dos molculas con
funciones distintas se han reportado
a ser idntico al regulador aminopeptidasa
PILSAP, es decir, el receptor de
diseminacin del factor necrosis tumoral
(TNF)-1 (ARTS-1) y la aminopeptidasa
asociada con el procesamiento del antgeno
en el retculo endoplsmico. (ARTS-1) se
expresa como una protena integral de
membrana tipo II en clulas epiteliales
pulmonares, as como en EC. Esta protena
forma un complejo molecular con receptor
de TNF-1 y promueve la actividad oxidasa
del receptor de TNF-1. ERAAP se expresa
en las clulas T asesinas y los ajustes de
patgenos intracelulares complejo mayor de
histocompatibilidad (MHC), molculas de
clase I en el retculo endoplsmico. As,
PILSAP parece tener mltiples funciones,
dependiendo en qu tipo de clula se
expresa. (3)






FISIOLOGA HUMANA LA ANGIOGNESIS

23


CONSIDERACIONES FINALES
La angiognesis es un proceso muy
complejo que cumple una funcin crtica en
el desarrollo normal y en la fisiopatologa de
enfermedades comunes. Esta resea se
enfoc principalmente en las etapas iniciales
del proceso que involucra la produccin de
factores angiognicos. Estn en evaluacin
en ensayos clnicos nuevas estrategias
teraputicas que involucran la estimulacin
de la angiognesis en el tejido isqumico y
la inhibicin en el neoplsico.
Particularmente en el caso del cncer, un
desafo ser optimizar la terapia para cada
paciente sobre la base del perfil molecular
individual que toma en cuenta los factores
genticos predisponentes, las mutaciones
somticas y los cambios fisiopatolgicos
secundarios al proceso primario de
enfermedad.















BIBLIOGRAFA:
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Blancos Teraputicos en el Tratamiento Contra
el Cncer
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Gonzlezay Jess M. Culebrasc
Cir Esp. 2005;78(1):3-11

6.-Angiogenesis in Wound Healing
by William W. Li, MD, and Vincent W. Li, MD
Copyright 2003 Dowden Health Media

7.- Factores de crecimiento para la angiognesis
teraputica en las enfermedades
cardiovasculares
Peter R. Valea, Douglas W. Losordob, James F.
Symesc y Jeffrey M. Isnera

8.- Proliferacin vascular inducida por genes
Alejandra R. Bosque Gmez
Instituto Nacional de Cardiologa Ignacio
Chvez.

9.- Eventos de sealizacin asociados al factor
de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF)
UNIVERSITAS SCIENTIARUM diciembre de
2005L. Morales-lvarez, M. Ariza.