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CENTRO UNIVERSITRIO UNA




Adriano Marinho
Mria Roberta Rios
Thas Nonato de Oliveira








RELATRIO DE AULA PRTICA:
Determinao do Nmero de Contaminantes Mtodo Pour Plate






Relatrio apresentado como requisito de avaliao do
curso de Farmcia do Centro Universitrio UNA para
aprovao em disciplina.

Professor (a): Elzria de Aguiar Nunan
Farmcia - 7 P - manh







Belo Horizonte
2014
1


1 INTRODUO


O controle de qualidade microbiolgico de extrema importncia para avaliao de pontos crticos
de contaminao e estabelecimento de normas, a fim de se obter produtos de qualidade. definido
como conjuntos de procedimentos que asseguram que ensaios necessrios e relevantes sejam
executados e que os materiais no sejam liberados para uso, at que a qualidade dos mesmos seja
garantida. Produtos contaminados podem causar danos sade do consumidor e podem levar ao
comprometimento do produto final (SILVA E SILVA, 2012).
Os testes de qualidade avaliam caractersticas microbiolgicas e fsico- qumicas de matrias
primas e produtos acabados. Os resultados encontrados devem estar de acordo com as
especificaes farmacopeicas, legislaes vigentes e artigos cientficos (SILVA E SILVA, 2012).
Buscando estabelecer rgidos parmetros da qualidade em todas as etapas de fabricao dos
produtos manipulados, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), determina que seja
cumprida a Resoluo da Diretoria Colegiada (RDC) n 67, de 8 de outubro de 2007, a qual dispe
sobre as boas prticas de manipulao das preparaes magistrais e oficinais em uso humano em
farmcia (SILVA E SILVA, 2012).
O mtodo de Pour Plate ou plaqueamento em profundidade utilizado para investigar a qualidade
dos produtos do ponto de vista microbiolgico, permite a contagem de bactrias e fungos. O
princpio do mtodo se baseia na afirmao de que cada clula microbiana presente no produto
testado (amostra) ir formar em meio slido apropriado, uma colnia visvel e isolada
(DOMINGUES et al, 2007).







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2 OBJETIVO
Avaliar o nmero total de microorganismos (bactrias mesfilas aerbias e fungos) presentes em
um determinado produto (Shampoo Palmolive).

3 METODOLOGIA
Inicialmente, desinfetou-se a embalagem do shampoo Palmolive com lcool a 70% e algodo e foi
realizada a agitao manual do frasco.
Com auxilio de uma pipeta, transferiu-se 10 mL da amostra para um erlenmeyer devidamente
identificado, contendo 90 mL de soluo salina peptonada e tamponada (SSPT) estril com o
neutralizante Tween 80 a 3,0% + lecitina a 0,3% j adicionado previamente (tabela 1). Logo aps
mediu-se o pH da soluo que se encontrava com pH 7,0 e agitou-se at total dissoluo da
amostra, obtemos assim, a diluio 10
-1
.
Conservante Neutralizante
Formaldedo Histidina 0,1 %
Produtos que liberam cloro (hipoclorito de sdio) Tiossulfato de sdio 0,5 %
Sais de amnio quaternrio (cloreto de benzalcnio) Tween 80 a 3,0 % + lecitina a 0,3 %
Fenis e derivados (nipagin, nipazol) Tween 80 a 1,0 %
Tensoativos anfteros (sabes e detergentes) Tween 80 a 3,0 % + lecitina a 0,3 %
Metais pesados orgnicos ou ionizados (timerosal) Cistena 0,1 %
Tabela 1: tipos de conservantes e seus neutralizantes utilizado
Dando continuidade prtica, transferiu-se 1 mL da diluio 10
-1
para um tubo de ensaio
contendo 9 mL de SSPT, ento obtemos a diluio 10
-2
.
A partir da diluio 10
-2
, foi feita a diluio 10
-3
ao adicionarmos em um tubo de ensaio contendo
9 mL de SSPT, 1 mL da diluio 10
-2
.
3

Transferiu-se 1mL da diluio 10
-2
para tubo de ensaio contendo 9 mL de SSPT obtendo-se a
diluio 10
-3
. Por fim, transferiu-se 1mL desta soluo a 10
-3
para tubo de ensaio contendo 9 mL de
SSPT obtendo-se a diluio 10
-4
.
De acordo a tcnica de semeadura em profundidade descrita na Farmacopeia Brasileira V ed.
colocou-se em placas de Petri estreis uma alquota de 1 mL de cada diluio em duplicata,
contendo a amostra, e verteu-se 20 mL de gar casena-soja (previamente fundido e resfriado a 45
C). O mesmo procedimento foi realizado para anlise de fungos e leveduras, no entanto,
utilizou-se gar sabouraud-dextrose (previamente fundido e resfriado a 45 C).
As placas de anlise para bactrias foram incubadas em estufa por 3-5 dias a 35 C e temperatura
ambiente por 5-7 dias a 25 C para fungos.

