1.

MEDIO DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el desarrollo de
microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio
de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
colonias.
Los microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH,
temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecolgicos. Entre los
requerimientos ms importantes para su desarrollo estn el carbono, el oxgeno, nitrgeno, dixido de
carbono e hidrgeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento
especficos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.

2. TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
Segn su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser
extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente.
Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una forma de un
extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
Segn su consistencia
a) LQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa.
b) SLIDOS: se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a razn de 15g/litro. El agar es una
sustancia inerte polisacrida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es
digerida por las bacterias no constituye ningn elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente
esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y
diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles en medio lquido".
c) SEMISLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad de las
especies en estudio.
Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el agregado de agar.
Segn su composicin: A causa de los requerimientos qumicos del mundo microbiano, a veces es necesario
agregar o eliminar componentes qumicos del medio.
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los microorganismos poco
existentes. Es el medio ms frecuentemente utilizado para mantener colonias microbianas. Por ejemplo:
agar comn o caldo comn.
b) ENRIQUECIDOS: estn compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede
agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, lquido
asctico, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones fsicas del medio
o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos especficos con el fin de inhibir el crecimiento de
especies qumicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio slo permite el crecimiento de un grupo
de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir de
poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos
estafilococos).
d) DIFERENCIALES: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios gneros y especies de
microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha aadido un carbohidrato y un indicador y la bacteria que
se cultiva es capaz de fermentar dicho carbohidrato, se produce una acidificacin del medio con el
consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH. El citrato de Simmons es un medio cuya nica
fuente de carbono es el citrato sdico, entonces en l solo crecern las bacterias capaces de desarrollarse
utilizando como nica fuente de carbono ese componente. A menudo la separacin se basa en la diferencia
de color de las colonias aisladas, como en el agar con azul de metileno - eosina que permite diferenciar E.
coli (colonias oscuras y de brillo metlico) de Enterobacter aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin
brillo). Estos dos microorganismos en agar nutritivo producen colonias de color gris blancuzco.
Suelen ser a la vez selectivos, por lo tanto solo crecern determinadas bacterias (pueden ser dos o ms
tipos) que al actuar sobre alguno de los componentes especficos del medio, demuestran algunas de sus
propiedades o caractersticas y nos permite diferenciar entre ambos tipos.
e)DE ENRIQUECIMIENTO: son medios lquidos que contienen un agente que inhibe las especies no deseadas
pero que favorece el crecimiento irrestricto del agente infeccioso. El medio de Muller - Kauffman, permite el
crecimiento de Salmonella inhibiendo a su vez el de numerosos coliformes. Esto es de gran importancia ya
que en ciertas muestras, por ejemplo fecales, el agente infeccioso (Salmonella) es frgil y puede ser
superado en nmero por agente bacterianos indgenas como E. coli; por lo tanto antes de realizar las
pruebas de laboratorio es necesario aumentar su nmero con respecto a sta en un caldo de
enriquecimiento. Ejemplo de este tipo son los caldo de tetrationato y selenito. El agua de peptona alcalina se
utiliza para Vibrio cholerae.
El enriquecimiento es una tcnica que utiliza un medio selectivo lquido para permitir el desarrollo de un
microorganismo a partir de una muestra que contiene una gran variedad de microorganismos. As, aquellos
microorganismos para los que el ambiente sea ms favorable crecern ms que los otros y finalmente sern
predominantes
f)DE TRANSPORTE: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicacin significativa de
los microorganismos desde el momento de su extraccin hasta su posterior estudio. Se utilizan
generalmente cuando las muestras deben ser enviadas de un laboratorio a otro. Se recomienda un lmite de
dos horas desde la recoleccin de las muestras y su estudio en el laboratorio, pero este lmite de tiempo es
superado (frecuentemente cuando se trata de muestras tomadas en un consultorio). Esta demora hace
necesario el uso de medios de transporte adecuados. Los medios de transporte ms frecuentemente
utilizados son los de Stuart, Amies y Carey - Blair. Existe una unidad descartable de cultivo de transporte
llamada Culterette que consiste en un tapn estril de poliestireno y un ampolla en la parte inferior que se
rompe cuando se ejerce presin liberando el medio de transporte de Stuart alrededor del extremo del tapn
impregnado en la muestra.
Hasta hace algunos aos los componentes orgnicos mencionados deban ser obtenidos por el microbilogo
y el medio de cultivo se preparaba en el laboratorio. Actualmente se dispone comercialmente de la mayor
parte de los medios e incluso de sus componentes adicionales.
Un gran nmero de medios de cultivo usados en el laboratorio de microbiologa son mixtos, es decir que
tienen como finalidad la de varios grupos de los mencionados, por ejemplo, el agar S- S es selectivo (pues
tiene un inhibidor: el verde brillante) y es a la vez un medio diferencial (lleva lactosa y un indicador) que
permite diferenciar las bacterias fermentadoras o no de dicho polisacrido. El medio de Thayer y Martin para
Neisseria es un medio enriquecido (contiene plasma) y es selectivo (tiene 3 antibiticos inhibidores de la
flora bacteriana y fngica: colistina, vancomicina y nistatina). (Torres & Lopez, 2006)

