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Prctica No.

1
Identificacin de analgsicos por cromatografa en capa fina

Reactivos:
Etanol/metanol
Cloruro de metileno/ter de petrleo/ter dimetilico/ cloroformo/acetona
Cristales de iodo
cido actico glacial (opcional)
acetato de etilo (opcional)

Medicamentos que deben traer estudiantes:
Acetaminofn
Aspirina
Cardioaspirina
Ibuprofeno

Procedimiento
Preparacin de la cmara de desarrollo
En esta prctica se usar una cromatografa en capa fina para determinar la composicin de varios
analgsicos. Tambin se le dar una muestra desconocida.

El interior de la cmara deber recubrirse con una pieza de papel filtro de aproximadamente
cortando de manera que ste no se extienda completamente alrededor de la cmara, ya que
deber dejar una pequea abertura de 2 - cm para poder observar el desarrollo del proceso en la
placa cromatogrfica que colocar en su interior. Adicione el solvente a la cmara de desarrollo
(que en este caso ser 5% de cido actico glacial en acetato de etilo). El nivel del solvente deber
quedar a una profundidad de 1 cm. Tape bien la cmara. Antes de colocar la placa en el interior de
la cmara deber asegurarse que el papel filtro est completamente humedecido por el solvente.
Verifique que el nivel del solvente no quede en la lnea o arriba de la lnea donde hizo la aplicacin
de las muestras porque las muestras de disolvern dentro de la cmara en lugar de continuar con
el proceso de desarrollo.

Aplicacin de la muestra
Utilice 12 capilares para cromatografa.
Despus de preparar stos, obtenga 2 placas cromatogrficas de 10 cm x 6.6 cm maniplelas muy
cuidadosamente. No debe colocar los dedos sobre la superficie. Colquelas en su mesa de trabajo
sobre una servilleta de papel.

Usando una regla, haga muy suavemente con un lpiz (no bolgrafo) una lnea a travs de la placa
(del lado ms corto) a una distancia de 1.5 cm de la base. Sobre esta misma lnea y a 0.6 cm de
distancia del lado izquierdo marque 6 puntos muy suavemente a intervalos de 1 cm entre cada
uno. Haga lo mismo con la otra placa.

Sobre la primera placa, empezando de izquierda a derecha, con el capilar de punta fina, coloque
muestras control en el siguiente orden: acetaminofn, luego aspirina, cafena, ibuprofeno, y
salicilamida. Este orden es alfabtico y evita despus cualquier confusin. Coloque por ltimo una
muestra control de referencia, la cual ya est previamente preparada. Las soluciones de estos
controles las encontrar en pequeos frascos debidamente identificados.

Es muy importante que las marcas las haga tan pequeas como sea posible. Para que no traslape
una muestra con la otra. La aplicacin deber tener de 1 2 mm de dimetro. Es importante que
antes de hacer sus aplicaciones practique sobre una placa, de manera de no raspar la placa cuando
efecte la aplicacin.

Desarrollo de las placas
Destape la cmara y coloque muy cuidadosamente la placa donde hizo las aplicaciones en el
interior de la cmara. La placa debe colocarse recostada en la pared interna del frasco en un
ngulo de aproximadamente 45 grados sin que la superficie cubierta con el absorbente toque el
papel filtro.

Una vez que la placa ha sido correctamente colocada coloque de nuevo la tapa de la cmara y
espere que el solvente avance por accin de capilaridad. A medida que el solvente avanza la placa
se notar humedecida. Cuando el solvente ha alcanzado una altura aproximada de 0.5 cm de la
parte superior de la placa, sta debe ser removida de la cmara (en la campana) y usando un lpiz
deber marcar inmediatamente la posicin del frente del solvente. Deje la placa en la campana
sobre una toalla de papel hasta que se seque.

Visualizacin
Cuando la placa este seca obsrvela bajo luz UV de onda corta (245 nm). Delinee ligeramente con
un lpiz alrededor de las manchas que observe. Anote cualquier diferencia de comportamiento
entre el ibuprofeno y la salicilamida. Ambos compuestos tiene valores similares de Rf pero las
manchas tienen diferente apariencia bajo la iluminacin UV. Antes de continuar. Haga un dibujo
de la placa en su cuaderno y anote las diferencias que usted observ.

A continuacin coloque la placa en un frasco que contenga unos pocos cristales de yodo. Tape el
frasco y calintelo muy suavemente sobre bao de vapor hasta que las manchas empiecen a
aparecer. Retire la placa del frasco y anote sus observaciones en el cuaderno.

Use una regla marcada en milmetros y mida la distancia que cada mancha se desplaz en relacin
al frente del solvente. Calcule los valores Rf para cada mancha.

Anlisis de analgsicos
Obtenga la mitad de una tableta de cada analgsico que va a analizar. Escoja por lo menos un
analgsico que contenga aspirina, acetaminofn, ibuprofeno, salicilamida y cafena.

Triture la mitad de la tableta en un mortero. Transfiera la mitad de la Tableta pulverizada a un
Erlenmeyer de 25 ml. En un beaker de 50 ml mezcle 15 ml de etanol absoluto y 15 ml de cloruro
de metileno y mezcle perfectamente la solucin. Agregue 5 ml de este solvente a cada una de las
muestras de analgsicos pulverizados y caliente suavemente cada una sobre un bao de vapor a
aproximadamente 100 C. No toda la tableta se disolver, Por qu? Despus de calentar las
muestras permita que sedimenten y utilice el lquido claro sobrenadante para hacer sus
aplicaciones sobre la segunda placa que tiene separada. Coloque tambin la mezcla de referencia
(la cual contendr: acetaminofn, aspirina, cafena, y salicilamida. El ibuprofeno se omitir de esta
mezcla) en la ltima posicin que ya tiene sealada en la placa. Desarrolle la placa en 0.5% de
cido actico glacial en acetato de etilo siguiendo todo el procedimiento anterior. Observe con luz
UV y marque las manchas visibles como lo hizo con la primera placa. Repita la visualizacin usando
yodo. Dibuje las placas en su cuaderno y escriba las estructuras de cada compuesto.




Preguntas Prelaboratorio
1. Explique cmo influyen los siguientes parmetros en la separacin por cromatografa en
capa fina
1. Fase estacionaria
2. Fase mvil
3. Saturacin de la cmara
4. Humedad relativa
2. A qu se le llama activacin de la placa y cmo se activa?
3. Explique como mnimo cuatro mtodos de desarrollo
4. Cules son los tipos de solventes que se pueden usar en cromatografa de capa fina?
1. Con fases estacionarias polares
2. Con fases estacionarias poco polares o apolares
5. Indique los mtodos de visualizacin que conoce. En qu se basa cada uno?
6. Qu grupos funcionales estn presentes en cada uno de los analgsicos que va a
analizar?
Preguntas Postlaboratorio
1. Explique cmo influye la aplicacin de la muestra en una separacin. De ejemplo
2. Cules son las sustancias que se pueden separar usando slica gel como fase estacionaria?
Explique y de ejemplo.
3. Explique las ventajas que se obtienen al hacer una elucin mltiple
4. Al cambiar un eluyente menos polar por otro ms polar Cmo se afecta la velocidad de la
elucin de un alcohol?
5. Qu significa DESARROLLO cromatogrfico e indique tres tipos de desarrollo que se
pueden usar.