Facultad de Salud, Deporte y Recreacin

Departamento de Ciencias QumicoBiolgicas

Bioqumica
Nutricin y Diettica








Cuantificaci n de prtenas















Integrante: Sebastin vila
Camila Sarabia
Vivian Yez
Fecha: 23 de sept 2014
Docente: Marcelo Gonzlez



Introduccin
En los seres vivos las biomolculas ms importantes se podra decir que son
las protenas ya que genera diversas funciones tales como biorreguladoras
(como enzima), inmunolgica (anticuerpos), estructural (colgeno),
transduccin de seales, etc. (Protena, 2004)
Estn compuestas de un gran nmero de aminocidos el cual se organiza en
cuatro niveles estructurales denominados: estructura primaria, estructura
secundaria, estructura terciaria y estructura cuaternaria. (Profesor en linea )
Prcticamente todos los procesos biolgicos dependen de la presencia o la
actividad de este tipo de molculas.
A consecuencia de su gran importancia es significativo determinar la
concentracin de dichas protenas en una muestra, para eso existen diversos
mtodos para la cuantificacin de protenas algunos de ellos se basan en
a) la propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz en el UV,
b) para la formacin de derivados qumicos, o
c) la capacidad que tienen las protenas de unir ciertos colorantes. (Reyes
& Cejudo)
En este prctico utilizaremos el mtodo derivados colorimtricos utilizando
cido Bicinconnico (BCA).Este mtodo depende principalmente de que, en
un medio alcalino, los enlaces peptdicos de las protenas reducen Cu++. Los
iones Cu+ producidos, se unen a dos molculas de BCA y al hacerlo, les
cambian la estructura electrnica de tal manera que ahora absorbe luz a 562
nm y aparecen prpura. En las condiciones de la reaccin, la absorcin del
compuesto es proporcional a la concentracin de protena presente. (castillo
)





















Mtodo de BCA El cido bicinconnico, sal sdica, es un compuesto capaz de formar un
complejo prpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de un
mtodo analtico capaz de monitorizar el in cuproso producido en una reaccin entre las
protenas con Cu2+ en medio alcalino (reaccin de Biuret). La estabilidad del reactivo y el
cromforo proporciona un mtodo para la cuantificacin de protenas que es sencillo, rpido, muy
sensible, y que muestra una gran tolerancia a compuestos que afectan a otros mtodos.
OH-
Protena + Cu2+ Cu1+

Cu1+ + BCA complejo























Objetivos

Objetivos generales
- Determinar la concentracin de protenas en una muestra problema

Objetivos especficos
- Aprender tcnica del BCA
- Realizar preparacin de la curva patrn
- Identificar y registrar los resultados obtenidos




























Materiales

-tubos de ensayos
-canasta para tubos de ensayo
-pipetas
-agua
-albumina
-reactivo bca
-protena

































Procedimiento Experimental

Se dio a conocer por el profesor a cargo, los materiales, instrumentos y
sustancias a trabajar en el laboratorio.

Preparacin de la curva patrn:
Primero se gener la preparacin de cinco soluciones seriadas de albumina
(protena), se adicionaron 10 gotas de albumina y 10 gotas de agua a un tubo
de ensayo, luego al segundo tuvo se agregaron 10 gotas de albumina que se
extrajeron del primer tuvo ms 10 gotas de agua, as sucesivamente y se
obtuvieron concentraciones de 2, 1, 0.5, 0.25 y 0.125 mg/mL. El cual fueron
colocados en una gradilla. Paralelo a eso, en 5 tubos de ensayo se agregaron
20 gotas de BCA con ayuda de una pipeta volumtrica de 1 ml. Luego del
tubo 2 mg/ml. de albumina se retir una gota que fue adicionada al tuvo BCA
que estaba asignado a esa concentracin, al tubo 1mg/ml tambin se le
extrajo una gota de albumina y adicionada al tubo BCA asignado, as
respectivamente con todas concentraciones restantes y sus tubos BCA
correspondientemente.
Los tubos BCA ya con la gota de albumina respectiva se dej incubar por 15
min, transcurrido ese tiempo se puedo verificar un precipitado.

Cuantificacin de protenas de la muestra problema:
En un tubo de ensayo se agregaron 20 gotas de solucin BCA, luego se le
agreg una gota de la muestra problema, se dej incubar por 10-15 minutos
y se realiz la comparacin con las distintas concentraciones del primer
procedimiento.

Cuantificacin de protenas en alimentos:
A continuacin en un tubo de ensayo se agreg 20 gotas de BCA, paralelo a
eso en otro tubo de ensayo se agreg una gota de jugo kapo (alimento) mas
20 gotas de agua, prontamente al tubo que contena BCA se le adicion una
gota de la disolucin del alimento el cual tuvo un tiempo de incubacin de 15
min. Ya precipitado se gener la comparacin con las concentraciones del
primer procedimiento.
Finalmente se limpi el rea de trabajo y los implementos utilizados.








Resultados
Preparacin de la curva patrn:





















Cuantificacin de protenas de la muestra problema:

Segn la comparacin
realizada en el laboratorio, se
lleg a la conclusin de que la
concentracin de muestra
problema era de 0,25 mg/ml.
Ya que eran idnticas en el
color de precipitado.

Cuantificacin de protenas en alimentos:

Segn la comparacin
realizada en el laboratorio, se
lleg a la conclusin de que la
concentracin de muestra
alimento (jugo kapo) era de
0,125 mg/ml. Ya que eran
idnticas en el color de
precipitado.

Preparacin de
soluciones seriadas de
albumina (tubos
anterior) solucin BCA
(tubos posterior)

Soluciones seriadas y
caracterizadas con sus
respectivas
concentraciones
(2, 1, 0.5, 0.25 y 0.125
mg/mL)

Resultado de
precipitacin gradual en
las diferentes
concentraciones de
albumina en tubos BCA.
Discusin



El resultado de las soluciones seriadas depende fundamentalmente de la proporcin que se
encuentre en la solucin con sus respectivas concentraciones de agua, albumina y el bca.
La correcta proporcin en las soluciones presentadas, es la determinante que proporcionara la
curva, que servir de patrn para la identificacin de las posteriores protenas.
Sin la correcta proporcin la curva no se podra realizar debido a que los colores patrn serian
iguales o similares, sin que se pueda identificar cambios drsticos en l, por ende se imposibilitara
la identificacin de la protena especfica a tratar.
Para que la curva se pueda realizar con xito, las concentraciones en las soluciones deben ser
distintas en cada tubo de ensayo, de esta forma otorgara una gama de colores distintos (curva).

La curva posee la desventaja de que el color obtenida en ella no es estable con el tiempo. Debido a
esto se necesita controlar cuidadosamente el tiempo entre el anlisis y la lectura de observancia.

Para la cuantificacin de la protena es necesario, un espectrofotmetro, que es un instrumento
para medir la transmitancia o absorbancia de una muestra, en funcin de la longitud de onda de la
radiacin electromagntica.












































Conclusin
Se concluye:
* Es importante el anlisis de protenas para la especificacin de la actividad biolgica en
alimentos.
* Existe una gran necesidad del anlisis de protenas con el fin de obtener la cuantificacin de una
protena en especfico.
*el mtodo utilizado para la cuantificacin de protenas en este laboratorio es un mtodo de los
simples, rpido, y, eficaz.
*en el mtodo utilizado debe estandarizarse el color mediante cantidades de protenas conocidas.
*no es frecuente encontrar derivaciones de color en este mtodo.






















Bibliografa
castillo , p. (s.f.). Determinacin de la concentracin de protenas de la preparacin de IgG.
Recuperado el sabado 27 de septiembre de 2014, de LABORATORIO DE INMUNOLOGIA:
http://www.uprm.edu/biology/profs/castillo/lab4inmuno.htm
Profesor en linea . (s.f.). Recuperado el sabado 27 de septiembre de 2014, de Estructura de las
protenas: http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/ProteinasEstruct.htm
Protena. (26 de octubre de 2004). Recuperado el 27 de septiembre de 2014, de Wikipedia :
http://es.wikipedia.org/wiki/Discusi%C3%B3n:Prote%C3%ADna