4 RESULTADOS E DISCUSSO

O Shampoo Palmolive utilizado na anlise possui entre seus ingredientes dois conservantes (Figura
1): Hidantona de DMDM (dmdm hydantoin), um derivado de formaldedo e
Metilisotiazolinona (methylisothiazolinone), um derivado de isotiazolinona ou de isotiazolina.
Sabe-se que necessria a neutralizao do agente conservante presente no produto para que o
controle quantitativo e qualitativo possam ser representativos, porm, provvel que o
neutralizante utilizado no tenha ao aqueles conservantes presentes no produto pois seria
necessrio adicionar Histidina 0,1% para neutralizar um derivado de formaldedo como a
hidantona de DMDM.

Figura 1: Ingredientes do Shampoo Palmolive

4

GAR CASENA-SOJA
No foi verificado crescimento de nenhum microorganismo em nenhumas das diluies. Este
resultado pode ter ocorrido devido ao fato do conservante no ter sido devidamente neutralizado.
GAR SABOURAUD-DEXTROSE
Nas placas contendo gar sabouraud-dextrose foi verificado crescimento de fungo naquelas com
diluies de 10
-2
e 10
-3
, entretanto, o crescimento foi pouco expressivo, j que somente uma
colnia se desenvolveu em cada placa.
Devemos levar em considerao que os conservantes presentes no produto no foram devidamente
neutralizados e que provavelmente interferiram no resultado. Outro fator importante que no deve
ser descartado a possibilidade de contaminao da placa durante a realizao da prtica.
Diluio 10
-2
-> 1 x 100 = 100 UFC/mL
Diluio 20
-3
-> 1 x 1000 = 1000 UFC/mL



4 CONCLUSO


A RDC 481/99 no declara que os cosmticos devam ser totalmente isentos de microorganismos,
esta resoluo estabelece um limite de no mximo 5x10
3
UFC/mL, e no podem estar presentes
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, coliformes totais e fecais e Clostridium sulfito
redutores.
Apesar dos resultados encontrados estarem dentro dos padres especificados pela ANVISA, os
mesmo no so confiveis, pois no foi utilizado na realizao da prtica um neutralizante
especfico para os conservantes do produto. A partir disso, vale ressaltar que necessrio inibir a
atividade dos conservantes durante o controle de qualidade de um produto, a fim de se obter
5

resultados fiis e produtos seguros.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

1
BRASIL. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - ANVISA. Portaria n 481 de 23 de
setembro de 1999. Estabelece os parmetros de controle microbiolgico para os produtos de
higiene pessoal, cosmticos e perfumes. Disponvel em: <
http://portal.anvisa.gov.br/wps/wcm/connect/82f733004aee4c53b7cebfa337abae9d/Resolu%C3%
A7%C3%A3o+RDC+n%C2%BA+481+de+27+de+setembro+de+1999.pdf?MOD=AJPERES>
Acesso em: 03 de set. 2014.

2
DOMINGUES, Vanessa Oliveira et al. Contagem de bactrias heterotrficas na gua para
consumo humano: comparao entre duas metodologias. Revista de Sade, vol. 33, n 1, p.
15-19, Paran, 2007. Disponvel em: <
http://cascavel.ufsm.br/revistas/ojs-2.2.2/index.php/revistasaude/article/viewFile/6458/3926 >.
Acesso em: 06 set. 2014.

3
SILVA, Maila Fernanda da; SILVA, Lisiane Lange da. Anlise microbiolgica de trs
formulaes magistrais. Cadernos da Escola de Sade, vol. 2, n 6, p. 117-130, Curitiba, 2012.
Disponvel em: < http://apps.unibrasil.com.br/revista/index.php/saude/article/viewFile/887/761 >.
Acesso em: 06 set. 2014.