3. COMPONENTES
a) LIQUIDOS: contienen los nutrientes en solucin acuosa.
b) SEMISOLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo
C) SOLIDO: se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a razn de 15g/litro. El agar es una
sustancia inerte polisacrida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas.

d) ENRIQUECIDOS: estn compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede
agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos
E) ENRIQUECIMIENTO: contienen un agente que inhibe las especies no deseadas pero que favorece el
crecimiento irrestricto del agente infeccioso.
F) SELECTIVOS:
g)diferencial: La adicin de un azcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan
para este fin. (Annimo)

4. Ph
Es un parmetro crtico en el cultivo de microorganismos ya que estos slo pueden crecer en un
rango estrecho de pH fuera del cual mueren rpidamente. El pH intracelular es ligeramente
superior al del medio que rodea las clulas ya que, en muchos casos, la obtencin de energa
metablica depende de la existencia de una diferencia en la concentracin de protones a ambos
lados de la membrana citoplsmica.
Cada tipo de microorganismo tiene un rango de pH en el que puede vivir adecuadamente,
fuera de este rango muere.
Los rangos de pH tolerables por diferentes tipos de microorganismos son, tambin,
distintos. Hay microorganismos acidfilos que pueden vivir a pH=1.0 y otros alcalficlos
que toleran pH=10.0
El pH interno en la mayora de los microorganismo est en el rango de 6.0 a 7.0.
Hay que considerar que, como consecuencia del metabolismo, el pH del medio de cultivo suele
tender a bajar durante el cultivo. Por consiguiente, es necesario controlar el pH de los cultivos
industriales para evitar que un descenso excesivo pueda producir la autoesterilizacin del
cultivo.
Por otra parte, la bajada del pH del medio que producen ciertos microorganismos les confiere
una ventaja selectiva frente a otros microorganismos competidores. As, por ejemplo, las
bacterias lcticas que producen grandes cantidades de cido lctico como consecuencia de su
metabolismo primario reducen el pH del medio de cultivo a valores inferiores a los soportables
por otras bacterias competidoras (llegan a bajar el pH del medio hasta 4.5). De esta forma, las
bacterias competidoras mueren y las lcticas se convierten en la poblacin dominante.
La bajada del pH se puede deber a varios factores, uno de los cuales es la liberacin de cidos
orgnicos de cadena corta (frmico, actico, lctico) por ciertas bacterias. En este sentido, hay
que tener en cuenta que la accin bactericida de estos cidos orgnicos de cadena corta es ms
potente que la debida nicamente a la bajada del pH que producen. Esto es, los cidos orgnicos
de cadena corta son txicos para algunas bacteriaspor s mismos.
En resumen, es necesario controlar el pH de los cultivos y de las fermentaciones industriales
para que se mantenga en los niveles adecuados para el crecimiento y metaboismo correcto del
microorganismo con el que se trabaja. (Anonimo)
5. Prueba de esterilidad : La prueba de esterilidad tiene fundamento en la deteccin de formas viables de
microorganismos, en medios de cultivo adecuados para el crecimiento de bacterias, hongos y levaduras que se
encuentran como contaminantes en productos estriles.
Recomendaciones especiales para la prueba de esterilidad
Para evitar una contaminacin accidental la prueba debe llevarse a cabo en condiciones aspticas por lo que peridicamente se
realizar el control ambiental de las reas de trabajo, as como del equipo y material empleados. Los envases de las muestras
deben desinfectarse previamente a su anlisis. A los productos envasados al vacio, se les debe introducir aire filtrado a travs de
algodn estril. Si el producto tiene diluyente o algn aplicador anexo, tambin debe cumplir la prueba de esterilidad. Se debe
llevar a cabo una prueba en blanco como testigo, paralela a los anlisis de las muestras.
Pruebas de esterilidad en medios de cultivo y soluciones
Preparar los medios de cultivo a partir de medios deshidratados comerciales o preparados en base a sus formulaciones. Ajustar el
pH con soluciones 1N de hidrxido de sodio o 1N de cido clorhdrico para que, despus de esterilizar en autoclave, se obtenga el
valor indicado en cada caso. Esterilizar a 121C durante 15 minutos. (QUIMINET, 2014)
BIBLIOGRAFIA
Bibliografa
QUIMINET. (18 de 08 de 2014). Obtenido de http://www.quiminet.com/articulos/prueba-de-esterilidad-34285.htm
Anonimo. (s.f.). genmic. Obtenido de http://www.unavarra.es/genmic/micind-2-8.htm
Annimo. (s.f.). Wandoo. Obtenido de http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm
Torres, C., & Lopez, L. (2006). Universidad Nacional del Nordeste . Obtenido de
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf